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2015年中国水产学会学术年会

作者：沈晓丹陈杰蒋霞云邹曙明上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室

核定位序列(Nuclear localization sequence,NLS)——蛋白质的一个结构域,通常为一短的氨基酸序列,它能与入核载体相互作用,使蛋白能被运进细胞核。真核细胞核膜上的核孔复合体(nuclear pore complex,NPC)是细胞核内外进行物质交换的主... 详细信息

核定位序列(Nuclear localization sequence,NLS)——蛋白质的一个结构域,通常为一短的氨基酸序列,它能与入核载体相互作用,使蛋白能被运进细胞核。真核细胞核膜上的核孔复合体(nuclear pore complex,NPC)是细胞核内外进行物质交换的主要通道,当分子量为50k D以上时,蛋白质则只能通过主动转运进入细胞核.以这种方式进入细胞核的蛋白质必须在其氨基酸序列上拥有特殊的核定位信号。金鱼Tgf2转座酶蛋白分子量约73k D,需要通过特定的核信号作用才可被带入核中。以p EGFP-C1为骨架,以本实验室保存的含有金鱼Tgf2转座酶序列载体中扩增Tgf2转座酶编码序列,构成p EGFP-C1-Tgf2TP、p EGFP-C1-Tgf2TP(1-618)、p EGFP-C1-Tgf2TP(74-649)融合表达质粒。将对照组p EGFP-C1和各重组质粒分别用脂质体介导,瞬时转染293细胞,荧光显微镜观察蛋白的核定位情况。单独表达的EGFP呈现全细胞均匀分布;p EGFP-C1-Tgf2TP(1-618)呈现出细胞质中具有更高的融合蛋白表达;p EGFP-C1-Tgf2TP、p EGFP-C1-Tgf2TP(74-649)表达出的融合蛋白部分可观察到呈现出细胞核较细胞质具有更均一明亮的现象。这些结果说明金鱼Tgf2转座酶氨基酸序列中含有可以影响蛋白入核的定位信号;在金鱼Tgf2转座酶蛋白的619-649这段氨基酸中包含NLS序列。

关键词： Tgf2转座子核定位信号 NLS 转座酶

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鸭瘟病毒UL47蛋白核定位信号协助UL41蛋白等由细胞质进入细胞核

鸭瘟病毒UL47蛋白核定位信号协助UL41蛋白等由细胞质进入细胞核

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十九次全国学术研讨会

作者：何天琼吴莉萍汪铭书吴英杨乔田斌程安春四川农业大学动物医学院

引言前期研究表明鸭瘟病毒(DPV) UL41蛋白(pUL41)不能独立由细胞质进入细胞核,围绕解析其入核机制开展的研究表明:材料与方法应用WB、IFA和碱基缺失等技术,对DPVUL41、UL47蛋白核定位机制等进行分析。结果与讨论(1)物信息学分析发现DPV... 详细信息

引言前期研究表明鸭瘟病毒(DPV) UL41蛋白(pUL41)不能独立由细胞质进入细胞核,围绕解析其入核机制开展的研究表明:材料与方法应用WB、IFA和碱基缺失等技术,对DPVUL41、UL47蛋白核定位机制等进行分析。结果与讨论(1)物信息学分析发现DPV的UL47蛋白(pUL47)第40-50位和768-777位氨基酸具备核定位信号(NLS)特征。

关键词：细胞核细胞质鸭瘟病毒核定位信号

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甾体激素受体中的核定位信号

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国外医学(卫生经济分册) 1988年第1期 36-37页

作者： Wolff B 宋亮年

早先利用细胞提取物进行的许多研究资料支持这样一种模型:胞浆甾体激索受体与其激素结合后,通过一种未知过程进入细胞核,与染色质结合,调节基因表达。但最近的工作,尤其是 King 和 Gr-eene、以及 Welsons、Lieberman 和 Gorski 等已向... 详细信息

<正> 早先利用细胞提取物进行的许多研究资料支持这样一种模型:胞浆甾体激索受体与其激素结合后,通过一种未知过程进入细胞核,与染色质结合,调节基因表达。但最近的工作,尤其是 King 和 Gr-eene、以及 Welsons、Lieberman 和 Gorski 等已向这一模型提出了挑战,他们的工作表明,在人乳癌MCF7细胞及大鼠垂体 GH3细胞中,大部分未占据

关键词：核定位信号调节基因提取物甾体激素街体激素大鼠定点突变基因融合基因转移核蛋白体

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用pdx-1和EGFP建立核定位信号的实验教学模型

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昆明医学院学报 2009年第3期30卷 51-53页

作者：陈元晓何志颖田明李文林胡以平陈英杰昆明医学院细胞生物学及遗传学教研室云南昆明650031 第二军医大学细胞生物学教研室上海200433 昆明医学院人体解剖学教研室云南昆明650031

目的建立核定位信号的实验教学模型.方法构建pdx-1基因和EGFP基因融合表达的表达载体,脂质体转染法将载体转入培养的HeLa细胞,荧光显微镜下观察.结果转染的HeLa细胞仅在细胞核发荧光,证明pdx-1蛋白的核定位信号将融合蛋白EGFP-pdx-1引... 详细信息

目的建立核定位信号的实验教学模型.方法构建pdx-1基因和EGFP基因融合表达的表达载体,脂质体转染法将载体转入培养的HeLa细胞,荧光显微镜下观察.结果转染的HeLa细胞仅在细胞核发荧光,证明pdx-1蛋白的核定位信号将融合蛋白EGFP-pdx-1引导到细胞核.结论用转录因子pdx-1和增强型绿色荧光蛋白EGFP建立核定位信号的实验教学模型是可行的.

关键词：胰十二指肠同源框-1 增强型绿色荧光蛋白核定位信号实验教学模型

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BRD7核定位信号的结构分析和功能鉴定

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生物技术通讯 2006年第6期17卷 843-847页

作者：周鸣李小玲徐晓杰周后德刘华英何佳瑾彭聪沈守荣范松青张荔茗向波李桂源中南大学湘雅医学院肿瘤研究所湖南长沙410078 中南大学湘雅三医院湖南长沙410013 中南大学湘雅二医院湖南长沙410003

目的:对BRD7的核定位信号进行预测、结构分析和功能鉴定,并考察其对BRD7亚细胞定位的影响。方法:通过生物信息学对BRD7的核定位信号进行预测和结构分析,然后利用绿色荧光蛋白(GFP)介导的直接荧光和间接免疫荧光定位方法分别对核定位信... 详细信息

目的:对BRD7的核定位信号进行预测、结构分析和功能鉴定,并考察其对BRD7亚细胞定位的影响。方法:通过生物信息学对BRD7的核定位信号进行预测和结构分析,然后利用绿色荧光蛋白(GFP)介导的直接荧光和间接免疫荧光定位方法分别对核定位信号的功能进行鉴定,并考察其对BRD7亚细胞定位的影响。结果:BRD7的65～96位氨基酸残基具有潜在核定位信号(NLS)的结构特征,该核定位信号包含3簇碱性氨基酸残基,可视为由2个紧密相邻、部分重叠的双向核靶序列NLS1和NLS2组成;并发现NLS及其构成上的NLS1和NLS2均具有介导异源蛋白GFP胞核定位的功能,从而证实BRD7的65～96位残基为BRD7功能性核定位信号所在区域,且单簇碱性氨基酸残基的缺失不足以破坏其核定位信号的功能;同时发现野生型BRD7呈胞核分布,而核定位信号缺失型BRD7主要呈胞浆分布。结论:BRD7的65～96位氨基酸残基为BRD7功能性核定位信号所在区域,在BRD7胞核分布模式中发挥了十分重要的作用。

关键词： BRD7 转录因子亚细胞定位核定位信号

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新城疫病毒M蛋白核定位信号突变影响病毒复制的作用机制研究

新城疫病毒M蛋白核定位信号突变影响病毒复制的作用机制研究

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第九届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：段志强袁超韩一帆周磊赵佳福阮涌陈佳琪倪萌萌嵇辛勤贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室

引言/目的新城疫病毒(NDV) M蛋白在病毒感染早期可通过携带的核定位信号(NLS)进入细胞核。我们前期研究发现,M蛋白NLS突变不仅丧失了细胞核定位特性,而且显著降低NDV的复制能力和致病性,但是具体机制尚不清楚。本研究进一步利用TMT定量... 详细信息

引言/目的新城疫病毒(NDV) M蛋白在病毒感染早期可通过携带的核定位信号(NLS)进入细胞核。我们前期研究发现,M蛋白NLS突变不仅丧失了细胞核定位特性,而且显著降低NDV的复制能力和致病性,但是具体机制尚不清楚。本研究进一步利用TMT定量蛋白质组学技术研究亲本病毒rSS1GFP和M蛋白NLS突变体病毒rSS1GFP-M/NLSm感染细胞后的差异表达蛋白,旨在阐释M蛋白NLS突变影响NDV复制的作用机制。

关键词：感染细胞差异表达蛋白病毒复制核定位信号作用机制研究新城疫病毒

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鸭瘟病毒UL13蛋白的细胞内定位分析及其核定位信号的确定

鸭瘟病毒UL13蛋白的细胞内定位分析及其核定位信号的确定

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第三届水禽疫病防控研讨会

作者：胡溪霞程安春汪铭书陈舜贾仁勇朱德康刘马峰刘菲孙昆峰杨乔吴英陈孝跃四川农业大学预防兽医研究所四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心动物疫病与人类健康四川省重点实验室

引言鸭瘟是由鸭瘟病毒（DPV）感染所引起的的急性、败血性及高度致死性的病毒性传染病,其病原属于α-疱疹病毒亚科成员,其中,UL13基因编码的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在整个疱疹病毒家族成员中均高度保守,其在病毒的复制、传播、病毒生理... 详细信息

引言鸭瘟是由鸭瘟病毒（DPV）感染所引起的的急性、败血性及高度致死性的病毒性传染病,其病原属于α-疱疹病毒亚科成员,其中,UL13基因编码的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在整个疱疹病毒家族成员中均高度保守,其在病毒的复制、传播、病毒生理活动的各种调节及宿主部分生理活动中有着重要作用。已有研究的疱疹病毒UL13同源蛋白均被报道能在感染细胞的细胞核中发挥重要功能。而鸭瘟病毒UL13蛋白的细胞内定位还没有研究。本文旨在探

关键词：鸭瘟病毒感染细胞核定位信号细胞内定位

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BRD7核定位信号的结构分析和功能鉴定

BRD7核定位信号的结构分析和功能鉴定

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第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：周鸣李小玲徐晓杰周后德刘华英何佳瑾武明花沈守荣曹莉王蓉唐珂李桂源中南大学湘雅医学院肿瘤研究所中南大学湘雅医学院肿瘤研究所中南大学湘雅医学院肿瘤研究所中南大学湘雅医学院肿瘤研究所中南大学湘雅医学院肿瘤研究所中南大学湘雅医学院肿瘤研究所中南大学湘雅医学院肿瘤研究所中南大学湘雅第三医院中南大学湘雅医学院肿瘤研究所中南大学湘雅医学院肿瘤研究所中南大学湘雅医学院肿瘤研究所中南大学湘雅医学院肿瘤研究所

目的:BRD7是我室通过cDNA代表性差异分析自主克隆的一个鼻咽癌抑瘤新基因,并已初步证实为一个潜在的核转录调节因子。本研究旨在对BRD7的核定位信号进行预测、结构分析和功能鉴定,并考察其对BRD7亚细胞定位的影响。方法:通过生物信息学... 详细信息

目的:BRD7是我室通过cDNA代表性差异分析自主克隆的一个鼻咽癌抑瘤新基因,并已初步证实为一个潜在的核转录调节因子。本研究旨在对BRD7的核定位信号进行预测、结构分析和功能鉴定,并考察其对BRD7亚细胞定位的影响。方法:通过生物信息学对BRD7的核定位信号进行预测和结构分析,然后利用绿色荧光蛋白(GFP)介导的直接荧光和间接免疫荧光定位方法分别对核定位信号的功能进行鉴定,并考察其对BRD7亚细胞定位的影响。结果:BRD7 的65—96位氨基酸具有潜在核定位信号(NLS)的结构特征, 该核定位信号包含三簇碱性氨基酸残基,可视为由两个紧密相邻、部分重叠的双向核靶序列NLS1和NLS2组成,并发现 NLS及其构成上的NLS1和NLS2均具有介导异源蛋白GFP 胞核定位的功能,从而证实BRD7的65—96位氨基酸为BRD7 功能性核定位信号所在区域,且单簇碱性氨基酸残基的缺失不足以破坏其核定位信号的功能;同时发现野生型BRD7呈胞核分布,而核定位信号缺失型BRD7主要呈胞浆分布。结论:BRD7的65—96位氨基酸为BRD7功能性核定位信号所在区域,在BRD7胞核分布模式中发挥了十分重要的作用。

关键词： BRD7 转录因子亚细胞定位核定位信号

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鸭圆环病毒Rep蛋白的核定位信号研究

鸭圆环病毒Rep蛋白的核定位信号研究

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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：王鑫李志国张瑞华陈君豪夏琳琳林少莉谢之景朱岩丽姜世金山东农业大学动物医学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室

引言近年来动物圆环病毒受到研究人员越来越多的关注,一是由于越来越多的圆环病毒家族成员在动物中被发现;二是随着对圆环病毒特别是对CAV和PCV2等动物圆环病毒研究的深入,人类越来越认识到圆环病毒在动物体内导致的促进免疫细胞凋亡、... 详细信息

引言近年来动物圆环病毒受到研究人员越来越多的关注,一是由于越来越多的圆环病毒家族成员在动物中被发现;二是随着对圆环病毒特别是对CAV和PCV2等动物圆环病毒研究的深入,人类越来越认识到圆环病毒在动物体内导致的促进免疫细胞凋亡、损伤免疫器官进而导致免疫抑制所带来的严重危害。鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)在我国鸭群中普遍存在,研究表明其具有两个基因型,并且复制

关键词：鸭圆环病毒基因型 Rep 核定位信号

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串联重复核定位信号的绿色荧光蛋白融合载体的构建与原核表达

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贵阳医学院学报 2008年第4期33卷 340-343页

作者：邓鹏陈腾祥龚小卫南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的:构建绿色荧光蛋白-串联重复核定位信号融合蛋白的表达载体(His-EGFP-3xNLS),并在原核细胞中进行表达与纯化。方法:采用PCR方法从原先克隆在pEGFP-C1载体中的3xNLS与EGFP编码序列扩增出来,使用常规酶切和连接方法将其重组至pET-14b... 详细信息

目的:构建绿色荧光蛋白-串联重复核定位信号融合蛋白的表达载体(His-EGFP-3xNLS),并在原核细胞中进行表达与纯化。方法:采用PCR方法从原先克隆在pEGFP-C1载体中的3xNLS与EGFP编码序列扩增出来,使用常规酶切和连接方法将其重组至pET-14b载体中,对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用IPTG诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白。结果:构建的His-EGFP-3xNLS融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36 kD的融合蛋白。结论:成功构建了His-EGFP-3xNLS融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究NLS介导信号分子入核提供了实验材料。

关键词：核定位信号载体蛋白质类基因表达蛋白纯化

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