检索结果-内蒙古大学图书馆

本发明提供了用于在植物中表达目的蛋白的植物表达系统和方法。所述植物表达系统包含第一核酸序列和第二核酸，所述第一核酸序列包含与一个或多于一个的豇豆花叶病毒组增强子可操作地连接的调节区序列、目的核苷酸序列、一个或多于一个的双粒病毒组扩增元件，所述第二核酸编码双粒病毒组复制酶。在植物中产生目的蛋白的方法，包括将植物表达系统引入植物或植物的部分，并在允许所述核苷酸序列表达的条件下培养所述植物或植物的部分，并产生所述目的蛋白。

关键词：植物表达系统目的蛋白核苷酸序列核酸序列病毒组双粒豇豆花叶病毒植物中表达核酸编码复制酶核酸扩增连接培养

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植物化学诱导表达系统的类型和应用研究

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安徽农业科学 2008年第8期36卷 3125-3126页

作者：况守龙长江师范学院重庆408003

介绍了植物化学诱导表达系统的构建原理,列举了该表达系统的类型,并展望了其应用前景。

关键词：化学诱导剂化学诱导系统植物表达系统

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植物源SARS-CoV-2 S1-RBD表达水平的优化

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第12期40卷 1761-1770页

作者：李晗纪惠莹张天昊王春玉何金鑫张莉莉山西农业大学动物医学学院动物医学系山西太谷030801 中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室北京100101 山东第一医科大学(山东省医学科学院)临床与基础医学院基础医学系济南250117

SARS-CoV-2受体结合域(RBD)是重组蛋白质疫苗的关键靶点。高效和高质量地表达RBD蛋白是开发有效重组蛋白疫苗的重要基础。相较于CHO细胞生产的RBD疫苗,植物表达系统具有更高安全性和更低成本的优势。目前,RBD抗原在植物中的表达水平较低... 详细信息

SARS-CoV-2受体结合域(RBD)是重组蛋白质疫苗的关键靶点。高效和高质量地表达RBD蛋白是开发有效重组蛋白疫苗的重要基础。相较于CHO细胞生产的RBD疫苗,植物表达系统具有更高安全性和更低成本的优势。目前,RBD抗原在植物中的表达水平较低,且其提取和质量优化方法尚未完全建立。本研究以SARS-CoV-2原型株RBD的R 319~K 537位氨基酸为模板,通过植物表达载体pCAMBIA1300在本氏烟草中进行瞬时表达。初始表达水平较低,仅为23.3μg/g鲜重,占植物总可溶蛋白质的0.23%。通过共表达高效基因沉默抑制子pGD-VSRs,RBD表达量提高了2.61倍。通过C-末端融合绿色荧光蛋白,确定了RBD在植物中定位于质外体区域。进一步引入αAmy3信号肽,使RBD的积累水平较PR1a信号肽提高2.1倍。最终,RBD在本氏烟草中的表达量提升至128.6μg/g鲜重,占植物总可溶蛋白质的1.29%。随后,采用质外提取纯化方法,获得纯度超过90%的RBD蛋白。小鼠免疫实验表明,该植物来源的RBD与CHO来源的RBD具有相当的免疫原性。本研究为植物源RBD疫苗的开发提供了重要的理论基础和技术支持。

关键词： SARS-CoV-2 受体结合域植物表达系统基因沉默抑制子信号肽免疫原性

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谈谈植物疫苗问题

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植物生理学通讯 2009年第10期45卷 1033-1042页

作者：张巍阎秀峰赵凌侠东北林业大学生命科学学院、林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室哈尔滨150040 上海交通大学农业与生物学院、植物生物技术研究中心上海200240

本文对植物疫苗的研究现状和问题进行了介绍和讨论。

关键词：植物疫苗转基因植物表达系统生物安全

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利用植物生物反应器生产医用蛋白质

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中国农业科学 2003年第5期36卷 583-589页

作者：孙萌苏宁钱凯先沈桂芳中国农业科学院生物技术研究所中国农业科学院生物技术研究所杭州310027 北京100081 浙江大学生命科学学院

植物表达系统生产医用蛋白质具有成本低廉、安全等优点。本文着重介绍了植物表达系统生产疫苗、抗体和药用蛋白质的情况 ,并探讨了提高植物表达系统生产水平的技术条件。

关键词：植物表达系统疫苗重组抗体药用蛋白质

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人源抗甲型肝炎病毒基因工程抗体在植物中的表达研究

人源抗甲型肝炎病毒基因工程抗体在植物中的表达研究

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作者：曹经瑗中国疾病预防控制中心

学位级别：博士

甲型肝炎病毒(以下简称甲肝病毒或HAV)属于小RNA病毒科肝炎病毒属，是甲型肝炎的致病因子，主要通过被污染的水和食物经粪口途径传播，人群普遍易感，每年甲型肝炎占我国急性病毒性肝炎的首位，是严重危害人民健康的疾病。甲肝病毒感染... 详细信息

甲型肝炎病毒(以下简称甲肝病毒或HAV)属于小RNA病毒科肝炎病毒属，是甲型肝炎的致病因子，主要通过被污染的水和食物经粪口途径传播，人群普遍易感，每年甲型肝炎占我国急性病毒性肝炎的首位，是严重危害人民健康的疾病。甲肝病毒感染后虽不易引起慢性感染，但会给国家和个人造成巨大的经济损失，如1988年的上海甲肝大流行。甲肝病毒是没有包膜的病毒颗粒，含有一个单股正链RNA，抗原结构保守。虽有不同的基因型，但只有一种血清型。目前有疫苗可以预防甲肝病毒的感染，但并没有纳入计划免疫，并且对甲肝病毒先期暴露后的感染无预防作用；而高效价人源免疫球蛋白作为一种被动免疫手段，在一旦有流行症状时使用，是一种有效的应急措施。但人源制品来源困难并且可能有病原微生物的污染，动物抗体因异种蛋白不宜应用。随着分子生物学和免疫学的发展，我们已经成功地从噬菌体抗体库中筛选获得了中和性人源抗甲肝病毒基因工程抗体基因，并分别在杆状病毒和CHO细胞表达系统中进行了IgG抗体的表达。植物表达系统与大肠杆菌***，酵母细胞，杆状病毒以及CHO细胞表达系统相比，具有许多优点：植物表达系统因其本身是自然界的一部分，参与自然界中的各种循环，可以大规模生产，成本低廉；有成熟的大量收获和加工植物及植物产品的现成技术，同时可最大程度地降低有可能影响人类健康的病原微生物或有毒物质的污染；具有真核基因表达调控及转录翻译加工的成套系统；另外某些植物可直接食用，可用于生产口服疫苗或药品从而降低了纯化的费用；外源蛋白在植物中表达后一般比较稳定，方便了产品的储藏和运输等等。目前已有多种形式的抗体在植物中进行了表达，包括scFv，Fab，IgG，IgA抗体等。为建立新的抗体高效表达系统，完善抗体工程平台，为新型基因工程抗体药品的生产和制备提供实验基础，也为探索用植物中生产的抗体来纯化相应的抗原以及体外诊断的应用等打下基础，我们在植物中表达了多种形式的人源中和性抗甲肝病毒基因工程抗体，并对其生物学功能进行了比较分析。本论文主要由以下内容组成： 1在大肠杆菌***中表达人源中和性抗甲肝病毒scFv抗体，并对其生物学特性进行鉴定。利用一株已筛选出的中和性人源抗甲肝病毒HAFc16IgG抗体基因经过PCR扩增和克隆，构建VH-linker-VL型单链抗体(scFvHA16)并在大肠杆菌中表达，经鉴定，表达抗体具有很好的与甲肝病毒抗原的结合活性。 2因为在植物中表达抗体耗时较长，我们首先在Pichiapastoris酵母中表达人源中和性抗甲肝病毒scFv-Fc融合抗体，并对其生物学特性进行鉴定。将上述的scFvHA16抗体基因克隆入含有人源Fc片段的酵母细胞表达载体pPiCZαFc中，得到融合抗体表达质粒pPiscFv-FcHA16，并在Pichiapastoris酵母中进行分泌表达，对表达产物进行了纯化。WesternBlot显示表达的蛋白带为具有不同糖基化形式的同源二聚体，ELISA以及体外中和实验表明表达的融合抗体仍保持了很好的生物学活性，与相应的CHO细胞中表达的CHOIgGHA16抗体相比，没有明显的区别。 3用双子叶植物种子储存蛋白特异性启动子Pfas构建了中和性人源抗甲肝病毒scFv-Fc融合抗体表达质粒patag6pfasscFv-FcHA16，同时还构建了另一株人源抗大肠杆菌麦芽糖结合蛋白MBP的融合抗体表达质粒pata6pfasscFv-FcMBP作为对照(此两个表达质粒均含有内质网定位信号KDEL)，并分别转化了拟楠芥植株。对拟楠芥转基因植株种子中表达蛋白的SDS-PAGE及WesternBlot分析表明，种子中表达的patag6pfasscFv-FcHA16融合抗体大部分降解了，分析表明这种降解是发生在植株体内而不是发生在抗体提取过程中；另一株对照抗体pata6pfasscFv-FcMBP则得到了很好的表达，表达蛋白占拟楠芥植株种子中可溶性蛋白的15％左右。本结果说明植物中抗体表达量与抗体本身的序列密切相关。 4用花椰菜嵌纹病毒35SRNA基因启动子P35S(此启动子为组成性启动子，理论上在植株的任何器官都能表达)构建了中和性人源抗甲肝病毒scFv-Fc融合抗体表达质粒P35SscFv-FcHA16+KDEL及P35SscFv-FcHA16-KDEL，并分别转化了生长中的拟楠芥植株及拟楠芥悬浮培养细胞(来源于拟楠芥植株的叶子)。对拟楠芥悬浮培养细胞中表达蛋白的分析表明，P35SscFv-FcHA16+KDEL质粒得到了很好的表达，表达蛋白占细胞中可溶性蛋白的1％以上；而P35SscFv-FcHA16-KDEL质粒表达的蛋白则大部分降解了。对拟楠芥悬浮培养细胞中表达的P35SscFv-FcHA16+KDEL融合抗体进

关键词：甲型肝炎病毒人源基因工程抗体植物表达系统植物悬浮细胞培养酵母细胞表达系统

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HSV--2抑制β--干扰素产生的机制及疫苗候选物gD的植物表达和免疫原性研究

HSV--2抑制β--干扰素产生的机制及疫苗候选物gD的植物表达和免疫...

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作者：关欣萌中国科学院大学

学位级别：博士

HSV-2是引发生殖器疱疹的主要病原，而且HSV-2的感染可以增加HIV-1感染和传播的风险。HSV-2原发感染后在神经系统建立潜伏感染，进而在人体内建立终身感染，目前尚没有针对HSV-2的疫苗。本课题针对HSV-2免疫逃逸和免疫保护策略，根据具... 详细信息

HSV-2是引发生殖器疱疹的主要病原，而且HSV-2的感染可以增加HIV-1感染和传播的风险。HSV-2原发感染后在神经系统建立潜伏感染，进而在人体内建立终身感染，目前尚没有针对HSV-2的疫苗。本课题针对HSV-2免疫逃逸和免疫保护策略，根据具体研究内容分为以下两方面的工作。　　第一部分的工作针对HSV-2抑制I型干扰素产生的机制。HSV-2有一系列逃逸宿主免疫的机制，有助于其在神经系统建立潜伏感染，可在机体受到刺激或免疫力低下时复发。黏膜感染是HSV-2原发感染的主要途径，有研究表明，在HSV-2感染部位IFN-β表达量很低，但具体机制尚不明确。本研究利用人黏膜组织块感染模型，发现HSV-2可以抑制人黏膜组织中IFN-β的产生;通过构建一系列HSV-2基因克隆进行筛选，发现HSV-2极早期蛋白ICP27可以显著抑制黏膜上皮细胞中IFN-β的诱导表达，并进一步在人原代上皮黏膜细胞上进行了验证;机制研究发现，HSV-2ICP27作用于IRF3信号通路，通过与IRF3直接相互作用干扰IRF3的激活，从而影响IRF3磷酸化及入核，导致IFN-β及其下游干扰素刺激基因(ISGs)的表达受阻;通过构建不同结构区域的截短突变，发现HSV-2ICP27的1-138aa区域是抑制IFN-β产生的关键区域。本研究在黏膜组织和细胞水平探究了HSV-2逃逸宿主天然免疫的分子机制，为深入理解HSV-2致病和设计防治策略提供了理论依据。　　第二部分的工作针对HSV-2疫苗候选物的植物表达和免疫原性分析。HSV-2是经性传播最广的病毒，特别是在发展中国家，因此，研发有效和经济的疫苗是HSV-2防治领域一个重要方向。HSV-2包膜糖蛋白D(gD)是病毒入侵的关键蛋白，具有中和抗体及T细胞的抗原表位，是疫苗研究的主要靶标。植物表达系统有成本低、产量大、无哺乳动物病原污染等优点，并且有与哺乳动物细胞类似的翻译后加工修饰体系，成为近年来最有潜力开发的表达系统。本研究将HSV-2包膜糖蛋白gD膜外区构建到植物表达载体pTRAK.6上;利用农杆菌将表达载体导入烟草中并对表达产物进行纯化;在小鼠模型上，用真核表达gD质粒进行初免，再用经烟草表达的gD或真核表达gD质粒进行增强免疫;研究结果表明，与DNA初免/DNA增强组相比较，DNA初免/蛋白增强组产生了更高水平的IgG和IgA，表明植物源gD有较好的免疫原性。本研究为植物源gD作为HSV-2亚单位疫苗的研发奠定了前期基础，所建立的植物表达系统为研制低成本的适合发展中国家的抗病毒疫苗提供了可能。

关键词：单纯疱疹病毒-2 免疫逃逸 β-干扰素植物表达系统包膜糖蛋白gD 免疫原性

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