检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2005年第5期32卷 456-462页

作者：王慷慨鄂顺梅蒋磊张华莉刘可张玲莉肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学教研室长沙410078

为探讨核定位信号在热休克蛋白70(HSP70)抑制H2O2所致核仁损伤中的作用,采用分子克隆技术分别构建了4个真核表达载体,pcDNA3.1(-)-HSP70WT(HSP70野生型),pcDNA3.1(-)-HSP70ΔNLS(核定位信号缺失突变体),pEGFP-N1-HSP70WT,pEGFP-N1-HSP70ΔNLS.向传代培养的C2C12肌源细胞培养液中加入终浓度为1.0mmol/L的H2O2模拟体外氧化应激.甲苯胺蓝染色细胞核仁发现,正常细胞仅有一个位于中央的、浓染致密的核仁颗粒.过氧化氢处理后3h,可见明显的核仁分离.热休克反应处理的细胞及转pcDNA3.1(-)-HSP70WT细胞则能明显抑制氧化应激所致的核仁分离.荧光蛋白示踪及核仁蛋白质免疫印迹分析显示,H2O2处理后1h,HSP70WT由正常时的细胞浆定位转为细胞核及核仁定位,而HSP70ΔNLS在H2O2处理后仍定位于细胞浆,同时丧失了抑制核仁分离的作用.上述结果提示,野生型HSP70能显著抑制氧化应激所致细胞核仁分离,核定位信号通过介导HSP70向细胞核及核仁移位而决定HSP70对核仁损伤的保护作用.

关键词：热休克蛋白70 核定位信号氧化应激核仁核仁分离

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核定位信号在JC病毒样颗粒入核转运中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第1期27卷 9-13页

作者：屈秋民曹红梅乔晋杨华西安交通大学医学院第一附属医院神经内科 710061

目的探讨JC病毒（JCV）主要外壳蛋白VP1所含核定位信号（NLS）在JCV病毒样颗粒（VLP）入核转运中的作用。方法应用位点诱变法将JCV野生型VP1（wtVP1）氨基末端3个氨基酸：第5位赖氨酸、第6位精氨酸、第7位赖氨酸分别置换为丙氨酸、甘氨... 详细信息

目的探讨JC病毒（JCV）主要外壳蛋白VP1所含核定位信号（NLS）在JCV病毒样颗粒（VLP）入核转运中的作用。方法应用位点诱变法将JCV野生型VP1（wtVP1）氨基末端3个氨基酸：第5位赖氨酸、第6位精氨酸、第7位赖氨酸分别置换为丙氨酸、甘氨酸、丙氨酸，制备成NIS变异的VP1（△NIS-VP1）。编码△NLS-VP1的基因克隆到原核表达质粒pET-15b中，体外表达、重组VP1 NLS变异的病毒样颗粒（△NLS-VLP），异硫氰基荧光素（FITC）标记后感染地高辛渗透或未渗透的SVG细胞，荧光显微镜观察VLP入核转运。结果wtVP1组成的病毒样颗粒（mtVLP）可以进入地高辛渗透或未渗透的SVG细胞核，而△NLS-VLP只能进入细胞浆，不能进入细胞核；体外转染后，wtVP1主要在SVG细胞核表达，而△NLS-VP1主要在细胞浆表达；包裹外源性DNA的VLP感染SVG细胞后，则wtVLP包裹的DNA在细胞浆和细胞核内均可检测到，而△NLS-VLP包裹的DNA只能在细胞浆检测到，不能在细胞核内检测到。VLP体外结合分析发现，wtVLP与胞浆转运因子（impomn）α、β均可结合，而△NLS-VSP与importin α、β不能结合。结论、VP1 NLS对于VLP入核转运是必需的，VLP的入核转运是由VP1 NIS与importin相互作用介导的。

关键词： JC病毒病毒样颗粒入核转运核定位信号

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核定位信号介导的细胞转运及其机制

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中国药理学通报 2003年第10期19卷 1081-1083页

作者：付爱玲孙曼霁军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

一些核定位信号肽 (NLS)具有通透生物膜和携带外源蛋白质、DNA、寡核苷酸等进入细胞的能力。NLS作为载体在运载外源物质时具有通用性。不同的NLS跨膜机制可能不同。

关键词：核定位信号转运机制研究

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核定位信号及其分析策略

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第8期25卷 683-689页

作者：赵元茵王元忠曹念周度金李渝萍第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学学员旅三队重庆400038

真核细胞核膜上的核孔复合体(nuclear pore complex,NPC)是细胞核内外进行物质交换的主要通道,分子量较小的化合物可自由通过NPC或采取被动扩散的方式进入细胞核,而分子量为50kD以上的蛋白质则只能通过主动转运进入细胞核.以这种方式进... 详细信息

真核细胞核膜上的核孔复合体(nuclear pore complex,NPC)是细胞核内外进行物质交换的主要通道,分子量较小的化合物可自由通过NPC或采取被动扩散的方式进入细胞核,而分子量为50kD以上的蛋白质则只能通过主动转运进入细胞核.以这种方式进入细胞核的蛋白质必须在其氨基酸序列上拥有特殊的核定位信号(nuclear localization signal,NLS),以被相应的核转运蛋白(karyopherins)识别.核定位信号具有多样性,包括经典核定位信号(classical NLS,cNLS),内输蛋白β2识别的核定位信号(又称PY模体-NLS)和其它类型的NLS.每一类NLS具有相似的特征,但并不具有完全保守的氨基酸组成.不同的NLS,往往对应着各不相同的核输入机制.而对同一蛋白质来说,也可能同时拥有几个功能性的NLS.研究核定位信号一方面可以帮助揭示新的大分子物质核转运机制,另一方面也有助于发现一些蛋白质的新功能.本文对常见NLS的分类进行了总结,并介绍了两种常用的NLS预测软件及鉴定NLS的一般策略.

关键词：核转运机制核定位信号内输蛋白

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核定位信号肽修饰的抗肿瘤纳米载药体系

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中国生物化学与分子生物学报 2022年第1期38卷 35-41页

作者：李若瑾吴晓雪王澈辽宁师范大学化学化工学院辽宁大连116029 辽宁省生物技术与分子药物研发重点实验室辽宁大连116081

纳米载药体系作为一类具有可控性和靶向性的药物递送工具,可以保护生物分子药物免于细胞内快速酶促降解、免于快速血液清除,确保将生物分子药物安全递送至作用部位,从而有效改善药物的生物利用度,提高药物疗效并降低毒副作用,在生物医... 详细信息

纳米载药体系作为一类具有可控性和靶向性的药物递送工具,可以保护生物分子药物免于细胞内快速酶促降解、免于快速血液清除,确保将生物分子药物安全递送至作用部位,从而有效改善药物的生物利用度,提高药物疗效并降低毒副作用,在生物医学领域具有广阔的应用前景,在功能材料研究和肿瘤靶向治疗研究中受到广泛关注。近年来,通过使用功能性生物分子对纳米载药体系表面进行功能化修饰,进一步改善其生物相容性和药物的生物活性是纳米医学研究的热点。细胞核是很多抗肿瘤物质的主要作用位点,而核定位信号(nuclear localization signal,NLS)肽,作为一类能够识别并定位于细胞核的功能化多肽,能够穿透生物膜并靶向细胞核,被认为是构建纳米载药体系的通用工具。将核定位信号肽用于构建具有核靶向能力的功能化纳米载药体系,在抗肿瘤治疗领域具有重要的应用价值。尽管目前已经开发出多种核靶向功能化纳米载药体系的合成工艺,但是由于制备成本高和合成工艺复杂,将核靶向纳米载体从实验阶段转化到临床阶段还有一段漫长的研究过程。本文重点从核靶向功能化纳米载药体系的组成与构建入手进行阐述,对其入核方式和入核条件进行分析,并针对抗肿瘤纳米载药体系现存的问题对今后发展的方向作出展望。

关键词：核定位信号肿瘤纳米载药体系

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核糖体蛋白L6/Taxreb107的核定位信号的分析

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生物化学与生物物理进展 2002年第1期29卷 144-148页

作者：王冀姝杨曦李荣周鹏张淼丽韩骅第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室西安710032 第四军医大学解剖教研室西安710032

核糖体蛋白L6 (RpL6 ,Taxreb10 7)含有三个具有核定位信号特征的基序 .用作者构建的核定位信号捕获系统分析了这些核定位信号是否具有介导蛋白质进行核转位的功能 .将RpL6 /Taxreb10 7分段插入核定位信号捕获载体的克隆位点后转化宿主酵... 详细信息

核糖体蛋白L6 (RpL6 ,Taxreb10 7)含有三个具有核定位信号特征的基序 .用作者构建的核定位信号捕获系统分析了这些核定位信号是否具有介导蛋白质进行核转位的功能 .将RpL6 /Taxreb10 7分段插入核定位信号捕获载体的克隆位点后转化宿主酵母 ,发现其前两个核定位信号可以介导融合蛋白进入细胞核 ,而第三个核定位信号无此作用 .将RpL6 /Taxreb10 7分段与绿色荧光蛋白融合后转染培养的哺乳类细胞 ,证实了以上在酵母中所得的结果 .进一步发现RpL6 /Taxreb10 7的前两个核定位信号同时具有核仁定位的功能 .当在细胞中表达的早期 ,进入核内的融合蛋白优先定位于核仁 .这些结果一方面有助于理解RpL6 /Taxreb10 7核转位的机理 ,同时说明作者构建的核定位信号捕获系统也可用在蛋白质中寻找核定位信号 .

关键词：核定位信号核糖体蛋白L6 核转位绿色荧光蛋白

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核定位信号及其在病毒感染机制中的研究进展

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微生物学通报 2021年第3期48卷 896-905页

作者：夏阳武斌张毅李吉达遵义医科大学公共卫生学院人畜共患病研究所贵州遵义563000 石家庄四药有限公司河北石家庄050000

核定位信号介导的蛋白入核是细胞内信号传递网络中核内外物质信息交流的重要一环,绝大多数病毒蛋白进入细胞核均需要核质转运受体识别和结合入核蛋白携带的核定位信号序列。病毒蛋白的入核转运机制在病毒感染过程中起着至关重要的作用,... 详细信息

核定位信号介导的蛋白入核是细胞内信号传递网络中核内外物质信息交流的重要一环,绝大多数病毒蛋白进入细胞核均需要核质转运受体识别和结合入核蛋白携带的核定位信号序列。病毒蛋白的入核转运机制在病毒感染过程中起着至关重要的作用,对于病毒的复制、毒力具有重要意义,针对该机制的研究有利于新的抗病毒靶点的发现。本文对核定位信号的分类信息进行了总结,并对不同的核质转运受体及其介导的入核机制进行了比较分析,概述了病毒入核蛋白及其核定位信号在病毒感染机制中的研究发现。

关键词：核定位信号核质转运受体病毒

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核定位信号的研究进展

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军事医学科学院院刊 2003年第3期27卷 216-219页

作者：刘朝晖邵宁生军事医学科学院基础医学研究所北京100850

核定位信号 (nuclearlocalizationsignal,NLS)是一种存在于细胞内许多蛋白质中、并介导蛋白质由细胞质向细胞核内转运的氨基酸序列。此氨基酸序列具有多样性 ,其作用机制也各有不同。它的核输入 (nuclearimport)作用受多种因素的调节。... 详细信息

核定位信号 (nuclearlocalizationsignal,NLS)是一种存在于细胞内许多蛋白质中、并介导蛋白质由细胞质向细胞核内转运的氨基酸序列。此氨基酸序列具有多样性 ,其作用机制也各有不同。它的核输入 (nuclearimport)作用受多种因素的调节。目前。

关键词：核定位信号核输入

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核定位信号肽在超声靶向微泡破坏介导基因转染中的增强效应

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中华超声影像学杂志 2016年第3期25卷 252-257页

作者：曹省周青陈金玲王益佳姜楠邓倾郭瑞强武汉大学人民医院超声影像科 430060

目的利用超声靶向微泡破坏（UTMD）技术联合核定位信号（NLS）肽促进增强型绿色荧光蛋白质粒（pEGFP）入核，提高UTMD介导基因的转染效率。方法实验分3组：UTMD＋pEGFP组（A组）、UTMD＋NLS肽’pEGFP组（B组）和阳离子脂质体Lip03000＋p... 详细信息

目的利用超声靶向微泡破坏（UTMD）技术联合核定位信号（NLS）肽促进增强型绿色荧光蛋白质粒（pEGFP）入核，提高UTMD介导基因的转染效率。方法实验分3组：UTMD＋pEGFP组（A组）、UTMD＋NLS肽’pEGFP组（B组）和阳离子脂质体Lip03000＋pEGFP组（C组）。FITC荧光标记NLS，核酸染料Cy3标记pEGFP，调整NLS肽与pEGFP不同摩尔比，观测两者最佳结合比值。以最佳超声辐照参数及NLS肽／pEGFP摩尔比转染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。转染6h后，用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分别评价Cy3标记质粒的入胞率和人核率。转染48h后，用流式细胞仪检测转染效率，CCK8检测细胞存活率，RT—PCR和Western分别检测mRNA和蛋白的相对表达量，并比较三组间的差异以评价NLS肽在UTMD介导基因转染中的增强效应。结果①转染6h后，带绿色荧光的NLS肽和红色荧光的pEGFP均能在细胞同一部位显示且强度信号一致，提示两者相互结合；琼脂糖凝胶电泳示最佳NLS肽／pEGFP结合摩尔比为10^4：1。②转染6h后，A、B、C三组质粒的入胞率分别为（63±12）％、（80±10）％和（92±8）％，入核率分别为（17±3）％、（50±12）％和（35±8）％，差异均有统计学意义（P均〈0．05），B组入胞率和人核率分别为A组的1．3倍和2．9倍，C组分别为A组的1．5倍和2．1倍。③转染48h后，三组细胞活性均80％，转染效率、mRNA和蛋白表达的相对量均依次增加，差异均有统计学意义（P均〈0．05），B组分别为A组1．6倍、2．3倍和2．4倍，但仍低于C组。结论NLS联合UTMD能提高pEGFP入核率，从而提高转染效率，NLS肽发挥增强效应为UTMD介导转染提供新策略。

关键词：超声处理微气泡转染核定位信号

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在活细胞上研究核定位信号介导核移位的方法

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南方医科大学学报 2012年第8期32卷 1148-1150页

作者：邓鹏龚小卫姜勇南方医科大学病理生理学教研室//广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的建立一种在活细胞上研究核定位信号(NLS)介导核移位机制的新方法。方法利用67 mg/L 3[-(3-胆酰氨基丙基)二甲氨基]丙磺酸盐(CHAPS)处理细胞后,用1 g/L麦胚凝集素(WGA)与细胞孵育,来观察能否阻断干扰素γ(IFN-γ)诱导的信号转导子和... 详细信息

目的建立一种在活细胞上研究核定位信号(NLS)介导核移位机制的新方法。方法利用67 mg/L 3[-(3-胆酰氨基丙基)二甲氨基]丙磺酸盐(CHAPS)处理细胞后,用1 g/L麦胚凝集素(WGA)与细胞孵育,来观察能否阻断干扰素γ(IFN-γ)诱导的信号转导子和转录激活子1(STAT1)移位入核。结果 CHAPS处理细胞后,对于IFN-γ本身诱导的STAT1核移位没有影响,而进一步用WGA处理则阻断了IFN-γ诱导的STAT1核移位。结论利用CHAPS在细胞膜上打孔的方法,建立了一种简单有效的、在活细胞上研究NLS介导核移位机制的新方法。

关键词：核移位核定位信号 CHAPSd~转导

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