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由水稻瘤矮病毒（Rice gall dwarf virus,RGDV）引致的水稻瘤矮病是我国局部地区发生的重要病害，在我国尚没有开展该病毒的分子生物学研究。本研究在调查华南地区不同稻区病害发生的基础上，重点进行病毒分离物株系变异鉴定，并对一个... 详细信息

标准号: gkls108121

由水稻瘤矮病毒（Rice gall dwarf virus,RGDV）引致的水稻瘤矮病是我国局部地区发生的重要病害，在我国尚没有开展该病毒的分子生物学研究。本研究在调查华南地区不同稻区病害发生的基础上，重点进行病毒分离物株系变异鉴定，并对一个代表分离物的全基因组进行核苷酸序列测定。选取5 个国内代表性分离物基因组片段S8～S11 进行核苷酸序列测定，并与已报道的泰国分离物相应核苷酸序列相比较，其基因组序列在不同分离物间相似性达94%～99%，其氨基酸序列相似性达96%～100%。这些结果表明， RGDV 是一种相对保守的病毒，在不同分离物间存在较高的相似性。选取广东信宜分离物进行了全基因组核苷酸序列测定，其中S4、S6、S7 和S12 是首次进行核苷酸序列分析。并对S8～S11 四个基因组片段进行了原核表达，首次获得了其四个基因组片段的原核表达产物。同时，本研究对RGDV 的S10 和S11 进行了基因沉默抑制子研究，结果表明，S11 是一个基因沉默的抑制子，这是首次在该病毒中发现抑制子。抑制子的发现，对于深入了解病毒致病作用和致病机理奠定了重要基础。

关键词：水稻瘤矮病毒株系分子特征

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中国水稻瘤矮病毒基因组片段S3,S8-S11克隆及其序列分析

中国水稻瘤矮病毒基因组片段S3,S8-S11克隆及其序列分析

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第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会

作者：范国成吴祖建林奇英谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建农林大学植物病毒研究所福建农林大学植物病毒研究所福建农林大学植物病毒研究所

由水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)引起的水稻瘤矮病1980年首次在泰国发现,随后在马来西亚、中国的广东也有报道。近年来,广西和福建的云霄、诏安已有零星分布。据我们2002年的田间现场调查,该病在广东的茂名市普遍发生,发病... 详细信息

由水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)引起的水稻瘤矮病1980年首次在泰国发现,随后在马来西亚、中国的广东也有报道。近年来,广西和福建的云霄、诏安已有零星分布。据我们2002年的田间现场调查,该病在广东的茂名市普遍发生,发病率一般在1%～5%,重者30%以上,且有进一步蔓延的趋势。因此进一步从基因组水平上研究RGDV,可以为深入探讨各个基因的功能奠定基础,为病毒的防治提供理论依据。

关键词：水稻瘤矮病毒氨基酸组成 S3,S8-S11 分离物基因组片段序列分析

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电光叶蝉siRNA抗病毒途径介导水稻条纹花叶病毒与水稻瘤矮病毒在昆虫体内的协生关系

电光叶蝉siRNA抗病毒途径介导水稻条纹花叶病毒与水稻瘤矮病毒在...

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中国植物病理学会2019年学术年会

作者：刘烨赵萍贾东升魏太云卫静福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

由介体电光叶蝉(Recilia dorsalis)以持久增殖型方式传播的水稻条纹花叶病毒(Rice stripe mosaic virus,RSMV)和水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)目前在我国南方稻区有蔓延暴发的趋势。近期研究发现二者存在协生关系,RGDV的侵... 详细信息

由介体电光叶蝉(Recilia dorsalis)以持久增殖型方式传播的水稻条纹花叶病毒(Rice stripe mosaic virus,RSMV)和水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)目前在我国南方稻区有蔓延暴发的趋势。近期研究发现二者存在协生关系,RGDV的侵染促进了RSMV在介体电光叶蝉体中肠内的增殖。通过对叶蝉中肠小RNA测序发现,RSMV源的siRNA在与RGDV复合侵染的叶蝉中肠内的数量低于其单独侵染的数量,表明虫体抗RSMV的RNAi通路被抑制,进而促进RSMV的积累。同时发现RGDV源的siRNA在复合侵染叶蝉肠道内的数量高于在单独侵染的肠道内的数量,表明RGDV可能通过吸引虫体的RNAi反应进而减少该途径对RSMV的防御,从而促进RSMV的增殖。通过干扰RNAi通路关键基因dicer2的表达,发现RSMV和RGDV在叶蝉肠道内的积累均增加,表明RGDV可能通过调控昆虫RNAi免疫通路促进RSMV的增殖。因此本研究建立RGDV通过调控叶蝉RNAi通路介导其与RSMV协生关系的模型,为探索新的病毒病防控技术提供理论依据。

关键词：水稻条纹花叶病毒水稻瘤矮病毒协生关系 RNAi

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南方根结线虫Vap基因与水稻瘤矮病毒S11基因RNAi载体的构建

南方根结线虫Vap基因与水稻瘤矮病毒S11基因RNAi载体的构建

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中国植物病理学会2010年学术年会

作者：白亭亭阮小蕾吴超廖金铃李华平华南农业大学资源环境学院广州510642

植物寄生线虫是世界农作物的重要病原物之一,寄主广泛为害极大,每年全世界农作物因植物寄生线虫为害造成的损失高达1250亿美元;水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)是中国、日本、朝鲜以及东南亚国家水稻上的一个重要病原,引起水... 详细信息

植物寄生线虫是世界农作物的重要病原物之一,寄主广泛为害极大,每年全世界农作物因植物寄生线虫为害造成的损失高达1250亿美元;水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)是中国、日本、朝鲜以及东南亚国家水稻上的一个重要病原,引起水稻瘤矮病,可导致水稻严重减产,甚至绝收.将来源于南方根结线虫Vap基因536 bp的片段与来源于水稻瘤矮病毒S11基因887 bp的片段连接成1423bp的大片段,作为正向序列,PCR扩增正向序列1～1173 bp部分,得到反向序列,其中正向序列比反向序列长250 bp.分别将正向序列、反向序列插入到预先准备好的含有3个酶切位点的pMDlB-T Simple载体上，获得含有Vap-S11正反向序列全长为2.6 kb的RNAi片段，将此片段插入到植物表达载体pCAMBIA-2300-ubi载体上，构建成RNAi载体，以期通过农杆菌介导的方法将其转入水稻，获得表达产生dsRNA、进而产生siRNA的转基因水稻，当被线虫取食或被RGDV侵染后沉默它们的靶基因，从而使转基因植物实现对南方根结线虫和水稻瘤矮病毒的抗性。

关键词：水稻瘤矮病毒耐寒基因根结线虫 Vap基因核糖核酸干扰载体

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应用原位杂交技术研究水稻瘤矮病毒在寄主水稻及介体电光叶蝉中的定位

应用原位杂交技术研究水稻瘤矮病毒在寄主水稻及介体电光叶蝉中的...

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中国植物病理学会2021年学术年会

作者：万文强迟云化王伟英吕鑫伟魏太云福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

水稻瘤矮病毒(Rice galldwarf virus,RGDV)引起的水稻瘤矮病在我国南方稻区一直处于常态流行态势,对水稻生产造成严重的经济损失。分子生物学和血清学方法可用于定量检测和鉴定感病植株和介体昆虫中的RGDV。但是,还没有可靠的方法精确... 详细信息

水稻瘤矮病毒(Rice galldwarf virus,RGDV)引起的水稻瘤矮病在我国南方稻区一直处于常态流行态势,对水稻生产造成严重的经济损失。分子生物学和血清学方法可用于定量检测和鉴定感病植株和介体昆虫中的RGDV。但是,还没有可靠的方法精确定位病毒RNA在感病寄主组织中的分布。本研究针对该病毒编码的主要外壳蛋白的S8基因序列设计特异性引物,并合成地高辛标记的原位杂交检测探针,随后以水稻及电光叶蝉的组织制备石蜡切片并进行探针杂交和显色。经NBT-BCIP显色后,感染RGDV的水稻植株及电光叶蝉的组织石蜡切片杂交结果呈阳性,地高辛标记的RNA探针与组织内RGDV的RNA可特异性结合呈紫红色,病毒RNA在水稻韧皮部及电光叶蝉唾液腺腺泡、中肠上皮细胞、雄性生殖系统、雌性生殖系统中表现出明显的组织嗜性差异,而未感染RGDV的对照组未出现阳性信号。该技术的应用为研究植物病毒RNA在寄主水稻和介体电光叶蝉中的分布提供了一种新的思路。

关键词：水稻瘤矮病毒原位杂交电光叶蝉

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利用叶蝉细胞瞬时表达系统研究水稻瘤矮病毒在介体细胞内的增殖机制

利用叶蝉细胞瞬时表达系统研究水稻瘤矮病毒在介体细胞内的增殖机...

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中国植物病理学会2016年学术年会

作者：王海涛张晓峰谢云杰王娟陈红燕魏太云福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

很多动植物病毒以昆虫作为媒介进行传播,由此引发的病毒病害严重影响人畜健康和粮食生产安全。由于昆虫介体本身体积小,寿命短,各种器官组织非常精细复杂,而且很多病毒基因组结构复杂,目前尚不易得到侵染性克隆,不能利用反向遗传学的手... 详细信息

很多动植物病毒以昆虫作为媒介进行传播,由此引发的病毒病害严重影响人畜健康和粮食生产安全。由于昆虫介体本身体积小,寿命短,各种器官组织非常精细复杂,而且很多病毒基因组结构复杂,目前尚不易得到侵染性克隆,不能利用反向遗传学的手段进行研究。因此,昆虫细胞系结合相应的瞬时表达载体系统,是研究无侵染性克隆病毒在细胞内增殖必不可少的技术手段。目前,叶蝉细胞系广泛地应用于植物呼肠孤病毒的研究中,然而缺少叶蝉细胞特异的瞬时表达载体,导致无法更深入地探索水稻病毒在叶蝉细胞内的增殖机制。本研究通过定位和克隆黑尾叶蝉actin基因的promoter序列,首次开发建立了能在叶蝉细胞中高效瞬时表达的载体系统。通过优化转染条件,该系统目前可以转染飞虱、叶蝉以及sf9等昆虫细胞并表达多种外源蛋白。同时利用该系统验证水稻瘤矮病毒RGDV非结构蛋白Pns7、Pns9和Pns12的细胞定位以及它们与主要的结构蛋白P3、P5、P8之间的互作情况,进一步完善了RGDV病毒原质(Viroplasm)形成的分子机制以及其招募结构蛋白的机理。该系统扩宽了昆虫细胞系的平台优势,为研究水稻病毒和昆虫互作机制提供了有力的工具。

关键词：昆虫培养细胞瞬时表达载体水稻瘤矮病毒病毒原质

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水稻瘤矮病毒病的新寄主

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广东农业科学 1983年第5期 44-44页

作者：洪福昌

据《IRRN》杂志1982年7卷6期上报道,泰国水稻病理学家Methie Putta和DaraChettanchit,以及日本植物病毒学家ToshihiroOmura和Yohachiro Honda等人曾于1979年把一种近年来发生引起稻株矮化、稻叶暗绿、叶片叶鞘长瘤的水稻病毒病鉴定为水... 详细信息

据《IRRN》杂志1982年7卷6期上报道,泰国水稻病理学家Methie Putta和DaraChettanchit,以及日本植物病毒学家ToshihiroOmura和Yohachiro Honda等人曾于1979年把一种近年来发生引起稻株矮化、稻叶暗绿、叶片叶鞘长瘤的水稻病毒病鉴定为水稻瘤矮病毒病(rice gall dwarf virus),其后,进行了接毒试验,利用二点黑尾叶蝉2—3龄的带毒若虫,在健康的台湾本地种1号秧苗上饲养10—14天,然后再移放到盆栽的11种植物上

关键词：水稻瘤矮病毒野生稻看麦娘捧头草禾本科牧草

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水稻瘤矮病—广东湛江新发生的一种水稻病毒病

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植物病理学报 1983年第4期 1-6页

作者：范怀忠张曙光何显志谢双大刘朝祯周亮高朱东刘显荣华南农学院广东农科院植保所广东省农业厅、湛江地区农业局

广东新发生的水稻瘤矮病于1981～1982年在广东湛江地区的信宜、高州和化州县发生流行。室内用叶蝉接种2叶龄的稻苗,在10～11月广州温室温度约为土9～23℃下,潜育期为13～28天,主要症状为病苗矮缩,叶片浓绿色,叶背及叶鞘上长有若干个淡... 详细信息

广东新发生的水稻瘤矮病于1981～1982年在广东湛江地区的信宜、高州和化州县发生流行。室内用叶蝉接种2叶龄的稻苗,在10～11月广州温室温度约为土9～23℃下,潜育期为13～28天,主要症状为病苗矮缩,叶片浓绿色,叶背及叶鞘上长有若干个淡黄绿色近圆形小瘤(0.1～1.2毫米直径)。病毒粒子球状,直径约60毫微米。昆虫介体为电光叶蝉(Recilia dorsalis Motsch.)和黑尾叶蝉(Nephotettix cinticeps Uhler.)。褐稻虱(Nilaparvata lugens Stal.)和白背飞虱(Sagatella furcifera Horvath.)不能传病。二点黑尾叶蝉(*** Distant.)和大斑黑尾叶蝉(*** Motsch)还有待进一步研究决定。电光叶蝉的最短获毒饲育期少于24小时。潜育期在平均室温22～23℃下为13～24天。保毒虫能终生传毒。根据上述实验结果,初步认为本病与泰国和马来西亚报道的水稻瘤矮病相同。

关键词：飞虱叶龄小瘤叶鞘介体瘤矮病水稻病毒病电光叶蝉水稻害虫潜育期褐稻虱稻苗水稻瘤矮病毒黑尾叶蝉信宜广东湛江

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水稻矮缩病毒非结构蛋白Pns11的核仁定位及其与核仁蛋白Fibrillarin的互作

水稻矮缩病毒非结构蛋白Pns11的核仁定位及其与核仁蛋白Fibrillar...

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作者：吴建国福建农林大学

学位级别：博士

水稻矮缩病毒(Rice Dwarf Virus,RDV),属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)、植物呼肠孤病毒属(Phytoreovirus),是水稻普通矮缩病的病原,广泛分布于日本、朝鲜、菲律宾、尼泊尔等东南亚水稻种植区,并且在我国南方水稻产区普遍发生,并有不同程... 详细信息

水稻矮缩病毒(Rice Dwarf Virus,RDV),属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)、植物呼肠孤病毒属(Phytoreovirus),是水稻普通矮缩病的病原,广泛分布于日本、朝鲜、菲律宾、尼泊尔等东南亚水稻种植区,并且在我国南方水稻产区普遍发生,并有不同程度的流行,给我国水稻生产造成严重损失。利用Affymetrix水稻全基因组芯片检测RDV侵染抗病水稻品种宜香2292(YX229)后基因表达的差异,其结果显示:水稻被RDV侵染后22 d,其基因变化倍数大于1.5倍,p-value小于0.05的表达差异显著的基因有856个,其中上调的基因为838个,下调的为18个;其中,大量的核仁和核糖体相关基因被诱导。对具有明确的基因功能注释的581个差异表达基因,按其基因功能划分为14类,其中胁迫防御相关基因占13.77%,转录因子占9.98%,代谢相关基因占9.29%,信号转导相关基因占9.29%,蛋白质降解相关基因占8.43%,蛋白质生物合成相关基因占6.20%,转座及反转座子蛋白/RNA沉默路径中的相关基因占5.51%,细胞壁相关基因占5.16%,内源激素相关基因占2.41%,分泌路径相关基因占2.07%,运输相关基因占1.38%,细胞周期和细胞骨架相关基因分别占1.03%,而没有明确功能分类的基因居多,为24.44%。通过融合GFP表达实验,证实RDV编码的运动蛋白Pns6是一个膜定位蛋白,主要定位于细胞膜以及核膜和胞间连丝上;Pns10编码的RNA沉默抑制因子,其定位形式和Free eGFP相似,主要定位于细胞质;RDV Pns11是一个双定位信号分子,主要定位于细胞核和叶绿体。同时以烟草核仁基因Fibrillarin为Marker基因,根据RDV Pns11氨基酸序列结构特点,对Pns11的定位形式进行了进一步研究,结果表明:RDV Pns11是一个核仁定位信号分子(Nucleolus localization signals, NoLS),能够与Fibrillarin共定位,且RDV Pns11的核定位信号(Nuclear location signal, NLS)是Pns11定位细胞核和核仁所必需的。对RDV Pns11NLS的缺失突变体的定位研究揭示,Pns11 NLS中的碱性氨基酸对核仁定位是至关重要的,其中NLS中132-144位8个碱性氨基酸“-RK----------KKGGKK-”和Pns11 NLS的C-端的6个碱性氨基酸“-RKSKRK-”是Pns11的核仁定位信号(NoLS),即是RDV Pns11定位核仁所必需的。为了深入研究RDV Pns11与核仁或核仁相关基因之间的关系,以水稻和烟草核仁基因所编码的Fibrillarin蛋白作为RDV Pns11潜在的靶蛋白,通过酵母双杂交和双分子荧光互补试验揭示,RDV Pns11可能与Fibrillarin蛋白存在弱的相互作用;TRV病毒诱导Fibrillarin基因沉默试验表明:Fibrillarin基因沉默后烟草植株发育迟缓,顶端优势基本散失,植株矮化,新叶扭曲畸形和白化,这与RDV侵染水稻后所产生的病害症状存在一定的相似性,这暗示RDV侵染寄主后,可能通过改变核仁相关基因的表达或与其互作,从而诱发一系列病毒病害症状的产生。以Fibrillarin基因沉默后的烟草植株为材料,研究揭示Fibrillarin基因的沉默不会影响RDV Pns11的定位;然而,RDV Pns11的RNA沉默抑制活性可能依赖于核仁蛋白-Fibrillarin,推测Pns11可能与Fibrillarin或Fibrillarin基因下游的某些基因存在互作。水稻矮缩病毒和水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)同属植物呼肠孤病毒属成员,且RDV Pns11与RGDV Pns12在氨基酸序列结构上存在22%的相似性。利用农杆菌共浸润的方法发现RGDV Pns12蛋白是该病毒的第二个RNA沉默抑制因子。Pns12能够抑制正义链RNA诱发的局部沉默,但不能抑制由双链RNA诱发的局部沉默,在异源病毒表达载体PVX中,Pns12能够增强PVX对本氏烟草的致病性。其结果表明,Pns12蛋白为RNA沉默抑制因子,可能作用于RNA沉默路径中dsRNA形成的上游,这与RDV Pns11具有RNA沉默抑制功能的研究结果是一致的。此外对RGDV Pns12亚细胞定位结果也显示,RGDV Pns12和RDV Pns11的定位形式也是相似的,主要定位于烟草表皮细胞的细胞核和核仁中,推测该基因可能在细胞核或核仁中发挥功能。

关键词：水稻矮缩病毒水稻瘤矮病毒转录谱 Pns11 核仁定位信号 RNA沉默抑制因子

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水稻OsAGO家族成员特征及对RGDV和SRBSDV的响应

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植物保护学报 2024年第3期51卷 636-644页

作者：魏莹林冬煊刘鸿飞徐荣荣朱永生吴建国赵珊珊福建农林大学虫媒介病毒研究中心福建省植物病毒学重点实验室闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福州350002 福建省农业科学院水稻研究所福州350002

为初步探究OsAGO家族在水稻抗病毒通路中的功能,对水稻OsAGO蛋白的基因组结构、系统发育关系、氨基酸序列及水稻瘤矮病毒(rice gall dwarf virus,RGDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(southern rice black streaked dwarf virus,SRBSDV)侵染后... 详细信息

为初步探究OsAGO家族在水稻抗病毒通路中的功能,对水稻OsAGO蛋白的基因组结构、系统发育关系、氨基酸序列及水稻瘤矮病毒(rice gall dwarf virus,RGDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(southern rice black streaked dwarf virus,SRBSDV)侵染后的转录组数据进行分析,同时采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术对这2种病毒侵染后OsAGO基因的相对表达量变化进行验证。结果表明,19个水稻OsAGO蛋白的外显子数量、内含子数量及编码区长度存在较大差异,且这19个OsAGO蛋白均匀分布在3个分支中;OsAGO蛋白PAZ结构域中与小RNA结合相关的YF(酪氨酸-苯丙氨酸)基序在OsAGO2、OsAGO3和OsAGO5中变成了YY(酪氨酸-酪氨酸),OsAGO蛋白PIWI结构域中与OsAGO蛋白切割活性相关的DDX(X代表H或D,即天冬氨酸-天冬氨酸-组氨酸/天冬氨酸)基序在OsAGO13中替换为LDH(亮氨酸-天冬氨酸-组氨酸)基序,而在OsAGO17中不包含YF基序且DDX基序替换为HDR(组氨酸-天冬氨酸-精氨酸)基序。RGDV侵染后OsAGO5和OsAGO12基因的转录组分析结果与qPCR结果一致,其中OsAGO5上调表达,OsAGO12下调表达;SRBSDV侵染后OsAGO1a、OsAGO1b、OsAGO1c、OsAGO1d和OsAGO4b基因的转录组分析结果与qPCR结果一致,均上调表达。表明大多数OsAGO均能响应RGDV和SRBSDV的侵染。

关键词：水稻 RNA沉默 AGO蛋白水稻瘤矮病毒南方水稻黑条矮缩病毒

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