检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：胡坚浙江大学

学位级别：博士

研究背景与目的肺癌的发病率已成为恶性肿瘤之首，有关发生机理一直是研究的方向与热点。众多的研究表明，端粒是细胞衰老、死亡和癌变的重要标志，许多端粒蛋白参与了端粒结构稳定性的调控，当端粒蛋白不能保护端粒末端时，端粒酶得以... 详细信息

研究背景与目的肺癌的发病率已成为恶性肿瘤之首，有关发生机理一直是研究的方向与热点。众多的研究表明，端粒是细胞衰老、死亡和癌变的重要标志，许多端粒蛋白参与了端粒结构稳定性的调控，当端粒蛋白不能保护端粒末端时，端粒酶得以将端粒重复序列TTAGGG加到端粒末端，造成细胞不朝衰老、死亡方向运动，而引起肿瘤。端粒重复序列结合因子(Telomeric Repeat Binding Factor 1，TRF1)就是端粒结合蛋白的一种，TRF1由439个氨基酸组成，分子量约60KD，研究结果表明TRF1是端粒延长的一个抑制因子，呈负反馈调节端粒的长度。TRF1与端粒DNA结合后，顺式抑制端粒酶的作用，从而控制端粒的长度。端粒酶是一种由RNA和蛋白质组成的核糖核蛋白体，具有逆转录酶的功能，能够将端粒重复序列TTAGGG加到染色体的末端。大量的恶性肿瘤细胞表达端粒酶，而大部分正常细胞不表达端粒酶。进一步的研究表明，TRF1对端粒酶的表达和活性没有影响，由此推测TRF1通过阻止端粒酶在端粒末端的作用来控制端粒长度。与TRF1密切相关的另一个端粒蛋白是端锚蛋白(Tankyrase 1，TANK1)，TANK1可以调节体内TRF1在端粒的聚集，在端粒酶阳性的细胞，TANK1长期过表达可使端粒长度进行性地延长，缺失PARP区域的TANK1对TRF1的分布和端粒长度的动力学无影响，因而TANK1可能是体内端粒延长的一种正调控因子，通过阻滞TRF1与端粒的结合发挥作用。根据“端粒长度调节的蛋白计数模型”，当TRF1减少至临界数目时，端粒中的TRF1向端粒酶提供的负反馈信号消失，端粒酶复合物激活，且脱落的TRF1为端粒酶与端粒的结合提供了入口，使激活的端粒酶结合到端粒上并催化合成端粒重复序列。随着端粒的延长，其结合的TRF1重新增至临界值，再次抑制端粒酶复合物与端粒的结合，维持了癌细胞端粒长度的稳定性，从而使癌细胞持续生长繁殖。综上所述，人类端粒的功能需要端粒蛋白的调控，TRF1具有抑制端粒酶复合物与端粒结合的作用，而TANK1能够清除端粒DNA上的TRF1。因此，TRF1和TANK1有可能成为抑制肿瘤的新靶点。基于以上的认识，我们首先对50例非小细胞肺癌(NSCLC)患者进行端粒酶表达的检测，筛选出端粒酶阳性表达的患者，在此基础上，分别检测TRF1在NSCLC患者癌组织及癌旁组织中转录水平、翻译水平表达的差异，并通过免疫组化了解TRF1在癌组织及癌旁组织中的细胞定位，进一步对预测的核定位序列进行检测。暨希望能通过对TRF1在NSCLC中的一系列检测研究，获得端粒结合蛋白在端粒网络调控中的一个切入点。第一部分TRF1及TANK1mRNA在端粒酶阳性的非小细胞肺癌中的表达研究目的对端粒酶表达阳性的NSCLC患者进一步检测TRF1、TANK1mRNA表达水平，并探讨其表达水平与临床病理特征的相关性。研究方法(1)研究对象2004年11月至2005年11月期间，收集NSCLC患者共50例，所有NSCLC病例均选自浙江大学医学院附属第一医院胸外科住院患者，并经病理切片证实；(2)对50例NSCLC患者首先进行免疫组化的端粒酶逆转录酶(TERT)检测，筛选出端粒酶阳性患者；(3)对端粒酶表达阳性的NSCLC患者，采用RT-PCR对TRF1、TANK1mRNA进行检测。结果(1)NSCLC中TERT免疫组化结果：TERT在细胞浆及细胞核均有表达，50例NSCLC患者的癌组织中TERT阳性表达例数为36例，阳性率为72.0％(36/50)。(2) 端粒酶阳性表达的NSCLC患者的临床资料：36例患者端粒酶表达阳性，其中男性22例，女性14例；腺癌23例，鳞癌13例；(3)TRF1mRNA在癌组织及癌旁组织的表达：癌组织TRF1mRNA为1.101±0．119，相应的癌旁组织为2.015±2.337，经配对t检验，癌旁组织TRF1mRNA的表达水平明显高于癌组织，差异具有显著性(P=0.02)。(4)癌组织TRF1mRNA表达与病理组织学的关系：36例NSCLC患者中，肺腺癌23，肺鳞癌为13例。肺腺癌癌组织TRF1mRNA表达为1.075±0.823，肺鳞癌癌组织TRF1mRNA表达为1.149±0.514，经t检验，差异无显著性(P=0.773)。(5)癌组织TRF1mRNA表达与淋巴结转移的关系：36例NSCLC患者中，淋巴结阳性为19例，淋巴结阴性为17例。淋巴结阳性患者癌组织TRF1mRNA表达为0.893±0.619，淋巴结阴性患者癌组织TRF1mRNA表达为1.334±0.769，差异无显著性(P=0.070)。(6)癌组织

关键词：非小细胞肺癌癌旁组织 NSCLC 癌组织端粒酶活性核定位信号序列

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Restin核定位信号序列的鉴定及其入核分子机制的初步探讨

Restin核定位信号序列的鉴定及其入核分子机制的初步探讨

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作者：王颖第四军医大学

学位级别：硕士

restin是本实验室于1999年在研究全反式维甲酸诱导细胞分化时克隆得到的一种黑色素瘤相关抗原家族的新基因，该基因主要表达于终末分化细胞，稳定转染该基因的细胞出现G1期阻滞，细胞增殖也受到抑制，提示restin与细胞周期的调控有关。2... 详细信息

restin是本实验室于1999年在研究全反式维甲酸诱导细胞分化时克隆得到的一种黑色素瘤相关抗原家族的新基因，该基因主要表达于终末分化细胞，稳定转染该基因的细胞出现G1期阻滞，细胞增殖也受到抑制，提示restin与细胞周期的调控有关。2001年，Chomez等通过同源序列筛选Genbank数据库，也发现了该基因，并命名为MAGE-H1，但有关该基因的具体生物学功能及作用机制的报道还很少。研究蛋白质的细胞内定位是了解蛋白质功能的基本方式之一。核内蛋白质如转录因子在许多基本细胞生物学行为诸如增殖、分化、凋亡等的调控上发挥重要作用，所以克隆核内蛋白质的基因、分析其核定位的分子机理，具

关键词： Restin 核定位信号序列 importinαⅡ

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胰岛素样生长因子结合蛋白-6（IGFBP-6）的细胞生长抑制作用及其核定位顺序的研究

胰岛素样生长因子结合蛋白-6（IGFBP-6）的细胞生长抑制作用及其...

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作者：韩建军中国协和医科大学

学位级别：硕士

IGFBP-6是IGF-Ⅱ的高亲和力结合蛋白,对IGF-Ⅱ活性具有重要的调节作用。IGFBP-6所具有的抑制IGF-Ⅱ促肿瘤生长活性的作用已经在很多肿瘤细胞系中得到了证实。随着研究的深入,IGFBP家族越来越多的生物学活性受到了人们的重视。IGFBP-6在... 详细信息

IGFBP-6是IGF-Ⅱ的高亲和力结合蛋白,对IGF-Ⅱ活性具有重要的调节作用。IGFBP-6所具有的抑制IGF-Ⅱ促肿瘤生长活性的作用已经在很多肿瘤细胞系中得到了证实。随着研究的深入,IGFBP家族越来越多的生物学活性受到了人们的重视。IGFBP-6在体内广泛的分布及其与IGF-Ⅱ的特殊关系表明对其活性的研究具有重要的意义。本论文的研究工作从以下方面对IGFBP-6的功能进行了研究。首先在原核表达体系中表达了重组人IGFBP-6及其C端,分离纯化得到了足够纯度的蛋白产品,检测了重组人IGFBP-6抑制IGF-Ⅱ促肿瘤细胞生长的活性,并对IGFBP-6及其C端独立于IGF的生物学活性做了初步的研究。 1.成功构建了原核表达载体pET-30b-IGFBP-6和pET-30b-IGFBP-6-C,转化***感受态细胞,筛选到了高表达量的菌株,优化了表达条件。 2.成功分离纯化了可溶性表达的IGFBP-6及其C端,得到纯度大于90%的目的蛋白。 3.检测了IGFBP-6抑制IGF-Ⅱ促肿瘤细胞A549增殖的活性。 4.检测了IGFBP-6及其C端单独也可以抑制PC-3M细胞的生长,证实IGFBP-6具有不依赖IGF-Ⅱ的生物活性,且进一步明确该作用位点就在其C端。另外,用本室保存的pEGFP-C1-IGFBP-6的质粒瞬时转染PC-3M细胞,根据绿色荧光强度在细胞核和细胞浆中的比例,确定了IGFBP-6在细胞核中是有分布的;且构建了pEGFP-C1-BP6-nls和pEGFP-C1-BP6-mut两个真核转染质粒,明确了IGFBP-6的核定位相关序列;并通过Annexin V-EGFP和PI双染凋亡检测试剂盒检测了过表达IGFBP-6的PC-3M的凋亡,为进一步研究IGFBP-6的非IGF依赖的生物学活性提供了理论依据。通过上述工作,首先在原核表达体系中表达并分离纯化到可用于后续试验的IGFBP-6及其C端,检测到IGFBP-6不仅可以抑制IGF-Ⅱ的促肿瘤细胞生长作用,而且有独立于IGF-Ⅱ的抑制PC-3M细胞生长的作用,并进一步明确该作用位点在其C端结构域;其次,确定了IGFBP-6在细胞核中的分布,并且明确了其核定位相关序列,检测了IGFBP-6诱导的PC-3M细胞凋亡,为进一步深入研究IGFBP-6在细胞内的生物活性奠定了基础。

关键词： IGFBP-6 非IGF依赖核定位信号序列

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对虾白斑综合征病毒核衣壳蛋白VP15核定位信号序列的确定

对虾白斑综合征病毒核衣壳蛋白VP15核定位信号序列的确定

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湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会

作者：李莉娟石正丽中国科学院武汉病毒研究所中国科学院武汉病毒研究所

对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,简称WSSV)是1993年以来引发我国大面积暴发对虾病毒性疾病的主要病原,并且也给世界对虾养殖业造成了巨大的经济损失。WSSV的毒力很强,被感染的对虾一般在3—7天内的死亡率高达100%。WSSV... 详细信息

对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,简称WSSV)是1993年以来引发我国大面积暴发对虾病毒性疾病的主要病原,并且也给世界对虾养殖业造成了巨大的经济损失。WSSV的毒力很强,被感染的对虾一般在3—7天内的死亡率高达100%。WSSV为dsDNA病毒,基因组大小为305,108bp,编码181个

关键词：对虾白斑综合征病毒核衣壳蛋白核定位信号序列

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MAGE家族新成员Restin入核分子机制的初步探讨

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科学技术与工程 2006年第18期6卷 2817-2821页

作者：王颖于芳付海燕杨国栋卢凡卢兹凡第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

restin是该实验室于1999年从维甲酸诱导分化的白血病细胞HL-60中克隆得到的一种黑色素瘤相关抗原(MAGE)家族的新基因,初步验证其生物学功能为阻滞细胞周期进程。利用生物学软件预测该基因所编码蛋白的N端含有一非典型二分裂核定位信号序... 详细信息

restin是该实验室于1999年从维甲酸诱导分化的白血病细胞HL-60中克隆得到的一种黑色素瘤相关抗原(MAGE)家族的新基因,初步验证其生物学功能为阻滞细胞周期进程。利用生物学软件预测该基因所编码蛋白的N端含有一非典型二分裂核定位信号序列(nuclearlocalizationsignal,NLS),且预测结果显示Restin入核可能与核转运蛋白importinαII的作用密切相关。因此克隆并鉴定了针对NLS等结构域的一系列截短体以及pACT-impotinαII,利用细胞双杂交技术对其进行相互作用以及作用部位的检测。结果证明Restin的入核确实与核定位信号序列以及核转运蛋白的相互作用有关。

关键词： Restin 核定位信号序列 importin α Ⅱ

来源：评论

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