检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陶蕾上海交通大学

学位级别：博士

本论文由两部分独立的研究内容组成：第一部分研究催吐萝芙木中生物碱的分离提取工艺、结构测定和药效学性质，第二部分研究基于表面等离子共振技术平台的传感芯片再生制备技术以及槲寄生凝集素含量检测。下面分别就这两部分内容进行阐... 详细信息

本论文由两部分独立的研究内容组成：第一部分研究催吐萝芙木中生物碱的分离提取工艺、结构测定和药效学性质，第二部分研究基于表面等离子共振技术平台的传感芯片再生制备技术以及槲寄生凝集素含量检测。下面分别就这两部分内容进行阐述。第一部分：催吐萝芙木生物碱的提取工艺研究催吐萝芙木是20世纪60年代自非洲加纳引种至我国云南、广西等地区的天然药材植物。催吐萝芙木的根部富含利血平、育亨宾等吲哚类生物碱，业已成为医药工业的重要原料。本课题在这样的背景下，开发了催吐萝芙木的新型分离提取工艺，采用本课题组自行设计装配的制备型反相层析装置，提取其中的生物碱成分，测定了10种生物碱成分的化学结构，并初步考察了其中4种成分的降血压活性与急性毒性。本部分共分为三章。第一章概述了萝芙木属植物所含药用生物碱的研究现状和催吐萝芙木药用生物碱分离提取工艺的现状以及课题的意义与主要内容。第二章建立了以酸性乙醇浸提、大孔树脂吸附、大孔弱酸性阳离子交换树脂提取、C18反相层析相结合，在实验室规模从催吐萝芙木中提取生物碱的新型工艺。第三章采用超高效液相色谱-质谱以及核磁共振等方法对从催吐萝芙木中获得的生物碱的化学结构进行测定，共鉴定了10种生物碱的化学结构。通过肾动脉结扎方法制作SD大鼠高血压模型，考察了从催吐萝芙木中分离提取出的4种组分的降血压活性，用ICR小鼠测定了这些组分的急性毒性。第一部分工作的创新点主要有：（1）自行设计和装配了制备型C18反相层析装置，具有处理量大、回收率高、操作简单等特点。试验表明，该装置在天然产物的分离纯化方面显示出广泛的适用性，有望通过进一步深入开发进入工业化生产领域。（2）本课题所建立的高产率的综合提取工艺，可以同时分离纯化10种不同的生物碱成分，所获得的生物碱成分的收率、纯度比传统的工艺更高。（3）本课题开发设计的提取工艺中所使用的有机溶剂乙醇等均可再回收利用，比起现有分离提取方法，所使用的有机溶剂更少，对环境污染更低。第二部分：表面等离子共振（SPR）技术在槲寄生凝集素的应用槲寄生凝集素是免疫调节的重要蛋白，近年来逐渐成为国内外生物医药学的研究热点。作为新兴的生物传感技术，SPR技术具有高灵敏度、高精确性的特点。本论文基于Plasmonic的SPR传感器的平台，探索了通过化学偶联的方法制备4种不同类型的传感芯片的技术，建立了一种操作简单、节约时间和试剂的快速检测槲寄生凝集素含量的方法；利用SPR技术考察了槲寄生凝集素对两株细胞系A549和Calu-3的体外细胞毒作用。本部分共分为三章。第四章介绍了SPR传感器的基本原理与本课题所使用的Plasmonic的SPR传感器的构造与操作方法，并阐述了槲寄生凝集素目前的研究现状以及课题的意义与主要内容。第五章设计了通过化学偶联的方法制备4种不同类型的传感芯片的方法，进一步扩大了SPR传感器在生物领域的应用范围。建立了针对I型槲寄生凝集素（ML-I）样品的三明治型抗体反应体系测定方法，并可分别用于缓冲液、血清样品及市售针剂中ML-I含量的检测，具有用于医学检验以及药厂质量控制的潜在应用价值。第六章基于SPR技术平台，以两株细胞系A549和Calu-3为研究对象，初步考察了ML-I对其体外毒性作用。第二部分工作的创新点主要有：（1）设计、改良了基于Plasmonic传感器技术平台的不同类型的传感芯片制备再生方法，具有程序简单、操作方便的特点。（2）首次报道使用SPR传感器测定槲寄生凝集素样品含量的方法，具有新颖性强、试剂用量少、节约时间的特点，且重复性好。

关键词：催吐萝芙木提取等离子共振槲寄生凝集素

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CYLD过表达对槲寄生凝集素诱导Bcap37细胞凋亡的影响

CYLD过表达对槲寄生凝集素诱导Bcap37细胞凋亡的影响

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2013浙江省医学会皮肤病学学术年会

作者：林蕾刘素荣叶孟王少敏倪曙民宁波大学医学院附属医院

目的探讨CYLD过表达对槲寄生凝集素诱导人乳腺癌细胞凋亡的影响。方法采用MTT法测定细胞的增殖活力,琼脂糖凝胶电泳观察细胞调亡,流式细胞仪进行细胞周期分析,Westernblot法和DIG-EMSA研究细胞调亡途径。结果:CYLD过表达不影响人乳腺癌... 详细信息

目的探讨CYLD过表达对槲寄生凝集素诱导人乳腺癌细胞凋亡的影响。方法采用MTT法测定细胞的增殖活力,琼脂糖凝胶电泳观察细胞调亡,流式细胞仪进行细胞周期分析,Westernblot法和DIG-EMSA研究细胞调亡途径。结果:CYLD过表达不影响人乳腺癌细胞株的生长,但可抑制NFκB的活性,可增强槲寄生凝集素对细胞的生长抑制作用,但不影响槲寄生凝集素对NFκB的抑制作用,也不影响槲寄生凝集素对IκBα、Bcl2和Bax的表达。结论 CYLD过表达可抑制NFκB的活性,并增强槲寄生凝集素对人乳腺癌细胞的生长抑制作用。

关键词：槲寄生凝集素细胞凋亡 Bcap37

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槲寄生凝集素腹腔内给药对腹腔巨噬细胞功能的影响

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中国临床药理学与治疗学 2010年第2期15卷 126-129页

作者：严梅娣叶孟林蕾倪曙民王少敏刘素荣宁波市第七医院普外科宁波大学医学院附属医院

目的:探讨小鼠腹腔内注射槲寄生凝集素对腹腔巨噬细胞功能的影响。方法:16只小鼠分为腹腔内给药组和空白组,分别取腹腔内巨噬细胞并计数,采用ELISA法测定TNF-α表达情况,Griess法测定NO表达,MTT法检测腹腔内巨噬细胞对肠癌HCT116细胞的... 详细信息

目的:探讨小鼠腹腔内注射槲寄生凝集素对腹腔巨噬细胞功能的影响。方法:16只小鼠分为腹腔内给药组和空白组,分别取腹腔内巨噬细胞并计数,采用ELISA法测定TNF-α表达情况,Griess法测定NO表达,MTT法检测腹腔内巨噬细胞对肠癌HCT116细胞的杀伤作用。结果:腹腔内给槲寄生凝集素后可明显增加腹腔内巨噬细胞数,并增加TNF-α和NO的表达水平;激活的巨噬细胞对HCT116细胞的杀伤作用增强,其杀伤作用与TNF-α和NO表达时间一致。结论:腹腔内注射槲寄生凝集素可激活腹腔内巨噬细胞,激活的巨噬细胞对HCT116细胞有杀伤作用。

关键词：结直肠肿瘤槲寄生凝集素巨噬细胞腹腔内化疗

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槲寄生凝集素的制备与免疫学功能研究

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中国免疫学杂志 2009年第1期25卷 59-62页

作者：余奇文张继英龚芳马妍慧程伟志陈雪华马安伦张冬青上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院消化外科研究所上海200025 Centre de recherche du CHUM Hopital Notre-Dame Universite de Montreal Montreal Quebec H2L 4M1 Canada

目的:分析从中国槲寄生中提取的55 kD凝集素诱导T淋巴细胞增殖和肿瘤细胞凋亡的免疫学活性。方法:通过CM-Sepharose和ConA柱分离和纯化了分子量为55 kD的槲寄生凝集素。用流式细胞术和ELISA检测纯化的槲寄生凝集素诱导T淋巴细胞表型和... 详细信息

目的:分析从中国槲寄生中提取的55 kD凝集素诱导T淋巴细胞增殖和肿瘤细胞凋亡的免疫学活性。方法:通过CM-Sepharose和ConA柱分离和纯化了分子量为55 kD的槲寄生凝集素。用流式细胞术和ELISA检测纯化的槲寄生凝集素诱导T淋巴细胞表型和细胞因子分泌格局。并经Annexin V染色法研究其诱导肿瘤细胞凋亡的免疫学机制。结果:从中国槲寄生中分离纯化了由两个30 kD亚基组成的55 kD槲寄生凝集素蛋白,其具有特异诱导人γδT细胞扩增和以Caspase依赖途径诱导Jurkat细胞凋亡,并能促进TNFα-释放和抑制IL-10的释放的作用。结论:中国槲寄生凝集素具有免疫学调节作用和诱导肿瘤细胞凋亡作用。在研究抗肿瘤和免疫学机制中具有应用价值。

关键词：槲寄生凝集素 Caspase 细胞凋亡 γδT细胞

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槲寄生凝集素蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

槲寄生凝集素蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

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第五届全国中医药免疫学术研讨会暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议

作者：钱柳胡朝英黄秋愉程伟志余奇文张继英张冬青陈雪华海交通大学医学院上海市免疫学研究所200025 上海上海交通大学医学院瑞金医院消化外科研究所 200025 上海

槲寄生(Mistletoe)是一种半寄生植物。被中医用于治疗淋病、梅毒、高血压和风湿病已有悠久历史。在欧洲，槲寄生凝集素(Mistletoe Lectin，ML)多年来一直被用作肿瘤的辅助治疗药物。本文基于前期研究基础进一步分析从中药槲寄生中... 详细信息

槲寄生(Mistletoe)是一种半寄生植物。被中医用于治疗淋病、梅毒、高血压和风湿病已有悠久历史。在欧洲，槲寄生凝集素(Mistletoe Lectin，ML)多年来一直被用作肿瘤的辅助治疗药物。本文基于前期研究基础进一步分析从中药槲寄生中制备的槲寄生凝集素蛋白(MLP)诱导肿瘤细胞凋亡的可能的Caspase途径。用台盼蓝染色检测MLP是否对正常人的外周血淋巴细胞具有毒性，用HT分析MLP作用的肿瘤细胞K562、U937、Jurkat、HL-60的凋亡形态学，应用FACS和MTT法研究MLP作用于肿瘤细胞的凋亡格局，同时分析MLP在诱导细胞凋亡信号通路中与Caspase-3通路的关联性，借以阐明MLP可能的抗肿瘤研究和临床应用前景。

关键词：槲寄生凝集素肿瘤治疗肿瘤细胞凋亡 Caspase-3通路抗肿瘤应用

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槲寄生凝集素抑制人大肠癌HCT116细胞环氧化酶-2表达的研究

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中国临床药理学与治疗学 2008年第5期13卷 504-507页

作者：林蕾叶孟王少敏倪曙民吴骁宁波大学医学院附属医院皮肤科宁波大学医学院附属医院肿瘤科

目的:探讨槲寄生凝集素对人大肠癌HCT116细胞环氧化酶(COX-2)表达的影响。方法:采用RT-PCR、Western blotting和ELISA等方法检测不同浓度(0.1～1mg/L)槲寄生凝集素对细胞COX-2及其产物前列腺素E2(PGE2)表达的影响。结果:槲寄生凝集素可... 详细信息

目的:探讨槲寄生凝集素对人大肠癌HCT116细胞环氧化酶(COX-2)表达的影响。方法:采用RT-PCR、Western blotting和ELISA等方法检测不同浓度(0.1～1mg/L)槲寄生凝集素对细胞COX-2及其产物前列腺素E2(PGE2)表达的影响。结果:槲寄生凝集素可抑制HCT116细胞的COX-2mRNA、蛋白表达及PGE2的水平,其抑制COX-2蛋白的表达与PGE2的水平相一致,只在大剂量(1mg/L)时对COX-1mRNA有抑制作用。结论:槲寄生凝集素具有抑制HCT116细胞的COX-2基因转录、蛋白表达和功能活性等作用,在一定浓度(0.1～1mg/L)和时间范围(3～24h)内,表现出时效与量效关系。

关键词：槲寄生凝集素大肠癌HCT116细胞系环氧化酶-2 前列腺素E2

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槲寄生凝集素对人结肠癌HT-29细胞增殖及凋亡的影响

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中国临床药理学与治疗学 2007年第9期12卷 1028-1031页

作者：王少敏叶孟倪曙民宁波大学医学院附属医院肿瘤内科

目的:研究槲寄生凝集素对人结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法观察槲寄生凝集素对体外培养的人结肠癌HT-29细胞增殖的影响,运用基因组DNA电泳观察凋亡特征性"梯状"条带及原位末端标记法检测槲寄生凝集素诱导HT... 详细信息

目的:研究槲寄生凝集素对人结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法观察槲寄生凝集素对体外培养的人结肠癌HT-29细胞增殖的影响,运用基因组DNA电泳观察凋亡特征性"梯状"条带及原位末端标记法检测槲寄生凝集素诱导HT-29细胞凋亡。结果:槲寄生凝集素对体外培养的人结肠癌HT-29细胞抑制作用表现出时间和剂量依赖性。基因组DNA琼脂糖凝胶电泳显示槲寄生凝集素作用于HT-29细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带。原位末端标记法检测显示槲寄生凝集素可明显诱导HT-29细胞的凋亡。结论:槲寄生凝集素可抑制人结肠癌HT-29细胞生长并诱导其凋亡。

关键词：槲寄生凝集素结肠癌细胞凋亡

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槲寄生凝集素增强γδ+T细胞杀伤功能及调节细胞因子分泌格局的研究

槲寄生凝集素增强γδ+T细胞杀伤功能及调节细胞因子分泌格局的研...

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第九届全国肿瘤生物治疗学术会议

作者：余奇文张继英马妍慧聂红沈天伟李伟毅李宁丽张冬青上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所

槲寄生(Mistletoe)是一种寄生性植物,可用于治疗淋病、高血压、风湿病等疾病。近年来研究发现,槲寄生不仅具有抗感染、诱导细胞凋亡以及细胞毒作用,还具有一系列免疫调节作用,值得关注的是:槲寄生在辅助治疗肿瘤的应用中获得了引人瞩目... 详细信息

槲寄生(Mistletoe)是一种寄生性植物,可用于治疗淋病、高血压、风湿病等疾病。近年来研究发现,槲寄生不仅具有抗感染、诱导细胞凋亡以及细胞毒作用,还具有一系列免疫调节作用,值得关注的是:槲寄生在辅助治疗肿瘤的应用中获得了引人瞩目的结果。

关键词：细胞因子 TNF 细胞毒作用槲寄生凝集素细胞杀伤

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槲寄生凝集素增强γδ+T细胞杀伤功能及调节细胞因子分泌格局的研究

槲寄生凝集素增强γδ+T细胞杀伤功能及调节细胞因子分泌格局的研...

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第三届全国中医药免疫学术研讨会

作者：余奇文张继英马妍慧柏峻聂红沈佰华王利沈天伟李伟毅李宁丽张冬青上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院上海市免疫学研究所

槲寄生(Mistletoe)是一种寄生性植物,可用于治疗淋病、高血压、风湿病等疾病。近年来研究发现,槲寄生不仅具有抗感染、诱导细胞凋亡以及细胞毒作用,还具有一系列免疫调节作用,值得关注的是:槲寄生在辅助治疗肿瘤的应用中获得了引人瞩目的结果。槲寄生发挥免疫调节作用的有效成份主要为槲寄生凝集素(Mistletoe Lectin,ML),ML是一种由A链和B链以二硫键相连的糖蛋白。A链由252个氨基酸组成,分子量约为30 KD,具有干扰核糖体蛋白质合成作用;B链由263个氨基酸组成,分子量约为35 KD,具有和D-半乳糖及N-乙酰半乳糖苷结合的特性。ML的免疫调节作用包括提高淋巴细胞对有丝分裂原的敏感性;增强IL-2受体的表达;提高NK细胞和LAK细胞的细胞毒功能以及促进趋化因子、TNF-α等细胞因子释放作用以及具有活化T辅助细胞功能,并可使TIL和巨噬细胞聚集在肿瘤细胞周围而发挥抗肿瘤作用。我们采用 MACS阳性分选法,从正常人外周血中分离γδ+T细胞,并采用不同浓度的ML刺激γδ+T细胞, 于不同时间观察ML增强γδ+T细胞对Daudi细胞的细胞毒作用,并观察ML协同LPS对γδ+T 细胞分泌细胞因子的调节作用,探索ML增强γδ+T细胞抗肿瘤作用和免疫调节之机理。结果: 用51Cr释放法检测经不同浓度ML(0,1,10,100和200 ng／ml)不同时间(12,24,48 h)诱导后的γδ+T细胞的细胞毒功能。100ng ML经24h和48 h诱导后,正常人γδ+T细胞对NK不敏感的Daudi细胞细胞毒百分率分别为29．25％,27．34％;200ng ML经24 h和48 h诱导后,正常人γδ+T细胞对Daudi细胞细胞毒百分率分别为25．25％,27．38％。明显高于12h诱导后的细胞毒百分率(100ngML为14．89％,200ng ML为18．88％)及阴性对照组9．89％(P<0．05)。用ELISA 法定量检测细胞因子,正常人外周γδ+T细胞经LPS(25 mg／L)及不同浓度的ML(0,1,10,100 和200 μg／L)诱导24 h后,TNF-α分泌高于单独LPS刺激组(表1),ML加入量为100 μg／L和 200 μg／L两组与单加LPS组比较,具有明显差异(P<0．05);IL-10分泌水平则随ML浓度的增高而下降(表)。ML对IL-1和IL-12的分泌无明显影响(数据未显示)。在ML(100 μg／L)+LPS (25mg／L)诱导γδ+T细胞分泌TNF-α实验中,于ML+LPS加入后不同时段(0;2;4;8;12;16;20;24h),取培养上清,检测培养中上清中TNF-α浓度,结果显示:当培养达8h时,TNF- α浓度达到最高,随后缓慢下降。

关键词：细胞毒作用不同浓度细胞分泌 LPS 细胞因子免疫调节作用槲寄生凝集素细胞杀伤

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槲寄生凝集素提取及其增强γδ-T细胞抗瘤作用的实验性研究

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诊断学理论与实践 2005年第4期4卷 300-302,316页

作者：朱吉乔晓洪周健柏峻张继英余奇文李宁丽张冬青上海天山中医医院外科上海200051 上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海200025

目的:采用硫酸铵沉淀法从中药槲寄生中提取制备分子量约为31ku的槲寄生凝集素有效成分,观察其对诱导正常人外周血γδ-T细胞受体(γδ-TCR)阳性T细胞表达、杀伤Daudi细胞和增强肿瘤组织中浸润的γδ-T细胞特异杀伤肿瘤细胞的能力。方法... 详细信息

目的:采用硫酸铵沉淀法从中药槲寄生中提取制备分子量约为31ku的槲寄生凝集素有效成分,观察其对诱导正常人外周血γδ-T细胞受体(γδ-TCR)阳性T细胞表达、杀伤Daudi细胞和增强肿瘤组织中浸润的γδ-T细胞特异杀伤肿瘤细胞的能力。方法:饱和硫酸铵沉淀法获得槲寄生凝集素;免疫荧光法检测γδ-TCR阳性细胞表达;乳酸脱氢酶法(LDH)检测γδ-TCR杀伤靶细胞活性。结果:不同浓度槲寄生凝集素均能诱导正常人外周γδ-TCR的表达;提取的槲寄生凝集素具有诱导外周血γδ-TCR阳性细胞杀伤Daudi细胞的能力,且呈剂量依赖;槲寄生凝集素可增强肿瘤组织中γδ-TCR阳性细胞的抗瘤效应。结论:槲寄生凝集素具增强γδ-T细胞杀伤肿瘤靶细胞的生物学作用。

关键词：槲寄生凝集素 γδ-T细胞乳酸脱氢酶法流式细胞仪

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