检索结果-内蒙古大学图书馆

北京大学学报（自然科学版） 2019年第3期55卷 519-525页

作者：王海英潘瑞刘树枫赵云鹏党晨原倪晋仁北京大学环境工程系北京市新型污水深度处理工程技术研究中心北京100871

为探索河流系统中厌氧氨氧化细菌的分布情况,于2014年春秋两季采集长江下游6个断面的水体和沉积物样品,通过宏基因组测序方法,根据优化序列与自建厌氧氨氧化细菌标记基因hzsA, hzsB, hzsC, hdh数据集的比对结果,计算各基因相对丰度。结... 详细信息

为探索河流系统中厌氧氨氧化细菌的分布情况,于2014年春秋两季采集长江下游6个断面的水体和沉积物样品,通过宏基因组测序方法,根据优化序列与自建厌氧氨氧化细菌标记基因hzsA, hzsB, hzsC, hdh数据集的比对结果,计算各基因相对丰度。结果表明,水体溶解氧浓度较高导致厌氧氨氧化细菌标记基因丰度极低,而沉积物中各基因相对丰度较高,平均值分别为4.540×10^(-10), 4.939×10^(-10), 4.333×10^(-10)和2.859×10^(-10)。随着温度升高,秋季沉积物中各基因相对丰度显著高于春季。大通、南京和徐六泾沉积物中各基因相对丰度较高,这与人类活动扰动的增强以及入海口盐度升高有关。物种分类鉴定结果表明,长江下游沉积物中厌氧氨氧化细菌在属水平上以Candidatus Brocadia和Candidatus Jettenia为主。厌氧氨氧化细菌标记基因相对丰度与NO_2^--N,NO_3^--N和NH_4^+-N等理化因子相关,并且,由于NO_2^--N浓度远远低于NH_4^+-N,因此NO_2^--N浓度是长江下游沉积物中厌氧氨氧化细菌生长的限制性因子。

关键词：长江下游厌氧氨氧化细菌标记基因物种组成

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从AFLP指纹和标记基因序列看我国养殖的四种鲍的亲缘关系

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高技术通讯 2004年第12期14卷 93-98页

作者：王志勇柯才焕王艺磊何家齐朱嘉濠集美大学水产学院，厦门361021 厦门大学海洋系，厦门361005 香港中文大学生物系，香港新界

九孔鲍是我国南方主要的鲍养殖对象，皱纹盘鲍与盘鲍则在北方被广泛养殖。对于皱纹盘鲍与盘鲍，尤其是九孔鲍与杂色鲍的分类关系，迄今学术界还存在着不同看法。本文通过AFLP指纹的比较以及细胞核ITS-1和18SrRNA基因片段、线粒体16S rRN... 详细信息

九孔鲍是我国南方主要的鲍养殖对象，皱纹盘鲍与盘鲍则在北方被广泛养殖。对于皱纹盘鲍与盘鲍，尤其是九孔鲍与杂色鲍的分类关系，迄今学术界还存在着不同看法。本文通过AFLP指纹的比较以及细胞核ITS-1和18SrRNA基因片段、线粒体16S rRNA和COI基因片段DNA序列的比较，发现九孔鲍与杂色鲍之间遗传趋异很小，只达到不同地方群体差异的水平；皱纹盘鲍与盘鲍趋异较大，可以认为是属于不同亚种。本研究结果同时表明AFLP技术是进行鲍种质鉴别和遗传多样性研究的有用手段。

关键词： AFLP指纹九孔鲍皱纹盘鲍养殖杂色鲍亲缘关系标记基因 DNA序列亚种细胞核

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标记基因技术在根瘤菌研究中的应用

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土壤通报 2010年第3期41卷 744-748页

作者：于芳韩梅韩晓日肖亦农林荣峰沈阳农业大学土地与环境学院辽宁沈阳110866

就分子标记技术的概念、种类、优缺点及理想标记基因的特征作了简要概述。重点阐述了现今常用的标记基因的种类、作用原理及使用方法,为直观的检测与跟踪根瘤菌在土壤中的竞争结瘤能力提供了有效的途径。几种标记不同基因的根瘤菌以菌... 详细信息

就分子标记技术的概念、种类、优缺点及理想标记基因的特征作了简要概述。重点阐述了现今常用的标记基因的种类、作用原理及使用方法,为直观的检测与跟踪根瘤菌在土壤中的竞争结瘤能力提供了有效的途径。几种标记不同基因的根瘤菌以菌剂形式施入土壤后,对其进行了动态跟踪、生态分布及占瘤率等方面的分析对比。根据分子标记的应用现状对未来发展方向做了展望。

关键词：根瘤菌分子标记标记基因

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标记基因在植物病害发生和流行规律研究中的应用

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植物保护 1997年第4期23卷 33-35页

作者：莫才清华中农业大学生命科学院

标记基因在植物病害发生和流行规律研究中的应用莫才清（华中农业大学生命科学院武汉４３００７０）导致植物病害发生的生物因素有真菌、细菌等多种微生物。由于微生物个体微小，给植物传染性病害的发生和流行规律研究带来一定的困难。... 详细信息

标记基因在植物病害发生和流行规律研究中的应用莫才清（华中农业大学生命科学院武汉４３００７０）导致植物病害发生的生物因素有真菌、细菌等多种微生物。由于微生物个体微小，给植物传染性病害的发生和流行规律研究带来一定的困难。以往研究一直采用病情指数等指标来研...

关键词：标记基因植物病害发生规律流行规律

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标记基因在造血干/祖细胞基因转导中的研究

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第三军医大学学报 1999年第8期21卷 27-29页

作者：赵志钢张书模第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所血液内科重庆400042

造血干细胞的研究和应用,为一些血液系统疾病,恶性肿瘤和遗传病的治疗带来了希望.造血干细胞能自我更新,能多向分化,是永不枯竭的造血源泉,是基因转移最理想的靶细胞,然而,显微镜无法分辨造血干细胞,而只能借助单克隆抗体等免疫学方法.

关键词：造血干细胞逆转录病毒载体标记基因

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转基因植物中的标记基因研究新进展

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遗传 2005年第3期27卷 499-504页

作者：杨英军周鹏中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术研究所国家重点实验室河南科技大学园林系洛阳471003

文章综述了转基因植物中标记基因研究的新进展,主要包括以下3个方面:第一是采用共转化、位点特异性重组和转座子等技术对传统抗性标记基因进行消除,以利于对同一作物进行多次转基因操作;第二是完善各种已应用的以糖类代谢酶基因、耐胁... 详细信息

文章综述了转基因植物中标记基因研究的新进展,主要包括以下3个方面:第一是采用共转化、位点特异性重组和转座子等技术对传统抗性标记基因进行消除,以利于对同一作物进行多次转基因操作;第二是完善各种已应用的以糖类代谢酶基因、耐胁迫酶类基因和绿色荧光蛋白基因等为安全标记基因的转化体系,并大力研究、开发潜在的汞离子还原酶基因、叶绿体合成关键酶基因等作为安全标记基因;第三是着力发展无标记基因、无载体骨架的简单高效转化体系。此外,还展望了安全标记的应用前景。

关键词：转基因植物标记基因消除安全基因标记

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标记基因的克隆、化学合成和体外定向分子进化及其在果树基因工程中的应用研究

标记基因的克隆、化学合成和体外定向分子进化及其在果树基因工程...

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作者：熊爱生南京农业大学

学位级别：博士

标记基因是一种用来筛选和鉴定转化细胞、组织和转基因植株的DNA片段,包括起富集转化细胞作用的选择基因和易于检测表达产物的报告基因。抗生素类和抗除草剂类是当前转基因作物中采用的选择标记基因。目前常用的报告基因主要包括β-葡... 详细信息

标记基因是一种用来筛选和鉴定转化细胞、组织和转基因植株的DNA片段,包括起富集转化细胞作用的选择基因和易于检测表达产物的报告基因。抗生素类和抗除草剂类是当前转基因作物中采用的选择标记基因。目前常用的报告基因主要包括β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)、β-半乳糖苷酶基因(LacZ)、荧光素酶基因(Luc)、绿色荧光蛋白基因(gfp)和冠瘿碱合成酶基因等。植物转基因中最广泛应用的报告基因是gus。转基因作物进入商业化生产阶段,其外源基因的逃逸是不可避免的。因此使用安全的标记基因和报告基因是一个很好的选择。体外定向分子进化是发现和改造生物活性分子的重要方法,提供了一种高效获得多样性的方法。DNA改组是重要的体外分子进化技术,结合高通量筛选在农业、环境污染治理、化学工业、基因治疗、疫苗、蛋白药物等方面有着广泛的应用。近年来,许多体外分子进化的新策略和新方法层出不穷。DNA改组技术的发展和成熟是在上世纪九十年代末期。特别是进入21世纪以来,体外分子进化技术在新技术和新理论的推动下,又得到了长足的发展。推理设计是基于基因和蛋白质信息进行基因和蛋白质序列的改造,作为基因和蛋白质体外快速改造有其重要的一面。化学法合成DNA是生物学基础研究和生物工程应用的一个非常重要的手段,化学法合成基因提供了一种改造基因,阐明基因功能,分析蛋白质-核酸相互作用的强有力手段,通过化学法合成和改造后能够实现高表达,也是消除多个点突变的好方法。近年来化学法合成DNA的发展使得大规模合成较长DNA序列成为可能。随着化学合成寡核苷酸链广泛的用于各类引物、基因全合成、DNA芯片等领域,实现了合成寡核苷酸链的小型化,自动化及高通量化。诞生了一些界面友好的设计基因软件。基因全合成自从出现后一直就有着广泛的应用,近年来应用的范围也越来越广泛。在重叠延伸PCR合成基因方法的基础上,建立了一种基于两步PCR的简单高效经济合成长DNA序列方法:PTDS。该方法主要涉及两步:首先通过12个长度60 nt且20 nt重叠的寡核苷酸,使用高保真的DNA聚合酶pfu合成4个长度为500 bp左右的的DNA片段;其次通过第一步PCR产物作为模板,使用最外侧的引物和高保真DNA聚合酶pyrobest进行第二步的PCR扩增,从而合成完整的目的抗虫基因vip3aI。另外进一步通过改良的PCR精确合成方法(PAS)合成了一编码普鲁兰酶的pulA基因和一编码耐高温β-葡萄糖苷酸酶的Tm-gus基因。大肠杆菌的β-葡萄糖苷酸酶基因,是一个使用广泛的报告基因。由于其具有检测灵敏,酶性质稳定,完善的酶学分析方法和可见的表型等特点,已经成为研究体外分子进化技术的一个好的模式。本文建立了一个高通量β-葡萄糖苷酸酶基因的体外分子进化体系,并通过该高通量体系获得了一个较野生型显著耐受高温的突变体:GUS-TR。该突变体的大肠杆菌转化子在膜上能够耐受100℃的高温达30分钟,而对照不能耐受70℃的高温。通过6-His表达和镍离子螯合层析得到纯化的突变体和野生型蛋白GUS-TR和GUS-WT。酶活性测定结果显示,经过70℃处理10分钟,表达的野生型的GUS-WT活性明显下降,而表达的耐高温的GUS-TR,经过80℃加热10分钟处理活性依然保留88%左右,经过80度加热30分钟,活性依然保留在50%以上。 gus-tr基因序列测定分析共有15个核苷酸位点发生改变,导致了12个氨基酸位点发生突变,分别是:I149T,N181S,D436E,V446A,A451V,Q493R,T509A,M532T,N550S,G559S,N566S和M591I。以gus-tr基因为模板进一步使用定点突变结合耐高温性状分析,发现存在于定点突变个体GUS-TR中的六个突变位点(Q493R,T509A,M532T,N550S,G559S和N566S)对于耐高温性的获得是重要的,且存在关联效应。其中Q493R和T509A位点是两个新发现的耐高温β-葡萄糖苷酸酶关键位点。通过定点突变技术获得含有上述六个关键位点的突变个体GUS-TR3337。通过对突变个体GUS-TR3337和野生型大肠杆菌β-葡萄糖苷酸酶(GUS-WT)的蛋白质纯化后分析,野生型蛋白质在70℃处理10分钟后酶活性完全丧失。而突变体GUS-TR3337在80℃处理10分钟后酶活性保留在75%以上。进一步通过蛋白质模型分析研究了耐高温突变个体和野生型之间的关系,从分子机制上探讨了β-葡萄糖苷酸酶之结构和功能的关系。为了直观地证明获得的耐高温β-葡萄糖苷酸酶突变体在植物转基因中作为报告基因的可行性,将获得的突变基因gus-tr3337和来自大肠杆菌的野生型gus基因分别转入拟南芥植株中进行植物中耐高温性能研究。通过农杆菌蘸花法分别获得多个转基因株系,编

关键词：果树基因工程标记基因体外定向分子进化 5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶基因合成植物转基因

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带有标记基因自删除系统的穿梭载体的构建与功能鉴定

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病毒学报 2015年第5期31卷 507-514页

作者：李莉莉王湛周玉柏张芳沈思嗣李泽琳曾毅北京工业大学生命科学与生物工程学院环境病毒学北京市重点实验室北京100124 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京100052

构建一个具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,用于快速准确地筛选符合临床试验要求的携带有外源目标基因的重组痘苗病毒MVA(rMVA)。为构建pZL-EGFP,将原有穿梭质粒pSC11的标记基因由LacZ置换成EGFP基因,并在EGFP基因的两... 详细信息

构建一个具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,用于快速准确地筛选符合临床试验要求的携带有外源目标基因的重组痘苗病毒MVA(rMVA)。为构建pZL-EGFP,将原有穿梭质粒pSC11的标记基因由LacZ置换成EGFP基因,并在EGFP基因的两侧插入TKL的同源序列。pZL-EGFP与MVA病毒共转染BHK-21细胞后经10代传代,一次噬斑筛选以获得携带有外源基因且EGFP已被删除的rMVA。最终获得的rMVA通过PCR和Western Blot方法对pZL-EGFP的功能进行鉴定。成功构建出具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,包装获得的重组痘苗病毒可在传代过程中自动删除标记基因EGFP。基因删除未影响重组病毒的活力,外源蛋白的表达具有良好的稳定性。pZL-EGFP能与MVA病毒在BHK-21细胞内发生同源重组并包装出rMVA,其携带的标记基因可在病毒传代过程中通过分子内同源重组被自动删除,基因删除不影响重组病毒的活力及外源基因的表达,这为进一步的研究奠定了坚实的基础。

关键词：穿梭质粒 MVA 标记基因同源重组 HPV 疫苗

来源：评论

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利用Cre/LoxP系统删除转基因山羊体内的选择标记基因

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生物工程学报 2013年第12期29卷 1847-1854页

作者：兰翀任丽娜吴敏刘思国刘国辉徐旭俊陈建泉马恒东成国祥四川农业大学动物遗传育种研究所四川雅安625014 上海转基因动物育种与制药工程技术研究中心上海杰隆生物工程股份有限公司上海201210

在制备转基因家畜过程中的一个关键步骤是使用选择标记基因（Selectablemarkergenes，SMGs）将转基因整合细胞从大量的正常细胞中筛选出来，这导致了SMGs整合入家畜的基因组内持续传递给后代。SMGs已被证明能够显著影响基因组内整合位... 详细信息

在制备转基因家畜过程中的一个关键步骤是使用选择标记基因（Selectablemarkergenes，SMGs）将转基因整合细胞从大量的正常细胞中筛选出来，这导致了SMGs整合入家畜的基因组内持续传递给后代。SMGs已被证明能够显著影响基因组内整合位点处的基因调控，也增加了对转基因动物安全评价的复杂性。为了确定转基因山羊制备过程中SMGs的删除时机和删除方法，在体细胞克隆前后两个时段内，利用Cre／LoxP系统删除SMGs的可行性，同时比较了蛋白转导和质粒共转染两种Cre导入方式的删除效率。结果表明：尽管在首次对山羊成纤维细胞进行遗传修饰后即可进行SMGs删除，但两次遗传修饰导致细胞严重老化，无法用于后续的体细胞克隆羊制备。在转基因山羊的成体细胞中删除SMGs不存在上述问题，成功率高，缺点是试验周期长、耗资增大。Cre表达质粒瞬时转染能够删除SMGs，但有超过30％的无SMGs细胞克隆中整合有质粒序列。TAT-CRE蛋白质转导方法可以避免引入的新外源基因，SMGs删除率达到43．9％～72．8％，是一种较佳的SMGs删除手段。

关键词：转基因山羊 Cre LoxP 基因敲除标记基因

来源：评论

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转基因水稻潮酶素标记基因在大鼠体内代谢的初步研究

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卫生研究 2007年第5期36卷 559-563页

作者：徐海滨殷昭雪中国疾病预防控制中心营养与食品安全所北京100021 首都医科大学

目的初步探索hpt在大鼠消化道内降解的特点和肝脏、肾脏转移的可能性。方法48只成年雄性SD大鼠随机分为8组,每组6只,6组作为转基因组,2组作为非转基因组,分别喂饲转基因饲料和非转基因饲料两周。所有动物于试验结束当天喂饲后2、4、6、8... 详细信息

目的初步探索hpt在大鼠消化道内降解的特点和肝脏、肾脏转移的可能性。方法48只成年雄性SD大鼠随机分为8组,每组6只,6组作为转基因组,2组作为非转基因组,分别喂饲转基因饲料和非转基因饲料两周。所有动物于试验结束当天喂饲后2、4、6、8、10和24h处死动物,取胃、空肠、回肠下段、盲肠、直肠的内容物。另取20只雄性SD大鼠随机分为2组,每组10只,转基因大米饲料与非转基因饲料喂饲大鼠4周,取其肝脏、肾脏。用PCR方法检测hpt片段在肠道和肝、肾脏器中的代谢情况。结果hpt基因在胃内容物中有少量未被降解之外,在小肠、盲肠及直肠内容物中,基因大部分已被降解。hpt基因在肠道的降解存在时间和片断依赖型。在试验周期内,肝、肾脏器中未捡出hpt基因片断。结论转基因水稻hpt基因在大鼠消化道内很容易降解,且不能在肝、肾脏器中被捡出。

关键词：转基因水稻标记基因代谢安全性评价

来源：评论

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