检索结果-内蒙古大学图书馆

中国蚕学会第八届青年学术研讨会

作者：叶博岳冬梅赵振军王林美张波范琦辽宁省农业科学院大连生物技术研究所

杆状病毒细胞凋亡抑制蛋白(IAP)在病毒感染细胞、调节细胞凋亡的过程中起着重要的作用。柞蚕核型多角体病毒(Ap MNPV)基因组编码两个可能的细胞凋亡抑制蛋白(Ap-IAP1和Ap-IAP2)。有研究认为Ap-IAP1具有抑制细胞凋亡的作用,而Ap-IAP2的... 详细信息

杆状病毒细胞凋亡抑制蛋白(IAP)在病毒感染细胞、调节细胞凋亡的过程中起着重要的作用。柞蚕核型多角体病毒(Ap MNPV)基因组编码两个可能的细胞凋亡抑制蛋白(Ap-IAP1和Ap-IAP2)。有研究认为Ap-IAP1具有抑制细胞凋亡的作用,而Ap-IAP2的功能还不清楚。为研究Ap-IAP2在病毒中的作用,我们构建了Ap-IAP2:EGFP融合表达载体,对Ap-IAP2在Ap MNPV感染细胞过程中的定位表达做了初步分析。方法:(1)Ap-iap2基因定位表达载体包括:Ap-iap2基因上游非编码区-295nt至编码区+726nt、egfp基因、SV40终止序列区域及Ap-iap2基因下游非编码区1kb。(2)利用昆虫细胞转染试剂将表达载体与Ap MNPV野生型病毒DNA共转染Tn-Hi5细胞,24小时后利用荧光显微镜每天观察细胞中荧光蛋白表达情况。结果:构建的Ap-iap2:egfp嵌合基因经过同源重组整合到病毒基因组中,Ap-iap2基因自身启动子调节Ap-IAP2:EGFP融合表达。在转染48小时后可见细胞核中有荧光蛋白表达,呈现较均匀分布;转染120小时后,细胞核心部位荧光渐强;转染140小时后细胞核中均匀分布的荧光逐渐褪散,在核心部位则出现类似病毒包涵体的荧光颗粒。初步实验结果显示Ap-IAP2表达主要分布在细胞核中,它在病毒复制、包装过程中的作用还有待于深入研究。

关键词：柞蚕核型多角体病毒细胞凋亡抑制蛋白定位表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

蓖麻蚕核型多角体病毒和柞蚕核型多角体病毒的密码子使用模式分析

引用

蚕业科学 2017年第1期43卷 77-83页

作者：石生林张莹王国宝王勇刘彦群杨瑞生秦利沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁省昆虫资源工程技术研究中心沈阳110866

蓖麻蚕核型多角体病毒(Phcy NPV)是柞蚕核型多角体病毒(Anpe NPV)的变种,不能感染柞蚕。通过病毒基因组GC含量、GC3s含量、有效密码子数、相对同义密码子使用度、密码子偏好参数的计算及ENc-plot分析、中性绘图分析、对应分析等,比较Phc... 详细信息

蓖麻蚕核型多角体病毒(Phcy NPV)是柞蚕核型多角体病毒(Anpe NPV)的变种,不能感染柞蚕。通过病毒基因组GC含量、GC3s含量、有效密码子数、相对同义密码子使用度、密码子偏好参数的计算及ENc-plot分析、中性绘图分析、对应分析等,比较Phcy NPV和Anpe NPV的密码子使用模式。Phcy NPV、Anpe NPV分别只有1个和4个ORF的密码子偏好性较强。与Anpe NPV比较,Phcy NPV少数ORF的GC含量、GC3s含量、有效密码子数量和密码子偏好参数变化较大,但2种病毒ORF组间的GC含量、GC3s含量、有效密码子数和密码子偏好参数均无统计学差异(P=0.135、P=0.189、P=0.192、P=0.200)。2种病毒ORF组间,由同义密码子编码的18种氨基酸的密码子使用均无统计学差异(P>0.05),鉴定的17种偏好性密码子也均相同。GC碱基组成是影响2种病毒ORF组密码子使用模式的主要因素,而自然选择对GC碱基组成的影响大于突变压力,但2种病毒间自然选择的影响程度无统计学差异(P=0.770)。Phcy NPV在适应新宿主蓖麻蚕的进化过程中密码子使用模式变化较小,尚不能通过密码子使用模式分析解释杆状病毒在不同宿主间的交叉感染机制。

关键词：蓖麻蚕核型多角体病毒柞蚕核型多角体病毒密码子偏好性密码子使用模式适应性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

蓖麻蚕和柞蚕核型多角体病毒经口感染及其解旋酶基因的分析

蓖麻蚕和柞蚕核型多角体病毒经口感染及其解旋酶基因的分析

引用

作者：陈言江苏大学

学位级别：硕士

杆状病毒是有囊膜的双链闭合环状DNA大形病毒,其基因组大小为80-180kb,主要以鳞翅目昆虫为宿主,迄今仅从节肢动物(绝大部分从昆虫)中分离出来,而且都具有高度的宿主特异性。蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini)和柞蚕(Antheraea pernyi)... 详细信息

杆状病毒是有囊膜的双链闭合环状DNA大形病毒,其基因组大小为80-180kb,主要以鳞翅目昆虫为宿主,迄今仅从节肢动物(绝大部分从昆虫)中分离出来,而且都具有高度的宿主特异性。蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini)和柞蚕(Antheraea pernyi)都是具有较高经济价值的泌丝昆虫,都容易被核型多角体病毒感染。柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus,AnpeNPV)的基因组序列已经完成,而对蓖麻蚕核型多角体病毒(Philosamia cynthia ricininucleopolyhedrovirus,PcrNPV)的基因组序列则知之甚少。以前的研究发现这两种病毒在感染性上有一定联系,为了弄清它们之间的关系,本论文分离纯化了蓖麻蚕和柞蚕核型多角体病毒,对其感染性进行了研究,并对这两种病毒的解旋酶(helicase)基因进行了分析。从而了解这两种病毒的相互感染特性,查明昆虫病毒的宿主特异性或宿主域,对进一步了解杆状病毒宿主域决定机制打下基础。本研究的主要结论如下: 1、分离纯化了蓖麻蚕和柞蚕核型多角体病毒,经电镜观察,两种多角体大多呈大小均一的三角体,大小为1-3μm。 2、用经口感染的方法观察柞蚕和蓖麻蚕幼虫食下后的变化。经镜检发现AnpeNPV能感染柞蚕和蓖麻蚕幼虫,感染率分别为78%和57%。纯化病虫尸体中收集的多角体,提取DNA,进行HindⅢ、SalⅠ、XhoⅠ和PstⅠ酶切图谱鉴定,结果发现酶切图谱与添毒多角体DNA的酶切图谱一致;而PcrNPV只能感染蓖麻蚕幼虫,感染率为79%,对柞蚕几乎没有感染力。 3、PcrNPV与AnpeNPV基因组DNA分别转染BmN和Tn5昆虫细胞系,细胞都没有明显的感染症状。 4、进一步构建了PcrNPV DNA PstⅠ酶切片段文库,挑取阳性克隆测序,测得的序列与AnpeNPV基因组序列的同源性均在95%以上,所以PcrNPV与AnpeNPV的同源性非常高。 5、helicase基因氨基酸同源性构建的分子进化树状图表明:PcrNPV与AnpeNPV的helicase基因进化关系较近,而与AcMNPV及BmNPV等的进化关系较远。 6、分析了PcrNPV和AnpeNPV的helicase基因,结果发现PcrNPVhelicase基因与AnpeNPV的helicase基因在杆状病毒的宿主域决定区、核定位信号区和C端7个基序上,氨基酸序列完全相同,仅在靠近DNA结合区螺旋-转角-螺旋结构处(974位)有1个氨基酸不同,推测helicase基因可能不是决定它们宿主域差异的主要原因。所以蓖麻蚕和柞蚕核型多角体病毒在基因组序列上同源性很高,但是宿主域范围有差别。

关键词：蓖麻蚕核型多角体病毒柞蚕核型多角体病毒解旋酶基因序列分析感染性宿主域

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

柞蚕核型多角体病毒对柞蚕蛹的感染性试验

引用

蚕业科学 2005年第2期31卷 239-239页

作者：刘限王学英石生林许方国沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110161

苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcNPV)和家蚕核型多角体病毒(BmNPV)载体表达系统的建立,使数百种外源基因得到高效的表达.该系统的产业化开发如大量培养昆虫细胞,存在成本高、技术难度大等问题.建立柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nuc... 详细信息

苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcNPV)和家蚕核型多角体病毒(BmNPV)载体表达系统的建立,使数百种外源基因得到高效的表达.该系统的产业化开发如大量培养昆虫细胞,存在成本高、技术难度大等问题.建立柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nuclear polyhedrosis virus ,ApNPV)载体表达系统,是利用柞蚕蛹为宿主进行外源基因表达.我国柞蚕资源丰富,柞蚕的蛹体大,以蛹滞育越冬,能够满足工厂化生产的需求.柞蚕核型多角体病毒有3个不同亚株,本实验研究了ApNPV A株系[简称ApNPV(A)]对不同发育阶段和不同品种的柞蚕蛹的感染性,为利用柞蚕蛹表达外源基因的产业化开发奠定基础.……

关键词：柞蚕核型多角体病毒柞蚕蛹感染性试验载体表达系统外源基因表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

昆虫细胞High Five在培养柞蚕核型多角体病毒中的应用

昆虫细胞High Five在培养柞蚕核型多角体病毒中的应用

引用

作者：范琦赵振军王林美叶博岳冬梅张波李树英 116024 辽宁省大连市高新园区世达街2号

本发明公开一种利用昆虫细胞High Five进行柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)及其重组病毒的增殖培养和克隆筛选。High Five细胞生长速度较快，贴壁较好，通过High Five细胞筛选病毒，柞蚕蛹体内扩增病毒，可以较快速的实现重组病毒的筛选，在... 详细信息

标准号: CN103555675B

本发明公开一种利用昆虫细胞High Five进行柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)及其重组病毒的增殖培养和克隆筛选。High Five细胞生长速度较快，贴壁较好，通过High Five细胞筛选病毒，柞蚕蛹体内扩增病毒，可以较快速的实现重组病毒的筛选，在利用我国丰富的柞蚕蛹资源，开发生物、农业、医药卫生以及相关科研产品等方面有广阔的应用前景，且能够有效提高柞蚕业的产值，增加农民收益。

关键词：重组病毒柞蚕蛹柞蚕核型多角体病毒病毒科研产品克隆筛选昆虫细胞农民收益细胞筛选细胞生长医药卫生增殖培养柞蚕业扩增贴壁体内筛选应用开发

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

昆虫细胞High Five在培养柞蚕核型多角体病毒中的应用

昆虫细胞High Five在培养柞蚕核型多角体病毒中的应用

引用

作者：范琦赵振军王林美叶博岳冬梅张波李树英 116024 辽宁省大连市高新园区世达街2号

标准号: CN103555675A

关键词：重组病毒柞蚕蛹柞蚕核型多角体病毒细胞生长速度病毒筛选科研产品昆虫细胞农民收益细胞筛选医药卫生增殖培养柞蚕业扩增克隆产值开发

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

不同温度对柞蚕核型多角体病毒在樗蚕蛹精细胞系中增殖的影响

引用

北方蚕业 2006年第1期27卷 23-25页

作者：王林美范琦张波叶博辽宁省农业科学院大连生物技术研究所 116024

本试验用柞蚕核型多角体病毒(Antheraea Pernyi Polyhedrosis Virus简称ApNPV)感染樗蚕蛹精巢细胞系,分别置于0℃,4℃,15℃,20℃,26℃,28℃,30℃,37℃下静止培养,观察细胞病理变化,测定细胞的感染百分率和多角体含量.试验结果表明,不同... 详细信息

本试验用柞蚕核型多角体病毒(Antheraea Pernyi Polyhedrosis Virus简称ApNPV)感染樗蚕蛹精巢细胞系,分别置于0℃,4℃,15℃,20℃,26℃,28℃,30℃,37℃下静止培养,观察细胞病理变化,测定细胞的感染百分率和多角体含量.试验结果表明,不同温度对病毒的感染率及其在细胞中复制有明显的影响.26℃～28℃是柞蚕核型多角体病毒感染樗蚕蛹精巢细胞并形成多角体的最适培养温度,感染率最高,多角体含量也最多.培养温度过低或过高,多角体都不能在细胞内复制.

关键词：柞蚕核型多角体病毒培养温度细胞系樗蚕蛹增殖细胞病理变化 Virus 感染率病毒感染百分率

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

荧光定量实时PCR方法分析柞蚕核型多角体病毒对不同昆虫细胞的感染性

荧光定量实时PCR方法分析柞蚕核型多角体病毒对不同昆虫细胞的感...

引用

中国蚕学会第八届青年学术研讨会

作者：赵振军王林美岳冬梅叶博张波范琦辽宁省农业科学院大连生物技术研究所

柞蚕核型多角体病毒(ApMNPV)通常只感染柞蚕、樗蚕等少数昆虫及所属细胞,具有较高的宿主专一性。我们曾发现ApNPVΔph/egfp在感染不同昆虫细胞后,绿色荧光蛋白有不同程度表达。为进一步了解ApNPVΔph/egfp在不同昆虫细胞中感染增殖情况... 详细信息

柞蚕核型多角体病毒(ApMNPV)通常只感染柞蚕、樗蚕等少数昆虫及所属细胞,具有较高的宿主专一性。我们曾发现ApNPVΔph/egfp在感染不同昆虫细胞后,绿色荧光蛋白有不同程度表达。为进一步了解ApNPVΔph/egfp在不同昆虫细胞中感染增殖情况,我们采用荧光定量实时PCR(Quantitative real-time Polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法对Ap NPVΔph/egfp在昆虫细胞BmN、Tn-Hi5及Sf21中的增殖进行了分析。方法:(1)以PMD18-T/egfp质粒DNA为模板进行qRT-PCR检测,以CT值为纵坐标,拷贝数为横坐标建立标准曲线,以此为标准定量分析感染细胞中病毒拷贝数。(2)Ap NPVΔph/egfp+(MOI 5)分别感染Bm N、Tn-Hi5和Sf21昆虫细胞,在病毒感染后的第8、16、24、48、72、96和120小时分别收集细胞,提取基因组DNA,进行qRT-PCR。(3)为分析病毒感染细胞产生子代病毒对细胞的持续感染能力,分别收集上一代感染病毒120h的细胞培养液直接用于下一代感染相应的昆虫细胞,收集不同感染代数的昆虫细胞,提取细胞基因组DNA用于qRT-PCR。PCR结果参照标准曲线定量并绘制病毒增殖曲线。结果:ApNPV-Δph/egfp+在感染Tn-Hi5细胞24小时后,病毒增殖较快,感染72小时后,病毒增殖进入平稳期,病毒增殖速率降低,感染120h后细胞中病毒的拷贝数是感染8小时病毒拷贝数的100倍。而ApNPVΔph/egfp+在BmN和Sf21细胞中增殖缓慢。虽然ApNPV-Δph/egfp+可感染Tn-Hi5细胞,但随病毒感染代数增加,细胞中病毒的拷贝数呈下降趋势,与第1代感染的细胞中的病毒拷贝数相比,第5代感染细胞中的病毒拷贝数下降了约50%。而分别感染Ap NPVΔph/egfp+的Bm N和Sf21细胞的培养液几乎不能再次感染相应的细胞。qRT-PCR分析结果表明ApMNPV能够感染Tn-Hi5细胞,但在Tn-Hi5细胞中产生子代病毒的能力受到限制;而在BmN和Sf21细胞中复制增殖明显受到抑制,不能产生子代病毒对细胞产生继代感染。

关键词：荧光定量实时PCR 柞蚕核型多角体病毒昆虫细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体的构建方法及应用

一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体的构建方法及应用

引用

作者：范琦叶博赵振军李佩佩岳冬梅王林美张波 116000 辽宁省大连市沙河口区黑石礁街50号

本发明公开了一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体的构建方法及应用，属于生物技术领域。本发明利用细菌人工染色体克隆载体构建一个包括含有lacZα报告基因和细菌转座子Tn7转座靶点序列的DNA片段、AnpeNPV多角体蛋白基因启动子序列和上游... 详细信息

标准号: CN110592139B

本发明公开了一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体的构建方法及应用，属于生物技术领域。本发明利用细菌人工染色体克隆载体构建一个包括含有lacZα报告基因和细菌转座子Tn7转座靶点序列的DNA片段、AnpeNPV多角体蛋白基因启动子序列和上游基因部分序列DNA片段、及多角体蛋白基因3’末端部分编码区序列和下游基因部分序列DNA片段的转移载体，将线性化转移载体质粒DNA与线性化的AnpeNPV基因组DNA共转染Tn‑High Five细胞，得到重组AnpeNPV。将该重组AnpeNPV基因组DNA转化至大肠杆菌中，获得AnpeNPV穿梭载体AnpeNPV‑bacmid。它既可以在大肠杆菌中以质粒DNA方式复制，亦可在Tn‑High Five昆虫细胞以及柞蚕蛹体内以病毒DNA方式复制，具有感染性。

关键词：大肠杆菌基因组DNA 穿梭载体线性化构建多角体蛋白基因启动子柞蚕核型多角体病毒复制多角体蛋白基因细菌人工染色体生物技术领域转移载体质粒编码区序列细菌转座子靶点序列报告基因克隆载体昆虫细胞上游基因下游基因转移载体病毒DNA 质粒DNA 感染性共转染柞蚕蛹转座体内细胞转化应用

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体的构建方法及应用

一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体的构建方法及应用

引用

作者：范琦叶博赵振军李佩佩岳冬梅王林美张波 116000 辽宁省大连市沙河口区黑石礁街50号

标准号: CN110592139A

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：