检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2006年第5期22卷 701-706页

作者：华荣虹吴东来童光志王云峰田志军周艳君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

SARS-CoVS蛋白特异的单克隆抗体2C5具有病毒中和作用。以单克隆抗体2C5为筛选靶分子,筛选噬菌体展示随机7肽库。经三轮淘洗后随机挑选20个噬菌体克隆进行ELISA分析和序列测定。在10个ELISAOD值大于0.2的阳性噬菌体克隆中,有8个噬菌体克... 详细信息

SARS-CoVS蛋白特异的单克隆抗体2C5具有病毒中和作用。以单克隆抗体2C5为筛选靶分子,筛选噬菌体展示随机7肽库。经三轮淘洗后随机挑选20个噬菌体克隆进行ELISA分析和序列测定。在10个ELISAOD值大于0.2的阳性噬菌体克隆中,有8个噬菌体克隆展示有共同的7肽序列TPEQQFT。展示有该序列的噬菌体克隆能竞争抑制SARS-CoVS蛋白抗原与单抗2C5的结合。结果表明TPEQQFT为单克隆抗体2C5的模拟表位。该结果可对进一步研究S蛋白结构与功能和设计SARS疫苗有一定的参考意义。

关键词： SARS冠状病毒(SARS-CoV) S蛋白单克隆抗体噬菌体随机肽库模拟表位

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噬菌体展示肽库筛选赭曲霉毒素A模拟表位的研究

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卫生研究 2005年第4期34卷 448-450页

作者：刘仁荣余宙何庆华王希许杨南昌大学食品科学教育部重点实验室南昌330047

目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定... 详细信息

目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序确定插入七肽的氨基酸序列。结果经过4轮淘选,共筛选到11株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合能被赭曲霉毒素A阻断,模拟表位的共有序列为IRPMVXX,X为任意氨基酸。以其中的P2号克隆建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～8000pgml,检测下限为150pgml。结论噬菌体展示技术可成功筛选到赭曲霉毒素A模拟表位,筛选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学分析方法。

关键词：噬菌体展示肽库赭曲霉毒素A 模拟表位单克隆抗体免疫分析

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模拟表位型EB病毒感染诊断抗原的制备

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中华实验和临床病毒学杂志 2018年第5期32卷 538-542页

作者：苏秋东郭敏卓邱丰贾志远范雪亭孟庆玲田瑞光毕胜利伊瑶杨俊梅中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 北京出入境检验检疫局技术中心 100026 郑州大学附属儿童医院 450053

目的利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒（epstein—Barr virus，EBV）感染的早期诊断，并初步评价其抗原性。方法将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3C2多肽序列用特定连接臂串联，密码子优化后全基因合成；将目... 详细信息

目的利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒（epstein—Barr virus，EBV）感染的早期诊断，并初步评价其抗原性。方法将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3C2多肽序列用特定连接臂串联，密码子优化后全基因合成；将目的片段插入带有Trx标签的表达质粒中，在大肠埃希菌中进行表达，并利用亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白；利用Western blot技术对目的蛋白抗原性进行鉴定，并建立EBV—IgM抗体检测捕获法ELISA技术，初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。结果所获取EBV模拟表位诊断抗原浓度为2．8mg／ml，纯度为99．01％；Western blot实验发现，以anti-Trx单克隆抗体或EBV—IgM阳性血清作为第一抗体，在NC膜约26×10^3处都可以发现特异条带（与预期一致）；对50份EBV急性感染阳性血清和50份阴性血清进行检测得出，阳性血清样本OD值1．352（95％CI：1．233～1．489）与阴性血清样本OD值0．135（95％CI：0．113～0．159）分布区组明显（P〈0．05），其中灵敏度为98．0％，特异性为96．0％，一致性检验kappa值为0．940，一致性优异。结论原核表达与亲和及离子交换层析纯化可以获取抗原性良好的EBV感染诊断抗原，偶联HRP后可以作为检测抗原应用于EBV-IgM捕获法ELISA血清学检测中。

关键词：模拟表位 EB病毒原核表达层析纯化

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS_5抗原模拟表位的筛选和鉴定

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中华肝脏病杂志 2002年第4期10卷 266-268页

作者：钟彦伟成军王刚田小军陈新华刘妍李莉张玲霞陈菊梅中国人民解放军第三○二医院基因治疗研究中心感染四科100039

目的筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5（HCV NS5）特异性噬菌体模拟表位,为抗HCV的疫苗研究探索新途径。方法以抗-HCV NS5的单克隆抗体作为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机七肽库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程,随机挑取30... 详细信息

目的筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5（HCV NS5）特异性噬菌体模拟表位,为抗HCV的疫苗研究探索新途径。方法以抗-HCV NS5的单克隆抗体作为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机七肽库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程,随机挑取30个克隆,经噬菌体酶联免疫吸附法（ELISA）鉴定并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验,最后对所选克隆进行DNA序列分析,以确定HCV NS5抗原的模拟表位。结果经噬菌体富集后,从随机筛选的30个克隆中得到12个阳性克隆,确定氨基酸序列QIRPTRQ为HCV NS5的模拟表位。结论用噬菌体七肽库成功筛选得到HCV NS5的模拟表位,为用HCV模拟表位探索HCV感染的防治研究创造了条件。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5 抗原模拟表位筛选鉴定 DNA序列分析

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利用噬菌体随机肽库筛选传染性法氏囊病病毒VP2模拟表位

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农业生物技术学报 2010年第3期18卷 573-579页

作者：王小娥杨春晓朱彩霞孙寅剑崔金生肖海君朱瑞良山东农业大学动物科技学院瑞普(天津)生物药业有限公司济宁市畜牧兽医局

用纯化的4株传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2单克隆抗体(1B5,5D1,2H11和I4-4-3)筛选噬菌体随机12肽库,对40个克隆(10个单克隆噬菌斑×4株单克隆抗体)进行ELISA验证,获得32个阳性克隆,选20个阳性克隆(5个单克隆噬菌斑×4株单克隆抗... 详细信息

用纯化的4株传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2单克隆抗体(1B5,5D1,2H11和I4-4-3)筛选噬菌体随机12肽库,对40个克隆(10个单克隆噬菌斑×4株单克隆抗体)进行ELISA验证,获得32个阳性克隆,选20个阳性克隆(5个单克隆噬菌斑×4株单克隆抗体)进行DNA序列分析,确定了4个优势12肽为不同传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗原表位。这4个12肽在一级结构上没有3个以上连续氨基酸与GenBank中传染性法氏囊病病毒VP2的氨基酸序列相同之处,与单抗的结合可被VP2蛋白有效地抑制,推测可能是构象依赖性表位。将4个模拟表位串联表达后获得目的蛋白,经SDS-PAGE分析,目的蛋白占菌体总蛋白的20%,分子量30kD。用多克隆抗体对目的蛋白进行免疫印迹分析,结果表明目的蛋白具有特异性和反应原性。试验结果提示:筛选的是传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2单抗的模拟表位。

关键词：模拟表位噬菌体随机12肽库噬菌体展示技术

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丙型肝炎病毒复合高变区1模拟表位蛋白的免疫原性分析

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中国病毒学 2006年第1期21卷 24-28页

作者：龚育平高军赵平秦照玲杨苗戚中田第二军医大学微生物学教研室全军医学微生物学重点实验室上海200433

将丙型肝炎病毒高变区1(HVR1)模拟表位融合基因插入原核表达载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,经亲和层析和凝胶过滤层析获得HCVHVR1模拟表位融合蛋白。用Westernblot和ELISA检测融合蛋白与HCV抗体阳性血清的结合情况。皮... 详细信息

将丙型肝炎病毒高变区1(HVR1)模拟表位融合基因插入原核表达载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,经亲和层析和凝胶过滤层析获得HCVHVR1模拟表位融合蛋白。用Westernblot和ELISA检测融合蛋白与HCV抗体阳性血清的结合情况。皮下注射免疫BALB/c小鼠,用ELISA检测小鼠血清中的抗HCV抗体水平及其与天然HCV高变区1合成肽的交叉反应。结果表明融合蛋白能与HCV抗体阳性血清特异结合,融合蛋白与HCV抗体阳性血清的结合频率为71.6%(25/35)。融合蛋白免疫小鼠后能有效诱导免疫应答,其诱生的特异性抗体最高滴度达104(免疫后第8周),且该抗体能同2条天然HCVHVR1合成肽发生交叉反应。本研究提示,HCV复合HVR1模拟表位融合蛋白在丙型肝炎疫苗的研发中可能具有潜在应用价值。

关键词：丙型肝炎病毒高变区1 模拟表位免疫原性

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丙型肝炎病毒E1蛋白的模拟表位研究

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中华肝脏病杂志 2001年第4期9卷 223-225页

作者：曹凤史宣玲杜勇侯利华季阳王海涛四川大学华西医院成都610041 中国医学科学院中国协和医科大学输血研究所军事医学科学院微生物流行病研究所

目的研究ＨＣＶＥ１蛋白的Ｂ－细胞表位。方法将携带ＨＣＶＥ１基因的重组质粒ｐＱＥ－３０－ＨＣＶｅ１１８在Ｅ．ｃｏｌｉ　Ｍ１５中进行大量诱导、表达；对表达的Ｅ１蛋白进行分离、纯化；再以纯化的蛋白捕获ＨＣＶ感染者血清中能... 详细信息

目的研究ＨＣＶＥ１蛋白的Ｂ－细胞表位。方法将携带ＨＣＶＥ１基因的重组质粒ｐＱＥ－３０－ＨＣＶｅ１１８在Ｅ．ｃｏｌｉ　Ｍ１５中进行大量诱导、表达；对表达的Ｅ１蛋白进行分离、纯化；再以纯化的蛋白捕获ＨＣＶ感染者血清中能与ＨＣＶＥ１蛋白特异反应的ＩｇＧ，以此ＩｇＧ作为筛选分子，对随机十二肽库进行淘洗，经ＥＬＩＳＡ筛选噬菌体阳性克隆并测序。结果ＨＣＶＥ１蛋白获得了高纯度的纯化，这种蛋白可特异地与部分丙型肝炎患者血清发生反应。在获得的１０个模拟表位中，６、２和２个递呈肽分别与ＨＣＶＥ１蛋白的３２０～３３６ａａ、２５１～２６３ａａ和２２５～２４８位ａａ具有最大同源性。结论在Ｅ１蛋白中存在多个Ｂ－细胞表位，３２０－３３６位极可能为ＨＣＶＥ１蛋白的优势表位。

关键词：丙型肝炎病毒 E1蛋白模拟表位

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应用噬菌体展示技术筛选兔出血症病毒抗原模拟表位

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畜牧兽医学报 2012年第8期43卷 1281-1286页

作者：杨廷亚王芳姜平胡波范志宇魏后军薛家宾江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095

以抗兔出血症病毒(RHDV)的单克隆抗体A3c作为靶物质,应用噬菌体展示技术筛选RHDV抗原表位。将纯化的单抗A3c包被固相载体,经3轮亲和筛选后,挑取25株噬菌体单克隆并扩增,用ELISA测定后,提取阳性克隆单链DNA并测序,用阳性噬菌体克隆免疫... 详细信息

以抗兔出血症病毒(RHDV)的单克隆抗体A3c作为靶物质,应用噬菌体展示技术筛选RHDV抗原表位。将纯化的单抗A3c包被固相载体,经3轮亲和筛选后,挑取25株噬菌体单克隆并扩增,用ELISA测定后,提取阳性克隆单链DNA并测序,用阳性噬菌体克隆免疫小鼠制备高免血清,检测筛选抗原表位的免疫原性。结果表明:3轮亲和筛选后,特异性噬菌体克隆得到了有效富集,25株噬菌体单克隆中有19株为阳性克隆;测序结果表明,获得了与抗原高度同源的序列GTDDMDPGTTAA,即抗原的模拟表位,其中,氨基酸基序DXXDP为表位中的核心氨基酸;制备的小鼠高免血清与抗原具有较好的反应性,阳性噬菌体克隆与兔RHDV高免血清也具有较好的反应性。因此,该表位具有良好的免疫原性和反应原性。该研究为RHDV抗原表位的研究和新型疫苗的探索积累了资料。

关键词：兔出血症病毒单克隆抗体噬菌体展示技术模拟表位

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猪O型口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗原模拟表位的筛选

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畜牧兽医学报 2006年第8期37卷 793-798页

作者：何玉龙伍晓雄赵娜袁芳艳聂芬龙良启华中农业大学动物医学学院

口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3ABC与FMDV复制有关,感染FMDV的动物产生的NSP 3ABC抗体可在体内存留较长时间,是鉴别诊断动物接种疫苗与自然感染口蹄疫的可靠指标。本文从猪FMDV-NSP3ABC阳性抗血清中分离和纯化IgG,以此为固相筛选分子... 详细信息

口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3ABC与FMDV复制有关,感染FMDV的动物产生的NSP 3ABC抗体可在体内存留较长时间,是鉴别诊断动物接种疫苗与自然感染口蹄疫的可靠指标。本文从猪FMDV-NSP3ABC阳性抗血清中分离和纯化IgG,以此为固相筛选分子,对噬菌体随机十二肽库进行4轮吸附-洗脱-扩增的富集筛选后,随机挑取20个噬菌斑进行扩增,用ELISA方法分别检测扩增后的噬菌体抗原性,其中有8个噬菌体克隆与纯化的IgG有较强的特异性结合能力;对得到的阳性克隆提取ssDNA进行测序,分析所递呈的氨基酸序列,其中的7个噬菌体展示肽的氨基酸片段具有较高的保守性;进一步分别以8个阳性噬菌体克隆为固相捕获分子,对22份疑似FMD病猪血清进行检测,结果显示,有5个噬菌体克隆检测结果与试剂盒检测有较高的符合率。本研究为FMDV-NSP 3ABC抗原表位结构进一步研究和建立猪自然感染FMDV快速鉴别诊断新方法奠定了基础。

关键词： FMDV NSP 3ABC 模拟表位噬菌体随机肽库

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HPV-58型E7蛋白抗原模拟表位的筛选及分析

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云南大学学报（自然科学版） 2014年第6期36卷 920-927页

作者：李燕博杨自腾马岚清华大学生命科学学院北京100084 清华大学深圳研究生院生命健康学部广东深圳518055 深圳大学生命科学学院广东深圳518060

利用该实验室成熟的噬菌体随机十二肽库筛选平台,对HPV-58型E7蛋白单克隆抗体株4C4a、6C7a进行3轮亲和筛选,得到2组、各8个阳性噬菌体克隆.阳性噬菌体氨基酸序列用以模拟单抗(靶蛋白)特异性识别的HPV-58型E7蛋白的抗原表位.将测得的阳... 详细信息

利用该实验室成熟的噬菌体随机十二肽库筛选平台,对HPV-58型E7蛋白单克隆抗体株4C4a、6C7a进行3轮亲和筛选,得到2组、各8个阳性噬菌体克隆.阳性噬菌体氨基酸序列用以模拟单抗(靶蛋白)特异性识别的HPV-58型E7蛋白的抗原表位.将测得的阳性噬菌体多肽序列及HPV-58型E7蛋白氨基酸序列进行生物信息学分析后,进行线性序列比对及构象性表位预测及分析.构象性表位的预测借力于Epi Search Server和Pepitope Server,对构象性表位匹配及簇的寻找提供有力支持,也为早期诊断及研制多肽疫苗提供参考.

关键词： HPV-58型E7蛋白噬菌体肽库模拟表位生物信息学构象性表位簇

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