检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王京首都医科大学

学位级别：硕士

神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)是神经生长因子家族的成员之一,在神经系统以及外周组织中有广泛的分布.利用基因工程手段获得大量的活动性的NT-3将促进对NT-3的基础医学和临床应用的深入研究.该实验选择了杆状病毒表达体系表达人NT-... 详细信息

神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)是神经生长因子家族的成员之一,在神经系统以及外周组织中有广泛的分布.利用基因工程手段获得大量的活动性的NT-3将促进对NT-3的基础医学和临床应用的深入研究.该实验选择了杆状病毒表达体系表达人NT-3(human NT-3,hNT-3).这一真核表达系统与真核细胞比较接近的蛋白质翻译后加工修饰机制,并具有容纳大生段外源基因,不依赖辅助病毒,高水平表达重组蛋白,操作简便,易于纯化,安全等优点.首先构建了转移载体pBacPAK9-hNT-3,利用杆状病毒多角蛋白(polyhedrin,PH)启动子启动hNT-3全长基因的表达,并且利用hNT-3自身产导肽指导hNT-3的分泌.接着又构建了转移载体pAcGP67B-hNT-3,该载体含有杆状病毒糖蛋白gp67的前导肽.将hNT-3成熟肽基因克隆至PH启动子下游后,以gp67的前导肽指导hNT-3的分泌.Lipofectin法将转移载体和线性化病毒共转染sf9细胞,构建并筛选了重组病毒BacPAK6-gp67-hNT-3;对重组病毒感染的细胞进行免疫组织化学染色,证明PH启动子可以启动hNT-3的表达;SDS-PAGE及Westen-blot检测感染细胞及培养上清发现gp67前导肽指导下hNT-3的分泌增加,在感染细胞中NT-3占细胞总蛋白的35﹪,在培养上清中NT-3粗品产量约为100mg/L.这一较高的表达产量能够进一步的蛋白纯化.

关键词：神经营养素-3 杆状病毒表达体系多角蛋白启动子

来源：评论

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牛轮状病毒VP7基因在昆虫细胞中的表达

引用

中国兽医科学 2013年第2期43卷 159-163页

作者：范晴谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基罗思思广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室广西南宁530001

利用PCR方法扩增出牛轮状病毒外衣壳蛋白VP7基因,经BamHⅠ+PstⅠ特异性酶切后,连接于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA中,成功构建了重组质粒pFastBacHTA-VP7。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素筛选和PC... 详细信息

利用PCR方法扩增出牛轮状病毒外衣壳蛋白VP7基因,经BamHⅠ+PstⅠ特异性酶切后,连接于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA中,成功构建了重组质粒pFastBacHTA-VP7。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素筛选和PCR筛选,获得转座的杆粒Bacmid-VP7。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot分析。结果显示,成功扩增了VP7基因,大小为981bp,所表达的重组蛋白大小为40.4ku,与预期值相符,该蛋白能与牛轮状病毒阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性。此研究结果为进一步研发牛轮状病毒ELISA检测试剂盒奠定了物质基础。

关键词：牛轮状病毒 VP7蛋白杆状病毒表达体系昆虫细胞

来源：评论

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东亚钳蝎兴奋型昆虫毒素BmK IT-AP的结构与功能研究和小鼠β-1，3-N-乙酰葡萄糖氨转移酶I的基因克隆与重组表达

东亚钳蝎兴奋型昆虫毒素BmK IT-AP的结构与功能研究和小鼠β-1，3...

引用

作者：李冲中国科学院生物物理研究所

学位级别：博士

该文完成了BmK IT-AP 2.6A分辨率的晶体结构解析.这是第一个解析的东亚钳蝎昆虫毒素的三维结构,它揭示了东亚钳蝎中兴奋型昆虫毒素和α类毒素在结构上的显著区别——毒素分子C端部分的结构组织方式.同时探讨了引起兴奋型昆虫毒素明显区... 详细信息

该文完成了BmK IT-AP 2.6A<'0>分辨率的晶体结构解析.这是第一个解析的东亚钳蝎昆虫毒素的三维结构,它揭示了东亚钳蝎中兴奋型昆虫毒素和α类毒素在结构上的显著区别——毒素分子C端部分的结构组织方式.同时探讨了引起兴奋型昆虫毒素明显区别于α类毒素的结构关键因素,包括第四对二硫键的位置由C12-C63变为C38-C64、11位残基由Asn变成Gly、58位残基由Arg/Lys变成Leu、C端长出约10个残基并形成了一个特有的α螺旋以及loop 38-44变成了38-40等.结构的变化引起了两类分子的表面的巨大差别,α毒素两个功能相关的分子表面区域——Site-RC位点形成的正电势分子表面和芳香族氨基酸残基(Tyr35、Trp38和Tyr-42)形成的疏水表面——在IT-AP中不存在了,这可以为α毒素和IT-AP的种属特异性的解释给出有力的证据.该文从小鼠基因组DNA中成功克隆了mGnT1的基因,并构建了mGnT1的昆虫细胞重组杆状病毒表达体系,获得了电泳可见的表达产物,为进一步获得大量mGnT1用于功能研究和结晶试验打下了基础.同时,该表达体系的建立还为mGnT1突变体的表达打下了基础.

关键词：东亚钳蝎兴奋型昆虫毒素钠离子通道基因重组表达包涵体复性晶体结构结构功能关系聚N-乙酰乳糖胺 β-1,3-N-乙酰葡萄糖氨转移酶I 杆状病毒表达体系

来源：评论

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牛病毒性腹泻病毒E2基因在昆虫细胞中的表达

引用

动物医学进展 2013年第4期34卷 9-12页

作者：范晴谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基罗思思广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室广西南宁530001

为了获得具有良好抗原性的牛病毒性腹泻病毒E2囊膜蛋白,利用PCR方法扩增牛病毒性腹泻病毒E2基因,连接于昆虫杆状病毒表达载体中,构建pFastBacHTA-E2重组质粒。将该重组质粒转化入DH10BAC感受态细胞,经PCR鉴定获得转座杆粒Bacmid-E2。转... 详细信息

为了获得具有良好抗原性的牛病毒性腹泻病毒E2囊膜蛋白,利用PCR方法扩增牛病毒性腹泻病毒E2基因,连接于昆虫杆状病毒表达载体中,构建pFastBacHTA-E2重组质粒。将该重组质粒转化入DH10BAC感受态细胞,经PCR鉴定获得转座杆粒Bacmid-E2。转座杆粒Bacmid-E2转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,感染细胞后,收获得到目的蛋白,用SDS-PAGE和Western blot对重组的表达蛋白进行分析。结果表明,重组E2蛋白大小为43.6ku,与预期值相符,该蛋白能与牛病毒性腹泻病毒阳性血清发生特异性反应,为进一步研发牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒奠定基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白杆状病毒表达体系昆虫细胞

来源：评论

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神经丝蛋白NF-L与NF-M杂合分子的表达与组装--中等分子量神经丝蛋白的第1段杆状区(Coil1)是影响装配的结构域

引用

中国科学C辑 1999年第4期29卷 337-345页

作者：佟向军翟中和陈建国北京大学生命科学学院北京100871

神经丝是神经细胞所特有的中间纤维,由NF-L,NF-M和NF-H 3种蛋白组成.NF-L能在细胞内自组装,NF-M则无自组装能力.构建了两种杂合体分子ML和***由NF-M的头部和NF-L的其他部分组成,MML由NF-M的头部加第1段杆状区和NF-L的第2段杆状区加尾部... 详细信息

神经丝是神经细胞所特有的中间纤维,由NF-L,NF-M和NF-H 3种蛋白组成.NF-L能在细胞内自组装,NF-M则无自组装能力.构建了两种杂合体分子ML和***由NF-M的头部和NF-L的其他部分组成,MML由NF-M的头部加第1段杆状区和NF-L的第2段杆状区加尾部组成.将2种杂合分子的cDNA转入缺乏内源性中间纤维的Sf9细胞中进行表达.结果表明,ML能在细胞内组装出纤维形态,并可与NF-M共同组装成平行的纤维束,MML无法形成纤维结构,说明NF-M的第1段杆状区是影响神经丝组装的结构域.

关键词：神经丝杂合分子杆状病毒表达体系装配

来源：评论

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牛病毒性腹泻病毒E2基因在昆虫细胞上的表达

牛病毒性腹泻病毒E2基因在昆虫细胞上的表达

引用

动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：范晴谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基罗思思广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室

为了获得具有良好抗原性的牛病毒性腹泻病毒囊膜蛋白,本研究利用PCR方法扩牛病毒性腹泻病毒E2基因,连接于昆虫杆状病毒表达载体中,构建pFastBacHTA-E2重组质粒。将该重组质粒转化入DH10BAC感受态细胞,经抗生素、PCR鉴定,获得转座杆粒Bac... 详细信息

为了获得具有良好抗原性的牛病毒性腹泻病毒囊膜蛋白,本研究利用PCR方法扩牛病毒性腹泻病毒E2基因,连接于昆虫杆状病毒表达载体中,构建pFastBacHTA-E2重组质粒。将该重组质粒转化入DH10BAC感受态细胞,经抗生素、PCR鉴定,获得转座杆粒Bacmid-E2。转座杆粒Bacmid-E2转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,感染细胞后,收获得到目的蛋白,最后用SDS-PAGE和Westernblotting对重组的表达蛋白进行分析。结果表明,实验成功体外表达E2基因,重组E2蛋白大小为43.6kDa,与预期值相符,且该蛋白能与BVDV阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性。此研究结果为进一步研发牛病毒性腹泻病毒ELISA检测试剂盒奠定物质基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白杆状病毒表达体系昆虫细胞

来源：评论

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