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中国植物病理学会2007年学术年会

作者：周锋普盈盈刘惠君魏春红李毅北京大学生命科学学院蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室北大耶鲁植物分子生物学和农业生物技术联合中心北京大学生命科学学院蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室北大耶鲁植物分子生物学和农业生物技术联合中心北京大学生命科学学院蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室北大耶鲁植物分子生物学和农业生物技术联合中心北京大学生命科学学院蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室北大耶鲁植物分子生物学和农业生物技术联合中心北京大学生命科学学院蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室北大耶鲁植物分子生物学和农业生物技术联合中心

病毒如何进入宿主细胞是病毒成功侵染宿主的第一步,是病毒与宿主相互作用以及抗病毒药物研发的热点。关于有囊膜动物病毒进入细胞研究的很多,少数病毒如何进入细胞了解的比较清楚。但是关于无囊

关键词：水稻矮缩病毒植物病毒 rice dwarf virus RDV

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共生菌、卵黄原蛋白和水稻矮缩病毒三者互作介导RDV的经卵传播

共生菌、卵黄原蛋白和水稻矮缩病毒三者互作介导RDV的经卵传播

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中国植物病理学会2017年学术年会

作者：吴维毛倩卓贾东升黄玲芝李曼曼陈红燕魏太云福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)是水稻矮缩病的病原物,由介体昆虫黑尾叶蝉以持久增殖型方式进行传播,同时也通过经卵传播方式直接将病毒传至子代昆虫。同时叶蝉体内的初生共生菌Sulcia和Nasuia也可通过经卵方式进行垂直传播,现有... 详细信息

水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)是水稻矮缩病的病原物,由介体昆虫黑尾叶蝉以持久增殖型方式进行传播,同时也通过经卵传播方式直接将病毒传至子代昆虫。同时叶蝉体内的初生共生菌Sulcia和Nasuia也可通过经卵方式进行垂直传播,现有研究表明在叶蝉体内初生共生菌和RDV入卵均发生在卵黄沉积期,此时卵巢大量摄入卵黄原蛋白;且共生菌和RDV均经由一类位于卵巢管柄处特异化的滤泡细胞-上皮鞘细胞侵入卵母细胞,而滤泡细胞可摄取血腔中的卵黄原蛋白提供给卵母细胞。这可能暗示共生菌和卵黄原蛋白在RDV入卵过程中起着一定作用。现有研究已证明RDV可通过与叶蝉初生共生菌Sulcia的外膜蛋白互作粘附在共生菌表面,伴随Sulcia入卵侵入卵母细胞;但是黑尾叶蝉的另一个初生共生菌Nasuia和卵黄原蛋白在RDV经卵传播过程中的作用仍不清楚。笔者通过免疫荧光观察发现:在卵巢上皮鞘处和卵巢内Nasuia、卵黄原蛋白和RDV三者存在共定位,免疫电镜的结果也表明在上皮鞘和卵内共生菌Nasuia内部可以观察有RDV病毒粒子分布,且卵黄原蛋白胶体金颗粒会特异性的标记在Nasuia上。据此笔者初步判定Nasuia、卵黄原蛋白可能介导RDV的经卵传播。通过酵母双杂交和GSTPull down实验也表明RDV的主要外壳蛋白P8与Nasuia的孔蛋白以及卵黄原蛋白的第四个结构域存在互作。此外,黑尾叶蝉菌胞内会特异性的表达肽聚糖识别蛋白相关蛋白NCrp,干扰此基因表达会抑制Nasuia,而不会对Sulcia造成明显的影响。因此笔者通过RNAi抑制NCrp的表达,与对照注射GFP相比,叶蝉体内Nasuia量明显降低,而叶蝉体内的病毒量不受影响。但病毒的经卵传播效率受到明显的抑制,主要表现为病毒侵染卵巢比例降低,后代卵内病毒量和带毒率均明显降低。同时注射卵黄原蛋白抗体的抗体阻断实验表明:抑制卵巢对卵黄原蛋白的吸收,对Sulcia的入卵没有明显的影响,但会明显降低卵巢内Nasuia和RDV的含量,同时也会明显降低后代卵内Nasuia和RDV的侵染率以及卵内含量。根据笔者现有的结果笔者推断RDV还可以通过与Nasuia和卵黄原蛋白的互作,突破经卵传播屏障。

关键词：水稻矮缩病毒经卵传播 Nasuia 卵黄原蛋白

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叶蝉共生菌Sulcia介导水稻矮缩病毒经卵传播

叶蝉共生菌Sulcia介导水稻矮缩病毒经卵传播

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中国植物病理学会2016年学术年会

作者：贾东升毛倩卓陈勇刘宇艳王海涛吴维陈倩陈红燕魏太云福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒学重点实验室

水稻矮缩病毒（Rice dwarf virus,RDV）属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）,植物呼肠孤病毒属（Phytoreovirus）成员,主要由介体黑尾叶蝉以持久增殖型方式传播,并经卵传播。但RDV的经卵传播机制尚不清楚。本研究通过免疫荧光标记对RDV侵入... 详细信息

水稻矮缩病毒（Rice dwarf virus,RDV）属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）,植物呼肠孤病毒属（Phytoreovirus）成员,主要由介体黑尾叶蝉以持久增殖型方式传播,并经卵传播。但RDV的经卵传播机制尚不清楚。本研究通过免疫荧光标记对RDV侵入卵巢的过程进行了系统的分析,发现病毒首先侵染卵柄,随后扩散到卵柄上皮鞘,然后侵入卵母细胞,因此推测病毒是通过卵柄上皮鞘侵入卵母细胞。根据已有的文献报道叶蝉内共生菌Sulcia也经卵垂直传播,本研究对RDV和共生菌Sulcia在卵巢的侵染进行共标记,发现共生菌Sulcia未侵入卵柄上皮鞘时,RDV仅侵染卵柄部位,当Sulcia侵入卵柄上皮鞘时RDV也侵入卵柄上皮鞘,且RDV粒体分布在共生菌表面。同时通过电镜在卵柄上皮鞘和卵母细胞内均观察到RDV吸附或嵌入共生菌Sulcia表面。此外,通过RT-qPCR对带毒和无毒黑尾叶蝉体内Sulcia的含量进行比较,发现带毒叶蝉体内的共生菌含量比无毒黑尾叶蝉高,且带毒卵内的共生菌与RDV含量呈正相关。由此我们初步认为共生菌Sulcia侵入卵的过程中介导RDV侵入卵,并推测两者间存在互作而导致RDV吸附在共生菌表面。为此,本研究通过酵母双杂交和GST pull-down技术证明共生菌Sulcia外膜蛋白（OMP）的BSA结构域与RDV外壳蛋白P2的N端（1-688aa）存在特异性互作。当用提取的RDV粒体与卵巢组织在体外孵育,发现RDV可与卵巢卵柄上皮鞘部位的共生菌相结合,且原核表达的P2蛋白N端多肽也可与卵柄上皮鞘的共生菌在体外相结合,而通过注射法将Sulcia外膜蛋白OMP的多克隆抗体注入叶蝉腹部封闭共生菌,导致RDV无法侵入卵柄上皮鞘。该研究进一步表明RDV的P2N与共生菌外膜蛋白间存在直接的互作。综合以上结果,本研究首次明确叶蝉共生菌Sulcia通过外膜蛋白与RDV粒体表面P2蛋白间的直接互作介导RDV突破经卵传播屏障侵入叶蝉卵柄上皮鞘,并侵入卵母细胞。

关键词：水稻矮缩病毒黑尾叶蝉共生菌Sulcia 经卵传播

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传带水稻矮缩病毒的二点黑尾叶蝉

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福建农业科技 1982年第3期 24-50页

作者：谢联辉林奇英郭景荣福建农学院

水稻矮缩病(RDV)是我国南方稻区的主要病毒病。据报道其传毒昆虫,有黑尾叶蝉(Nephotettixcincticeps)、大斑黑尾叶蝉(***)和电光叶蝉(Inazuma dorsalis)三种。本省稻田中除黑尾叶蝉和电光叶蝉外,还有大量的二点黑尾叶蝉(***)。有的年份... 详细信息

水稻矮缩病(RDV)是我国南方稻区的主要病毒病。据报道其传毒昆虫,有黑尾叶蝉(Nephotettixcincticeps)、大斑黑尾叶蝉(***)和电光叶蝉(Inazuma dorsalis)三种。本省稻田中除黑尾叶蝉和电光叶蝉外,还有大量的二点黑尾叶蝉(***)。有的年份这种叶蝉的数量甚至超过黑尾叶蝉,而成为优势种。那么,田间的这种二点黑尾叶蝉能不能传播水稻矮缩病呢?国外学者(新海昭,1962)断言,说它不能传播这种病毒。我们在一九七三年的田间调查中,注意到这种叶蝉和水稻矮缩

关键词：二点黑尾叶蝉田间传毒毒力毒性水稻害虫电光叶蝉水稻矮缩病毒

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利用黑尾叶蝉培养细胞及介体的RNAi体系研究水稻矮缩病毒的复制机理

利用黑尾叶蝉培养细胞及介体的RNAi体系研究水稻矮缩病毒的复制机...

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：陈倩陈红燕谢联辉魏太云福建农林大学植物病毒研究所

呼肠孤病毒科病毒的复制和子代病毒粒体的装配在由病毒非结构蛋白构成的病毒原质(viroplasm)上进行。植物呼肠孤病毒属病毒(phytoreoviruses)的代表种水稻矮缩病毒(rice dwarf virus,RDV)的3个非结构蛋白Pns6、Pns11和Pns12是病毒侵染... 详细信息

呼肠孤病毒科病毒的复制和子代病毒粒体的装配在由病毒非结构蛋白构成的病毒原质(viroplasm)上进行。植物呼肠孤病毒属病毒(phytoreoviruses)的代表种水稻矮缩病毒(rice dwarf virus,RDV)的3个非结构蛋白Pns6、Pns11和Pns12是病毒侵染介体黑尾叶蝉培养细胞时形成viroplasm的基质成分,但该3个非结构蛋白的在病毒复制过程中的机理仍有待揭示。本研究将源于RDV Pns6、Pns11和Pns12基因的体外合成dsRNAs分别导入黑尾叶蝉培养细胞和虫体内,免疫荧光实验发现通过dsRNA干扰其中任何一个基因,都会导致RDV细胞侵染率和介体带毒率显著降低。RT-qPCR实验表明dsRNAs不仅降低了对应基因片段的转录水平,也降低了另外两个片段和病毒外壳蛋白P8基因的转录水平。Western blot也显示干扰其中一个蛋白,都可同时降低Pns6、Pns11和Pns12三个蛋白和病毒外壳蛋白P8的表达水平。RDV基因组检测表明该3个蛋白对应的RNA干扰显著降低了RNA合成水平,而另一个非结构蛋白Pns10的dsRNA对RNA合成没有明显影响。因此推断Pns6、Pns11和Pns12与病毒复制直接相关,皆为RDV的复制关键因子。本研究首次建立了适应黑尾叶蝉培养细胞和介体昆虫的高效RNA干扰技术体系,确定了RDV Pns6、Pns11和Pns12为病毒缺一不可的关键复制因子,为RDV viroplasm的功能和病毒的复制机理的研究奠定基础。

关键词：水稻矮缩病毒病毒原质复制关键因子 RNAi 黑尾叶蝉培养细胞

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利用黑尾叶蝉培养细胞及介体的RNAi体系研究水稻矮缩病毒的复制机理

利用黑尾叶蝉培养细胞及介体的RNAi体系研究水稻矮缩病毒的复制机...

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中国植物病理学会2014年学术年会

作者：陈倩陈红燕谢联辉魏太云福建农林大学植物病毒研究所福州 350002

呼肠孤病毒科病毒的复制和子代病毒粒体的装配在由病毒非结构蛋白构成的病毒原质(viroplasm)上进行.植物呼肠孤病毒属病毒(phytoreoviruses)的代表种水稻矮缩病毒(rice dwarf virus,RDV)的3个非结构蛋白Pns6、Pns1 1和Pns12是病毒侵染... 详细信息

呼肠孤病毒科病毒的复制和子代病毒粒体的装配在由病毒非结构蛋白构成的病毒原质(viroplasm)上进行.植物呼肠孤病毒属病毒(phytoreoviruses)的代表种水稻矮缩病毒(rice dwarf virus,RDV)的3个非结构蛋白Pns6、Pns1 1和Pns12是病毒侵染介体黑尾叶蝉培养细胞时形成viroplasm的基质成分,但该3个非结构蛋白的在病毒复制过程中的机理仍有待揭示.本研究将源于RDV Pns6、Pns11和Pns12基因的体外合成dsRNAs分别导入黑尾叶蝉培养细胞和虫体内,免疫荧光实验发现通过dsRNA干扰其中任何一个基因,都会导致RDV细胞侵染率和介体带毒率显著降低.RT-qPCR实验表明dsRNAs不仅降低了对应基因片段的转录水平,也降低了另外两个片段和病毒外壳蛋白P8基因的转录水平.Western blot也显示干扰其中一个蛋白,都可同时降低Pns6、Pns11和Pns12三个蛋白和病毒外壳蛋白P8的表达水平.RDV基因组检测表明该3个蛋白对应的RNA干扰显著降低了RNA合成水平,而另一个非结构蛋白Pns10的dsRNA对RNA合成没有明显影响.因此推断Pns6、Pns11和Pns12与病毒复制直接相关,皆为RDV的复制关键因子.本研究首次建立了适应黑尾叶蝉培养细胞和介体昆虫的高效RNA干扰技术体系,确定了RDV Pns6、Pns11和Pns12为病毒缺一不可的关键复制因子,为RDV viroplasm的功能和病毒的复制机理的研究奠定基础.

关键词：水稻矮缩病毒病毒原质复制关键因子 RNAi 黑尾叶蝉培养细胞

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水稻条纹病毒、水稻矮缩病毒、水稻黑条矮缩病毒的检测方法普通RT-PCR方法和实时荧光RT-PCR方法

水稻条纹病毒、水稻矮缩病毒、水稻黑条矮缩病毒的检测方法普通R...

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标准类型：行业标准

本标准规定了水稻条纹病毒、水稻矮缩病毒的普通RT-PCR 和实时荧光RT-PCR检测方法。本标准适用于水稻、玉米和媒介昆虫中的水稻矮缩病毒、水稻条纹病毒、水稻黑条矮缩病毒的检测。

标准号: SN/T 1666-2005

关键词：水稻条纹病毒水稻矮缩病毒水稻黑条矮缩病毒检测

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水稻矮缩病毒三抗夹心酶联免疫吸附检测试剂盒

水稻矮缩病毒三抗夹心酶联免疫吸附检测试剂盒

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作者：张仲凯李毅董家红李婷婷方琦丁铭陈永对张丽珍苏晓霞 650223 云南省昆明市五华区学云路9号

本发明公开了一种水稻矮缩病毒三抗夹心酶联检测试剂盒，试剂盒包含阳性对照、阴性对照、水稻矮缩病毒多克隆抗体、水稻矮缩病毒单克隆抗体、酶标抗体及其它材料和药品，所说的其它材料和药品包括被缓冲液、PBST、病毒抽提缓冲液、封闭... 详细信息

标准号: CN102128929A

本发明公开了一种水稻矮缩病毒三抗夹心酶联检测试剂盒，试剂盒包含阳性对照、阴性对照、水稻矮缩病毒多克隆抗体、水稻矮缩病毒单克隆抗体、酶标抗体及其它材料和药品，所说的其它材料和药品包括被缓冲液、PBST、病毒抽提缓冲液、封闭缓冲液、底物缓冲液、底物、5块酶标板及20个一次性滴管，水稻矮缩病毒多克隆抗体在分离提纯水稻矮缩病毒后，通过家兔免疫分离血清得到；所述的水稻矮缩病毒单克隆抗体在分离提纯水稻矮缩病毒后，通过小鼠免疫、细胞融合、克隆纯化得到；本发明制备的试剂盒检测灵敏度高、特异性强，可规模化生产用于水稻矮缩病的田间监测。

关键词：水稻矮缩病毒缓冲单克隆抗体多克隆抗体分离提纯底物酶标滴管规模化生产检测试剂盒试剂盒检测水稻矮缩病分离血清家兔免疫细胞融合阳性对照阴性对照灵敏度试剂盒抽提抗体克隆病毒田间封闭监测

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水稻矮缩病毒第六号基因片段

水稻矮缩病毒第六号基因片段

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作者：李毅魏春红吴刚刘慧君 100871 北京市海淀区颐和园路5号

本发明涉及水稻矮缩病毒rice dwarf virus(RDV)非结构蛋白基因S6生物学功能及其确定方法。水稻矮缩病毒第六号基因片段S6编码一个非结构蛋白Pns6，利用马铃薯X病毒Potato Virus X(PVX)细胞间运动缺陷株的侵染性克隆与RDV编码的非结构蛋... 详细信息

标准号: CN1209460C

本发明涉及水稻矮缩病毒rice dwarf virus(RDV)非结构蛋白基因S6生物学功能及其确定方法。水稻矮缩病毒第六号基因片段S6编码一个非结构蛋白Pns6，利用马铃薯X病毒Potato Virus X(PVX)细胞间运动缺陷株的侵染性克隆与RDV编码的非结构蛋白基因进行的互补试验表明RDV S6编码的非结构蛋白是RDV的细胞间运动蛋白。Pns6的细胞内定位研究表明S6蛋白定位于植物细胞壁胞间连丝处，具有运动蛋白的典型特征。S6基因生物学功能的确定，有助于更深一步的了解水稻矮缩病毒系统侵染植物的机制，从而获得更强的抗RDV植株，有广泛的农业利用价值。

关键词：水稻矮缩病毒结构蛋白基因生物学功能细胞间运动结构蛋白植物细胞壁蛋白定位典型特征定位研究基因片段农业利用系统侵染运动蛋白植株丝处马铃薯蛋白克隆病毒细胞基因试验

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一种水稻矮缩病毒的快速检测方法

一种水稻矮缩病毒的快速检测方法

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作者：张仲凯董家红尹跃艳丁铭李婷婷方琦彭潞波张丽珍苏晓霞 650223 云南省昆明市学云路9号

本发明提供了一种水稻矮缩病毒的快速检测方法，其步骤包括通过水稻矮缩病毒抗体特异捕获水稻矮缩病毒、高温变性获得病毒RNA作为模板、利用水稻矮缩病毒特异性引物进行一步法反转录聚合酶链式反应one step RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳检测... 详细信息

标准号: CN101824490B

本发明提供了一种水稻矮缩病毒的快速检测方法，其步骤包括通过水稻矮缩病毒抗体特异捕获水稻矮缩病毒、高温变性获得病毒RNA作为模板、利用水稻矮缩病毒特异性引物进行一步法反转录聚合酶链式反应one step RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳检测目的片段；该方法利用抗体的高效价及特异性，可特异快速的获得目的片段，为研究病毒的分子变异而进行的基因组序列扩增提供了快捷特异的方法，从而完善了免疫捕获RT-PCR的技术。

关键词：水稻矮缩病毒目的片段抗体聚合酶链式反应琼脂糖凝胶电泳快速检测方法基因组序列特异性引物分子变异免疫捕获研究病毒病毒RNA 反转录高效价一步法变性扩增捕获检测完善

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