检索结果-内蒙古大学图书馆

色谱 2005年第4期23卷 374-377页

作者：张嵬杨秉呼梁乾德鲁丹丹林汝仙王升启军事医学科学院放射医学研究所北京100850

为了进行硫代反义寡核苷酸药物癌泰得的药代动力学研究,建立了毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的方法.样品经强阴离子交换柱除去血浆中的蛋白和油脂,通过反相C18柱脱盐,再通过渗滤膜除去残留盐分后,以长度为24个碱基的寡核苷酸作为... 详细信息

为了进行硫代反义寡核苷酸药物癌泰得的药代动力学研究,建立了毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的方法.样品经强阴离子交换柱除去血浆中的蛋白和油脂,通过反相C18柱脱盐,再通过渗滤膜除去残留盐分后,以长度为24个碱基的寡核苷酸作为内标,采用毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得的含量.结果表明,毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的线性范围为12.5～400 mg/L(r=0.999 8),日内、日间的相对标准偏差分别为0.398% ～2.46% 、2.75% ～6.07% ,回收率为99.53% ～102.1% .毛细管凝胶电泳法用于血浆中反义硫代寡核苷酸的含量测定具有良好的准确性、稳定性和重现性.

关键词：毛细管凝胶电泳反义寡核苷酸癌泰得药代动力学

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毛细管凝胶电泳法测定硫代寡核苷酸药物癌泰得的含量

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色谱 2004年第3期22卷 202-205页

作者：杨秉呼孙偶君张敏丽王升启军事医学科学院放射医学研究所北京100850

癌泰得为20碱基的抑制端粒酶催化亚基hTERT的硫代反义寡核苷酸,体内、体外抗肿瘤活性评价显示其有较好的抗肿瘤活性。采用固相合成仪分别制备了癌泰得及与其碱基百分组成基本相同的硫代寡核苷酸内标,并使用制备型阴离子交换色谱和反相... 详细信息

癌泰得为20碱基的抑制端粒酶催化亚基hTERT的硫代反义寡核苷酸,体内、体外抗肿瘤活性评价显示其有较好的抗肿瘤活性。采用固相合成仪分别制备了癌泰得及与其碱基百分组成基本相同的硫代寡核苷酸内标,并使用制备型阴离子交换色谱和反相高效液相色谱进行纯化。采用毛细管凝胶电泳仪和单链DNA分离试剂盒测定了癌泰得的含量。所用毛细管规格为内径100μm,总长31cm,有效长度20cm;电动进样,进样电压-10kV,进样时间1s;分离电压-12 4kV;柱体温度40℃;样品储存温度为30℃;缓冲溶液为pH8 5的Tris 硼酸盐 7mol/L尿素缓冲液;紫外检测,波长为254nm。结果表明,在12 5～800mg/L时呈现良好的线性关系(r=0 99997);最低检测限为0 220mg/L;日内、日间的相对标准偏差(RSD)分别为0 449%～1 89%和1 01%～1 48%;低、中、高3种浓度的平均回收率为96 95%,RSD为6.88%。说明毛细管凝胶电泳内标法用于反义硫代寡核苷酸的含量测定结果准确、可靠。

关键词：毛细管凝胶电泳癌泰得反义硫代寡核苷酸药物

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毛细管凝胶电泳在临床分子生物学研究中的应用

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生理科学进展 1999年第2期30卷 159-162页

作者：廖杰赵玉兰解放军总医院医学实验测试中心

毛细管电泳作为迅速发展的分离技术，已得到广泛应用。本文简要介绍了毛细管凝胶电泳技术的发展，近年来在临床分子生物学领域的应用情况，其中包括病原体、遗传病和肿瘤的基因诊断、ＤＮＡ序列分析、反义治疗的监测等。由于毛细管凝胶... 详细信息

毛细管电泳作为迅速发展的分离技术，已得到广泛应用。本文简要介绍了毛细管凝胶电泳技术的发展，近年来在临床分子生物学领域的应用情况，其中包括病原体、遗传病和肿瘤的基因诊断、ＤＮＡ序列分析、反义治疗的监测等。由于毛细管凝胶电泳在核酸分析中显示了巨大的优越性，随着技术和仪器设备的不断发展和完善，在临床分析中必将得到更广泛的应用。

关键词：毛细管凝胶电泳临床分子生物学诊断治疗

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毛细管凝胶电泳分离和检测低聚核苷酸和脱氧核糖核酸的合成产物

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分析化学 1996年第3期24卷 330-332页

作者：任吉存黎众魁夏林庆姚开泰湖南医科大学肿瘤研究所!长沙410078

本文将毛细管凝胶电泳方法用于低聚核苷酸及DNA合成产物的分离检测，并探讨了低聚核苷酸的淌度与其碱基数的关系以及迁移时间和相对迁移时间的重现性。

关键词：毛细管凝胶电泳低聚核苷酸脱氨核糖核酸

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DNA序列分析新技术——阵列毛细管凝胶电泳

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化学通报 1996年第8期 13-18页

作者：宋立国熊少祥陈洪程介克武汉大学化学系

“人的基因组项目”对ＤＮＡ序列分析的速度提出了极高的要求，阵列毛细管凝胶电泳主要为解决这一问题而发展起来。本文详细介绍了阵列毛细管凝胶电泳与毛细管凝胶电泳和板凝胶电泳的不同，它对电泳系统、检测系统的新要求及目前的研究... 详细信息

“人的基因组项目”对ＤＮＡ序列分析的速度提出了极高的要求，阵列毛细管凝胶电泳主要为解决这一问题而发展起来。本文详细介绍了阵列毛细管凝胶电泳与毛细管凝胶电泳和板凝胶电泳的不同，它对电泳系统、检测系统的新要求及目前的研究及应用状况，并对其应用前景进行了展望。

关键词：毛细管凝胶电泳 DNA 序列分析人基因组项目

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基于毛细管凝胶电泳与DNA条形码技术鉴别可食用动物内脏掺假方法的研究

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食品工业科技 2023年第15期44卷 329-336页

作者：励炯吴琼江海扈明洁金朦娜闫金花杭州市食品药品检验研究院浙江杭州310017

建立并优化了使用基于DNA条形码技术对可食用内脏制品中包括猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅、兔7种常见动物源成分进行掺假鉴别的方法。用生理盐水清洗和真空冷冻干燥预处理后的内脏样品,经DNA提取扩增后,扩增产物经毛细管凝胶电泳分析系统进... 详细信息

建立并优化了使用基于DNA条形码技术对可食用内脏制品中包括猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅、兔7种常见动物源成分进行掺假鉴别的方法。用生理盐水清洗和真空冷冻干燥预处理后的内脏样品,经DNA提取扩增后,扩增产物经毛细管凝胶电泳分析系统进行确认,克隆测序结果提交本地数据库Viscera进行比对,同时筛选出适合7种动物源内脏DNA扩增的通用引物COI-A,优化DNA模板量和退火温度,验证考察了19个可食用内脏掺假模型的最低掺假比例。7种动物的5类内脏的PCR扩增效率均为100%,最佳的DNA模板量和退火温度为2μL和53℃,掺假成分的最低检出比例为5%。本方法灵敏度高,可靠性好,可作为常见可食用动物内脏掺假的有效检测方法。

关键词：毛细管凝胶电泳 DNA条形码内脏细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ 掺假

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毛细管凝胶电泳柱技术的新进展

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化学进展 1996年第4期8卷 301-307页

作者：陈怡黄爱今孙亦梁北京大学化学与分子工程学院

全面介绍了当前毛细管凝胶电泳（ＣＧＥ）柱制备的几种技术，初步归纳了影响凝胶柱稳定性的可能因素，并对毛细管凝胶电泳柱技术的几个发展方向进行了概述。

关键词：毛细管凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶稳定性凝胶柱

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慢病毒载体生产用质粒DNA构象检测毛细管凝胶电泳法的建立及验证

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药物分析杂志 2021年第7期41卷 1189-1202页

作者：张丽霞吴雪伶陈雪清徐玲丽赵鹏孟淑芳中国食品药品检定研究院北京100050 广州威溶特医药科技有限公司广州510000 上海爱博才思分析仪器贸易有限公司上海200335

目的:建立可定量检测质粒DNA超螺旋构象相对百分含量的毛细管凝胶电泳法(CGE),并开展方法学验证研究及初步应用探讨。方法:选用涂层毛细管,采用荧光检测器CGE法分离质粒DNA,首先通过限制性内切酶和缺刻酶处理法确认质粒DNA超螺旋(covale... 详细信息

目的:建立可定量检测质粒DNA超螺旋构象相对百分含量的毛细管凝胶电泳法(CGE),并开展方法学验证研究及初步应用探讨。方法:选用涂层毛细管,采用荧光检测器CGE法分离质粒DNA,首先通过限制性内切酶和缺刻酶处理法确认质粒DNA超螺旋(covalently closed circular,ccc)、线性(linear)及开环(open circular,oc)这3种构象在电泳图谱中的位置,然后通过对荧光染料、样品上样浓度等条件进行优化,建立质粒DNA构象的检测方法。对所建方法进行专属性、准确性、线性、精密度、检测下限和定量下限验证,并通过将质粒DNA置于不同保存温度、反复冻融及紫外照射后再进行质粒DNA构象的检测,初步分析该方法应用的可行性。结果:采用总长度为40 cm、有效长度为30.2 cm涂层毛细管,毛细管和样品上样温度分别为20℃和4℃,质粒浓度为4 ng·μL^(-1)以1378.95 Pa,4 s上样分离,CGE法可准确地定量质粒DNA 3种构象所占的比例,且分离度良好。通过对3种常用的质粒保存液基质的检测结果显示,这些基质不会干扰检测结果,专属性较好。质粒DNA 3种构象的线性范围均在0.25^8 ng·μL^(-1),构象峰面积与上样浓度具有良好的线性关系,相关系数分别是0.9977、0.9994、0.9927。将线性化质粒及开环质粒分别以3%^50%添加至原质粒中,可检出的线性及开环构象的峰面积与添加浓度呈现良好的线性关系,相关系数分别为0.9999和0.9972,线性构象的回收率在104%-120%,准确性良好;开环构象的回收率稍差,为68%-94%。将质粒DNA分别以高(4μg·mL^(-1))、中(2μg·mL^(-1))、低(0.5μg·mL^(-1))3个浓度验证实验的重复性,结果显示,试验内重复性良好,质粒DNA超螺旋构象迁移时间的RSD在0.22%-0.54%,相对百分含量的RSD在0.38%-2.1%;中间精密度也较好,迁移时间的RSD在0.52%-1.1%;相对百分含量的精密度在质量浓度为2 ng·μL^(-1)和4 ng·μL^(-1)时,RSD值分别为3.6%、0.25%。灵敏度的验证结果显示,定量下限及检测下限分别为0.5ng·μL^(-1)和0.25 ng·μL^(-1)。用该方法分别检测质粒DNA在不同保存条件、冻融及紫外照射后的构象变化,结果显示,质粒DNA在-80℃、-20℃保存1周,超螺旋构象无明显变化,但在室温保存1周后,质粒DNA开环构象含量从1.39%增加到4.16%;将质粒DNA反复冻融5次,未观察到明显的构象变化,但冻融7次后,质粒DNA开环构象相对百分含量从1.3%左右增加到1.93%;质粒DNA质量浓度在1 mg·mL^(-1)时,紫外照射15 min到3 h,质粒DNA的超螺旋构象相对百分含量从96.97%下降到54.38%,同时线性及开环构象明显增加。结论:本研究建立的毛细管凝胶电泳法可以很好地将质粒DNA的超螺旋、线性及oc 3种构象分离,各构象分离度良好,可准确定量不同构象相对百分含量,线性相关系数不低于0.99,灵敏度高,可重复性好,且可灵敏地反映出质粒DNA构象的变化,可用于质粒DNA构象纯度检测的质量控制。

关键词：毛细管凝胶电泳质粒DNA 慢病毒载体拓扑结构超螺旋构象线性构象开环构象定量检测

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基于毛细管凝胶电泳的寡核苷酸纯度分析方法

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计量学报 2023年第3期44卷 410-414页

作者：王乐乐张晓霞刘刚上海市计量测试技术研究院国家市场监管重点实验室(生物分析计量溯源) 上海201203 SCIEX 北京100015

在寡核苷酸的化学合成过程中,会产生与全长序列相差一个(n-1)和两个核苷酸(n-2)的杂质,因为分子质量及电荷性质与主成分差异小,难以准确定量检测。毛细管凝胶电泳具有样品用量少、速度快、灵敏度高、分离效果好、自动化程度高等优势,而... 详细信息

在寡核苷酸的化学合成过程中,会产生与全长序列相差一个(n-1)和两个核苷酸(n-2)的杂质,因为分子质量及电荷性质与主成分差异小,难以准确定量检测。毛细管凝胶电泳具有样品用量少、速度快、灵敏度高、分离效果好、自动化程度高等优势,而普遍应用于核酸的分离和分析。采用毛细管凝胶电泳对寡核苷酸纯度进行分析,能有效分离寡核苷酸全长序列与n-1的杂质,在0.03~1.00 mg/L浓度范围内线性良好(R^(2)=0.998 8),检出限约为0.01 mg/L(信噪比S/N>3),该方法的建立将为寡核苷酸的纯度分析与质量控制提供有力的技术支撑。

关键词：计量学毛细管凝胶电泳寡核苷酸纯度分析单核苷酸分辨率

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部分交联聚丙烯酰胺用于毛细管凝胶电泳蛋白质分离

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科学通报 2008年第14期53卷 1645-1649页

作者：周瑾徐建栋谢瑶屈锋邓玉林耿利娜北京理工大学生命科学与技术学院北京100081

以高分辨低黏度可替换的部分交联聚丙烯酰胺作为毛细管凝胶电泳的分离筛分介质,实现了溶菌酶、细胞色素C、核糖核酸酶A和胰蛋白酶4种碱性蛋白的基线分离.该聚合物材料具有的动态涂渍能力减少了毛细管壁对蛋白质的吸附,显著改善了分离重... 详细信息

以高分辨低黏度可替换的部分交联聚丙烯酰胺作为毛细管凝胶电泳的分离筛分介质,实现了溶菌酶、细胞色素C、核糖核酸酶A和胰蛋白酶4种碱性蛋白的基线分离.该聚合物材料具有的动态涂渍能力减少了毛细管壁对蛋白质的吸附,显著改善了分离重现性.混合使用两种部分交联聚合物,分离分辨率和塔板数获得进一步提高.初步实验研究结合分离机制的解析,这种具有多种优异性能的部分交联聚丙烯酰胺聚合物材料,介于交联聚合物凝胶和非交联线性凝胶之间的一个中间状态,有望在毛细管电泳以及微流控芯片电泳等生物分离领域发挥重要作用.

关键词：毛细管凝胶电泳部分交联聚丙烯酰胺蛋白质分离

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