检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2000年第2期16卷 134-136页

作者：王新力彭学贤李宏中国科学院微生物研究所北京100080

根据ACC合酶高度保守区氨基酸序列设计两种兼并引物。通过RTPCR,克隆了香蕉果肉ACC合酶1693bp的cDNA片段。再根据其序列测定结果进行5′RACE(RapidamplificationofcDNAends)。最终确定香蕉果肉中ACC合酶的mRNA全长为1752个核苷酸。其中... 详细信息

根据ACC合酶高度保守区氨基酸序列设计两种兼并引物。通过RTPCR,克隆了香蕉果肉ACC合酶1693bp的cDNA片段。再根据其序列测定结果进行5′RACE(RapidamplificationofcDNAends)。最终确定香蕉果肉中ACC合酶的mRNA全长为1752个核苷酸。其中5′非翻译区74个核苷酸,编码区1461个核苷酸,3′非翻译区217个核苷酸,编码产物为486个氨基酸。通过Northern杂交分析。

关键词：香蕉果实特异性 ACC合酶 cDNA 克隆序列分析

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香蕉果料ACC合酶全长cDNA序列分析及其果实特异性鉴定

香蕉果料ACC合酶全长cDNA序列分析及其果实特异性鉴定

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作者：李宏北京师范大学

学位级别：硕士

该实验室在前期工作中已获得含有香蕉果肉ACC合酶1.69kb cDNA的pMACS质粒.该研究对克隆到的cDNA进行了亚克隆及序列测定.为了确定ACC合酶转录起始位点,根据序列测定结果设计引物,进行5\'RACE扩增产物的克隆及序列测定,最终确定香... 详细信息

该实验室在前期工作中已获得含有香蕉果肉ACC合酶1.69kb cDNA的pMACS质粒.该研究对克隆到的cDNA进行了亚克隆及序列测定.为了确定ACC合酶转录起始位点,根据序列测定结果设计引物,进行5\'RACE扩增产物的克隆及序列测定,最终确定香蕉果肉中ACC合酶的转录起始位点为G,其cDNA全长为1752个核苷酸,其中5\'非翻译区74个核苷酸,编码区1461个核苷酸,3\'非翻译区217个核苷酸.编码产物为486个氨基酸,计算分子量为55kD,pI值为6.95.将核苷酸序列及推测的氨基酸序列与其它植物ACC合酶进行比较,结果表明该香蕉ACC合酶与其它植物ACC合酶一样具有七个保守区.Northern杂交需要高质量的总RNA,研究小组对香蕉总RNA的提取方法进行了摸索,结果表明:1)Ainsworth的方法适合于香蕉根组织的总RNA的提取;2)***-Gomez的方法可以从香蕉果肉和叶中提取高质量的总RNA;3)Shujun Chang的方法对香蕉果皮决RNA的提取最有效.通过Northern杂交分析,证明此ACC合酶基因的表达具有果实特异性,在幼小及年老植株的叶和根中均测不到其转录物的存在.此外,研究小组还构建了ACC合酶的瞬时表达载体.

关键词： ACC合酶 cDNA 5\\\'\'RACE Northern杂交果实特异性序列分析

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西瓜果实特异启动子WSP功能区域的初步定位

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生物工程学报 2003年第2期19卷 227-230,T001页

作者：吴韩英刘敬梅杨信廷朱祝军寿森炎浙江大学园艺系清华大学生物科学与技术系植物分子生物学实验室国家农业信息化工程技术研究中心

西瓜AGPase的大亚基基因wml1的 5′端上游 15 73bp序列 ,是一个果实特异性启动子 (命名为WSP)。根据WSP内部酶切位点 ,获得了 3个不同 5′端缺失的启动子片段 (长分别为 12 0 1bp、898bp、795bp) ,并构建成植物瞬间表达载体 ,与含WSP的... 详细信息

西瓜AGPase的大亚基基因wml1的 5′端上游 15 73bp序列 ,是一个果实特异性启动子 (命名为WSP)。根据WSP内部酶切位点 ,获得了 3个不同 5′端缺失的启动子片段 (长分别为 12 0 1bp、898bp、795bp) ,并构建成植物瞬间表达载体 ,与含WSP的瞬间表达载体一起用基因枪的方法转入西瓜叶、茎、花及不同发育期果实中。瞬时表达结果表明 ,15 73bp、12 0 1bp、898bp的片段均能指导GUS基因在西瓜果实和花中特异性表达 ,但是表达强度和表达时期有所不同 ,795bp的片段不能指导GUS基因表达。推测在 180bp 5 5 1bp之间可能存在促进外源基因在果实发育后期表达的顺式作用元件 ,而果实特异调控区域可能位于 85 4bp 95 7bp之间。

关键词：西瓜果实特异性启动子瞬时表达定位

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西瓜wml15’端启动子区域对番茄的遗传转化及其转录调控功能研究

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实验生物学报 2003年第3期36卷 226-232页

作者：吴韩英刘敬梅朱祝军杨信廷陈大明浙江大学园艺系清华大学生物科学与技术系植物分子生物学实验室国家农业信息化工程技术研究中心

根据wml1 5’端启动子区域内部的限制性酶切位点,分离得到长度分别为1573bp、1197bp、896bp、795bp的片段,并与GUS基因融合构成转录融合体。用农杆菌介导法将这些片段转入番茄中,对转基因植株进行GUS活性分析,发现1573bp、1197bp、896b... 详细信息

根据wml1 5’端启动子区域内部的限制性酶切位点,分离得到长度分别为1573bp、1197bp、896bp、795bp的片段,并与GUS基因融合构成转录融合体。用农杆菌介导法将这些片段转入番茄中,对转基因植株进行GUS活性分析,发现1573bp、1197bp、896bp的片段都能诱导GUS在授粉后15天、30天、45天的番茄果实中表达,且表达强度随果实发育而增强,而在叶片、茎、根中未检测到GUS基因表达。而795bp的片段转化的植株中则未检测到GUS基因表达。推定857bp至957bp之间的序列中包含了启动子行使正常功能必需的元件。

关键词：转录调控启动子果实特异性遗传转化番茄西瓜 ADP-葡萄糖焦磷酸化酶

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甜瓜黄瓜素基因启动子表达载体的构建及分析

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西北植物学报 2011年第11期31卷 2153-2157页

作者：包秋华王磊牛一丁哈斯阿古拉内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021 内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室呼和浩特010018

该研究构建了由黄瓜素基因5′端310bp启动子序列驱动β-葡萄糖醛酸酶(GUS)报告基因的植物表达载体pPZP-CGN,通过花粉管通道法将植物表达载体pPZP-CGN导入甜瓜,并采用荧光法定量测定转基因植株中GUS活性。结果显示,gus基因在果实中高表达... 详细信息

该研究构建了由黄瓜素基因5′端310bp启动子序列驱动β-葡萄糖醛酸酶(GUS)报告基因的植物表达载体pPZP-CGN,通过花粉管通道法将植物表达载体pPZP-CGN导入甜瓜,并采用荧光法定量测定转基因植株中GUS活性。结果显示,gus基因在果实中高表达,而在根、茎、叶等组织中表达活性很低,表明黄瓜素基因上游310bp启动子具有指导外源基因在果实中高效特异表达的特性。

关键词：甜瓜黄瓜素果实特异性启动子花粉管通道法

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SlAN2-like启动子区变异影响番茄果实花青素合成的机制研究

SlAN2-like启动子区变异影响番茄果实花青素合成的机制研究

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作者： KIM PYOL 东北林业大学

学位级别：博士

花青素具消炎及抗氧化的功效,是蔬果重要的品质性状。普通栽培种番茄果实不含花青素,前人通过与野生番茄杂交育种的手段培育出果实合成花青素合成的品系,例如果实表皮有花青素斑点的Aft(LA1996)番茄。前人发现,栽培种番茄中的编码R2R3-... 详细信息

花青素具消炎及抗氧化的功效,是蔬果重要的品质性状。普通栽培种番茄果实不含花青素,前人通过与野生番茄杂交育种的手段培育出果实合成花青素合成的品系,例如果实表皮有花青素斑点的Aft(LA1996)番茄。前人发现,栽培种番茄中的编码R2R3-MYB转录因子的SlAN2-like基因发生了可变剪接,导致蛋白丧失调节花青素合成的功能。然而我们研究发现SlAN2-like基因在栽培种番茄果实中不表达,而在Aft型番茄果实中SlAN2-like基因的表达水平较高,这种控制SlAN2-like基因在不同品系番茄果实中差异表达的机制并未解析。本研究以果实可以合成花青素的Aft型番茄及果实不合成花青素的moneymaker(MM)型番茄做为研究材料,运用遗传学、分子生物学、表观遗传学等多种手段结合转基因及基因编辑技术,系统解析了SlAN2-like基因果实特异性表达影响番茄果实花青素合成的具体作用机制。主要研究结果如下:***2-like的表达水平特异调控番茄果实花青素的合成本研究针对Aft番茄和MM番茄品系绿熟期果皮为材料,运用RT-qPCR技术对花青素合成通路中的关键结构基因SlDFR与四个MYB转录因子SlAN2、SlANT1、SlANT1-like、SlAN2-like进行基因表达分析,发现果皮花青素含量与结构基因SlDFR和转录因子SlAN2-like基因表达显著正相关。进一步以Aft和MM的杂交F2群体为材料,证明果皮花青素合成表型、SlAN2-like基因型、SlAN2-like基因表达水平共分离且可遗传。运用CRISPR/Cas9技术对Aft番茄的SlAN2-like基因进行敲除后发现,突变体果实无花青素合成且SlAN2-like和SlDFR基因表达水平显著降低。因此,番茄果实花青素合成受SlAN2-like基因的表达水平特异调控。***2-like启动子区域的变异影响SlAN2-like基因的表达量及果实花青素积累本研究克隆得到果实积累花青素的Aft番茄和果实无花青素积累的MM番茄品系中SlAN2-like基因翻译起始位点前2.4 kb的启动子序列,经序列比对后发现两品种的SlAN2-like基因启动子1.2 kb-1.8 kb位置存在580 bp的差异区域。经对25个不同品系番茄花青素合成表型、580 bp差异区域基因及SlA N2-like基因表达水平进行分析,证明SlAN2-like基因启动子变异导致SlAN2-like基因表达水平差异从而影响花青素合成。本研究进一步构建了四种转基因株系:MM-pSlAN2-likeAft::SlAN2-likeAft(MM-pA:A),Aft-pSlAN2-likeAft::SlAN2-likeAft(Aft-pA:A),MM-pSlAN2-likeMM::SlAN2-likeAft(MM-pM:A),MM-pSlAN2-likeAft::SlAN2-likeMM(MM-pA:M),证明了 SlAN2-like基因启动子的Aft基因型变异显著提高SlAN2-like基因表达水平从而促进番茄果皮花青素合成。3.H3K27me3修饰水平调节SlAN2-like表达水平影响番茄果实花青素合成本研究发现Aft番茄仅在外果皮合成花青素,MM番茄整株各部位几乎无花青素合成,然而MM-pA:A与Aft-pA:A转基因株系的茎、叶、花及内果皮处均产生花青素。表明SlAN2-likeAft启动子的遗传转化导致花青素的异位合成,故推测是染色质状态影响SlAN2-like基因表达。本研究运用McrBC-PCR及ChIP-qPCR的方法测定Aft和MM绿色果皮中SlAN2-like启动子的甲基化水平及H3K9Ac,H3K4me3,H3K27me3组蛋白修饰水平,证明Aft和MM番茄来源的SlAN2-like启动子区在果实中的组蛋白H3K27me3修饰水平差异显著。进而对Aft及MM的不同组织部位,F2[Aft×MM]群体及不同品系番茄果皮的H3K27me3组蛋白修饰水平进行分析,证明SlAN2-like启动子区的H3K27me3修饰具有组织特异性、可遗传性以及普遍性。综上,本研究证明了番茄SlAN2-like启动子区580 bp变异控制SlAN2-like启动子区H3K27me3的修饰水平,从而影响SlAN2-like表达水平,最终决定番茄果实特异性花青素合成。

关键词： SlAN2-like启动子花青素果实特异性染色体状态 H3K27me3 番茄

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农杆菌介导人肝再生增强因子转化河套蜜瓜的研究

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内蒙古大学学报（自然科学版） 2006年第6期37卷 656-659页

作者：刘明秋张立全格根通拉嘎苗素平扈廷茂内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021

利用三亲融合法将含有人肝再生增强因子(hum an augm en ter of liver regeneration,hALR)的果实特异性表达载体pPZP-CAN导入农杆菌LBA 4404,转化河套蜜瓜子叶外植体,经诱导与筛选获得了抗性再生植株,PCR扩增、PCR-Sou thern和斑点杂交... 详细信息

利用三亲融合法将含有人肝再生增强因子(hum an augm en ter of liver regeneration,hALR)的果实特异性表达载体pPZP-CAN导入农杆菌LBA 4404,转化河套蜜瓜子叶外植体,经诱导与筛选获得了抗性再生植株,PCR扩增、PCR-Sou thern和斑点杂交检测证明hALR已整合入河套蜜瓜再生植株基因组中.

关键词：人肝再生增强因子河套蜜瓜子叶转基因果实特异性

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河套蜜瓜花粉管通道法转化hALR基因

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生物技术通报 2009年第3期25卷 70-73页

作者：张立全哈斯阿古拉扈廷茂刘明秋内蒙古大学生命科学学院生物工程中心内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点实验室呼和浩特010021

为利用河套蜜瓜为生物反应器生产可用于治疗肝病的蛋白因子,以人胎肝mRNA为模板,经RT-PCR扩增获得了471 bp cDNA片段。克隆到pMD18-T载体,命名为pMD-ALR,测序分析结果与GenBank中报道的hALR编码序列完全相同。酶切回收hALR片段,插入到... 详细信息

为利用河套蜜瓜为生物反应器生产可用于治疗肝病的蛋白因子,以人胎肝mRNA为模板,经RT-PCR扩增获得了471 bp cDNA片段。克隆到pMD18-T载体,命名为pMD-ALR,测序分析结果与GenBank中报道的hALR编码序列完全相同。酶切回收hALR片段,插入到含有甜瓜果实黄瓜素(Cucumisin)基因启动子的果实特异性表达载体pPZP-CGN中,构建了hALR甜瓜果实特异性表达载体pPZP-CAN。花粉管通道法转化试验大田自花授粉花63朵,收获T0代果实27颗,结实率为42.9%。提取T0代种子无菌苗DNA,经PCR、PCR-southern和斑点杂交检测有13株呈阳性。

关键词：人肝再生增强因子果实特异性花粉管通道法河套蜜瓜

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甜味蛋白Brazzein在番茄中的遗传转化研究

甜味蛋白Brazzein在番茄中的遗传转化研究

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作者：郭淑华中国农业科学院

学位级别：硕士

甜度是番茄品质性状的一个重要指标,人们在食用番茄时往往喜欢加一些蔗糖提高甜度,但吃糖过多不利于健康。因此,培育果实甜度高而含糖量不高的品种是番茄营养品质育种的和多样性育种的一个目标。基因工程育种是实现这一目标的有效途径... 详细信息

甜度是番茄品质性状的一个重要指标,人们在食用番茄时往往喜欢加一些蔗糖提高甜度,但吃糖过多不利于健康。因此,培育果实甜度高而含糖量不高的品种是番茄营养品质育种的和多样性育种的一个目标。基因工程育种是实现这一目标的有效途径。甜味蛋白Brazzein是一种高甜度、低热量、天然、安全的新型甜味剂,与蔗糖不同,它不会引起龋齿、心血管疾病及糖尿病人的胰岛素反应。用Brazzein转化番茄,不仅可以改善番茄的品质,培育适合糖尿病人食用的番茄新品种,还可以以番茄作为生物反应器生产甜味蛋白,进行甜味蛋白的商业化生产。本研究通过农杆菌介导的番茄叶盘转化法进行番茄的遗传转化,在构建Brazzein番茄果实特异表达载体的基础上,进行了甜味蛋白在番茄中的遗传转化研究,试验过程中得到的结果如下: 1、建立了番茄转化再生体系: 在pBI121的基础上构建转化载体,根癌农杆菌LBA4404介导,叶盘转化法建立了番茄转化再生体系。筛选了适于番茄转化的培养基的配方;确定了100mg/l的卡那霉素为番茄转基因的最适抗性筛选浓度;明确了美味樱桃番茄、中蔬4号和丽春为再生能力强、适于基因转化的番茄品种,在转化过程中始终以100mg/l卡那霉素进行连续的转化苗的筛选工作,极大的减小了转化植株的验证和栽培管理工作量,提高了转化生根植株的阳性比率,在最后得到的所有生根植株中阳性株比率超过90%。 2、克隆了E8P1启动子并分析了其果实特异表达功能: 利用同源克隆的方法,从番茄红玛瑙213基因组中PCR方法克隆到1121bp的启动子E8P1的DNA序列,构建了由E8P1启动子启动的GUS表达载体E8P1∷GUS,并对它的功能进行了验证,获得了美味樱桃番茄转E8P1∷GUS启动子基因材料。对E8P1∷GUS转基因番茄进行了载体整合与表达的分析,通过基因组PCR验证了GUS基因的整合,一步RT-PCR证实了GUS基因在转基因成熟果实中的转录表达,并且在果实中表达水平显著高于CaMV35S∷GUS转基因番茄。E8P1∷GUS转基因番茄的各组织器官和不同发育时期的果实经组织化学染色后GUS基因的表达表现出了果实发育阶段特异性和组织特异性。上述结果证明了E8P1是一个可用于转基因的果实特异性启动子。 3、合成了Brazzein基因,并获得了转基因番茄材料: 通过PCR扩增合成了Brazzein编码基因,并对Brazzein基因进行了T克隆。构建了pE8P1.B和pBI121.B两个植物表达载体。叶盘转化法得到了中蔬4号和丽春E8P1∷B和CaMV35S∷B转基因番茄植株。反转录检测到了Brazzein基因在转基因果实中的转录表达。对转基因果实的甜度进行了感官评价和可溶性含糖量的测定。转基因番茄果实的含糖量与野生型对照和E8P1∷GUS转基因番茄对照相比没有发生改变,但转基因番茄的甜度显著高于两个对照。

关键词：番茄果实特异性启动子甜味蛋白 Brazzein

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一种能够自发消除农残的果实种质培育方法

一种能够自发消除农残的果实种质培育方法

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作者：赵杰宏赵德刚潘晨韩洁 550025 贵州省贵阳市花溪区贵州大学(北区)科技处

一种能自发消除农残的果实种质的培育方法，包括下列步骤：(1)按常规方法克隆果实特异性启动子：(2)人工合成有机磷水解酶OPH的基因；(3)构建果实特异性OPH植物表达载体：将E8扩增产物和人工合成的OPH基因序列分别连接到pGEM-T easy上... 详细信息

标准号: CN101451144B

一种能自发消除农残的果实种质的培育方法，包括下列步骤：(1)按常规方法克隆果实特异性启动子：(2)人工合成有机磷水解酶OPH的基因；(3)构建果实特异性OPH植物表达载体：将E8扩增产物和人工合成的OPH基因序列分别连接到pGEM-T easy上构建出pGEM-E8和pGEM-OPH，然后用HindIII和BamHI双酶切pGEM-TE8和pSH，把E8构建到pSE8；用EcoRI单酶切pGEM-OPH和pSE8，把OPH构建到pSE8OP，筛选出正向连接载体，从而得到果实特异性启动子驱动的植物表达载体备用；(4)转化土壤农杆菌和植物外植体；(5)转基因植株的分化、移栽。本发明既能降低果实的农药残留，同时也不影响田间农药的功效，从而有利于提高产量和质量。

关键词：果实特异性植物表达载体启动子果实有机磷水解酶产量和质量土壤农杆菌植物外植体转基因植株基因序列扩增产物农药残留培育方法单酶切筛选出双酶切连接正向移栽种质克隆田间农药基因转化

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