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AND代表“并且”；OR代表“或者”；NOT代表“不包含”；(注意必须大写,运算符两边需空一格)

检索范例：

范例一：(K=图书馆学 OR K=情报学) AND A=范并思 AND Y=1982-2016
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文献类型

2 篇 学位论文
2 篇 会议

馆藏范围

4 篇 电子文献
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日期分布

学科分类号

3 篇 农学
- 3 篇 兽医学

主题

4 篇 标记毒株
2 篇 猪圆环病毒2型
2 篇 v5表位
2 篇 生物学特性
1 篇 猪繁殖与呼吸综合...
1 篇 鉴别诊断
1 篇 猪瘟病毒
1 篇 elisa
1 篇 flag
1 篇 嵌合病毒

机构

2 篇 中国农业科学院哈...
1 篇 中国兽医药品监察...
1 篇 中国农业科学院

作者

2 篇 危艳武
2 篇 郭龙军
2 篇 吴洪丽
2 篇 刘长明
2 篇 陆月华
2 篇 黄立平
1 篇 李东艳
1 篇 张飞雁
1 篇 付玉洁
1 篇 韩焘

语言

4 篇 中文

检索条件"主题词=标记毒株"

共 4 条记录，以下是1-10 订阅

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详细简洁

排序：

表达V5表位的重组猪圆环病毒2型毒株及其生物学特性鉴定

表达V5表位的重组猪圆环病毒2型毒株及其生物学特性鉴定

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：黄立平陆月华危艳武郭龙军吴洪丽张飞雁付玉洁刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为了探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作为表达外源表位的可行性,本研究构建了以PCV2基因组为骨架,在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签,用构建感染性分子克隆重组质粒转染细胞,拯救出一株表达V5... 详细信息

为了探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作为表达外源表位的可行性,本研究构建了以PCV2基因组为骨架,在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签,用构建感染性分子克隆重组质粒转染细胞,拯救出一株表达V5表位标签的重组毒株,命名为recPCV2/CL-V5。采用免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)、血清中和试验(SNA)、捕获ELISA及免疫电镜对重组毒株进行了鉴定。结果表明:在recPCV2/CL-V5株感染细胞中检出PCV2和V5表位抗原;PCV2阳性血清和中和性单克隆抗体(1D2)能够完全中和recPCV2/CL-V5株的细胞感染性;recPCV2/CL-V5株在繁殖动力学和形态学上与亲本病毒基本一致。鉴于recPCV2/CL-V5株插入了一个V5表位,采用PCR、IPMA和捕获ELISA与亲本毒株相鉴别。recPCV2/CL-V5株经细胞连续传10代,体外培养增殖性能稳定,毒价可达106.25 TCID50/mL。拯救的带有V5表位标签的重组PCV2毒株,为深入研究该病毒复制理、抗原表位展示及分子标记疫苗和鉴别诊断等开创了新的平台。

关键词：猪圆环病毒2型 V5表位标记毒株生物学特性

来源：评论

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重组猪圆环病毒2型表达V5表位标签的构建及其拯救毒株的体外生物学特性

重组猪圆环病毒2型表达V5表位标签的构建及其拯救毒株的体外生物...

引用

第九届全国病毒学学术研讨会

作者：黄立平陆月华郭龙军危艳武吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

猪圆环病毒2型(PCV2)是引发PMWS的主要病原.为了研究PCV2作为表达载体的可行性，构建了以PCV2基因组为骨架，在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签，用构建感染性分子克隆重组质粒转染细... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是引发PMWS的主要病原.为了研究PCV2作为表达载体的可行性，构建了以PCV2基因组为骨架，在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签，用构建感染性分子克隆重组质粒转染细胞，拯救出一株表达V5表位标签的重组毒株，命名为recPCV2/CL-V5.采用免疫过氧化物酶单层试验(PMA)、血清中和试验(SNA)、捕获ELISA及免疫电镜对重组毒株进行了鉴定. 结果表明：在recPCV2/CL-V5株感染细胞中检出PCV2和V5表位抗原;PCV2阳性血清和中和性单克隆抗体(1D2)能够完全中和recPCV2/CL-V5株的细胞感染性;recPCV2/CL-V5株在繁殖动力学和形态学上与亲本病毒基本一致.鉴于recPCV2/CL-V5株插入了一个V5表位，采用PCR、IPMA和捕获ELISA与亲本毒株相鉴别.recPCV2/CL-V5株经细胞连续传10代，体外培养增殖性能稳定，毒价可达106.25TCID50/mL.拯救的带有V5表位标签的重组PCV2毒株，为深入研究该病毒复制理、抗原表位展示及分子标记疫苗和鉴别诊断等开创了新的平台.

关键词：猪圆环病毒2型 V5表位标记毒株生物学特性

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PRRSV标记抗原肽的筛选及其ELISA检测方法的建立

PRRSV标记抗原肽的筛选及其ELISA检测方法的建立

引用

作者：李东艳中国农业科学院

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus,PRRSV)引起的危害养猪业的重要传染病。该病在各主要养猪国家均有发生,严重影响了养猪业的健康发展。疫苗接种是防控P... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus,PRRSV)引起的危害养猪业的重要传染病。该病在各主要养猪国家均有发生,严重影响了养猪业的健康发展。疫苗接种是防控PRRS的有效手段之一,但现有弱毒疫苗通常缺少有效的鉴别诊断方法,很难从血清学上区分疫苗免疫和野毒感染,给PRRS的监测和防控带来了巨大挑战。本研究旨在构建PRRS缺失标记毒株和PRRS插入标记毒株,以及建立针对标记蛋白多肽的ELISA诊断方法,为开发PRRS标记疫苗奠定基础。为了选择合适的缺失标记位置,本研究对GenBank中907条北美洲型PRRSV NSP2序列进行比对后,将缺失位置设计在NSP2的562-627aa和749-813aa,分别命名为m1B、m2B。以PRRS弱毒疫苗HuN4-F112株为模式毒株,在其感染性克隆上进行缺失,拯救出单缺失标记毒株rHuN4-F112-m1B、rHuN4-F112-m2B和双缺失标记毒株rHuN4-F112-C5-m1B-m2B。单缺失或双缺失这两处多肽区域均提高了病毒复制水平。将多肽m1B、m2B分别包被ELISA板,结果显示m1B、m2B均与HP-PRRS和NADC30-like PRRS阳性血清反应;将m1B、m2B进一步分段则减弱与PRRS阳性血清的反应。为提高ELISA检测的敏感性,本研究将m1B和m2B多肽进行组合包被,建立了1B2B-ELISA鉴别诊断方法。通过对HuN4-F112免疫血清的检测,表明免疫后21 d可检测到针对1B2B的特异性抗体,其抗体转阳时间晚于N蛋白抗体的转阳时间。在插入标签方面,选取与PRRSV同为尼多病毒目的传染性支气管炎病毒的免疫优势抗原区域,设计合成了两个基因片段(m2A、m5A)并分别替换到PRRSV NSP2的第322-432aa位置,成功拯救出两株插入毒株,即rHuN4-F112-m2A和rHuN4-F112-m5A。仔猪免疫试验表明,rHuN4-F112-m2A免疫组在免疫后14 d、rHuN4-F112-m5A免疫组在免疫后21 d均可以用IDEXX抗体检测试剂盒检测到PRRSV抗体的产生,ELISA检测结果发现各时间点的血清与m2A无明显反应,而在免疫4周后部分猪只的血清为m5A抗体阳性,但反应信号微弱。本研究以HuN4-F112株作为模式疫苗毒株,开展了缺失标记、插入标记的筛选和鉴定相关研究,发现了可用于鉴别诊断的缺失标记,并通过一系列反应条件的优化建立了相应的间接ELISA检测方法,为今后研制PRRS标记弱毒疫苗提供候选标签,为PRRS疫苗株和野毒株的鉴别诊断提供技术支持。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征标记毒株鉴别诊断 ELISA

来源：评论

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猪瘟兔化弱毒标记株感染性克隆的构建与病毒拯救

猪瘟兔化弱毒标记株感染性克隆的构建与病毒拯救

引用

作者：韩焘中国兽医药品监察所

学位级别：硕士

猪瘟(Classic Swine Fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classic Swine Fever virus,CSFV)引起的一种猪的高度接触性传染疾病,被世界动物卫生组织(Office International des Epizoofies,OIE)列为必须通报传染病之一。猪瘟的流行给世界养猪业的发... 详细信息

猪瘟(Classic Swine Fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classic Swine Fever virus,CSFV)引起的一种猪的高度接触性传染疾病,被世界动物卫生组织(Office International des Epizoofies,OIE)列为必须通报传染病之一。猪瘟的流行给世界养猪业的发展和贸易造成了巨大损失。猪瘟兔化弱毒疫苗(hog cholera lapinized ***)从1957年就在国内广泛应用于猪瘟的预防(Zhou TC,1980)。不仅为我国,而且还为欧洲国家CSF控制作出了重大贡献,是世界公认的金标准弱毒疫苗。但由于疫苗接种猪与自然感染猪不能从血清学上予以区分,不利于猪瘟的净化和消灭,研制标记疫苗有助于解决这个问题。本研究运用反向遗传操作技术,在实验室已构建的C株感染性克隆的基础上,在E1的C末端插入FLAG基因作为标记分子,构建含有FLAG基因的猪瘟兔化弱毒标记毒株v C-FLAG的感染性克隆,并成功拯救出含有FLAG标记的v C-FLAG病毒,并采用猪瘟E2单克隆抗体WH303,FLAG单克隆抗体免疫组化染色,RT-PCR、荧光定量PCR等方法鉴定拯救病毒为v C-FLAG病毒。通过病毒的细胞适应性实验,证明v C-FLAG病毒可以适应多种猪源细胞,其中以SK6细胞为最佳。通过常规病毒传代、细胞带毒传代以及带毒细胞混合正常细胞培养等方法研究标记病毒的传代方式,使用猪瘟病毒抗原检测ELISA以及传代病毒滴度测定,探索病毒增殖的最佳条件。证明了SK6细胞系是培养v C-FLAG的最适细胞系,探索出了使用带毒细胞混合正常细胞进行传毒的病毒传代方法。不同代次病毒经免疫组化、RT-PCR和核苷酸序列测定证明嵌合病毒能稳定表达标记抗原,且在细胞中传代的遗传稳定性良好。通过兔体实验,研究了猪瘟兔化弱毒标记毒株与兔体反应热的关系,以及兔猪瘟抗体的消长情况。v C-FLAG保持了与C株兔组织毒一样的能够引起典型的兔体反应热的特性。并且两株病毒引起的兔血清猪瘟抗体增长规律一致。v C-FLAG在兔体上连续传四代,经RT-PCR测序证明该毒株在兔体上的遗传稳定性良好。为探索研究FLAG抗体的检测方法,分别采用FLAG的合成肽,FLAG-BAP融合蛋白包被ELISA反应板,首先使用FLAG单克隆抗体建立间接ELISA检测方法。比较发现FLAG-BAP蛋白包被的ELISA反应板更加灵敏。于是采用FLAG-BAP包被ELISA反应板进行兔血清抗体的检测,在接种v C-FLAG和C株第21天的兔血清中FLAG抗体水平并没有太大的差别。随后使用商品化兔抗FLAG多克隆抗体进行验证,发现该方法对于检测兔抗FLAG抗体并没有明显的特异性。实验结果表明,标记抗体检测方法尚不成熟,但为进一步研究标记抗体检测方法提供了重要数据。综合上述结果表明,v C-FLAG标记嵌合毒株,可以很好的展示FLAG抗原肽,并且可采取感染细胞混合正常细胞培养的方式进行大量繁殖,在细胞和兔体上传代遗传稳定。v C-FLAG保持着C株在兔体上引起典型兔体反应热的特点,且能够诱导兔子产生猪瘟抗体。初步探索了标记抗体检测方法,为进一步完善标记疫苗配套检测方法提供了重要数据。

关键词：猪瘟病毒标记毒株 FLAG 嵌合病毒

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