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微生物学报 2010年第6期50卷 717-723页

作者：孙蕾吴茂森陈华民何晨阳中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193

【目的】旨在阐明3个DSF/Rpfxoo信号系统成员RpfFxoo、RpfCxoo和RpfGxoo在水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***,Xoo)毒性表达中的功能。【方法】用标记置换法缺失突变rpfFxoo、rpfCxoo和rpfGxoo基因,测定突变体及其互补菌株的DSF(diffusible signal factor)信号分子产生、胞外多糖(EPS)产生及其对水稻的致病性。【结果】从野生型菌株PXO99A基因组中克隆了推测与DSF信号生成和传导有关的基因rpfFxoo、rpfCxoo和rpfGxoo,获得了相应的单基因或双基因缺失突变体。与PXO99A产生DSF相比,ΔrpfFxoo、ΔrpfF+Cxoo和ΔrpfF+Gxoo均不产生DSF,ΔrpfCxoo过量产生,ΔrpfGxoo产量降低;rpfFxoo、rpfCxoo和rpfGxoo可以分别互补Xoo和Xcc的相应基因突变体,恢复DSF产生表型。除ΔrpfFxoo的EPS产生无明显变化外,其余突变体的均显著减少。所有突变体对水稻的致病性均显著下降。【结论】RpfFxoo、RpfCxoo和RpfGxoo调控了Xoo的DSF信号生成、EPS产生和致病性。

关键词：水稻白叶枯病菌 DSF(diffusible signal factor) rpf基因毒性调控

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水稻白叶枯病菌核苷酸信号受体蛋白Clpxoo的分子鉴定及其功能

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微生物学报 2009年第1期49卷 32-37页

作者：管文静吴茂森何晨阳中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193

【目的】本文的目的为阐明水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae,简称Xoo)核苷酸信号途径及其作用机理。【方法】本研究对推导的信号受体蛋白Clpxoo进行了基因克隆、序列分析、缺失突变和互补及其相关表型的鉴定。【结果】克隆... 详细信息

【目的】本文的目的为阐明水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae,简称Xoo)核苷酸信号途径及其作用机理。【方法】本研究对推导的信号受体蛋白Clpxoo进行了基因克隆、序列分析、缺失突变和互补及其相关表型的鉴定。【结果】克隆的clpxoo基因序列与大肠杆菌crp和铜绿假单胞菌vfr的同源性较高,与其它几种病原黄单胞菌clp高度保守。Clpxoo序列N端具有环化核苷酸cNMP结合结构域(CAP-ED),C端具有保守的DNA结合结构域(HTH-CRP)。用双交换法构建了基因缺失突变体(△clpxoo)。与野生型菌株PXO99A相比,△clpxoo的运动性、胞外多糖产生能力和对H2O2的抗性均显著降低,基因互补可使之部分恢复;△clpxoo胞外酶产生和对烟草致敏性无显著改变。【结论】Clpxoo可能作为全局性的保守调控因子之一,调控了Xoo的鞭毛运动性、胞外多糖产生和对H2O2的抗性。

关键词： Clpxoo 鞭毛运动性毒性 H2O2抗性水稻白叶枯病菌

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水稻白叶枯病菌EAL结构域蛋白VieAxoo基因缺失突变和功能分析

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微生物学报 2011年第1期51卷 29-34页

作者：梁士敏杨凤环管文静吴茂森陈华民田芳许艳丽何晨阳东北林业大学生命科学学院哈尔滨150012 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193

【目的】旨在揭示水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***,简称Xoo)环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)信号蛋白VieAxoo的生物学功能。【方法】本研究通过标记置换法对vieAxoo基因(PXO_04753)进行了缺失突变研究,采用表型测定进行了功能鉴定。【结... 详细信息

【目的】旨在揭示水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***,简称Xoo)环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)信号蛋白VieAxoo的生物学功能。【方法】本研究通过标记置换法对vieAxoo基因(PXO_04753)进行了缺失突变研究,采用表型测定进行了功能鉴定。【结果】从野生型菌株PXO99A中克隆的vieAxoo基因序列与其它病原黄单胞菌的同源序列高度保守。VieAxoo具有参与c-di-GMP降解的磷酸二酯酶(PDE)EAL结构域和磷酸信号识别受体REC结构域。与PXO99A相比,△vieAxoo基因缺失突变体对水稻的致病性、胞外多糖(EPS)产生和运动性无明显改变;但对烟草的致敏性和生物膜形成显著降低;基因互补可以使之完全恢复。【结论】VieAxoo正向调控了Xoo对烟草的致敏性和生物膜形成能力。

关键词：水稻白叶枯病菌环鸟苷二磷酸 vieAxoo 缺失突变功能鉴定

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水稻白叶枯病菌和水稻细菌性条斑病菌的实时荧光PCR快速检测鉴定

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微生物学报 2003年第5期43卷 626-634页

作者：廖晓兰朱水芳赵文军罗宽漆艳香湖南农业大学植物保护学院长沙410128 国家质检总局动植物检疫实验所北京100029

成功建立了水稻白叶枯菌与水稻细菌性条斑病菌快速检测鉴定的实时荧光PCR方法。根据含铁细胞接受子基因设计两菌的通用引物PSRGF PSRGR(扩增一个 1 5 2bpDNA片段 )和特异性探针 (Baiprobe和Tiaoprobe) ,并对 1 3种细菌和 1种植原体进行... 详细信息

成功建立了水稻白叶枯菌与水稻细菌性条斑病菌快速检测鉴定的实时荧光PCR方法。根据含铁细胞接受子基因设计两菌的通用引物PSRGF PSRGR(扩增一个 1 5 2bpDNA片段 )和特异性探针 (Baiprobe和Tiaoprobe) ,并对 1 3种细菌和 1种植原体进行实时荧光PCR。结果表明 ,两个特异性探针能分别特异性检测到目标病原菌产生荧光信号而其它参考菌不产生荧光信号。检测的绝对灵敏度是 3 0 .6fg μL质粒DNA和 1 0 3CFU mL的菌悬浮液 ,相当于 1个细菌细胞的基因 ,比常规PCR电泳检测高约 1 0 0倍 ,相对灵敏度为 1 0 5CFU mL。整个检测过程只需 2h ,完全闭管 ,降低了污染的机会 ,无需PCR后处理。用这两个特异性探针分别对自然感染白叶枯菌和条斑菌的叶片DNA提取液和种子浸泡液进行实时荧光PCR ,结果均可特异性检测到目标菌的存在并完全可将两种病原细菌区分开来 ,且只需 0 3g叶片和 1

关键词：水稻白叶枯病菌水稻细菌性条斑病菌实时荧光PCR 检测

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水稻白叶枯病菌无毒新基因的克隆和序列分析

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复旦学报（自然科学版） 2005年第4期44卷 534-539页

作者：梁斌张鑫军杨晨郭滨戴陆园余腾琼沈大棱复旦大学生命科学学院遗传学研究所上海200433 云南省农科院农作物品种资源站昆明650205

从菲律宾水稻白叶枯病菌9a生理小种的代表菌株PXO339中克隆到一个新的无毒基因,全长2118bp,编码705个氨基酸,分子质量和等电点分别约为74.7ku和***网站BLAST表明,该基因属于avrBs3基因家族,命名为arp3.与所有avrBs3同源基因的Alignment... 详细信息

从菲律宾水稻白叶枯病菌9a生理小种的代表菌株PXO339中克隆到一个新的无毒基因,全长2118bp,编码705个氨基酸,分子质量和等电点分别约为74.7ku和***网站BLAST表明,该基因属于avrBs3基因家族,命名为arp3.与所有avrBs3同源基因的Alignment分析发现,arp3的5’端缺少了两个长度分别是144bp和45bp的片断,但在水稻白叶枯病菌中,arp3基因的5’端的特征很普遍.全长的arp3基因中间区域是一个特异的只有5.5次102bp的重复区,是已克隆的avrBs3基因家族中重复次数最少的一个.C-端有3个核定位信号NLSs和1个酸性转录激活域AAD.

关键词：水稻白叶枯病菌 arp3 无毒基因 AvrBs3相似蛋白

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水稻白叶枯病菌TonB-Dep-Rec蛋白家族成员Tdrxoo的功能鉴定

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微生物学报 2010年第2期50卷 155-161页

作者：许景升吴茂森何晨阳中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193

【目的】旨在揭示水稻白叶枯病菌(Xanthomonas ***,Xoo)致病性和运动性及其基因表达的调控途径。【方法】本研究通过基因克隆、序列分析和缺失突变方法,对与应答调节子GacAxoo互作的Tdrxoo的分子特征和功能进行了鉴定。【结果】利用序... 详细信息

【目的】旨在揭示水稻白叶枯病菌(Xanthomonas ***,Xoo)致病性和运动性及其基因表达的调控途径。【方法】本研究通过基因克隆、序列分析和缺失突变方法,对与应答调节子GacAxoo互作的Tdrxoo的分子特征和功能进行了鉴定。【结果】利用序列特异性引物进行基因扩增,成功地从野生型菌株PXO99A中克隆了tdrxoo基因。Tdrxoo与其它病原黄单胞菌的同源序列高度保守,具有TonB-Dependent-Receptor(TDR)结构域,推测其是位于细菌外膜、可能接收来自细菌体外环境信号的蛋白。用基因标记交换法,构建了△tdrxoo基因缺失突变体。与PXO99A相比,Δtdrxoo在人工培养条件下的生长受到影响,致病性完全丧失,胞外纤维素酶和木聚糖酶活性和运动能力显著减弱,基因互补可以使之恢复;Δtdrxoo嗜铁素产生无明显改变。【结论】Tdrxoo作为一种细胞外膜蛋白,可能参与调控了病菌的生长、致病性、胞外酶活性和运动性等表型。

关键词：水稻白叶枯病菌 Tdrxoo TonB—Dep-Rec蛋白致病性调控作用

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水稻白叶枯病菌鞭毛基体基因fliExoo缺失突变分析

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植物病理学报 2010年第1期40卷 33-39页

作者：傅本重吴茂森陈华民何晨阳中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193

为了阐明水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***,简称Xoo)鞭毛基体组分蛋白基因fliExoo的生物学功能,本研究用GmR抗性基因标记交换法成功构建了基因缺失突变体△fliExoo。与野生型菌株PXO99A相比,△fliExoo鞭毛缺失,菌体易沉降,在0.3%... 详细信息

为了阐明水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***,简称Xoo)鞭毛基体组分蛋白基因fliExoo的生物学功能,本研究用GmR抗性基因标记交换法成功构建了基因缺失突变体△fliExoo。与野生型菌株PXO99A相比,△fliExoo鞭毛缺失,菌体易沉降,在0.3%半固体培养基上运动能力明显降低;尽管生长速率和胞外纤维素酶活性无明显变化,但胞外多糖产生和生物膜形成能力明显下降;对水稻品种日本晴的致病性和对非寄主烟草的致敏性反应明显减弱。基因互补可以使上述突变表型恢复。因此,鞭毛基因fliExoo突变不仅影响了细菌鞭毛依赖的运动性,而且对病原菌毒性相关的表型也产生了影响。

关键词：水稻白叶枯病菌 fliExoo 缺失突变运动性毒性

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水稻白叶枯病菌hrpG调控基因的鉴定

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植物病理学报 2015年第2期45卷 130-138页

作者：王淼啸刘之洋董启超邹丽芳陈功友上海交通大学农业与生物学院上海200240

水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***,Xoo)引起的白叶枯病(bacterial leaf blight,BLB)是水稻上最严重的细菌病害之一。Xoo与寄主水稻的互作依赖由hrp基因编码的Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS),将效应蛋白(T3SS effectors,T3SEs)注射入水稻细胞,引起BLB症状的扩展。HrpG是hrp基因转录表达的主要调控因子。为了鉴定未知的hrpG调控子,本研究在以hrpG∷gusA为报道基因构建的转座子突变体库中,筛选获得4个候选的hrpG负调控子突变体G24-46、G48-22、G19-14和G57-41。GUS活性测定、荧光定量PCR以及烟草组织的GUS染色试验均显示,在这些突变体中hrpG的表达显著增加。Southern杂交结果显示,突变体中转座子均为单一位点的插入。插入位点分析结果显示,在G24-46、G48-22、G57-41和G19-14中转座子分别插入在minD、pilA、metB和wxoB基因中。毒性测定结果显示,这4个突变体在水稻上的毒性显著降低。这些hrpG调控子基因的鉴定为进一步解析稻黄单胞菌hrpG上游调控网络提供了新的科学线索。

关键词：水稻白叶枯病菌 hrpG基因 gusA基因基因调控 hrp基因

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水稻白叶枯病菌3-羟基脂酰ACP脱水酶基因XoofabZ的功能鉴定

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微生物学通报 2024年第11期51卷 4687-4698页

作者：鄢明峰李信申孙杨华菊玲黄水金江西省农业科学院植物保护研究所江西南昌330299

【背景】由水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***,Xoo)引起的白叶枯病是水稻生产中最严重的细菌性病害。脂肪酸合成是细菌最重要的基础代谢之一,对细胞生长、膜磷脂和生物活性物质合成尤为重要,但对于该菌脂肪酸合成相关基因的功能知... 详细信息

【背景】由水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***,Xoo)引起的白叶枯病是水稻生产中最严重的细菌性病害。脂肪酸合成是细菌最重要的基础代谢之一,对细胞生长、膜磷脂和生物活性物质合成尤为重要,但对于该菌脂肪酸合成相关基因的功能知之甚少。【目的】鉴定Xoo PXO99A基因组中PXO_01118(XoofabZ)基因是否编码3-羟基脂酰ACP脱水酶并参与脂肪酸的从头合成,为防治水稻白叶枯病害提供新思路。【方法】通过异体遗传互补和体外酶学活性检测分析Xoo FabZ的蛋白活性;进一步利用同源重组原理进行XoofabZ基因的遗传学分析。通过剪叶法检测替换突变株对寄主水稻的致病力。【结果】利用异体遗传互补和体外酶学活性检测手段相结合证明了Xoo FabZ能在脂肪酸合成的起始反应和脱水反应中发挥3-羟基脂酰ACP脱水酶活性。本研究无法直接获得XoofabZ基因敲除突变株,证明XoofabZ是必需基因。大肠埃希氏菌(Escherichia coli)EcfabZ基因替换突变株对寄主水稻的致病性显著降低。【结论】XoofabZ是水稻白叶枯病菌必需基因,编码3-羟基脂酰ACP脱水酶,参与Xoo脂肪酸从头合成反应和致病力的形成。

关键词：水稻白叶枯病菌 3-羟基脂酰ACP脱水酶脂肪酸合成

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水稻白叶枯病菌pxo_04104基因功能的初步分析

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基因组学与应用生物学 2017年第4期36卷 1588-1593页

作者：田程段江宁李建超倪哲罗军韩倩廖舟翔何勇强黄胜广西大学生命科学与技术学院南宁530004

水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***,Xoo)是一种重要的植物病原细菌,可以引起水稻白叶枯病,使水稻减产。本研究通过对Xoo K74 Tn5插入突变体库进行致病力检测、质粒拯救定位发现pxo_04104基因与Xoo致病相关,pxo_04104基因编码peripl... 详细信息

水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae ***,Xoo)是一种重要的植物病原细菌,可以引起水稻白叶枯病,使水稻减产。本研究通过对Xoo K74 Tn5插入突变体库进行致病力检测、质粒拯救定位发现pxo_04104基因与Xoo致病相关,pxo_04104基因编码periplasmic beta-glucosidase(周质β-葡萄糖苷酶)。该基因的缺失突变体及其互补菌株生理生化表型检测显示缺失突变体致病力、抗渗透压能力显著下降,其互补菌株致病力可恢复到野生型水平的84.2%,抗渗透压能力也可恢复。本研究为深入研究pxo_04104基因致病分子机理提供了线索。

关键词：水稻白叶枯病菌 Tn5插入突变体致病相关基因

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