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中国兽医学报 2002年第1期22卷 32-33页

作者：刘文博焦新安张扬王芳潘志明高崧张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点实验室江苏扬州225009

为了探究沙门氏菌鞭毛蛋白共同抗原模拟表位阳性克隆的免疫生物学特性 ,用从噬菌体线性肽库及限制性库中筛选出的阳性克隆 1和 6 2分别免疫 BAL B/c小鼠 ,其高免血清对单抗 de7的竞争 - EL ISA效价达 10 6 以上 ,而其他血清则无抑制作... 详细信息

为了探究沙门氏菌鞭毛蛋白共同抗原模拟表位阳性克隆的免疫生物学特性 ,用从噬菌体线性肽库及限制性库中筛选出的阳性克隆 1和 6 2分别免疫 BAL B/c小鼠 ,其高免血清对单抗 de7的竞争 - EL ISA效价达 10 6 以上 ,而其他血清则无抑制作用。在间接免疫荧光试验中 ,免疫血清均能与 11株不同血清型的沙门氏菌反应 ,而不与大肠杆菌反应。以上结果表明 ,筛选获得的沙门氏菌鞭毛蛋白共同抗原模拟表位 ,不仅很好地模拟了天然表位 ,而且具有很好的抗原性。

关键词：沙门氏菌模拟表位鞭毛蛋白共同抗原免疫生物学

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噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮模拟表位肽

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生物技术通报 2013年第1期29卷 144-150页

作者：徐富勇徐玲刘仁荣裘雪梅朱立鑫南昌大学生命科学与食品工程学院南昌330029 江西科技师范大学生命科学学院南昌330013

拟用pⅧ噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)模拟表位肽,并验证其反应原性。通过将含有ZEN模拟表位序列以及肠激酶酶切位点的寡聚核苷酸与经过EcoR I和BamH I双酶切的pC89S4噬菌粒连接,构建表达载体pC89-CZEN。pC89-CZEN... 详细信息

拟用pⅧ噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)模拟表位肽,并验证其反应原性。通过将含有ZEN模拟表位序列以及肠激酶酶切位点的寡聚核苷酸与经过EcoR I和BamH I双酶切的pC89S4噬菌粒连接,构建表达载体pC89-CZEN。pC89-CZEN转化感受态XL1-Blue得到工程菌pC89-ek-zen,然后用KM13超感染、IPTG诱导表达,纯化后得到展示有玉米赤霉烯酮模拟表位的噬菌体颗粒。对KM13超感染时菌体浓度OD600、IPTG诱导时菌体浓度OD600、IPTG加入量以及诱导表达温度和时间进行优化,以探索最佳表达条件;通过ELISA测定反应原性,对比肠激酶酶切前后模拟表位肽与ZEN抗体的结合效果。结果显示,成功构建了表达载体pC89-CZEN,最优表达条件为KM13超感染时菌体浓度OD600为0.4、IPTG诱导时菌体浓度OD600为0.6以及IPTG加入量为终浓度1.0 mmol/L、诱导表达温度为24℃、时间8 h,酶切后结合效果明显高于酶切前。

关键词：噬菌体展示系统玉米赤霉烯酮模拟表位肠激酶

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CD20分子模拟表位肽的筛选及其疫苗构建

CD20分子模拟表位肽的筛选及其疫苗构建

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作者：李萌第四军医大学

学位级别：博士

人淋巴细胞分化抗原CD20仅表达于正常以及95％以上的恶性B细胞表面，是细胞表面非糖基化疏水磷蛋白，分子量为33—37kD，起始表达于pre—B细胞阶段，到B细胞终末分化成浆细胞时消失，是B细胞的标志性分子。CD20抗原在恶性B细胞表面具有... 详细信息

人淋巴细胞分化抗原CD20仅表达于正常以及95％以上的恶性B细胞表面，是细胞表面非糖基化疏水磷蛋白，分子量为33—37kD，起始表达于pre—B细胞阶段，到B细胞终末分化成浆细胞时消失，是B细胞的标志性分子。CD20抗原在恶性B细胞表面具有稳定表达、不脱落、不分泌的特性。该分子的第三和第四跨膜区之间，由43个氨基酸残基组成的膜外区，构成了其主要的抗原表位，可以使抗体最大限度地接近细胞膜。因此，CD20分子是恶性B细胞肿瘤治疗最为理想的一个靶抗原。1997年，针对B细胞CD20抗原研制的单克隆抗体Rituximab成为被FDA第一个批准用于B细胞淋巴瘤的治疗，并在临床应用中取得了良好的治疗效果。但单抗治疗的费用高、剂量大、需反复注射以及免疫原性反应极大的限制了单抗的临床应用。因而，构建针对CD20分子的治疗性疫苗，刺激宿主免疫系统产生针对肿瘤的特异性体液免疫反应并对该肿瘤抗原形成长期的免疫记忆，用主动免疫的方式克服单抗应用的不足具有良好的发展前景。模拟表位疫苗是近年来随着噬菌体肽库技术发展起来的一类疫苗，它可以在构象上模拟天然抗原，诱导相应天然表位特异性的体液免疫反应。而且由于模拟表位分子小可以直接以化学合成的方式得到，与传统疫苗以及基因工程产品相比它造价低、工艺简单、质量控制容易，具有工艺稳定、

关键词：人淋巴细胞分化抗原CD20 单克隆抗体Rituximab 模拟表位治疗性疫苗恶性淋巴瘤

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副鸡禽杆菌免疫优势模拟表位的鉴定及免疫原性分析

副鸡禽杆菌免疫优势模拟表位的鉴定及免疫原性分析

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作者：王宏俊中国农业大学

学位级别：博士

鸡传染性鼻炎是由副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum, Apg)所致鸡的一种重要的细菌性疾病。副鸡禽杆菌有A、B、C三种血清型,其有效保护性抗原成分至今尚不明了。本文利用原核表达系统成功表达了副鸡禽杆菌三个血清型菌株的血凝素... 详细信息

鸡传染性鼻炎是由副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum, Apg)所致鸡的一种重要的细菌性疾病。副鸡禽杆菌有A、B、C三种血清型,其有效保护性抗原成分至今尚不明了。本文利用原核表达系统成功表达了副鸡禽杆菌三个血清型菌株的血凝素蛋白,并分析了重组血凝素蛋白的免疫原性;应用噬菌体肽库技术筛选和鉴定出副鸡禽杆菌的2个免疫优势模拟抗原表位,分析了模拟抗原表位的免疫原性,研究结果为进一步研制与开发鸡传染性鼻炎新型疫苗奠定了基础。根据副鸡禽杆菌A、B、C三种血清型代表性菌株Hp8、Dalian和Modesto的血凝素基因序列,分别设计特异性引物,采用PCR技术扩增出副鸡禽杆菌三种血清型菌株的血凝素基因,序列测定结果表明,三种血清型的血凝素基因全长分别为1 035bp、1 038bp和1 026bp。分别将PCR扩增产物克隆到pET-32a (+)载体,构建出原核表达重组质粒pET- A、pET- B和pET- C。表达产物经Western-blotting及血凝和血凝抑制试验鉴定,结果表明,重组血凝素可以与相应的副鸡禽杆菌阳性血清特异性结合,并且都具有凝集鸡红细胞的活性。用纯化的重组血凝素作为免疫原分别免疫鸡,其血凝抑制抗体滴度均达到1:10以上;用相应菌株攻毒后,部分免疫鸡获得了保护,大部分试验鸡出现鼻炎症状,三种重组血凝素的保护率分别为3/10,2/10和2/10。由此表明,重组血凝素蛋白具有良好的免疫原性,但不能诱导足够的免疫保护。结果提示,血凝素可能不是副鸡禽杆菌的惟一保护性抗原。利用Biosun和Hopp-wood分子生物学软件分析了副鸡禽杆菌Hp8株血凝素蛋白的B细胞表位,结果发现在血凝素蛋白的第86位氨基酸和第186位氨基酸的附近区域可能是2个表位区,以其前后15个氨基酸作为线性表位序列( A1-YDDFGRAKLRQDGET ,A2-NKVGRWEKDGSRVDY)。采用基因工程技术将其分别展示到大肠杆菌GI826的鞭毛上,经抗原抗体结合试验表明,构建的重组菌不具有与副鸡禽杆菌抗体结合活性,提示选定的2个血凝素蛋白的线性抗原肽缺乏免疫活性。利用噬菌体随机12肽库,以A型副鸡禽杆菌多克隆抗体和C型副鸡禽杆菌单克隆抗体纯化IgG筛选。结果表明,用多抗筛选获得的噬菌体克隆中,50%具有核心氨基酸序列A-DP(M)L,单抗筛选获得的噬菌体克隆中,80%以上带有共有氨基酸序列Y-P-Q(A)WW。含有上述共有序列的噬菌体克隆不仅可以与抗体特异结合,并与副鸡禽杆菌抗原竞争结合抗体。将编码YGLLAVDPLFKP和YSPHQWWLSGAV的DNA片段分别插入质粒pFliTrx,转化大肠杆菌GI826并在鞭毛上成功展示,构建的重组菌能与相应抗体特异结合。用2个重组菌免疫鸡产生的相应抗体分别能与A型副鸡禽杆菌0083株和C型副鸡禽杆菌Modesto株结合,攻毒试验结果表明,免疫鸡分别获得了4/8和3/8的免疫保护。结果提示,鉴定出的副鸡禽杆菌的2个免疫优势模拟表位可作为候选表位,具有研制与开发鸡传染性鼻炎新型疫苗的潜力。

关键词：副鸡禽杆菌血凝素原核表达模拟表位免疫原性

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心肌炎小鼠心脏结构和功能改变的超声评价及CVB<,3>抗原模拟表位的筛选

心肌炎小鼠心脏结构和功能改变的超声评价及CVB<,3>抗原模拟表位...

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作者：刘廷亮山东大学

学位级别：博士

病毒性心肌炎为最常见的感染性心肌炎,其病理特点为病毒感染后引起心肌局限性或弥漫性炎性病变和心肌纤维的变性或坏死,从而导致临床表现为不同程度的心功能障碍和全身症状的严重疾患.目前已知有20多种病毒在引起全身感染的同时,可侵犯... 详细信息

病毒性心肌炎为最常见的感染性心肌炎,其病理特点为病毒感染后引起心肌局限性或弥漫性炎性病变和心肌纤维的变性或坏死,从而导致临床表现为不同程度的心功能障碍和全身症状的严重疾患.目前已知有20多种病毒在引起全身感染的同时,可侵犯心脏引发心肌炎,其中以心肌为主要受累靶器官并以心血管临床表现为主的是柯萨奇B组病毒.CVB感染引起的心肌炎占人类VM的50%以上,预后大多良好,少数可出现心源性休克,甚至猝死,部分病例可转化为扩张性心肌病,严重危害人类特别是青少年的身心健康.柯萨奇B<,3>病毒(CVB<,3>)是引起小儿病毒性心肌炎的主要病原,临床上对于VM的及时诊断并早期治疗具有重大意义,病毒性心肌炎小鼠模型在研究VM的发病机制、临床表现、转归、预后及治疗等方面具有重要价值.对于小鼠模型心脏结构及功能改变的评价是研究的重要内容之一,高频超声心动图技术可以直观无创的观察小鼠的心功能的变化,目前已用于转基因鼠、高血压大鼠模型、初生乳鼠以及胎鼠等的研究,但在VM小鼠模型中应用超声心动图评价心功能等变化的鲜有报道,该研究中应用10MHz探头对VM小鼠行超声心动图检查,评价VM小鼠心脏结构及功能的变化.诊断CVB<,3>感染的经典方法包括组织或体液病毒分离,应用中和试验、补体结合试验从血清中检测特异病毒抗体,近年来还有应用RT-PCR检测病毒核酸以及应用荧光免疫或放射免疫检测病毒抗体,以上方法多具有阳性率低、重复性差、价格昂贵等不足.该研究中我们应用CVB<,3>病毒制备Balb/c小鼠心肌炎模型,设计了应用噬菌体随机肽库结合特异性抗体研究蛋白质B细胞抗原表位的技术路线.以小鼠抗CVB<,3>病毒抗体MAB948作为受体分子,淘筛噬菌体展示随机12肽库,得到了CVB<,3>病毒B组胞模拟表位,为进一步的基于抗原表位水平的特异性诊断试剂、疫苗的研制打下了基础.

关键词：病毒性心肌炎抗原表位模拟表位超声心动描记术噬菌体随机展示肽库噬菌体展示技术生物淘筛小儿病

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肺癌T7噬菌体文库中MUC1蛋白抗原模拟表位的筛选

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免疫学杂志 2016年第2期32卷 132-136页

作者：邱宇曹丽郝晓宁王建飞董旭祖金池钟理丁浩河北大学生命科学学院生物芯片实验室保定071002 91766 California Deparment of Basic Medical SciencesWestern University of Health SciencesUSA 河北大学附属医院胸外科保定071002

目的利用噬菌体表面展示技术,从肺癌T7噬菌体展示文库中筛选MUC1蛋白抗原的模拟表位。方法以MUC1单克隆抗体为靶分子,对肺癌T7噬菌体文库进行淘洗筛选,得到的阳性克隆进行测序并推导其氨基酸序列,对得到的阳性噬菌体克隆进行鉴定。结果... 详细信息

目的利用噬菌体表面展示技术,从肺癌T7噬菌体展示文库中筛选MUC1蛋白抗原的模拟表位。方法以MUC1单克隆抗体为靶分子,对肺癌T7噬菌体文库进行淘洗筛选,得到的阳性克隆进行测序并推导其氨基酸序列,对得到的阳性噬菌体克隆进行鉴定。结果经3轮淘选,得到20个阳性克隆。测序获得AAPDFRP、SAPDDRP 2种氨基酸序列,对MUC1单抗的抑制率均在50%以上,与肺癌血清结合特异性较高,此2种蛋白序列可模拟MUC1蛋白抗原表位。结论通过噬菌体展示技术成功筛选到MUC1蛋白的模拟表位序列XAPDXRP(X为任意氨基酸),对肺癌的早期诊断有一定的参考价值。

关键词：肺癌 MUC1 模拟表位噬菌体文库

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利用噬菌体随机十二肽库筛选生长抑素抗原模拟表位

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华中农业大学学报 2006年第6期25卷 591-594页

作者：袁芳艳何玉龙赵娜聂芬伍晓雄龙良启李奎罗晓松华中农业大学水产学院武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 中国农业科学院畜牧研究所北京100094 中国水产科学研究院长江水产研究所荆州434000

用生长抑素(somatostatin,SS)疫苗“激生1号”免疫日本大耳兔得到抗血清,经饱和硫酸铵粗提IgG,再经DEAE-sephadex-A50低压层析系统纯化后,以此IgG作为筛选配基,对随机十二肽库进行4轮淘洗。随机挑取22个噬菌斑进行双夹心ELISA,结果有6... 详细信息

用生长抑素(somatostatin,SS)疫苗“激生1号”免疫日本大耳兔得到抗血清,经饱和硫酸铵粗提IgG,再经DEAE-sephadex-A50低压层析系统纯化后,以此IgG作为筛选配基,对随机十二肽库进行4轮淘洗。随机挑取22个噬菌斑进行双夹心ELISA,结果有6个克隆与SS抗体有较强的特异性结合力,竞争抑制ELISA进一步证明6个克隆有较好的抑制作用。将6个阳性克隆提取ssDNA进行测序,测序结果中有5个克隆的外源肽序列完全一致,经与SS氨基酸序列比对,发现两者有共同序列FWK,说明5个克隆模拟了生长抑素的抗原表位。

关键词：生长抑素噬菌体随机肽库模拟表位

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A抗原模拟表位的筛选和鉴定

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免疫学杂志 2002年第5期18卷 347-349,352页

作者：钟彦伟成军陈新华王刚洪源王琳李莉张玲霞陈菊梅解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的　筛选丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)非结构蛋白NS4A(HCVNS4A)特异性噬菌体模拟表位 ,为抗HCV的疫苗研究探索新途径。方法　以抗 HCVNS4A的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工合成的噬菌体随机 1 2肽库进行 5轮“吸附洗脱... 详细信息

目的　筛选丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)非结构蛋白NS4A(HCVNS4A)特异性噬菌体模拟表位 ,为抗HCV的疫苗研究探索新途径。方法　以抗 HCVNS4A的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工合成的噬菌体随机 1 2肽库进行 5轮“吸附洗脱扩增”的筛选过程 ,随机挑取 45个克隆 ,经噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)鉴定并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验 ,最后对所选克隆进行DNA序列分析 ,以确定HCVNS4A抗原的模拟表位。结果　经噬菌体富集后 ,从随机筛选的 45个克隆中得到 1 3个阳性克隆 ,确定氨基酸序列XXRXXMXPXXXI为HCVNS4A的模拟表位。结论　用噬菌体 1 2肽库成功筛选得到HCVNS4A的模拟表位。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A 抗原模拟表位筛选鉴定

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MUC1黏蛋白模拟表位的筛选和鉴定

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免疫学杂志 2006年第2期22卷 210-212页

作者：崔志刚宋波张立新路浩军李春海第三军医大学西南医院泌尿外科重庆400038 军事医学科学院附属医院肿瘤分子生物学实验室北京100850

目的从噬菌体表面展示的随机12肽库中筛选出MUC1抗原的模拟表位。方法通过生物淘洗,获得阳性噬菌体克隆,通过基因测序,推导氨基酸序列,同MUC1核心序列比较,选出2个模拟表位,进行抗原表位预测和竞争抑制实验。结果筛选到的两个模拟表位与... 详细信息

目的从噬菌体表面展示的随机12肽库中筛选出MUC1抗原的模拟表位。方法通过生物淘洗,获得阳性噬菌体克隆,通过基因测序,推导氨基酸序列,同MUC1核心序列比较,选出2个模拟表位,进行抗原表位预测和竞争抑制实验。结果筛选到的两个模拟表位与MUC1单克隆抗体的亲和力均较强,能特异性抑制MUC1的抗原抗体结合,且包含有与某些MHCⅠ类分子较好结合的位点。结论从噬菌体12肽库中筛选出两个MUC1的模拟表位可以作为靶向MUC1肿瘤疫苗的候选肽。

关键词： MUC1 噬菌体表面展示模拟表位

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应用噬菌体表面展示技术筛选丙型肝炎病毒核心蛋白抗原模拟表位

引用

解放军医学杂志 2003年第1期28卷 34-36页

作者：钟彦伟成军王刚洪源王琳李莉张玲霞陈菊梅解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

为筛选丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白(core)特异性噬菌体 12肽模拟表位 ,应用噬菌体表面展示技术 ,以抗 HCV核心蛋白抗原的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工化学合成的噬菌体随机 12肽库进行 5轮“吸附洗脱扩增”的筛选过程 ,随机挑... 详细信息

为筛选丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白(core)特异性噬菌体 12肽模拟表位 ,应用噬菌体表面展示技术 ,以抗 HCV核心蛋白抗原的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工化学合成的噬菌体随机 12肽库进行 5轮“吸附洗脱扩增”的筛选过程 ,随机挑取 5 0个克隆 ,经噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)鉴定 ,并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验 ,最后对所选克隆进行DNA序列分析 ,以确定HCV核心抗原的模拟表位。经免疫学鉴定后 ,从随机筛选的 5 0个克隆中确定 10个阳性克隆 ,进行DNA序列测定 ,确定氨基酸序列XRQXXPXXXHXX为HCV核心的模拟表位。

关键词：噬菌体丙型肝炎病毒核心蛋白模拟表位抗原

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