检索结果-内蒙古大学图书馆

环境科学学报 2009年第9期29卷 1793-1799页

作者：王玮文湘华清华大学环境科学与工程系北京100084

应用化学合成方法获得了碱基序列优化后的木质素过氧化物酶LiPH2合成基因.分别将去除和含有自身信号肽的合成基因与几种选定的表达载体连接,并转化进入相应的Pichiapastoris宿主菌中,共构建了8个不同的毕赤酵母表达系统.对酵母转化子基... 详细信息

应用化学合成方法获得了碱基序列优化后的木质素过氧化物酶LiPH2合成基因.分别将去除和含有自身信号肽的合成基因与几种选定的表达载体连接,并转化进入相应的Pichiapastoris宿主菌中,共构建了8个不同的毕赤酵母表达系统.对酵母转化子基因及对其发酵液中重组蛋白的分析结果表明,其中1个表达系统的酵母转化子能够成功分泌LiPH2重组蛋白.同时,对影响目的基因表达的各种因素的分析结果表明:就不同宿主菌而言,SMD1168与表达成功的X-33受体菌在其余因素相同的情况下无分泌蛋白表达,pep4基因的缺失对LiPH2蛋白的表达有不利影响;;就不同分泌信号肽而言,与α因子信号肽相比,LiPH2自身信号肽更有利于引导LiPH2的分泌表达;;就不同表达载体而言,其对外源蛋白的表达存在较大差别.本研究中得到的重组蛋白分子量有所增加,说明很可能存在过度糖基化的影响,过度糖基化和C-端氨基酸的增加可能是造成表达蛋白没有活性的原因.

关键词：木质素过氧化物酶巴斯德毕赤酵母异源表达合成基因

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木质素过氧化物酶在球型介孔材料上的固定化特性研究

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环境科学 2010年第10期31卷 2493-2499页

作者：徐龙乾文湘华丁杭军清华大学环境科学与工程系北京100084 北京科技大学材料科学与工程学院北京100083

在醋酸-醋酸钠缓冲体系(pH=3.5)中以聚乙二醇-聚丙三醇-聚乙二醇三嵌段共聚物(P123)为模板,正硅酸甲酯(TMOS)为硅源,1,3,5-三异丙基苯(TIPB)为扩孔剂合成了具有规则六方形孔道(11.6nm)的微米级球型颗粒.以合成的介孔材料为载体,采用物... 详细信息

在醋酸-醋酸钠缓冲体系(pH=3.5)中以聚乙二醇-聚丙三醇-聚乙二醇三嵌段共聚物(P123)为模板,正硅酸甲酯(TMOS)为硅源,1,3,5-三异丙基苯(TIPB)为扩孔剂合成了具有规则六方形孔道(11.6nm)的微米级球型颗粒.以合成的介孔材料为载体,采用物理吸附法对木质素过氧化物酶(LiP)进行固定化,研究了初始酶量和固定化时间等因素对固定化效果的影响,以及固定化对LiP酶学性质和稳定性的影响.结果表明,当初始酶量(E)与载体量(MS)比为76.8mg/g,固定化反应12h时,固定化LiP可获得最大蛋白质负载量(8.87mg/g)和最大表观活性(41.45U/mg).与游离酶相比,固定化LiP的最适pH和温度均未有明显变化,但pH稳定性和热稳定性都有了不同程度的提高,在4℃条件下保存7周后固定化LiP活性几乎没有损失,且在重复使用6次后,可保留近30%的活性.

关键词：介孔材料固定化木质素过氧化物酶稳定性

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木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶对染料脱色的性能比较

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环境科学研究 2002年第5期15卷 17-21页

作者：章燕芳李华钟华兆哲陈坚江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214036

通过控制培养基中Mn2 +的浓度获得只含有木质素过氧化物酶 (LiP)或锰过氧化物酶 (MnP)的单一酶培养物 ,用于比较LiP和MnP对染料降解脱色的条件和能力的差异。结果表明 ,LiP对橙Ⅰ降解脱色的最佳条件为H2 O2 0 15mmol L ,pH 3 0 ,温度 ... 详细信息

通过控制培养基中Mn2 +的浓度获得只含有木质素过氧化物酶 (LiP)或锰过氧化物酶 (MnP)的单一酶培养物 ,用于比较LiP和MnP对染料降解脱色的条件和能力的差异。结果表明 ,LiP对橙Ⅰ降解脱色的最佳条件为H2 O2 0 15mmol L ,pH 3 0 ,温度 4 0℃ ;MnP为H2 O2 0 15mmol L ,pH 3 5,温度 4 0℃。最佳条件下 ,考察LiP和MnP作用下染料浓度和染料类型对脱色的影响 ,发现LiP作用下脱色率明显高于MnP作用下的脱色率 ,表明LiP可作用的染料浓度比MnP高 ,可作用的染料范围比MnP大。

关键词：黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶锰过氧化物酶脱色染料废水处理

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木质素过氧化物酶基因(LipH8)的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达

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微生物学报 2004年第2期44卷 258-260页

作者：王海宽孙亚范杜连祥路福平天津科技大学食品科学与生物工程学院天津300222

以黄孢原毛平革菌 (Phanerochaetechrysosporium)RNA为模板 ,克隆LipH8基因片段 ,研究LipH8基因在甲醇毕赤酵母中的表达。构建了甲醇酵母表达质粒pMETA_LipH8载体 ,并将其线性化后用电穿孔法导入PichiamethabolicaPMAD16 ,部分阳性克隆... 详细信息

以黄孢原毛平革菌 (Phanerochaetechrysosporium)RNA为模板 ,克隆LipH8基因片段 ,研究LipH8基因在甲醇毕赤酵母中的表达。构建了甲醇酵母表达质粒pMETA_LipH8载体 ,并将其线性化后用电穿孔法导入PichiamethabolicaPMAD16 ,部分阳性克隆的PCR结果表明LipH8基因已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上 ,经摇瓶培养筛选出表达水平较高的酵母工程菌株。胞外木质素过氧化物酶活力达 932U L。

关键词：黄孢原毛平革菌 RNA 克隆甲醇毕赤酵母木质素过氧化物酶异源表达 cDNA

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木质素过氧化物酶的应用

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生物学杂志 2021年第3期38卷 99-102页

作者：梁晓玉崔周磊王洪成陈华友江苏大学生命科学研究院镇江212013

综述木质素过氧化物酶的催化机制、酶活测定、克隆表达、协同作用与应用的研究进展。木质素过氧化物酶在化学化工、生态修复以及生物饲料行业等方面有着广泛的应用,而木质素过氧化物酶工业化应用受酶产量及酶活性影响。提高酶表达量、... 详细信息

综述木质素过氧化物酶的催化机制、酶活测定、克隆表达、协同作用与应用的研究进展。木质素过氧化物酶在化学化工、生态修复以及生物饲料行业等方面有着广泛的应用,而木质素过氧化物酶工业化应用受酶产量及酶活性影响。提高酶表达量、改善酶学性质、探究木质素过氧化物酶高效利用的方法是促使木质素过氧化物酶工业化应用的关键,也是近年来的研究热点。结果为进一步深入研究开发木质素过氧化物酶提供参考,并对木质素过氧化物酶研究前景进行展望。

关键词：木质素过氧化物酶催化机制酶活协同作用

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木质素过氧化物酶催化木质素降解的理论研究

木质素过氧化物酶催化木质素降解的理论研究

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作者：房文涵厦门大学

学位级别：硕士

木质素是自然界中含量最丰富的芳香化合物资源,结构十分坚固,难以被降解,应用价值远远被低估。科学家们一直致力于研究如何有效降解木质素,在研究中发现木质素过氧化物酶LiP是降解木质素最高效的酶之一。虽然LiP早于1983年就被发现并报... 详细信息

木质素是自然界中含量最丰富的芳香化合物资源,结构十分坚固,难以被降解,应用价值远远被低估。科学家们一直致力于研究如何有效降解木质素,在研究中发现木质素过氧化物酶LiP是降解木质素最高效的酶之一。虽然LiP早于1983年就被发现并报道,但其催化机理至今仍尚不明确,尤其是涉及pH依赖的长程电子转移反应。本文通过使用QM/MMMD、QM/MM Metadynamics以及非绝热的电子转移/质子耦合电子转移理论,尝试解决pH是如何调节LiP中长程电子转移反应,以此揭示了 LiP降解木质素的机制。本论文获得的主要结论如下:LiP是通过两个连续的长程电子转移反应实现对木质素的单电子氧化。第一个涉及从Trp171到CpdⅠ的电子转移反应,第二个涉及从木质素底物到Trp171自由基的电子转移反应。当调节pH的酒石酸缓冲溶液不存在时,我们的研究结果表明,第一个电子转移遵循电子转移质子转移的分步机制,Trp171被CpdⅠ单电子氧化之后,会自发地将质子转移到相邻的残基Glu250上,形成了中性的Trp171·自由基。对于从木质素底物转移到Trp171的第二个电子转移,我们的研究结果表明,该过程是通过PCET反应机制发生,因为仅单电子转移在热力学上是不太有利的。而当调节pH的缓冲溶液存在时,酒石酸会与Glu250形成强氢键作用,稳定Trp·+阳离子自由基,不用涉及PCET反应机制就可以将木质素底物单电子氧化,而且相比于不存在酒石酸时,会显著地提高4个数量级的电子转移速率。当木质素底物被单电子氧化之后,会大大的降低C-C键断裂的势垒,从而实现LiP对木质素的降解。因此,本论文的工作不仅揭示了 LiP催化木质素降解的机理,而且揭示了可以通过调节环境的酸度或者操纵分子间的氢键,进而改变蛋白中长程电子转移的机制和动力学。从长远来看,这些研究结果对相关的催化剂设计和生物工程具有指导意义。

关键词：木质素过氧化物酶长程电子转移 QM/MMMD 非绝热过程

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木质素过氧化物酶对多溴联苯醚的去除效果研究

木质素过氧化物酶对多溴联苯醚的去除效果研究

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作者：陈怡君南京大学

学位级别：硕士

多溴联苯醚(PBDEs)作为常用的阻燃剂被添加到各种工业材料中，废弃工业材料的处理不当导致了此类物质在环境中的广泛存在。多溴联苯醚的物理化学性质稳定，并且具有生物累积性及内分泌干扰性，因此，它的存在对整个生态系统构成了极大... 详细信息

多溴联苯醚(PBDEs)作为常用的阻燃剂被添加到各种工业材料中，废弃工业材料的处理不当导致了此类物质在环境中的广泛存在。多溴联苯醚的物理化学性质稳定，并且具有生物累积性及内分泌干扰性，因此，它的存在对整个生态系统构成了极大的威胁。白腐菌及其分泌的过氧化物酶系能够高效催化降解类木质素结构，被广泛的应用于木质素的矿化以及工业染料的脱色等。\n 本研究首先优化了白腐菌的培养条件和木质素过氧化物酶(LiP)活性测定方法；选择低溴代的4,4\'-二溴联苯醚(BDE-15)作为研究对象，研究了在水溶液中纯化的LiP对BDE-15的催化去除作用，并且考察了黎芦醇、环糊精和天然有机质对LiP去除BDE-15的影响。\n 研究结果主要概括如下：\n (1)经过比较实验，选择了灵敏度更高的Azure B染料法作为酶活的测定方法。相比较静置培养而言，振荡培养条件下可以获得更高的LiP活性，在培养的第8天，酶活性达到最大值2802.9U/L。通过对白腐菌Phanerochaete chrysosporium的培养基中藜芦醇(VA)和Mn2+浓度的调整，实现了LiP与MnP两种酶的分离，为LiP的纯化提供了理论准备。\n (2)考察了纯化的LiP对BDE-15的去除作用，去除反应在水相中进行，反应体系包括BDE-15，LiP，藜芦醇(VA)，过氧化氢(H2O2)。在30分钟的反应时间内，LiP对BDE-15的平均去除效率接近50％。此外，去除效率还受反应体系pH值，LiP活性，VA初始浓度和H2O2初始浓度的影响。\n (3)当反应体系中有羟丙基-β-环糊精(HPCD)存在时，会促进LiP对VA的氧化，即短时间内增加LiP的活性，但在降解反应动力学实验中没有发现HPCD对BDE-15的去除有明显的促进作用。酶促反应动力学实验的结果显示，HPCD的添加对反应的米氏常数影响不大。由此推断出，HPCD在反应初始阶段增强了LiP活性，并且在一定程度上延长了酶活性的保持时间，其影响还有待进一步的研究。\n (4)自然环境中广泛存在的天然有机质(NOM)会影响多种有机污染物的迁移和转化。当反应体系中有NOM存在时，NOM会和体系中的VA发生竞争抑制作用，从而抑制LiP对VA的氧化；并且这种抑制作用随着NOM浓度的升高而增强，LiP活性和LiP对BDE-15的去除效率也随之降低。酶促反应动力学实验的结果显示，NOM的加入使kM值从286.1增加到716.7，说明NOM抑制了LiP与底物BDE-15的结合。\n (5)通过在反应过程中补加LiP和H2O2的连续处理实验，实现了对BDE-15的完全去除，为LiP在工业废水处理中的应用提供了理论基础。

关键词：木质素过氧化物酶多溴联苯醚去除效果白腐菌废水处理

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荧光假单胞菌GcM5-1A胞外木质素过氧化物酶的初步纯化及性质研究

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北京林业大学学报 2010年第3期32卷 112-116页

作者：孔令营郭道森赵博光李荣贵青岛大学生物系南京林业大学森林资源与环境学院

本文研究了松材线虫携带的荧光假单胞菌GcM5-1A的培养液经硫酸铵分级沉淀后,各组分中木质素过氧化物酶(LiP)的活性及各组分对黑松悬浮细胞的毒性;还对GcM5-1A菌株胞外LiP进行了初步纯化,并对纯化后的酶学性质进行了研究。结果表明:LiP... 详细信息

本文研究了松材线虫携带的荧光假单胞菌GcM5-1A的培养液经硫酸铵分级沉淀后,各组分中木质素过氧化物酶(LiP)的活性及各组分对黑松悬浮细胞的毒性;还对GcM5-1A菌株胞外LiP进行了初步纯化,并对纯化后的酶学性质进行了研究。结果表明:LiP活性主要出现在50%～70%沉淀组分中;0～20%沉淀组分和50%～70%沉淀组分对黑松悬浮细胞的毒性很强;GcM5-1A菌株培养液经硫酸铵分级沉淀以及DEAE-SepharoseFF两步纯化后,其LiP的比活力从0.81U/mg提高到21.30U/mg;其最适温度为35℃,最适pH为4.0;在15～35℃、pH6.0～9.0范围内,酶活力保持相对稳定;NH2OH·HCl和KCN对酶活力的抑制作用分别达到88%和57%,而NaN3对酶活力的抑制作用只有15%左右;吸收光谱显示该酶在406nm处有一个Soret峰,加入1mmol/LNa2S2O4后,吸光度出现了明显的下降,但Soret峰没有显著移动。

关键词：松材线虫荧光假单胞菌木质素过氧化物酶毒素

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黄孢原毛平革菌合成的木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶及其菌球在染料脱色过程中的作用

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过程工程学报 2002年第3期2卷 246-251页

作者：章燕芳李华钟华兆哲陈坚江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214036

在黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)限氮浸没式培养中,获得了含木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)、只含LiP或MnP以及无LiP和MnP的4种培养物,考察了LiP,MnP及菌球在染料脱色过程中的作用. 结果表明,4种培养物对6种... 详细信息

在黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)限氮浸没式培养中,获得了含木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)、只含LiP或MnP以及无LiP和MnP的4种培养物,考察了LiP,MnP及菌球在染料脱色过程中的作用. 结果表明,4种培养物对6种染料都有明显的脱色效果,甲基橙、橙I、次甲基蓝脱色率在90%左右,刚果红、直接湖蓝脱色率在80%左右,结晶紫脱色率在60%左右. 无酶情况下染料的脱色主要是菌球的吸附,有酶情况下染料的脱色主要是酶的降解. 菌球在脱色过程中除了吸附染料外,还起到提供HO和藜芦醇的作用,促进了染料的降解.

关键词：黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶锰过氧化物酶菌球染料脱色

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曝气式反应器中木质素过氧化物酶的合成及对印染废水配制液的脱色处理

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过程工程学报 2002年第5期2卷 459-464页

作者：章燕芳李华钟华兆哲陈坚江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214036

比较了黄孢原毛平革菌在3种生物反应器(搅拌式反应器、鼓泡式反应器、曝气式反应器)中合成木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)的差异. 结果表明,曝气式反应器对酶的合成(尤其是LiP)最为有利. 考察了曝气式反应器中半连续培养和... 详细信息

比较了黄孢原毛平革菌在3种生物反应器(搅拌式反应器、鼓泡式反应器、曝气式反应器)中合成木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)的差异. 结果表明,曝气式反应器对酶的合成(尤其是LiP)最为有利. 考察了曝气式反应器中半连续培养和连续培养两种方式下酶的合成和橙I脱色情况,发现半连续培养可使培养体系长时间保持较高酶活力,置换比例为1/2时染料废水可连续脱色5批,脱色率达到90%以上,比脱色率在46.7 g/(gd)以上. 连续培养条件下酶很快失活,废水的脱色率迅速下降. 在曝气式反应器中用半连续培养的方式(置换比例1/2)对实际印染废水进行处理,可处理废水4批,前3批脱色率达到90%以上,第4批有明显下降.

关键词：曝气式反应器黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶印染废水配制液脱色

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