检索结果-内蒙古大学图书馆

化学学报 2007年第8期65卷 760-764页

作者：林治华王槐亮唐艳吴玉章重庆工学院生物工程学院重庆400050 第三军医大学基础部全军免疫学研究所重庆400038

运用多项式方案、量化基序方案等经典的CTL表位筛选方案,初步筛选了酪氨酸激酶相关蛋白TRP-2 CTL表位TRP-2_(180～188)(SVYDFFVWL)的模拟表位,以通过表位改造提高其与HLA-A2.1分子结合的能力,从而提高其免疫原性,根据打分结果,合成了4... 详细信息

运用多项式方案、量化基序方案等经典的CTL表位筛选方案,初步筛选了酪氨酸激酶相关蛋白TRP-2 CTL表位TRP-2_(180～188)(SVYDFFVWL)的模拟表位,以通过表位改造提高其与HLA-A2.1分子结合的能力,从而提高其免疫原性,根据打分结果,合成了4个得分较高的九肽序列,亲和力实验结果表明所筛选的4个序列较原序列均有较高的亲和力,但对2位的单突变结果较1和2位双突变结果理想,进一步运用分子模拟方法对4个序列与HLA-A2.1分子间的相互作用进行了分子模拟分析,分子模拟结果较好地解释了上述实验现象,从而为进一步的结构改造提供了理论依据,本研究提供了一个合理高效的模拟表位筛选方法。

关键词：酪氨酸激酶相关蛋白模拟表位分子模拟计算机辅助筛选免疫原性

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应用噬菌体展示肽库筛选生殖支原体黏附蛋白的模拟表位

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第1期32卷 84-90页

作者：曾焱华游晓星何军刘良专唐正宇余敏君吴移谋南华大学病原生物学研究所衡阳421001 南华大学附属南华医院长沙卫生职业学院

目的利用纯化的兔抗重组生殖支原体黏附素蛋白（rMgPa）的多克隆抗体（pAb）从噬菌体展示随机12肽库筛选MgPa的模拟表位。方法用纯化的兔抗rMgPa的pAb对噬菌体随机12肽库进行生物淘洗，随机挑取噬菌体克隆进行DNA测序与分析，并用MIMOX... 详细信息

目的利用纯化的兔抗重组生殖支原体黏附素蛋白（rMgPa）的多克隆抗体（pAb）从噬菌体展示随机12肽库筛选MgPa的模拟表位。方法用纯化的兔抗rMgPa的pAb对噬菌体随机12肽库进行生物淘洗，随机挑取噬菌体克隆进行DNA测序与分析，并用MIMOX对噬菌体克隆所展示的肽序列进行生物信息学分析。用ELISA、竞争性结合试验和Westernblot检测噬菌体与pAb结合的特异性。结果4轮生物淘洗后特异性噬菌体克隆得到了明显的富集。依据氨基酸组成的不同，74个噬菌体克隆所展示的肽序列可大致分为3组。经对肽序列进行比较分析以及用MIMOX进行生物信息学分析，结果表明这3组的核心序列分别为：P—S-A-A／V—X—R—F／w—E／S．L—S—P、A—K—L／L-T／Q-X—T—L—X—L和K-S-L-S—R—X—D—X-I。ELISA、竞争性结合试验和Westernblot方法检测的结果表明噬菌体能与pAb发生特异性结合，说明其可能足MgPa的模拟表位。结论成功筛选到MgPa的3个可能的模拟表位，为研制基于Mg抗原表位的诊断试剂与多肽疫苗奠定了一定的实验基础。

关键词：生殖支原体黏附蛋白噬菌体展示肽库模拟表位

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丙型肝炎病毒高变区1模拟表位的交叉反应性分析

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病毒学报 2008年第4期24卷 249-254页

作者：杨苗赵平边中启任艳丽龚育平戚中田第二军医大学微生物学教研室全军医学微生物学重点实验室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 成都军区昆明总医院感染病中心昆明650032

研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)高变区1(Hypervariable region 1,HVR1)抗原表位的交叉反应性,获取高反应性的抗原表位。设计并合成5种HVR1模拟表位基因,构建编码HVR1模拟表位的表达载体,表达并纯化表位蛋白。ELISA法检测表位... 详细信息

研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)高变区1(Hypervariable region 1,HVR1)抗原表位的交叉反应性,获取高反应性的抗原表位。设计并合成5种HVR1模拟表位基因,构建编码HVR1模拟表位的表达载体,表达并纯化表位蛋白。ELISA法检测表位蛋白与35份HCV抗体阳性血清的交叉反应性。包装HCV假病毒(HCVpseudotype particles,HCVpp),评价表位蛋白免疫BALB/c鼠血清在假病毒感染Huh7.5细胞中的作用。结果表明,表达纯化的5种表位蛋白(P1、P2、P5、P6、P8)均可与HCV抗体阳性血清反应,阳性反应率分别为54.3%(P1)、62.9%(P2)、80%(P5)、68.6%(P6)、54.3%(P8)。表位蛋白P6、P8免疫BALB/c鼠血清对HCV假病毒感染Huh7.5细胞具明显的抑制作用。结果提示,选取的HVR1模拟表位在HCV感染免疫与疫苗研制中可能具有潜在的价值。

关键词：丙型肝炎病毒高变区1 模拟表位交叉反应性

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应用噬菌体随机肽库研究细粒棘球蚴抗原模拟表位

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第5期28卷 352-354页

作者：宣燕郑宏梁超新疆医科大学第一附属医院麻醉科.乌鲁木齐市830054

用抗细粒棘球蚴B抗原(EgB)多克隆抗体筛选噬菌体随机7肽库。经过5轮筛选后,噬菌体回收率从第1轮的4.15×10-5增加到第5轮的4.30×10-2,说明阳性克隆得到富集。随机挑取60个蓝色噬菌斑进行扩增,对其核苷酸序列进行测定分析并与Eg... 详细信息

用抗细粒棘球蚴B抗原(EgB)多克隆抗体筛选噬菌体随机7肽库。经过5轮筛选后,噬菌体回收率从第1轮的4.15×10-5增加到第5轮的4.30×10-2,说明阳性克隆得到富集。随机挑取60个蓝色噬菌斑进行扩增,对其核苷酸序列进行测定分析并与EgB进行同源性比较。采用ELISA法对阳性噬菌体与抗EgB多克隆抗体结合特性进行检测,共检测出45个与抗EgB多克隆抗体结合的克隆株(阳性率为75%),其递呈的七肽序列与EgB的同源性低。采用ELISA法检测所选多肽对棘球蚴病所致过敏性休克患者抗血清的反应性,结果显示,细粒棘球蚴病患者抗血清与45个阳性噬菌体克隆反应的吸光度(A410值)比其与7肽库反应的A410值大2倍以上,该45个阳性噬菌体克隆与EgB多克隆抗体的结合是特异的。提示成功分析细粒棘球蚴囊液B抗原肽表位以及模拟表位。

关键词：模拟表位噬菌体肽库多克隆抗体细粒棘球蚴

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结核分枝杆菌抗原模拟表位肽的筛选及免疫活性鉴定

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吉林大学学报（医学版） 2009年第4期35卷 664-668,766页

作者：张林波王海燕刘香英张丹丹刘英嘉温得中吉林农业大学生命科学学院分子免疫学研究室吉林长春130118 吉林大学基础医学院医学遗传学教研室吉林长春130021

目的:从噬菌体随机12肽库中筛选结核分枝杆菌模拟抗原表位,并初步研究其免疫活性。方法:以鹿结核阳性血清纯化多克隆抗体IgG作为固相配基筛选噬菌体随机12肽库,按吸附-洗脱-扩增过程进行3轮筛选,随机挑取20个单克隆进行特异性鉴定,将筛... 详细信息

目的:从噬菌体随机12肽库中筛选结核分枝杆菌模拟抗原表位,并初步研究其免疫活性。方法:以鹿结核阳性血清纯化多克隆抗体IgG作为固相配基筛选噬菌体随机12肽库,按吸附-洗脱-扩增过程进行3轮筛选,随机挑取20个单克隆进行特异性鉴定,将筛选后得到的阳性克隆扩增后免疫BALB/c小鼠作为实验组;以TBS为阴性对照组,BCG为阳性对照组,采用间接ELISA方法检测抗体效价,MTT法检测淋巴细胞增殖能力。每组小鼠免疫3周后再鼻腔接种BCG,3周后无菌取左全肺研磨计算肺脏荷菌量,取右全肺制备病理切片观察肺脏病理变化。结果:经三轮筛选后阳性克隆得到富集,ELISA鉴定20个单克隆中有15个阳性克隆,阳性率为75%。免疫后实验组小鼠抗体水平高于BCG组(P<0.01)。小鼠脾淋巴细胞增殖实验,经ConA、LPS、PPD刺激后实验组SI值均高于BCG组,但差异无显著性(P>0.05),与TBS组比较差异有显著性(P<0.01)。实验组、BCG组均观察到少量的淋巴细胞浸润,而TBS组肺泡结构消失,组织发生实变。肺脏荷菌量实验显示实验组肺脏荷菌量[(4.080±0.035)log ***-1)]低于TBS组[(4.360±0.110)log ***-1](P<0.01),但高于BCG组荷菌量[(3.980±0.023)log ***-1](P>0.05)。结论:成功筛选得到含有结核分枝杆菌抗原模拟表位的阳性克隆,这些阳性克隆能有效诱导小鼠产生比BCG更高的抗体效价和保护效应,对其进行进一步序列测定和功能分析将有助于结核病疫苗的开发。

关键词：结核分枝杆菌随机肽库模拟表位免疫分析

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基于生殖支原体黏附蛋白模拟表位的多抗原肽免疫效果的观察

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中华微生物学和免疫学杂志 2013年第4期33卷 287-292页

作者：曾焱华游晓星唐双阳朱翠明余敏君吴移谋何军南华大学病原生物学研究所衡阳421001 南华大学附属南华医院

目的制备基于生殖支原体黏附蛋白（MgPa）模拟表位的多抗原肽（MAP），检测其诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答的水平，为研制安全、有效的基于模拟表位的Mg表位肽疫苗奠定实验基础。方法以多聚赖氨酸为核心基质，人工合成3种... 详细信息

目的制备基于生殖支原体黏附蛋白（MgPa）模拟表位的多抗原肽（MAP），检测其诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答的水平，为研制安全、有效的基于模拟表位的Mg表位肽疫苗奠定实验基础。方法以多聚赖氨酸为核心基质，人工合成3种含MgPa模拟表位的八分枝MAP，用反相高效液相色谱（RP—HPLC）和质谱分析对其进行纯化与鉴定。将其单独或混合免疫BALB／c小鼠。间接ELISA测定小鼠血清中的特异性IgG抗体及其亚类的水平；MTT比色法检测MAP刺激免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖反应，并用ELISA检测其脾细胞培养上清中的IL-4和WN-γ水平。结果成功合成了较高纯度的含MgPa模拟表位的3种MAP，这3种MAP均能刺激小鼠产生IgG抗体，且以Thl型免疫应答产生的IgG2a型抗体为主；与单个MAP组相比，混合MAP免疫组小鼠产生了更多的IgG、IgGl和IgG2a抗体（P均〈0．01）；3种MAP均能特异性诱导免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖，且能刺激其产生较多的IL-4和IFN-1，混合MAP免疫组小鼠产生的IL4和IFN-γ，与单个MAP组相比差异具有统计学意义（P均〈0．01）。结论基于MgPa模拟表位的3种MAP均能刺激小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答，且混合免疫组诱导的免疫应答效果比单个MAP组更好。

关键词：生殖支原体黏附蛋白模拟表位多抗原肽免疫原性

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应用随机肽库筛选展示河豚毒素模拟表位噬菌体

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卫生研究 2010年第3期39卷 299-301,305页

作者：张林江涛计融中国疾病预防控制中心营养与食品安全所北京100021

目的利用噬菌体随机肽库筛选展示河豚毒素(TTX)模拟抗原表位的噬菌体,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗TTX单克隆抗体为靶分子,从以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ表面的随机七肽库中进行生物亲和淘选,用ELISA... 详细信息

目的利用噬菌体随机肽库筛选展示河豚毒素(TTX)模拟抗原表位的噬菌体,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗TTX单克隆抗体为靶分子,从以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ表面的随机七肽库中进行生物亲和淘选,用ELISA法鉴定阳性克隆。结果通过4轮淘选,获得了7株能与抗TTX单克隆抗体特异性结合的噬菌体,采用间接竞争ELISA,筛选到3株能抑制TTX的阳性克隆。其中以4号噬菌体建立的免疫检测方法,线性范围为1～20ng/ml(TTX毒素浓度),R2=0.9947,检测下限为1ng/ml。结论从噬菌体七肽库筛选到了展示TTX模拟抗原表位的噬菌体,淘选出来的噬菌体粒子可作为毒素的替代品用于免疫学检测。

关键词：河豚毒素噬菌体展示肽库模拟表位 ELISA

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从噬菌体十二肽库筛选旋毛虫抗原模拟表位

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2004年第2期22卷 103-105页

作者：潘虹姜昌富李天群雷家慧时红波魏兰英华中科技大学同济医学院病原生物学系武汉430030 湖北民族学院病原生物学系恩施445000

目的　从噬菌体肽库筛选旋毛虫抗原的模拟表位 ,为研究和开发新的旋毛虫病诊断抗原提供实验依据。方法　以纯化旋毛虫病患者血清免疫球蛋白 (Ts IgG)对噬菌体十二肽库进行 5轮筛选 ,随机挑选 2 4个克隆 ,通过ELISA选取吸光值 (A)较高的 ... 详细信息

目的　从噬菌体肽库筛选旋毛虫抗原的模拟表位 ,为研究和开发新的旋毛虫病诊断抗原提供实验依据。方法　以纯化旋毛虫病患者血清免疫球蛋白 (Ts IgG)对噬菌体十二肽库进行 5轮筛选 ,随机挑选 2 4个克隆 ,通过ELISA选取吸光值 (A)较高的 6个克隆 (T1～T6) ,并检测其敏感性和特异性。　结果　T1～T6敏感性与旋毛虫幼虫抗原 (TsA)相同 (阳性率为 10 0 % ,P >0 .0 5 ) ,特异性与TsA无明显差异 (阴性率为 0～ 40 % ,P >0 .0 5 ) ,其中T3 ,T6与并殖吸虫病患者血清无交叉反应 ,特异性高于TsA(P <0 .0 5 ) ,T6与日本血吸虫病患者血清无交叉反应 ,特异性亦高于TsA(P <0 .0 5 )。

关键词：噬菌体肽库旋毛虫抗原模拟表位

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利用Sm抗原模拟表位肽构建狼疮样鼠模型

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中国医学科学院学报 2007年第2期29卷 191-195,I0002页

作者：谢红付冯浩曾海燕李吉施为易梅伍斌中南大学湘雅医院皮肤科长沙410008 湖南师范大学第一附属医院皮肤科长沙410005

目的利用Sm抗原模拟表位肽免疫BALB/C小鼠,构建狼疮样鼠模型。方法用鼠Sm单克隆抗体对噬菌体随机12肽库进行亲和筛选,将筛选的噬菌体阳性克隆行双抗体夹心ELISA检测、DNA序列测定并推导其氨基酸序列,初步确定Sm抗原模拟表位;进而用混合... 详细信息

目的利用Sm抗原模拟表位肽免疫BALB/C小鼠,构建狼疮样鼠模型。方法用鼠Sm单克隆抗体对噬菌体随机12肽库进行亲和筛选,将筛选的噬菌体阳性克隆行双抗体夹心ELISA检测、DNA序列测定并推导其氨基酸序列,初步确定Sm抗原模拟表位;进而用混合噬菌体阳性克隆皮下免疫BALB/C小鼠,ELISA法检测小鼠血清IgG型抗Sm抗体、抗双链DNA(dsDNA)抗体和抗核抗体(ANA)水平;直接免疫荧光检测小鼠肾脏IgG型免疫复合物的沉积以及HE染色观察小鼠肾脏组织病理损伤情况。结果免疫筛选获得的5个ELISA强阳性的噬菌体克隆的氨基酸序列IR、SQ、PP出现频率增加;实验组小鼠血清中第28天出现Sm抗体、dsDNA抗体、ANA抗体,且滴度不断升高;第33天出现蛋白尿;肾脏可以检测到IgG型免疫复合物沉积及明显的肾脏病理改变。对照组小鼠无明显自身抗体产生和肾脏病变。结论利用Sm抗原噬菌体模拟表位肽可成功构建狼疮样小鼠模型。

关键词：系统性红斑狼疮 Sm抗原噬菌体肽库模拟表位

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应用噬菌体展示技术筛选氯胺酮模拟表位的研究

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卫生研究 2010年第5期39卷 608-610页

作者：熊勇华陈雪岚刘小兴南昌大学食品科学国家重点实验室南昌330047 江西师范大学生命科学学院

目的应用噬菌体展示技术筛选氯胺酮模拟表位,为建立无毒ELISA检测体系提供基础。方法以抗氯胺酮单克隆抗体为配体,在噬菌体七肽库中淘选氯胺酮的模拟表位。经4轮淘选后,选择可与氯胺酮单克隆抗体有不同程度结合的噬菌体,并进一步以间接... 详细信息

目的应用噬菌体展示技术筛选氯胺酮模拟表位,为建立无毒ELISA检测体系提供基础。方法以抗氯胺酮单克隆抗体为配体,在噬菌体七肽库中淘选氯胺酮的模拟表位。经4轮淘选后,选择可与氯胺酮单克隆抗体有不同程度结合的噬菌体,并进一步以间接竞争ELISA确定与盐酸氯胺酮存在竞争抑制的阳性克隆。结果发现10个噬菌体均可与氯胺酮单克隆抗体不同程度的结合;以间接竞争ELISA确定其中5个阳性克隆与盐酸氯胺酮存在竞争抑制现象;5个阳性克隆测序结果表明,获得了4种不同的氨基酸序列。结论初步判断这4个噬菌体展示了氯胺酮模拟抗原表位。

关键词：噬菌体展示技术模拟表位氯胺酮

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