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环境科学学报 1994年第4期14卷 466-474页

作者：黄玉瑶高玉荣曹宏任淑智朱江中国科学院动物研究所

在室外中等规模草型塘模型生态系统（Ｖ＝３ｍ￣３）中，实验研究了国产新农药单甲脒盐酸盐水剂对池塘生态系统结构与功能的影响．在１２．５、２５．０和５０．０ｍｇ／Ｌ的农药浓度下１周左右，大型水生植物、浮游植物、浮游动物、底... 详细信息

在室外中等规模草型塘模型生态系统（Ｖ＝３ｍ￣３）中，实验研究了国产新农药单甲脒盐酸盐水剂对池塘生态系统结构与功能的影响．在１２．５、２５．０和５０．０ｍｇ／Ｌ的农药浓度下１周左右，大型水生植物、浮游植物、浮游动物、底栖动物均受到不同程度的损伤和破坏，种类、密度，多样性指数下降，高浓度组中浮游生物全部消亡；水层中的好氧异养菌数量则明显增加，单甲脒浓度越高异养菌数量增加越多．与此同时，群落产氧量减少，呼吸量增加，Ｐ／Ｒ比值及ｐＨ值明显下降，单甲脒浓度越高，群落代谢变化幅度越大．单甲脒水剂还明显增加水体总氮和磷酸盐含量．实验结果表明，草型塘模型生态系统是评价农药等化学品整体生态效应的一种有效途径．

关键词：模型生态系统草型塘单甲脒农药生态系统效应

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应用草型塘模型生态系统研究化学品的整体生态效应

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生态学报 1995年第1期15卷 39-47页

作者：黄玉瑶高玉荣曹宏任淑智朱江中国科学院动物研究所

本文叙述草型塘模型生态系统的结构、功能及应用于评价化学品引起生态效应的可能性。模型塘由８个３ｍ×１ｍ×１ｍ（Ｖ＝３ｍ￣３）的玻璃钢水槽组成。每个槽的底部铺设１０ｃｍ厚的带有水生生物种子、孢子和卵子的河泥，灌注... 详细信息

本文叙述草型塘模型生态系统的结构、功能及应用于评价化学品引起生态效应的可能性。模型塘由８个３ｍ×１ｍ×１ｍ（Ｖ＝３ｍ￣３）的玻璃钢水槽组成。每个槽的底部铺设１０ｃｍ厚的带有水生生物种子、孢子和卵子的河泥，灌注自来水，添加一定量的ＫＮＯ＿３和ＮａＨ＿２ＰＯ＿４．使起始氮、磷含量达到中－富营养水平。在室外自然光照条件下培养，实验历时４个多月。经１个多月的培养，各槽即形成结构复杂的沉水植物群落，除各种常见的沉水植物外，尚有多种藻类、浮游动物、底栖动物及微生物。各群落之间的相似性较好，藻类、浮游甲壳类及底栖动物多样性指数变异系数分别为１７．７％、１８．０％和３６．０％。群落功能稳定，９月中旬各槽群落总产氧量平均为５．７５±０．３０ｇ／ｍ￣２·ｄ’Ｐ／Ｒ比值平均为１．２６±０．０７，二者的变异系数分别为５．２％和５．６％。经单甲脒农药污染影响实验，本模型生态系统中的群落结构及功能产生一系列明显反应。说明草型塘模型生态系统结构、功能比较复杂，稳定，可比性较强，对药物污染反应灵敏，是生态系统水平上生态效应评价的良好工具。

关键词：模型生态系统草型塘群落结构化学品

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氮磷营养盐对模型生态系统中粪肠球菌抗生素耐药形成的影响

氮磷营养盐对模型生态系统中粪肠球菌抗生素耐药形成的影响

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作者：包松英福建农林大学

学位级别：硕士

目的：建立模型生态系统研究氮磷营养盐对粪肠球菌产生土霉素（OXY）、氨苄西林（AMP）、环丙沙星（CIP）、万古霉素（VAN）、氯霉素（CHL）、红霉素（ERY）耐药表型的影响，初步探讨氮磷营养盐对粪肠球菌产生土霉素、氯霉素和红霉素耐... 详细信息

目的：建立模型生态系统研究氮磷营养盐对粪肠球菌产生土霉素（OXY）、氨苄西林（AMP）、环丙沙星（CIP）、万古霉素（VAN）、氯霉素（CHL）、红霉素（ERY）耐药表型的影响，初步探讨氮磷营养盐对粪肠球菌产生土霉素、氯霉素和红霉素耐药的抗生素耐药基因（ARGs）机理。方法：从福州森林公园采集土样，分装后高压灭菌。检测实验室保存的粪肠球菌纯菌株（ATCC29212）对试验用6种抗生素敏感性，结果表明除了对红霉素中介之外，对其他抗生素菌均敏感，可以作为试验用纯菌株。将增菌后的菌液与灭菌的土样搅拌均匀放入试验用水箱并加入纯水。按照此方法建立8个水箱，共4个剂量组，分别添加含氮量为0mg/L、1.50mg/L、4.5mg/L、12.5mg/L的硝酸铵（NH4NO3）以及含磷量为0mg/L、0.15mg/L、0.45mg/L、1.25mg/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4）营养液，每个剂量组两个重复。采集第0d、1d、7d、14d、21d、28d、40d、60d、95d系统中的水样和泥样，水样用于检测富营养化的5个相关指标TN（Total Nitrogen）、TP（TotalPhosphorus）、CODMn（Permanganate Index）、Chla（Chlorophyll-a）、SD（SecchiDepth），了解不同水箱中水质变化情况；泥样用于检测粪肠球菌对6种抗生素的敏感性，了解氮磷营养盐对粪肠球菌产生抗生素耐药性的影响。用PCR的方法检测土霉素耐药基因tetM、tetL、tetS，红霉素耐药基因ermB、msrC和mefA，氯霉素耐药基因cat以及肠球菌表面蛋白的esp基因。结果：（1）不同剂量氮磷营养盐添加入系统之后，系统中低中高剂量组TN值出现明显梯度变化，使得TLI值在第7d时基本达到预期的轻度、中度、重度富营养化水平，第7d21d之间，由于藻类繁殖不均衡，造成同一剂量组不同水箱之间的Chla和CODMn值出现差异，TLI指数也发生明显变化，而粪肠球菌对不同抗生素耐药现象从第7d开始出现，并持续到第60d不等，暗示着TN、Chla和CODMn指标的改变造成不同程度的富营养化对系统中粪肠球菌引发和维持对6种不同抗生素耐药有十分明显的影响。（2）添加不同剂量氮磷营养盐对粪肠球菌分离率的影响不同，由于本试验是人为添加纯菌株，因此在第0d，8个水箱的分离率均达到了100%，第1～28d，低剂量组两个水箱，中剂量组3号水箱和高剂量组1号水箱中粪肠球菌的分离率均高于空白组，且与剂量呈正相关，而第40～60d，低于空白剂量组；中剂量组5号和高剂量组8号水箱中的粪肠球菌分离率均低于或等于空白剂量组。（3）添加不同剂量氮磷营养盐可以引发粪肠球菌产生对土霉素、氯霉素、红霉素、环丙沙星以及氨苄西林的耐药；对土霉素耐药的影响与添加剂量呈正相关，高剂量组1号和8号分别在第21d和第7d出现土霉素耐药，之后缓慢升高，到第60d均达到最高值100%，中剂量组3号和5号均在第21d出现土霉素耐药，第60d达到最高值，低剂量组分别在第21d和28d开始出现土霉素耐药，最高值分别达到66.7%和100%；对氯霉素耐药影响随剂量增加而增大，高剂量组8号和中剂量组5号均在第7d就出现氯霉素耐药，且到第60d，耐药率分别达到66.7%和40%，低剂量组仅在第28d和60d出现氯霉素耐药；对红霉素耐药也与剂量呈正相关，高剂量组8号和中剂量组5号在第7d分别出现了14.3%和16.7%的耐药率，之后缓慢上升，第60d达到最高值；低剂量组7号在第21d出现50%耐药率，之后缓慢下降；仅高剂量添加组对环丙沙星耐药性产生明显影响，高剂量组8号在第7d就产生14.3%的环丙沙星耐药率，到第40d上升为50%，之后迅速下降至0，而高剂量1号仅在第40d出现33.3%的耐药率；仅中剂量组5号和低剂量组7号水箱在第21d出现50%和16.7%的氨苄西林耐药率，其余水箱均无明显变化，系统中未分离到粪肠球菌对万古霉素产生耐药。（4）对土霉素耐药的37株粪肠球菌中，tetM、tetL、tetS基因的阳性率分别为97.3%、62.2%、18.9%，对土霉素敏感的39株粪肠球菌中，tetM、tetL、tetS基因的阳性率分别为89.7%、7.7%、0%；对氯霉素耐药的13株粪肠球菌中，cat基因的阳性率为69.2%，对氯霉素敏感的70株粪肠球菌中，cat基因阳性率为2.9%；检测了对红霉素耐药、中介、敏感的粪肠球菌各22、31、16株，ermB基因阳性率分别为77.3%、77.4%、75.0%，检测了对红霉素耐药、中介、敏感的粪肠球菌各22、40、13株，msrC阳性率分别为18.2%、0%、0%，检测了对红霉素耐药、中介、敏感的粪肠球菌57株

关键词：氮磷营养盐粪肠球菌抗生素耐药模型生态系统抗生素耐药基因

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氮磷营养盐对模型生态系统中粪肠球菌抗生素耐药形成的影响

氮磷营养盐对模型生态系统中粪肠球菌抗生素耐药形成的影响

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：包松英李健马玉芳李猛苏俊峰陈晓勇俞道进黄一帆福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室福州350002

[目的]研究氮磷营养盐对模型生态系统中粪肠球菌产生土霉素、氨苄西林、环丙沙星、万古霉素、氯霉素、红霉素耐药表型的影响,初步探讨氮磷营养盐对粪肠球菌产生土霉素、氯霉素和红霉素耐药的抗生素耐药基因(ARGs)机理。[方法]将实验室... 详细信息

[目的]研究氮磷营养盐对模型生态系统中粪肠球菌产生土霉素、氨苄西林、环丙沙星、万古霉素、氯霉素、红霉素耐药表型的影响,初步探讨氮磷营养盐对粪肠球菌产生土霉素、氯霉素和红霉素耐药的抗生素耐药基因(ARGs)机理。[方法]将实验室保存的粪肠球菌纯菌株(ATCC29212)与灭菌土样搅拌均匀并加入纯水,分为4组,每组2个重复,添加不同浓度氮磷营养盐。采集不同时间点的水样及泥样,水样用于检测富营养化相关指标TN、TP、CODMn、Chla、SD;泥样用于检测粪肠球菌对6种抗生素的敏感性。用PCR法检测土霉素耐药基因tetM、tetL、tetS,红霉素耐药基因ermB、msrC和mefA,氯霉素耐药基因cat以及肠球菌表面蛋白的esp基因。[结果]氮磷营养盐对粪肠球菌产生土霉素耐药的影响最大,与剂量呈正相关;高剂量氮磷营养盐对粪肠球菌产生红霉素、氯霉素和环丙沙星耐药的影响较显著,但中低剂量的效果不明显;粪肠球菌产生氨苄西林耐药表型影响不明显,而对万古霉素则没有产生可检测到的影响。在添加氮磷前系统中已经存在tetM、tetL和ermB基因,而氮磷营养盐的添加可能对tetM、tetL和ermB基因起到诱导表达的作用,而系统中检测到的msrC基因阳性菌株均为高水平红霉素耐药株,cat基因的阳性率所占耐药株比率也很高。[结论]氮磷营养盐可导致模型生态系统中粪肠球菌出现不同程度的抗生素耐药性,该现象是多种机制共同作用的结果。

关键词：氮磷营养盐粪肠球菌抗生素耐药模型生态系统抗生素耐药基因

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微宇宙理论及其在生态毒理学研究中的应用

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生态学报 2001年第10期21卷 1726-1733页

作者：杜秀英竺乃恺夏希娟徐晓白中国科学院生态环境研究中心北京100085

简述微宇宙理论、发展史和主要类型 ,并着重综述了微宇宙在生态毒理学研究中的主要应用情况 ,以及与实验室单物种试验和野外试验比较微宇宙的优缺点 ,并对微宇宙的未来发展趋势也作了简要讨论。

关键词：微宇宙理论微宇宙模型生态系统生态毒理学应用

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氮磷营养盐条件下大肠杆菌对氯霉素耐药性及机理研究

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中国畜牧兽医 2015年第6期42卷 1580-1586页

作者：黄启发陈秀萍林晶张洁汪燕秋俞道进福建农林大学动物科学学院福州350002

为探讨氮磷营养盐对环境大肠杆菌(***)耐药性的影响及其机制,本试验通过建立模型生态系统研究氮磷营养盐引发大肠杆菌对氯霉素(CHL)产生耐药表型的影响,并对分离到的耐药菌株和敏感菌株进行cat基因检测。结果显示,添加不同剂量氮磷营养... 详细信息

为探讨氮磷营养盐对环境大肠杆菌(***)耐药性的影响及其机制,本试验通过建立模型生态系统研究氮磷营养盐引发大肠杆菌对氯霉素(CHL)产生耐药表型的影响,并对分离到的耐药菌株和敏感菌株进行cat基因检测。结果显示,添加不同剂量氮磷营养盐可引发大肠杆菌对氯霉素产生耐药性,46株耐氯霉素大肠杆菌cat基因的阳性率为89.13%;16株对氯霉素敏感的大肠杆菌未检出cat基因。结果表明,模拟生态系统中加入氮磷营养盐可引发大肠杆菌对氯霉素产生耐药;氮磷营养盐引发大肠杆菌对氯霉素耐药与cat基因有关。

关键词：大肠杆菌模型生态系统氮磷营养盐耐药 cat基因

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富营养化对大肠杆菌耐药性及外膜蛋白OmpF表达水平的影响

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畜牧与兽医 2015年第5期47卷 88-92页

作者：黄启发陈秀萍陈玉红肖正润丘建龙徐超俞道进福建农林大学动物科学学院福建福州350002

为了研究水体富营养化对大肠杆菌耐药性与外膜蛋白Omp F表达水平之间的相关性,通过建立模型生态系统,分离纯化大肠杆菌进行药敏试验,并采用Western-Blot蛋白印迹法对耐药大肠杆菌Omp F的表达水平进行定量研究。结果显示:从低剂量组中不... 详细信息

为了研究水体富营养化对大肠杆菌耐药性与外膜蛋白Omp F表达水平之间的相关性,通过建立模型生态系统,分离纯化大肠杆菌进行药敏试验,并采用Western-Blot蛋白印迹法对耐药大肠杆菌Omp F的表达水平进行定量研究。结果显示:从低剂量组中不同时期分离的多株大肠杆菌对AMP、CF、TEL和CHL 4种抗生素同时表现为高水平耐药,表明大肠杆菌多重耐药的出现与系统环境富营养化有关;对5株耐药大肠杆菌及3株敏感大肠杆菌的Omp F表达水平定量分析显示,与空白组相比,耐药大肠杆菌的Omp F在第16天后显著下调并且维持到第68天,表明轻度富营养化导致大肠杆菌耐药的出现和维持可能与Omp F的减量表达有关。本研究结果为进一步开展富营养状态下大肠杆菌耐药性的形成和维持的研究提供了理论基础。

关键词：大肠杆菌富营养化模型生态系统 OmpF 耐药

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低水平氮磷营养盐对水源性大肠杆菌群体感应系统的影响

低水平氮磷营养盐对水源性大肠杆菌群体感应系统的影响

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作者：黄启发福建农林大学

学位级别：硕士

目的:通过建立模型生态系统,研究低水平氮磷营养盐对氨苄西林(AMP)、头孢唑啉(CFZ)、头孢噻肟(CTX)、庆大霉素(GM)、四环素(TE)、环丙沙星(CIP)和氯霉素(CHL)7种抗生素耐药表型产生的影响,了解大肠杆菌在不同剂量营养盐条件下耐药性的... 详细信息

目的:通过建立模型生态系统,研究低水平氮磷营养盐对氨苄西林(AMP)、头孢唑啉(CFZ)、头孢噻肟(CTX)、庆大霉素(GM)、四环素(TE)、环丙沙星(CIP)和氯霉素(CHL)7种抗生素耐药表型产生的影响,了解大肠杆菌在不同剂量营养盐条件下耐药性的维持和变化;分析得到的多重耐药大肠杆菌与群体感应系统调控相关的6个基因sdiA、lsrR、lsrADB、ftsE、ftsQ和hflX表达水平的相关性。方法:建立模型生态系统,共设4个剂量组和一个空白组,每个剂量设置2个重复,分别添加低水平的磷酸二氢钠(NaH2P04)和硝酸铵(NH4N03)营养盐使TN 和 TP 最终浓度分别为 1.50mg/L,0.15mg/L;2.50mg/L,0.25mg/L;3.50 mg/L,0.35 mg/L;4.50 mg/L,0.45 mg/L。采集第 0 d、1 d、8 d、15 d、22 d、29d、36d、54d、85d模型生态系统的水样并测定TN、TP、CODMn和Chla4个水质指标,同时分离、鉴定和保存相应时间点的大肠杆菌;用微量肉汤稀释法检测分离菌对7种抗生素的敏感性,探讨不同氮磷营养盐浓度对大肠杆菌耐药性的影响。以分离到对AMP和CFZ高水平耐药的大肠杆菌为材料,应用Real-time PCR检测调控QS的6个基因sdiA、lsrR、lsrADB、ftsE、ftsQ和hflX的表达水平。用Pearson相关性分析法分析耐药水平和6个基因的表达水平相关性。结果:(1)添加不同剂量低水平的氮磷营养盐可以引发***的耐药。对AMP和CFZ的耐药最明显,大部分表现为高水平的耐药,且二者变化相似,超低剂量组第15 d和第22 d分离到敏感菌,其它都为高水平耐药菌;低剂量组第1d和第8 d分离到对AMP敏感菌,对CFZ表现为低水平的耐药菌,其余都是高水平耐药菌;中剂量组整个过程都分离到对两种药物表现为高水平的耐药菌;高剂量组第8d和第15 d分离到敏感菌,其它都为高水平耐药菌。不同剂量组分离到少量对CTX的耐药菌,没有明显规律性变化。高剂量组的第8 d和第15 d分离到低水平的耐GM的大肠杆菌,第22 d分离到对TE的高水平耐药菌,没有分离到对CIP和CHL的耐药菌。(2)水质指标TN、TP、CODMn、Chla和大肠杆菌对7种药物耐药水平的相关性系数都比较低,但是TN与大肠杆菌对AMP、CFZ和GM耐药水平的相关系数分别为0.447、0.38和0.388,呈低度的相关性;CODMn与大肠杆菌对AMP、CFZ和CTX的相关系数分别为0.605、0.507和0.566,呈低度的相关性。(3)细菌对AMP和CFZ的耐药水平与基因ftsQ表达水平呈负相关,与另外5个基因表达水平呈正相关。超低剂量组:对AMP的耐药水平和基因lsrR、lsrADB、ftsE和hflX的表达水平呈显著的相关性;对CFZ的耐药水平和基因sdiA、lsrR、lsrADB和hflX的表达水平呈低度的相关性。低剂量组:对AMP的耐药水平和基因表达水平呈弱的相关性;对CFZ的耐药水平和基因sdiA、lsrR和hflX的表达水平呈低度的相关性。中剂量组:对AMP的耐药水平和基因lsrR、ftsE的表达水平呈显著的相关性,与基因sdiA和ftsQ的表达水平呈低度的相关性;对CFZ的耐药水平与基因lsrR的表达水平呈显著的相关性,与基因ftsQ表达水平呈低度的相关性。高剂量组:对AMP的耐药水平和基因lsrR、lsrADB和ftsE的表达水平呈显著的相关性,与基因hfX表达水平呈低度的相关性;对CFZ的耐药水平与基因ftsE和hflX的表达水平呈显著的相关性,与基因lsrR和lsrADB的表达水平呈低度的相关性。结论:(1)模型生态系统分离到对AMP和CFZ高水平耐药大肠杆菌与加入的氮磷营养盐有关,但是与加入氮磷营养盐剂量没有明显的关系。(2)模型生态系统分离到对AMP和CFZ高水平耐药与TN和CODMn有一定的相关性,但是不显著。(3)大肠杆菌对CFZ和AMP的高水平耐药与sdiA、lsrR、lsrADB、ftsE和hflX 5个基因的增量表达相关,同时与基因ftsQ的减量表达相关。(4)水源性大肠杆菌可以通过群体感应系统调控相关基因的表达水平,应对氮磷营养盐的刺激而产生高水平耐药菌。

关键词：模型生态系统大肠杆菌耐药水平群体感应系统低水平氮磷营养盐

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葡萄糖对水源性肠球菌抗生素耐药形成的影响

葡萄糖对水源性肠球菌抗生素耐药形成的影响

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作者：杨帆福建农林大学

学位级别：硕士

目的：通过建立模型生态系统进行研究，了解葡萄糖引发系统中的肠球菌对红霉素、环丙沙星、土霉素、氨苄西林、万古霉素耐药的表型的影响，探讨葡萄糖引发系统中的肠球菌对红霉素和环丙沙星耐药产生的机理。方法：（1）土壤的采集：作... 详细信息

目的：通过建立模型生态系统进行研究，了解葡萄糖引发系统中的肠球菌对红霉素、环丙沙星、土霉素、氨苄西林、万古霉素耐药的表型的影响，探讨葡萄糖引发系统中的肠球菌对红霉素和环丙沙星耐药产生的机理。方法：（1）土壤的采集：作为底泥的土样采自福州市森林公园，采样点选择游人很少经过的地方。（2）分离土壤中的肠球菌并检测MIC值是否处于敏感的范围，是否可以作为底泥。（3）模型生态系统的建立：建立12个模型系统，分别为0.02g/L、0.1g/L、0.4g/L、1.6g/L、3.2g/L和0g/L，每个剂量设置两个重复加入经过高压灭菌的葡萄糖。（4）耐药表型检测：依次采取0d、1d、8d、16d、28d、40d、86d和140d模型系统中水和底泥交界处的混合物，经培养分离纯化后检测肠球菌对6种抗生素的敏感程度，了解葡萄糖对肠球菌产生抗生素耐药表型变化造成的影响；检测系统各个阶段的溶氧、pH、温度变化，了解添加葡萄糖对水源性肠球菌分离率等的影响。（5）耐药基因检测：检测分离纯化得到的肠球菌ermB、mefA、gyrA以及Esp等基因，对gyrA基因进行测序，分析83和87位点有无突变产生。结果:(1)添加不同剂量葡萄糖对肠球菌分离率的影响不同，添加量在一定范围内可以显著提高肠球菌的分离率；添加0.02g/L剂量可以使系统中的肠球菌分离率从20%提高到90%；添加0.1g/L和0.4g/L剂量组也有不同程度提高；而添加1.6g/L和3.2g/L的剂量组在16d到28d分离率有下降。 (2)添加不同剂量葡萄糖没有引发肠球菌对氨苄西林和万古霉素的敏感性产生可检测到的影响。0.02g/L剂量在第8d出现了环丙沙星耐药菌株，并在28d达到最高的57.1%；到140d仅有40%菌株表现为中介，无耐药菌株。0.1g/L剂量在第8d耐药和中介菌株分离率均降到零，而后又呈上升趋势，到140d添加0.1g/L-3.2g/L葡萄糖对环丙沙星的耐药性的影响都比较明显，总的来说葡萄糖的添加剂量越大影响就越大，剂量较大的组耐环丙沙星的菌株的出现时间较早，耐药率也较大。第1d3.2g/L剂量产生的耐药率最高，为60%。0.02g/L剂量在第8d也出现了耐药菌株，并还维持在33.3%。0.4g/L和1.6g/L剂量组均在1d就产生了耐药菌株，并在16d和28d达到最高，而后又都有所下降。3.2g/L剂量组耐药菌株出现较快，第一天耐药率就达到了60%，并且维持了15d；第86d又出现了12.5%的耐药率和37.5%的中介率；到140d耐药和中介菌株均没出现。不同的添加剂量对氯霉素耐药产生的影响也不同，系统中只有0.02g/L和3.2g/L剂量组对氯霉素产生了14.3%和37.5%的耐药率。系统中分离得到的肠球菌对红霉素以及土霉素的耐药菌株出现的都比较晚，而且程度不完全与添加剂量呈正比。 (3)分离得到的对红霉素耐药的44株肠球菌中，ermB基因的阳性率为63.6%（28/44），ermB基因呈阳性的菌株中，耐256μg/mL和128μg/mL浓度红霉素的肠球菌有24株，可见对红霉素耐药程度越高越容易出现ermB耐药基因；对红霉素敏感的16株肠球菌均未检测到ermB耐药基因的存在。试验中介导对红霉素耐药的mefA基因仅在中介菌株中检测到一株。肠球菌的gyrA基因试验共检测72株，其中60株显示为阳性，对其进行测序分析发现该基因的83和87位点没有突变的产生。对耐药菌株进行检测没有发现与肠球菌表面蛋白表达有关的Esp基因。结论：(1)一定浓度的葡萄糖可以引发模型中肠球菌产生红霉素、环丙沙星、氯霉素和土霉素耐药，对肠球菌万古霉素、氨苄西林耐药的产生无明显的作用。 (2)模型系统中的葡萄糖浓度不同，对肠球菌对环丙沙星、红霉素、氯霉素和土霉素的影响程度不同；对氯霉素耐药的形成影响不大。 (3)本试验模型生态系统中的肠球菌的对红霉素耐药与ermB基因的存在有很大关系，而基因测序结果表明gyrA基因的第83和第87位点均未发生突变，说明系统中肠球菌对环丙沙星耐药的形成的原因并不是gyrA基因突变。 (4)检测表明本试验耐药菌株中没有出现Esp和mefA基因，说明模型中肠球菌耐药的形成与这两种基因引起的耐药机理无关。

关键词：葡萄糖肠球菌模型生态系统抗生素耐药表型耐药基因

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玉米粉对水源性肠球菌抗生素耐药形成的影响

玉米粉对水源性肠球菌抗生素耐药形成的影响

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作者：赖宝色福建农林大学

学位级别：硕士

目的:建立模型生态系统研究玉米粉引发水源性肠球菌对氯霉素(CHL)、红霉素(ERY)、氨苄西林(AMP)、土霉素(OTC)、万古霉素(VAN)和环丙沙星(CIP)耐药表型产生的影响,初步探讨玉米粉引发水源性肠球菌对红霉素和环丙沙星耐药的机理。方法:... 详细信息

目的:建立模型生态系统研究玉米粉引发水源性肠球菌对氯霉素(CHL)、红霉素(ERY)、氨苄西林(AMP)、土霉素(OTC)、万古霉素(VAN)和环丙沙星(CIP)耐药表型产生的影响,初步探讨玉米粉引发水源性肠球菌对红霉素和环丙沙星耐药的机理。方法:从福州森林公园采集土样,检测土样中肠球菌对试验用6种抗生素的敏感性,结果表明这些土样中的肠球菌对这6种抗生素都敏感,可作为模型生态系统的底泥。模型生态系统建立后,将系统分为6个剂量组,分别添加8g/L、4g/L、1g/L、0.25g/L、0.05g/L和0g/L的灭菌玉米粉,每个剂量组两个重复。采集第0d、第1d、第3d、第7d、第14d、第30d、第40d、第61d和第130d系统中的泥样,检测泥样中肠球菌对6种抗生素的敏感性,了解玉米粉对水源性肠球菌抗生素耐药表型形成的影响;应用PCR方法检测ermB、mefA、gyrA和Esp等基因,序列测定和分析gyrA基因83位点和87位点是否发生突变;结晶紫染色法检测不同葡萄糖浓度对肠球菌生物膜形成的影响。结果: (1)添加不同剂量玉米粉对肠球菌分离率的影响不同,影响程度和添加玉米粉的剂量呈正相关,添加8g/L玉米粉对肠球菌分离率影响最大,可使分离率从40%上升为100%,添加4g/L玉米粉时肠球菌的分离率最高只上升到80%,添加1g/L、0.25g/L、0.05g/L和0g/L玉米粉时肠球菌的分离率变化不大。 (2)添加不同剂量玉米粉没有引发肠球菌对氨苄西林和万古霉素的敏感性产生可检测到的影响。添加0.05g/L-8g/L玉米粉对环丙沙星的耐药性都产生了影响,且添加玉米粉的剂量越大产生的影响越大,环丙沙星耐药菌株的出现时间越早,耐药率也越大。添加8g/L玉米粉可在第1d就出现了耐环丙沙星的菌株,而在第7d时就使肠球菌对环丙沙星的耐药率达到了100%;添加4g/L玉米粉时对环丙沙星的影响虽然也在第1d就出现,但到了第14d时才出现了最高的耐药率85.7%;添加1g/L玉米粉对环丙沙星的影响较小,在第7d才出现25%的耐药率,影响最大时的耐药率也才达到50%。对氯霉素的影响也因添加玉米粉剂量不同而不同,添加8g/L和4g/L玉米粉时没有出现对氯霉素耐药的肠球菌,而添加0.05g/L-1g/L玉米粉时都出现了氯霉素耐药菌株,且耐药程度与添加玉米粉的剂量呈正相关,耐药率分别为20%、25%和55.5%。对红霉素和土霉素耐药性的影响情况较一致,耐药程度与添加玉米粉的剂量不完全呈正比,且耐药菌株出现的时间较晚。 (3)对红霉素耐药的28株肠球菌中,ermB基因的阳性率为78.6%,而对红霉素敏感的16株肠球菌均未检测到ermB耐药基因,另外,无论是对红霉素敏感的肠球菌还是对红霉素耐药的肠球菌均未检测到mefA耐药基因。模型生态系统中分离的102株肠球菌gyrA基因的阳性率为96.1%,但83位点和87位点均没有发生突变。 (4)表达肠球菌表面蛋白的Esp基因检出率为0%。不同浓度的葡萄糖对分离自模型生态系统中肠球菌的生物膜形成能力有不同的促进作用,1.0%葡萄糖比0.5%葡萄糖有更强的促进生物膜形成作用。结论: (1)添加玉米粉可引发模型生态系统中的肠球菌对红霉素、土霉素、环丙沙星和氯霉素产生耐药,但对万古霉素和氨苄西林没有产生可检测到的影响。 (2)添加不同剂量的玉米粉引发水源性肠球菌对红霉素、土霉素、环丙沙星和氯霉素耐药的程度不同;对环丙沙星的影响程度与添加玉米粉的剂量呈正比,添加剂量越大对环丙沙星耐药性形成速度与程度的影响越大;对氯霉素的影响在添加0.05g/L-1g/L剂量区间,影响程度与添加玉米粉的剂量呈正相关;对土霉素和红霉素的影响较不规律,影响程度与添加玉米粉的剂量不完全呈正比,但整体趋势还是表现为添加剂量越大,影响程度越大。 (3)模型生态系统中的肠球菌对环丙沙星耐药不是由gyrA基因突变引起,但对红霉素的耐药绝大部分与ermB耐药基因有关。 (4)肠球菌生物膜的形成与Esp基因之间没有必然的联系,但肠球菌在葡萄糖诱导下具有形成生物膜的能力,且生物膜的形成与葡萄糖的浓度在一定范围内呈正相关。肠球菌耐药的产生与环境中葡萄糖的浓度以及生物膜的形成有一定的相关性。

关键词：玉米粉肠球菌生物膜模型生态系统抗生素耐药

来源：评论

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