检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2013年第3期40卷 544-544页

作者：邱并生 <微生物学通报>编委会北京100101

在研究根瘤菌与豆科植物共生关系的过程中,人们发现根瘤中同时定居着许多与根瘤菌不同的内生菌,这些非共生细菌生活在根瘤中,但不引起植物产生明显的病害,为根瘤内生细菌。根瘤内生细菌不仅将植物作为其栖息场所,而且对宿主植物有促生... 详细信息

在研究根瘤菌与豆科植物共生关系的过程中,人们发现根瘤中同时定居着许多与根瘤菌不同的内生菌,这些非共生细菌生活在根瘤中,但不引起植物产生明显的病害,为根瘤内生细菌。根瘤内生细菌不仅将植物作为其栖息场所,而且对宿主植物有促生、防病、内生联合固氮等广泛的生物学作用。本刊2011年第6期刊登了龚明福、

关键词：苦豆子根瘤内生细菌棉花枯萎病生物防治拮抗

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根瘤内生细菌抗南方根结线虫的生物活性研究

根瘤内生细菌抗南方根结线虫的生物活性研究

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作者：赵劲捷沈阳农业大学

学位级别：硕士

根结线虫是植物寄生线虫中对各种作物最具破坏性的物种之一,其寄生性强,寄主范围广,繁育周期短且繁殖频率高,给农业生产造成巨大产量损失。生物防治微生物对环境友好且通常对人畜无害,是控制根结线虫病害的一种安全有效措施。本研究从44... 详细信息

根结线虫是植物寄生线虫中对各种作物最具破坏性的物种之一,其寄生性强,寄主范围广,繁育周期短且繁殖频率高,给农业生产造成巨大产量损失。生物防治微生物对环境友好且通常对人畜无害,是控制根结线虫病害的一种安全有效措施。本研究从448株根瘤内生细菌分离株中筛选并鉴定出对南方根结线虫有较好防效的生防细菌,通过盆栽和田间试验验证其防效,并研究了其在番茄根部的定殖分布。主要研究结果如下:1.防治南方根结线虫的根瘤内生细菌筛选及防效研究:通过田间初筛试验和盆栽复筛试验筛选出5株对南方根结线虫有较好防效的根瘤内生细菌Sneb1994,Sneb1995,Sneb1997,Sneb2000和Sneb2001。这五株内生细菌显示出高杀线虫活性,处理24 h后二龄幼虫(J2)死亡率皆为85%以上,同时对卵孵化具有抑制作用,并可促进番茄种子萌发及生长。盆栽试验结果表明,五株内生细菌的发酵液灌根处理均能显著减少根结和卵囊数量,并促进番茄植株生长。温室田间防效试验结果显示菌株Sneb1997和Sneb2000的发酵液对番茄根结线虫病有较好防效,并可促进番茄植株生长和提高果实产量。2.有效根瘤内生细菌的鉴定:通过16S rDNA基因序列分析并结合菌株形态特征和生理生化特性对筛选的5株有效内生细菌进行鉴定,鉴定菌株Sneb1994为氧化微杆菌(Microbacterium oxydans),Sneb1995为油菜假单胞菌(Pseudomonas brassicacearum),Sneb1997为防御假单胞菌(***),Sneb2000为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),Sneb2001为普利茅斯沙雷氏菌(Serratia plymuthica),其中氧化微杆菌(***)用于防治根结线虫病尚为首次报道。3.生防菌株Sneb1997和Sneb2001在番茄植株的定殖研究:将含有gfp基因的质粒PMP2444以电击法导入到生防菌株Sneb1997和Sneb2001中,构建可以发出绿色荧光的菌株Sneb1997-gfp和Sneb2001-gfp,标记菌株的生长速率及杀线虫活性与野生菌株相比没有显著差异,且质粒PMP2444在标记菌株中能稳定遗传。标记菌株发酵液灌根处理后可大量定殖于番茄根部,菌株Sneb1997-gfp于15 d种群数量达到最大,每克根为2.41×10～6 cfu;菌株Sneb2001-gfp的定殖数量低于菌株Sneb1997-gfp,于第10 d种群数量达到最大,每克根为8.79×10～5 cfu。此外,在番茄茎中也可检测到标记菌株。通过激光扫描共聚焦显微镜观察显示,菌株Sneb1997-gfp优先定殖于番茄根毛和根表,之后在根部表皮细胞、根尖及根部维管束中大量聚集,并在南方根结线虫侵染番茄根部20 d后,于根部巨细胞中观察到菌株聚集;菌株Sneb2001-gfp只在番茄根毛、根表、根部表皮细胞及维管束中观察到。本试验从448株根瘤内生细菌分离株中筛选并鉴定出5株高效生防细菌,其中氧化微杆菌用于防治根结线虫病尚为首次报道,此外菌株Sneb1997和Sneb2001可定殖于番茄根系,研究结果为植物线虫病害的生物防治提供了新的微生物资源。

关键词：南方根结线虫根瘤内生细菌防效定殖番茄

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防治南方根结线虫的根瘤内生细菌的筛选及鉴定

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中国生物防治学报 2020年第5期36卷 811-820页

作者：赵劲捷王帅范海燕赵迪刘晓宇朱晓峰王媛媛段玉玺陈立杰沈阳农业大学植物保护学院沈阳110866 沈阳农业大学分析测试中心沈阳110866 沈阳农业大学理学院沈阳110866 沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110866

根结线虫的严重发生给农作物生产造成巨大经济损失,生物防治是控制该病的一种安全有效措施。本研究从448株根瘤内生细菌分离株中筛选出3株对南方根结线虫有较好防效的生防细菌Sneb1994、Sneb1995和Sneb2000,3个菌株发酵滤液对南方根结线... 详细信息

根结线虫的严重发生给农作物生产造成巨大经济损失,生物防治是控制该病的一种安全有效措施。本研究从448株根瘤内生细菌分离株中筛选出3株对南方根结线虫有较好防效的生防细菌Sneb1994、Sneb1995和Sneb2000,3个菌株发酵滤液对南方根结线虫2龄幼虫(J2)均有高毒杀活性,处理24 h校正死亡率达85%以上,同时对卵孵化具有抑制作用,并可促进番茄种子生长。盆栽试验结果表明,3个菌株发酵液灌根处理均能显著减少根结数和卵囊数,相对防效为37.95%~44.51%,同时促进番茄植株的生长。经形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析,鉴定菌株Sneb1994、Sneb1995和Sneb2000分别为氧化微杆菌Microbacterium oxydans、油菜假单胞菌Pseudomonas brassicacearum和蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus。氧化微杆菌为首次报道对根结线虫有效的生防菌株。这些根瘤内生细菌菌株的发掘,为植物线虫病害的生物防治提供了新的微生物资源。

关键词：南方根结线虫根瘤内生细菌鉴定防效番茄

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达乌里胡枝子产铁载体根瘤内生细菌的鉴定及其促生抗逆效应

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微生物学通报 2023年第10期50卷 4413-4432页

作者：杨凯元韩玲娟梁银萍黄臣蒋霖赵祥高鹏山西农业大学草业学院山西晋中030600 农业农村部饲草高效生产模式创新重点实验室山西晋中030600

【背景】根瘤是植物-微生物共生的特殊结构,蕴含丰富的微生物资源。产铁载体根瘤内生细菌对促进结瘤固氮具有重要作用,但目前关于其是否对植物具有促生作用尚不明确。【目的】筛选鉴定达乌里胡枝子(Lespedeza daurica)根瘤产铁载体内生... 详细信息

【背景】根瘤是植物-微生物共生的特殊结构,蕴含丰富的微生物资源。产铁载体根瘤内生细菌对促进结瘤固氮具有重要作用,但目前关于其是否对植物具有促生作用尚不明确。【目的】筛选鉴定达乌里胡枝子(Lespedeza daurica)根瘤产铁载体内生细菌,明确其促生作用,为丰富植物促生菌资源提供新的途径。【方法】利用铬天青(chrome azurol S, CAS)培养基初筛产铁载体根瘤内生细菌,对目的菌株进行鉴定;通过液体发酵试验确定其产铁载体能力;利用促生功能培养基测定其他促生特性;利用不同盐浓度(0.01%-9.00%)、不同pH值(3.0-12.0)的酵母甘露醇(yeast mannitol,YMA)液体培养基和不同培养温度(4-60℃)确定其抗逆特性;通过盆栽试验初步验证其对植物的促生作用。【结果】48株根瘤内生细菌可产铁载体,其中9株为高产铁载体细菌,分别为TG4、TG9、TG13、TG15、TG28、TG32、TG38、TG76和TG78,铁载体相对表达量为26%-93%;经鉴定,除了TG28为巨大普里斯特氏菌(Priestiamegaterium),其余8株菌均为耐寒短杆菌(Brevibacterium frigoritolerans);TG15、TG28、TG76和TG78具有产生长素(indole-3-acetic acid, IAA)(7.62-64.90μg/mL)、1-氨基环丙烷-1-羧酸(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid, ACC)脱氨酶和固氮能力;而且在盐浓度0.01%-5.00%、pH 4.0-12.0和温度4-37℃均可生长;TG15和TG28显著提高了达乌里胡枝子的茎粗,且TG28显著提高了株高。【结论】达乌里胡枝子根瘤中定殖有促生和抗逆效应较强的产铁载体细菌,但对植株的促生作用仅表现在形态发育方面,预测其分泌的铁载体等促生物质可能对共生的结瘤固氮细菌产生积极作用。

关键词：达乌里胡枝子根瘤内生细菌产铁载体细菌促生抗逆

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苦豆子根瘤内生细菌分离及其对棉花枯萎病的生物防治效果测定

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微生物学通报 2011年第6期38卷 865-870页

作者：龚明福韩松李超徐琳韦革宏西北农林科技大学生命科学学院陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨陵712100 塔里木大学生命科学学院新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室新疆阿拉尔843300 河西学院生命科学与工程系甘肃张掖734000

对从塔里木盆地苦豆子中分离得到的内生细菌进行皿内涂布拮抗实验、对峙培养法拮抗实验、胞外分泌物拮抗性测定和盆栽控病实验等研究,结果表明塔里木盆地苦豆子根瘤中存在大量的棉花枯萎病菌拮抗性内生细菌。皿内涂布法筛选结果表明60... 详细信息

对从塔里木盆地苦豆子中分离得到的内生细菌进行皿内涂布拮抗实验、对峙培养法拮抗实验、胞外分泌物拮抗性测定和盆栽控病实验等研究,结果表明塔里木盆地苦豆子根瘤中存在大量的棉花枯萎病菌拮抗性内生细菌。皿内涂布法筛选结果表明60株苦豆子根瘤内生细菌中有48株相对抑菌率超过50%。对峙培养法对48株拮抗性内生细菌进一步筛选的结果表明,对棉花枯萎病菌抑菌距离超过20 mm的菌株有40株。40株拮抗性内生细菌胞外分泌物对棉花枯萎病菌的抑菌距离超过5 mm的有26株。KDRE12和KDRE41对棉花枯萎病的盆栽控病平均防效分别为67.11%和72.65%,具有应用潜力。

关键词：苦豆子根瘤内生细菌棉花枯萎病生物防治拮抗

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泡桐根瘤内生细菌的分离及初步鉴定

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广东农业科学 2019年第1期46卷 36-42页

作者：丁玮吕成群黄宝灵李昆龙陈振飞任涵康凯广西大学林学院广西南宁530004 广西绿桐林业科技有限公司广西南宁530028

【目的】为了探究非豆科植物泡桐与微生物共生固氮体系,对泡桐根瘤内生细菌的分离培养条件及其系统发育地位进行初步研究。【方法】对从广西钦州市采集的泡桐根瘤上分离纯化得到的根瘤内生细菌,进行传统生理生化研究和16S rDNA系统发育... 详细信息

【目的】为了探究非豆科植物泡桐与微生物共生固氮体系,对泡桐根瘤内生细菌的分离培养条件及其系统发育地位进行初步研究。【方法】对从广西钦州市采集的泡桐根瘤上分离纯化得到的根瘤内生细菌,进行传统生理生化研究和16S rDNA系统发育分析。【结果】经分离纯化得到9株根瘤内生细菌,大部分菌株能较好地利用8种碳源;78%的菌株能利用铵盐,89%的菌株能利用硝酸盐;所有的供试菌株在3-酮基乳糖和淀粉水解试验中呈阴性;89%的菌株能利用柠檬酸盐;B.T.B反应除菌株PG-7产碱外,其余都产酸;33%的菌株能使硝酸盐还原;有56%的菌株能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好,多数菌株具备豆科植物根瘤菌的一般生理生化特征。通过16S rDNA全序列分析,确定9株供试菌株可分为4个菌属,其中菌株PG-1和PG-2共属于土壤杆菌属(Agrobacterium),PG-3、PG-5、PG-6、PG-8和PG-9等5株菌株共属于根瘤菌属(Rhizobium),PG-4隶属于草螺菌属(Herbaspirillum),PG-7隶属于伯克氏菌属(Burkholderia)。【结论】分离自同一寄主的根瘤内生细菌其生理生化特性方面存在较大的差异性,同时表现出了遗传的多样性。

关键词：泡桐根瘤内生细菌生理生化特性 16SrDNA全序列分析

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白花泡桐幼林根瘤内生细菌的分离及鉴定

白花泡桐幼林根瘤内生细菌的分离及鉴定

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作者：丁玮广西大学

学位级别：硕士

为了探究非豆科植物泡桐与微生物共生固氮体系,对泡桐根瘤内生细菌的分离培养条件及其系统发育地位进行初步研究。对从广西钦州市和南宁市2处地点采集的白花泡桐(Paulownia fortunei(Seem.)Hemsl)根瘤上分离、纯化获得的根瘤内生细菌菌... 详细信息

为了探究非豆科植物泡桐与微生物共生固氮体系,对泡桐根瘤内生细菌的分离培养条件及其系统发育地位进行初步研究。对从广西钦州市和南宁市2处地点采集的白花泡桐(Paulownia fortunei(Seem.)Hemsl)根瘤上分离、纯化获得的根瘤内生细菌菌株,进行了传统生理生化特性、生长适应性、回接试验,并对16SrDNA全序列以及固氮nifA基因片段序列进行了测定和系统发育分析。研究结果如下:1.经分离纯化共获得21株泡桐根瘤内生细菌菌株,从菌体的形态特征来看,除菌株PG-7外,其余菌株均为杆状,革兰氏染色均为阴性,所有菌株均无芽孢,有鞭毛,33%的菌株有荚膜,这些菌株的形态与根瘤菌有许多相似性。从生理生化特征的鉴定来看,不同菌株之间存在着较明显的差异。3-酮基乳糖试验均呈阴性,10%的菌株可以水解淀粉,90%的菌株都能利用柠檬酸盐,33%的菌株能还原硝酸盐,大部分菌株表现牛肉膏蛋白胨的阳性反应,B.T.B反应试验中95%的菌株均产酸。多数供试菌株能不同程度地利用KNO3和(NH4)2HPO4两种氮源,有95%的菌株能利用硝酸盐,有90%的菌株能利用铵盐,绝大部分菌株都能在含有碳源的培养基上生长良好。2.泡桐根瘤内生细菌的最适生长温度为30℃左右,多数菌株不能耐高温和低温。耐酸碱的范围较宽,有48%的菌株能在pH值为4.0～9.0的条件下生长,具有较强的耐碱性,耐酸能力相对较差。耐盐能力较好,有81%的菌株能在NaC1为2.0%的浓度下生长。大部分供试菌株对Sm和Cm抗性最强,而对Tc和Gm无抗性,不同菌株对抗菌素的抗性有较大差异。3.回接结瘤试验中,接种9株根瘤内生菌株的试管幼苗均未结瘤,但在盆栽试验中对泡桐幼苗的生长有明显的促进作用。不同的根瘤内生细菌对植株的促生效应有明显差异,接种菌株PG-9的幼苗株高和地径生长量为最高。4.通过16SrDNA全序列分析,可将21株供试菌株分为6个细菌属,分别为根瘤菌属(Rhizobium)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、草螺菌属(Herbaspirillum)、伯克氏菌属(Burkholderia)、壳聚糖酶产生菌属(Mitsuaria)和鞘脂菌属(Sphingobium)。其中根瘤菌处于优势地位,有67%的菌株都是根瘤菌,说明了泡桐根瘤内生细菌具有丰富地遗传多样性。5.对供试菌株的nifA基因片段进行了扩增和测序,通过比对分析得出,菌株PG-7与伯克氏菌属的nifA基因有97%的相似性,而其余菌株与根瘤菌属的nifA基因均有普遍相似性,与参比菌株相似性均在95%至以上,最高达到99%。

关键词：白花泡桐根瘤内生细菌生物学特性 16S rDNA全序列分析固氮nifA基因

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小叶罗汉松、竹柏根瘤内生细菌的分离和鉴定

小叶罗汉松、竹柏根瘤内生细菌的分离和鉴定

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作者：于新宁广西大学

学位级别：硕士

本工作从广西林业科学研究院和广西大学校园内6处不同地点采集小叶罗汉松和竹柏的根瘤,从中分离纯化得到23个菌株,均为杆状菌,革兰氏染色阴性,有鞭毛。根据芽孢的有无可将23个菌株初步分为2大细菌类群,即:13株不产芽孢类杆菌和10株产芽... 详细信息

本工作从广西林业科学研究院和广西大学校园内6处不同地点采集小叶罗汉松和竹柏的根瘤,从中分离纯化得到23个菌株,均为杆状菌,革兰氏染色阴性,有鞭毛。根据芽孢的有无可将23个菌株初步分为2大细菌类群,即:13株不产芽孢类杆菌和10株产芽孢杆菌。按照杰明细菌鉴定手册,将2大类群细菌分别进行种属鉴定:13株不产芽孢类杆菌经过系统鉴定,以及结合其侵染豆科植物刺槐的途径研究与回接原宿主植物结瘤的研究,初步确定其中有2个菌株C4和C4Y41属于根瘤菌属细菌;10株产芽孢类杆菌通过传统表型分类法及16SrDNA编码序列同源性比较分析,结果与Bacillus subtilis有高达99%的同源性,因此我们鉴定该10个菌株为枯草芽孢杆菌。同时我们也将10株枯草芽孢杆菌接种到刺槐幼苗和原宿主植物幼苗上,结果发现,供试的10个菌株都可以侵染豆科植物刺槐结瘤,有50%的菌株能使接种后的植株生物量比不接种植株生物量要高,增加幅度0.05%—37.97%,从而可知,有部分的菌株对苗木的生长有一定的促进作用;供试的10个菌株也都可以侵染原宿主植物结瘤。本研究中,利用PCR技术作为基因克隆的重要手段,根据Genbank中nifA基因序列设计特异引物,PCR扩增出一段与Klebsiella pneumoniae nif gene cluster有99%的同源性的片断,可以作为筛选菌株C421R基因组文库中的探针。

关键词：根瘤内生细菌分离和特性互接结瘤回接结瘤 16SrDNA序列 nifA

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鸡毛松根瘤内生细菌多样性研究

鸡毛松根瘤内生细菌多样性研究

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作者：庄培亮广西大学

学位级别：硕士

调查发现鸡毛松在自然界中具有普遍结瘤的现象，为了了解鸡毛松根瘤内生细菌的种类多样性，不同生态环境下鸡毛松根瘤内生细菌的多样性，以及鸡毛松根瘤内生细菌与豆科植物根瘤内生细菌的关系，我们对不同环境中的鸡毛松进行采样，采样... 详细信息

调查发现鸡毛松在自然界中具有普遍结瘤的现象，为了了解鸡毛松根瘤内生细菌的种类多样性，不同生态环境下鸡毛松根瘤内生细菌的多样性，以及鸡毛松根瘤内生细菌与豆科植物根瘤内生细菌的关系，我们对不同环境中的鸡毛松进行采样，采样后用传统方法对鸡毛松根瘤内生细菌进行划线分离。从广西防城十万大山处采得鸡毛松基部根瘤，并从中分离得到菌株M8-1，M8，M8-2’’，M82，M8-2’，M83，M8-2，M63，M61—1；从鸡毛松根与红豆根交际处采样，并从中分离得到菌株J1，J2，J3；从南宁良凤江采得鸡毛松根瘤，并从中分离得到M1，M2，M3，J4，M5。同时从与鸡毛松伴生的红豆根瘤中分离得到菌株H1。将从鸡毛松分离得到的各个菌株进行了侵染刺槐幼苗结瘤的实验，以验证其结瘤能力。从实验统计结果可以看出这些鸡毛松根瘤内生细菌均能使刺槐幼苗根瘤产生结瘤现象。为了验证十万大山处跟红豆树生长在一起的鸡毛松根瘤内生细菌的种类以及比较其与H1的亲缘关系，因此对J1，J2，J3，H1进行了16S rDNA序列的测序鉴定，并比较了J1和H1，J2和H1的16S rDNA序列的相似性。从测序结果可以看出J1，J2，H1为未知细菌，从序列比较结果可以看出J1和H1，J2和H1的16S rDNA序列的相似性达到98％，亲缘关系较近。同时由于菌株J4和M8在侵染刺槐结瘤试验中，J4表现出较高固氮酶活性，M8的结瘤的形状为圆锥状和圆形的组合体，与其他的结瘤形状不同，因此对J4和M8也进行了16S rDNA的测序鉴定。通过16S rDNA的测序鉴定，证明J4和M8为芽孢杆菌。由于明确了M8和J4是芽孢杆菌，并能导刺槐致结瘤，为了研究芽孢杆菌M8和J4侵染刺槐结瘤的侵染途径以及探讨其与刺槐共生关系机理，而进行了根瘤的解剖学超显微观察。研究发现：其侵染线结构与根瘤菌的侵染线极其相似，但侵染细胞结构却不尽相同；芽孢杆菌的类菌体周膜的形成以及菌体穿越细胞壁的方式也与根瘤菌有所不同。为了能更真实的了解鸡毛松根瘤内生细菌的多样性，避免传统培养方法使环境微生物的丢失，我们还进行了直接从根瘤中提取混合DNA，并通过测16S RDNA的方式检测其多样性的探索工作，虽然没有完成通过测定混合16S rDNA序列鉴定根瘤内生细菌多样性的工作，但顺利提取了根瘤内混合DNA。

关键词：微生物多样性根瘤内生细菌互接结瘤 16SrDNA序列

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枫香拟茎点霉B3对连作花生根瘤内生细菌和根际固氮菌的影响

枫香拟茎点霉B3对连作花生根瘤内生细菌和根际固氮菌的影响

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作者：武佳蕊南京师范大学

学位级别：硕士

作为我国重要经济油料作物,由于耕地面积有限以及经济效益等原因,花生连作十分普遍。花生连作后结瘤减少,病害频发,产量下降,导致严重的连作障碍。现有缓解连作障碍方法由于可操作性和经济效益等原因而难以实际应用。前期我们发现植物... 详细信息

作为我国重要经济油料作物,由于耕地面积有限以及经济效益等原因,花生连作十分普遍。花生连作后结瘤减少,病害频发,产量下降,导致严重的连作障碍。现有缓解连作障碍方法由于可操作性和经济效益等原因而难以实际应用。前期我们发现植物内生真菌枫香拟茎点霉B3 B3)能显著增加花生结瘤固氮并提高花生产量从而克服花生连作障碍。对内生菌克服连作障碍的机理进行初步探究,发现与内生真菌优化花生连作土壤微生物群落结构,调节花生根系分泌物,降解土壤中有害酚酸类化感物质等有关。但是否还有其它重要机理仍不清楚。氮素是花生植物生长的重要元素,花生生长过程中所需氮素主要来源于根瘤固氮、土壤供给、肥料供给三个途径。因此在本研究我们尝试从植物内生菌增加花生根瘤有益内生细菌多样性促进花生结瘤以及改善花生根际土壤固氮菌群落丰度及结构,改善土壤氮素水平两个角度探讨植物内生真菌促进花生结瘤固氮克服连作障碍的潜在机理。豆科植物根瘤中除了能诱导宿主植物结瘤并进行固氮的根瘤菌外,还存在着其他内生细菌,它们虽然不能诱导宿主植物结瘤,但却能进行生物固氮、促进宿主植物结瘤和生长,其生态功能逐渐受到重视。因此我们利用植物诱捕法,通过盆栽试验探究 *** B3对连作花生根瘤内生细菌多样性的影响。我们共设置了四个处理,分别为连作土壤种植花生(CK)、非连作土壤种植花生处理(NS)、连作土壤种植花生并且施加植物内生真菌*** B3(CSB3)、连作土壤种植花生并施加灭活B3(CSIB3)。在花生花期我们从花生根瘤中共分离出120株根瘤内生细菌,经鉴定它们分别属于变形菌门(Proteobacteria),拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)三个门,16个属,33个种。其中NS处理中包括3个门、17个种、34个菌株,比只包括1个门、12个种和27个菌株的CK处理多。CSB3处理有3个门、18个种和34个菌株,不仅比CK处理多也比含有2个门、11个种和25个菌株的CSIB3处理多。相关性分析表明,分离得到的16S rRNA基因与土壤pH和总氮显著正相关。本研究首次报导了植物内生真菌对连作花生根瘤内生细菌多样性性的影响,结果表明连作花生根瘤中根瘤内生细菌多样性低于非连作土壤,而施加活性*** B3能增加连作土壤中花生根瘤内生细菌的多样性,这可能与***改善土壤环境有关。随后分离得到的根瘤内生细菌33株代表菌株的植物促生长特性被分析,能诱导花生有效根瘤生成的仅有NS-13(Biradyrhzobium cytisi),与NS-13共接种促进花生结瘤的有5株,其中NS和CSB3处理各有3株、CK和CSIB3各1株。共接种时同时促进花生根长茎长和生物量的有13株,其中NS与CSB3均有9株,而CSIB3和CK分别只有3和2株。具有溶磷、产铁载体、产生长素及拮抗病原菌的菌株分别有16、16、11和7种。NS(10)与CSB3(10)处理溶磷菌株相同,其次为CSIB3(5)和CK处理。在所有能产铁载体的菌株中,CSB3处理有11个种,在四个处理中最多,其次是NS处理(10种),CSIB3处理(5种)高于CK处理(4种)。CSB3和NS均包含了 7种产IAA菌株,CK处理有4种,而CSIB3处理仅有1种。在所有拮抗花生病原真菌尖孢镰刀菌的7种菌株中,CSB3与NS处理均有5种菌株,而CK和CSIB3处理分别只有3和1种。以上结果表明,与非连作处理相比,连作导致了花生根瘤有益内生细菌种类的减少,而施加内生真菌B3后,增加了花生根瘤有益内生细菌的多样性,促进了花生的结瘤,这可能是植物内生真菌促进连作花生结瘤的一个重要原因。虽然花生所需氮素的40-50%来源于根瘤固氮,但还有一部分需从土壤中获得。作为生物体从自然界获取氮素的主要途径,生物固氮在农业生态系统中占重要地位。因此我们利用实时定量PCR和T-RFLP技术,研究了 NS、CK、CSB3和CSIB3四个处理中花生苗期、花期和收获期根际土壤固氮菌群落的丰度和结构,发现三个时期NS和CSB3处理花生根际土壤固氮菌群落丰度和固氮菌群落丰度百分数(每克土壤中nifH基因拷贝数16S rDNA拷贝数的百分比)均显著高于同时期的CK和CSIB3处理,且固氮菌群落丰度与土壤总氮呈显著正相关。聚类分析表明,NS和CSB3处理固氮菌群落结构与CK处理相比均具有明显差异,通过对环境因子和根际固氮菌群落进行RDA分析发现,不同时期影响固氮菌群落结构分布的因素不同,在苗期,显著影响固氮菌群落分布的因素为有机质、氨氮、硝氮和总氮,在花期影响群落分布的是pH和氨氮,而在收获期为土壤速效磷、氨氮以及总氮。总之,我们的试验结果表明连作土壤中花生根际固氮菌群落丰度显著低于非连

关键词：植物内生真菌结瘤固氮根瘤内生细菌固氮菌

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