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文献类型

2 篇 学位论文

馆藏范围

2 篇 电子文献
0 种 纸本馆藏

日期分布

学科分类号

2 篇 医学
- 2 篇 临床医学

主题

2 篇 氧诱导视网膜新生...
1 篇 苏木精-伊红染色
1 篇 慢病毒
1 篇 视网膜新生血管疾...
1 篇 视网膜新生血管
1 篇 基因治疗
1 篇 基质细胞衍生因子...
1 篇 曲安奈德
1 篇 血管内皮细胞生长...
1 篇 心脏荧光素灌注造...
1 篇 氧诱导
1 篇 视网膜铺片
1 篇 基因片段
1 篇 基因转移
1 篇 慢病毒载体
1 篇 sflt-1
1 篇 小鼠
1 篇 眼球连续切片

机构

1 篇 复旦大学
1 篇 上海交通大学

作者

1 篇 张敏
1 篇 陈向武

语言

2 篇 中文

检索条件"主题词=氧诱导视网膜新生血管模型"

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排序：

曲安奈德抑制氧诱导视网膜病变模型小鼠中视网膜新生血管的机制研究

曲安奈德抑制氧诱导视网膜病变模型小鼠中视网膜新生血管的机制研...

引用

作者：陈向武复旦大学

学位级别：硕士

第一部分氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy, OIR)模型的建立目的建立OIR模型小鼠。方法7日龄C57BL/6J新生小鼠6只作为单纯给氧组,置于氧浓度75%的容器内连续饲养5天至小鼠12日龄,再置于正常空气环境下饲养至17日龄；6只同... 详细信息

第一部分氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy, OIR)模型的建立目的建立OIR模型小鼠。方法7日龄C57BL/6J新生小鼠6只作为单纯给氧组,置于氧浓度75%的容器内连续饲养5天至小鼠12日龄,再置于正常空气环境下饲养至17日龄；6只同龄新生小鼠在正常空气环境饲养至17日龄作为单纯对照组。采用FFA眼底造影、视网膜铺片ADP染色及计数眼球切片中突破视网膜内界膜新生血管的内皮细胞核数等方法观察视网膜新生血管情况。结果单纯给氧组FFA检查可见眼底视网膜新生血管生成,视网膜铺片ADP酶染色见视网膜血管大片无灌注区,血管部分闭塞,分支减少,分布较紊乱；而单纯对照组小鼠视网膜血管分布均匀规则,无闭塞。单纯给氧组平均每个眼球切片中突破视网膜内界膜的内皮细胞核数为(24.8±7.1)个,较对照组显著增多(P<0.05)。结论该小鼠模型具有血管无灌注区、血管闭塞、新生血管形成等改变,重复性好、可定量研究,是研究视网膜新生血管比较合适的动物模型。第二部分曲安奈德(triamcinolone acetonide, TA)抑制视网膜新生血管的机制研究目的通过OIR模型小鼠,探讨TA抑制视网膜新生血管的可能机制。方法7日龄C57BL/6J新生小鼠36只,共分为4组。其中18只制作OIR动物模型,并且于12日龄时玻璃体腔内注射曲安奈德2μl,作为高氧TA组；对侧眼注射相同体积的平衡盐溶液(balanced salt solution, BSS),作为高氧BSS组；其余两组小鼠在正常环境下饲养,余处理同前,分别作为正常BSS组和正常TA组。用FFA造影及二磷酸腺苷(adenosine diphos-phate, ADP)酶法染色,了解视网膜血管情况；用视网膜切片HE染色,计数小鼠视网膜新生血管内皮细胞核数,加以比较；用免疫组织化学法检测各组小鼠视网膜切片VEGF、SDF-1、CD14含量。用Realtime PCR检测VEGF、SDF-1 mRNA的表达。结果与高氧BSS组相比,高氧TA组突破视网膜内界膜内皮细胞细胞核数目明显减少(P<0.05),血管分布更规则,FFA造影接近正常眼底。SDF-1、VEGF mRNA及SDF-1、VEGF和CD14蛋白表达在高氧TA组低于高氧BSS组(P<0.05),正常TA组和正常BSS组之间无明显差异(P>0.05)。VEGF、SDF-1与CD14的IOD/AOI值均呈显著线性相关(偏相关分析P<0.05)。结论TA能有效抑制小鼠视网膜新生血管形成,其机制可能是通过减少单核/巨噬细胞聚集进而降低SDF-1及VEGF的表达而实现。

关键词：曲安奈德血管内皮细胞生长因子基质细胞衍生因子-1 氧诱导视网膜新生血管模型

来源：评论

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慢病毒介导的sFlt-1基因片段转移对小鼠视网膜新生血管的阻遏作用

慢病毒介导的sFlt-1基因片段转移对小鼠视网膜新生血管的阻遏作用

引用

作者：张敏上海交通大学

学位级别：硕士

1.携带sFlt-1基因不同片段的慢病毒载体的构建及表达目的:建立携带可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)不同基因片段的慢病毒表达质粒,为进一步研究sFlt-1蛋白生物学功能奠定基础。方法:以人新鲜胎盘组织提取的cDNA为模板,分别选取sFl... 详细信息

1.携带sFlt-1基因不同片段的慢病毒载体的构建及表达目的:建立携带可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)不同基因片段的慢病毒表达质粒,为进一步研究sFlt-1蛋白生物学功能奠定基础。方法:以人新鲜胎盘组织提取的cDNA为模板,分别选取sFlt-1第2-3及第2-4免疫球蛋白样结构编码序列设计引物,进行RT-PCR扩增,制备sFlt-1基因片段sFlt-1(2-3)和sFlt-1(2-4)。扩增片断经限制性内切酶BamHI和SalI双酶切后,插入慢病毒载体pRRL-GFP中,构建慢病毒表达质粒pRRL/sFlt-1(2-3)及pRRL/sFlt-1(2-4),分别与慢病毒包装载体pMDLg/pRRE、包被载体PRSV/REV、pMD2.G共转染人胚肾细胞(HEK293T),获得重组慢病毒***-1(2-3)及***-1(2-4),并感染人视网膜色素上皮细胞,通过RT-PCR和Western blot检验***-1(2-3)及***-1(2-4)在人类细胞的表达。结果:经酶切鉴定及基因测序证实pRRL/sFlt-1(2-3)和pRRL/sFlt-1(2-4)的序列与Genebank完全相同,包装成病毒后能有效感染人视网膜色素上皮细胞。结论:本实验成功构建了分别携带sFlt-l基因第2-3和第2-4免疫球蛋白样区域编码序列的慢病毒载体,包装成病毒后能有效感染人类细胞,为今后视网膜新生血管疾病的基因治疗提供了新的可能途径。 2.小鼠视网膜新生血管模型的建立及鉴定目的:建立稳定可靠的视网膜新生血管动物模型,为今后探究视网膜新生血管疾病的治疗方法奠定模型基础。方法:将新生C57BL/6J小鼠随机分为正常组和模型组。将模型组小鼠于生后第7天置于75%氧浓度环境,生后第12天返回正常空气中;正常组小鼠则始终置于正常空气环境喂养。至小鼠生后第17天进行心脏荧光素灌注造影视网膜铺片和眼球连续切片苏木精-伊红(H-E)染色鉴定视网膜新生血管生成情况。结果:模型组小鼠心脏荧光素灌注造影视网膜铺片结果显示视网膜中央区域无灌注缺血,另外视网膜有明显的异常表现诸如血管迂曲扩张、荧光渗漏等。眼球连续切片H-E染色发现模型组小鼠视网膜有许多突出内界膜的血管内皮细胞核,计数为平均48.65±6.24个/片/眼,而正常组小鼠为平均0.38±0.21个/片/眼,两组比较P<0.01。结论:氧诱导的视网膜缺血模型可成功诱导小鼠产生视网膜新生血管,可作为今后探究视网膜新生血管疾病治疗方法的可靠动物模型。 3.可溶性Flt-1基因不同片段转移对小鼠视网膜新生血管的阻遏作用目的:探究sFlt-1基因不同片段转移对小鼠视网膜新生血管的阻遏作用。方法:建立氧诱导的小鼠视网膜新生血管模型,于小鼠生后第12天进行玻璃体内分别注射慢病毒介导的sFlt-1(2-3)和sFlt-1(2-4),于小鼠生后第17天通过心脏荧光素灌注造影视网膜铺片和眼球连续切片苏木精-伊红(H-E)染色观察并比较两者对小鼠视网膜新生血管的阻遏作用,并通过Western blot和免疫组织化学的方法检测两者对视网膜血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体-2(KDR/Flk-1)表达的影响。结果:通过荧光素灌注造影视网膜铺片观察到***-1(2-3)和***-1(2-4)转移后小鼠视网膜新生血管均显著减少,眼球连续切片H-E染色发现***-1(2-3)转移较***-1(2-4)更能有效地减少突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数。通过Western blot和免疫组织化学的方法检测到视网膜VEGF表达无明显改变,而视网膜KDR/Flk-1的表达下降较显著,并且***-1(2-3)的作用较***-1(2-4)更明显。结论:慢病毒介导的sFlt-1基因片段转移能够明显阻碍小鼠视网膜VEGF与其功能受体的结合,从而抑制视网膜新生血管的形成。

关键词： sFlt-1 基因片段慢病毒载体视网膜新生血管疾病基因治疗视网膜新生血管氧诱导小鼠心脏荧光素灌注造影视网膜铺片眼球连续切片苏木精-伊红染色视网膜新生血管疾病 sFlt-1 慢病毒基因转移氧诱导视网膜新生血管模型小鼠

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