检索结果-内蒙古大学图书馆

植物生理学报 2025年第05期 619-627页

作者：南文斌徐新怡王嵩彭霖李均瑶赵滢滢秦小健梁永书李明张汉马重庆师范大学生命科学学院植物环境适应生物学重庆市重点实验室

转基因植株的创建在植物科学研究中具有重要的作用,遗传编码的标签蛋白常被用于基因表达分析和蛋白功能研究。传统的酶切连接克隆方法不仅耗时,有时还会受限于酶切位点的选择。使用抗生素或除草剂进行转基因植物的筛选不仅耗时繁琐,工... 详细信息

转基因植株的创建在植物科学研究中具有重要的作用,遗传编码的标签蛋白常被用于基因表达分析和蛋白功能研究。传统的酶切连接克隆方法不仅耗时,有时还会受限于酶切位点的选择。使用抗生素或除草剂进行转基因植物的筛选不仅耗时繁琐,工作量大,而且可能会对某些转基因植物的生长产生不利影响。本论文中,我们通过对pFP101载体进行改造,构建了一套适用于In-fusion和Gateway克隆的植物表达载体,且能基于种子特异性荧光进行快速简便的转基因植物筛选、纯合子鉴定和表型分析,然后进一步使用该系统检测了拟南芥根中基因的表达和蛋白定位。因此这套载体系统可以用于拟南芥转基因株系的快速产生,以及通过不同蛋白标签进行植物的基因表达和蛋白功能研究。

关键词：转基因植物表达载体载体改造拟南芥

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros的构建及其在草莓上的验证

引用

农业生物技术学报 2014年第3期22卷 389-396页

作者：金万梅王华北京市农林科学院林业果树研究所

为了研究多基因互作,减少多次转化的不确定性,本研究在花青素合成调节基因del(delila)和ros(rosea1)的上下游分别引入CaMV 35S启动子和nos终止子,以pBI121-del和pCAMBIA1301-ros做中间载体,并利用BamHⅠ和BglⅡ产生相同4碱基末端的片段... 详细信息

为了研究多基因互作,减少多次转化的不确定性,本研究在花青素合成调节基因del(delila)和ros(rosea1)的上下游分别引入CaMV 35S启动子和nos终止子,以pBI121-del和pCAMBIA1301-ros做中间载体,并利用BamHⅠ和BglⅡ产生相同4碱基末端的片段,在连接酶的作用下将CaMV 35S启动子分别驱动的del和ros基因构建在同一个植物表达载体pCAMBIA2301上,利用所构建的载体pCAMBIA2301-delros通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404介导的方法转化草莓(Fragaria ananassa Duch.),并进行PCR检测,获得转基因草莓。通过组织观察发现,转基因草莓的根和叶的颜色变成红紫色;实时RT-PCR分析表明,在转基因草莓中花青素合成的结构基因花色素合成酶(anthocyanidinsynthase,ANS)、查尔酮异构酶(chalcone-flavanone isomerase,CHI)、查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)、二羟黄酮醇-4-还原酶(dihydroflavonol-4-reductase,DFR)、黄烷酮-3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)和类黄酮-3-O-葡糖基转移酶(UDP glucose-flavonoid 3-O-glcosyl-transferase,UFGT)在转基因株系中的表达均上调,这也进一步证实通过该方法构建的植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros可以用来转化植物。本研究结果表明,植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros成功构建,为多基因植物表达载体的构建提供了一种思路,也为在植物体内同时研究多个基因的互作提供借鉴。

关键词：植物表达载体构建草莓转基因

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

植物表达载体pCAMBIA2300-35S-GUS-CaMVterm的构建及验证

引用

中国生物工程杂志 2013年第3期33卷 86-91页

作者：巩元勇冯永坤倪万潮束红梅郭书巧刘来华江苏省农业科学院经济作物研究所农业部长江下游棉花和油菜重点实验室南京210014 中国农业大学资源、环境及粮食安全中心教育部植物与土壤互作重点实验室北京100193

为拓宽pCAMBIA2300表达载体的使用范围,进一步方便植物基因工程科研工作者在构建表达载体时的需要,利用SacⅠ和XhoⅠ双酶切pJIT166载体获取"35S-GUS-CaMVterm"片段,将该片段插入到pCAMBIA2300表达载体的多克隆位点区,构建完成... 详细信息

为拓宽pCAMBIA2300表达载体的使用范围,进一步方便植物基因工程科研工作者在构建表达载体时的需要,利用SacⅠ和XhoⅠ双酶切pJIT166载体获取"35S-GUS-CaMVterm"片段,将该片段插入到pCAMBIA2300表达载体的多克隆位点区,构建完成了pCAMBIA2300-35S-GUS-CaMVterm表达载体。所构建的表达载体通过农杆菌介导转化拟南芥,获得拟南芥转基因植株,转基因植株的GUS染色结果进一步验证了本文所构建表达载体的正确性和实用性。该表达载体的成功构建,方便了构建基因超表达载体,以及使得研究启动子的活性及GUS组织化学定位成为可能,还可以通过GUS染色对转基因植物进行鉴定,为植物基因工程科研工作提供了一个较好的备选植物表达载体。

关键词：植物表达载体 pCAMBIA2300 pJIT166

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

缺失GDD保守区的黄瓜花叶病毒复制酶基因的克隆及植物表达载体构建

引用

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2001年第5期27卷 531-534页

作者：温瑞郑重周雪平浙江大学生物技术研究所浙江杭州310029 浙江大学植物保护系浙江杭州310029

以 CMV亚组 1株系 Fny- CMV RNA2基因组为模板 ,根据其序列设计引物进行 PCR扩增 ,得到 2 .5 kb的全长复制酶基因扩增产物 .对此产物进行纯化 ,并用 N co I和 Bsp HI进行双酶切 ,得到 3个片段 .将不含有 GDD保守区的 2个片段用 T4 DNA... 详细信息

以 CMV亚组 1株系 Fny- CMV RNA2基因组为模板 ,根据其序列设计引物进行 PCR扩增 ,得到 2 .5 kb的全长复制酶基因扩增产物 .对此产物进行纯化 ,并用 N co I和 Bsp HI进行双酶切 ,得到 3个片段 .将不含有 GDD保守区的 2个片段用 T4 DNA连接酶连接 ,并对连接产物进行 PCR扩增 ,得到 2 .2kb左右缺失 GDD保守区的黄瓜花叶病毒复制酶基因的扩增产物 .将其克隆到 p GEM- T Easy Vector上 ,进行序列测定 ,结果表明 GDD保守区确已缺失 .该缺失不导致开放阅读框架的移码 .将缺失 GDD保守区的基因定向克隆到植物表达载体 p BI12 1中 ,并经三亲交配导入根癌农杆菌中 ,经 PCR及酶切鉴定。

关键词：黄瓜花叶病毒复制酶植物表达载体基因克隆 GDD保守区缺失

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

禽传染性支气管炎病毒S1基因植物表达载体的构建

引用

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2001年第3期27卷 293-296页

作者：吴建祥周继勇程丽琴沈行燕丁红梅浙江大学动物预防医学研究所浙江杭州310029

:以含传染性支气管炎病毒 ( ZJ971毒株 ) S1基因的质粒 PBS为模板 ,根据其序列设计引物进行PCR扩增 ,得到 1.7kb左右的 S1基因产物 ;用 Xbal I和 Bam HI酶切纯化 ,并在 T4 DNA连接酶的作用下 ,定向克隆到植物表达载体 PBI12 1中 ,PCR及... 详细信息

:以含传染性支气管炎病毒 ( ZJ971毒株 ) S1基因的质粒 PBS为模板 ,根据其序列设计引物进行PCR扩增 ,得到 1.7kb左右的 S1基因产物 ;用 Xbal I和 Bam HI酶切纯化 ,并在 T4 DNA连接酶的作用下 ,定向克隆到植物表达载体 PBI12 1中 ,PCR及酶切鉴定表明。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 S1基因植物表达载体质粒PBS 酚切鉴定三亲交配定向克隆

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

美洲黑杨木质素生物合成转录因子PdLiml基因的克隆、表达及植物表达载体构建

引用

北京林业大学学报 2009年第6期31卷 1-8页

作者：王璐李百炼张金凤张德强北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室 100083

在植物体内,Liml基因与木质素生物合成酶基因启动子区域富含AC的Pal盒结合,转录调控木质素的生物合成过程.该研究组合利用生物信息学和realtime PCR方法,首次从美洲黑杨形成层cDNA中分离出PdLimlcDNA全长,并进行了测序和序列分析.结果表... 详细信息

在植物体内,Liml基因与木质素生物合成酶基因启动子区域富含AC的Pal盒结合,转录调控木质素的生物合成过程.该研究组合利用生物信息学和realtime PCR方法,首次从美洲黑杨形成层cDNA中分离出PdLimlcDNA全长,并进行了测序和序列分析.结果表明,克隆的美洲黑杨PdLimlcDNA片段总长为952 bp,基因内部含有完整的开放阅读框架,大小为594 bp,可编码长度为197个氨基酸残基的蛋白质,所推导的蛋白质氨基酸序列与拟南芥AtLiml和水稻OsLiml蛋白的同源性分别为82.1%和78.2%.组织特异性realtime PCR结果显示,PdLiml基因在场树根、茎、叶片和顶端分生组织中均有表达,但其表达模式却不同:PdLiml在成熟叶片和成熟木质部中表达丰度最高,在树皮、根部、韧皮部和形成层表达丰度较高,在未成熟木质部有少量表达,在顶端分生组织中表达丰度最低.在此基础上,以pBI121为表达载体,构建了在CaMV35S启动子驱动下,PdLiml基因的正义(pBI121-CaMV35S-sensePdLiml)和反义(pBI121-CaMV35S-antisense PdLiml)类型的双元植物表达载体.该研究为杨树PdLiml的基因工程改良木材纤维品质性状提供了重要的理论依据,具有潜在的应用价值.

关键词：杨树 Liml转录因子术质素生物合成 realtime PCR 植物表达载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

红花bZIP20转录因子基因的克隆、表达分析及植物表达载体构建

引用

中草药 2016年第8期47卷 1369-1374页

作者：官丽莉崔琪韩怡来顾天瑶武云云胡人阁杜林娜李海燕李校堃吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心吉林长春130118

目的克隆红花花瓣中b ZIP20(Basic region/leucine zipper motif)基因,研究其在不同组织中的表达量并构建其植物表达载体。方法根据红花转录组测序结果挑选b ZIP基因的设计引物,以红花花瓣总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增b ZIP20基因开放... 详细信息

目的克隆红花花瓣中b ZIP20(Basic region/leucine zipper motif)基因,研究其在不同组织中的表达量并构建其植物表达载体。方法根据红花转录组测序结果挑选b ZIP基因的设计引物,以红花花瓣总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增b ZIP20基因开放阅读框(ORF)片段,利用RT-PCR法分析在红花不同组织以及尖孢镰刀菌侵染后红花根部b ZIP20基因的表达量,同时构建植物表达载体p BASTA-b ZIP20。结果 b ZIP20基因ORF长981 bp,编码326个氨基酸(Gen Bank登录号为KT692605)。红花b ZIP20与其他物种氨基酸具有一定的同源性,其与芝麻、野茶树的氨基酸序列相似性高达85.41%和83.99%。实时荧光定量PCR分析表明,b ZIP20基因在不同组织中的表达水平具有显著差异,在花中呈现高表达,而在其他组织中低表达。接种尖孢镰刀菌的红花根部组织中b ZIP20基因的表达显著上调。结论成功地对b ZIP20基因进行克隆及表达分析,并构建植物表达载体p BASTA-b ZIP20。

关键词：红花 b ZIP20基因表达分析 RT-PCR 植物表达载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因植物表达载体的构建与遗传转化柑橘的研究(英文)

引用

遗传 2004年第4期26卷 425-431页

作者：胡蓉魏泓陈善春何永睿西南师范大学生命科学学院重庆400715 第三军医大学实验动物中心重庆400038 中国农业科学院柑橘研究所重庆400712

基因工程领域的研究进展使得植物体成为具有重要经济价值的药用蛋白的生产体系。以含甲型肝炎病毒结构基因cDNA的克隆载体 pCDNAⅡA16为模板 ,用甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因特异引物进行PCR扩增 ,得到全长 2 .2kb衣壳蛋白融合基因序... 详细信息

基因工程领域的研究进展使得植物体成为具有重要经济价值的药用蛋白的生产体系。以含甲型肝炎病毒结构基因cDNA的克隆载体 pCDNAⅡA16为模板 ,用甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因特异引物进行PCR扩增 ,得到全长 2 .2kb衣壳蛋白融合基因序列。经测序鉴定后正向克隆于植物表达载体 pBI12 1中 ,衣壳蛋白融合基因位于pBI12 1质粒T DNA左右边界区间内 ,处于CaMV35S启动子控制之下。经限制性内切酶分析和PCR鉴定后利用冻融法将重组质粒 pBI12 1 A导入根癌农杆菌LBA4 4 0 4。以锦橙 (***)上胚轴为转化材料 ,通过根癌农杆菌介导法将衣壳蛋白融合基因转化到植物基因组中。 12 0株转化外植体经卡那霉素 5 0mg/L筛选 ,其中 13株生长状况良好未出现白化现象的拟转化芽微嫁接到实生砧木继续培养。PCR分析证明 ,13株拟转化植株中有 5株植物基因组中已导入甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因 ,转化率为 4 1%。此研究是对遗传转化柑桔表达外源蛋白的初步探讨。

关键词：甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因柑橘植物表达载体遗传转化食用疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

商陆抗病毒蛋白cDNA的克隆、测序及其植物表达载体的构建

引用

Acta Botanica Sinica 1999年第2期41卷 226-228页

作者：张海燕刘桂珍陈正华中国科学院遗传研究所北京100101

商陆抗病毒重【'1（m）卜。。）（1。Ill'l－。l。。111。。。""。''，NP）是从美洲商陆叶片。I。分或Utoot件如VR，分子量约30hi）L'。PAP属典型的中链核栩然大活主l'I，对动物病毒和植物病；每均计... 详细信息

商陆抗病毒重【'1（m）卜。。）（1。Ill'l－。l。。111。。。""。''，NP）是从美洲商陆叶片。I。分或Utoot件如VR，分子量约30hi）L'。PAP属典型的中链核栩然大活主l'I，对动物病毒和植物病；每均计）'们的抗病；沙作用'，'－。在国外，PAP达国已被川于如N...加'1物从因?..

关键词：商陆抗病毒蛋白 cDNA克隆植物表达载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

红花ERF1转录因子的克隆及植物表达载体的构建

引用

中草药 2019年第4期50卷 963-969页

作者：刘秀明吕彦曦杨龙宇杜卫红宫彦红刘建雨董园园姚娜李海燕吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心吉林长春130118 吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118 长春市一三七中学吉林长春130118

目的克隆1条红花AP2/ERF家族转录因子编码区序列,并构建植物表达载体。方法在红花转录组测序基础上,利用RT-PCR方法克隆1条红花AP2/ERF家族转录因子编码区序列(Ct ERF1)并进行生物信息学分析,利用ClustalW 1.83软件构建系统进化树,在Ct ... 详细信息

目的克隆1条红花AP2/ERF家族转录因子编码区序列,并构建植物表达载体。方法在红花转录组测序基础上,利用RT-PCR方法克隆1条红花AP2/ERF家族转录因子编码区序列(Ct ERF1)并进行生物信息学分析,利用ClustalW 1.83软件构建系统进化树,在Ct ERF1基因序列两端引入SpeI和XbaI酶切位点,构建含有35S启动子的植物超表达载体p BASTA-Ct ERF1。结果 CtERF1基因编码297个氨基酸,且具有典型的AP2/ERF基因的功能结构域,含有1个AP2区域,为ERF亚族蛋白,亚细胞定位分析推测其定位在细胞质和细胞核上。系统进化分析表明,Ct ERF1基因编码氨基酸与其他物种氨基酸具有一定的同源性,其中与杨树和人参的亲缘关系最近。通过分子生物学方法,成功构建p BASTA-CtERF1植物表达载体。结论成功克隆了1条红花AP2/ERF家族转录因子编码区基因Ct ERF1,并构建了植物表达载体p BASTA-Ct ERF1。

关键词：红花 AP2/ERF转录因子黄酮合成基因克隆植物表达载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：