检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：杨静李成云朱有勇梁美玲刘林 650000 云南省昆明市北郊黑龙潭云南农业大学

本发明提供了检测水稻稻瘟病菌基础抗性的基因型表达分子标记及应用，可用于水稻对稻瘟病菌基础抗性的鉴定。该分子标记的核苷酸序列为SEQ ID No.1，利用本发明所述引物对，以水稻基因组DNA为模板进行PCR扩增，可以得到与水稻对稻瘟病... 详细信息

标准号: CN104404152B

本发明提供了检测水稻稻瘟病菌基础抗性的基因型表达分子标记及应用，可用于水稻对稻瘟病菌基础抗性的鉴定。该分子标记的核苷酸序列为SEQ ID No.1，利用本发明所述引物对，以水稻基因组DNA为模板进行PCR扩增，可以得到与水稻对稻瘟病菌基础抗性基因紧密连锁的基因型分子标记。通过PCR扩增分析可以明确该标记的有无可以判断水稻对稻瘟病菌基础抗性的有无，能够用于水稻对稻瘟病菌基础抗性有无的检测。该基因型分子标记带型简单、分布较密等特点具有SSR不可比拟的优势，能快速精确检测亚种内品种间的多态性，具有广阔的应用前景。

关键词：稻瘟病菌抗性分子标记基因型水稻检测水稻基因组DNA 分子标记带型水稻稻瘟病菌核苷酸序紧密连锁抗性基因多态性可用亚种引物应用分析

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一种鉴定水稻稻瘟病菌的引物组及其筛选方法和应用

一种鉴定水稻稻瘟病菌的引物组及其筛选方法和应用

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作者：邢俊杰彭海邓华凤彭志荣石银丰 410125 湖南省长沙市芙蓉区马坡岭

本发明涉及一种鉴定水稻稻瘟病菌的引物组及其筛选方法和应用。所述引物组包括正向引物和反向引物，引物组中的多个引物的序列如序列表中SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:200所示。所述引物组的筛选方法，包括：1)将稻瘟病菌的基因组序作为查询... 详细信息

标准号: CN111662997A

本发明涉及一种鉴定水稻稻瘟病菌的引物组及其筛选方法和应用。所述引物组包括正向引物和反向引物，引物组中的多个引物的序列如序列表中SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:200所示。所述引物组的筛选方法，包括：1)将稻瘟病菌的基因组序作为查询序列，并与基因组序列数据库进行比对，将所有基因组序列比对整齐；2)沿着比对整齐的基因组序列做平移；每平移一次对窗口内多个稻瘟病菌的基因组片段进行两两比较，留下有区分度的基因片段作为候选标记位点；3)对每个候选标记位点在多个基因组间的保守区域进行引物设计；4)筛选出引物组。该引物组能够准确且低成本鉴定水稻稻瘟病菌。本发明还包括上述引物组的应用。

关键词：引物组基因组序列比对水稻稻瘟病菌平移标记位点稻瘟病菌筛选整齐基因组片段保守区域查询序列反向引物基因片段基因组序引物设计正向引物低成本基因组区分度种鉴定引物应用数据库

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检测水稻稻瘟病菌基础抗性的基因型表达分子标记及应用

检测水稻稻瘟病菌基础抗性的基因型表达分子标记及应用

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作者：李成云杨静梁美玲刘林朱有勇 650000 云南省昆明市北郊黑龙潭云南农业大学

标准号: CN104404152A

关键词：稻瘟病菌分子标记抗性基因型水稻水稻稻瘟病菌水稻基因组精确检测抗性基因模板进行多态性核苷酸检测带型亚种引物分析

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四种杀菌剂对水稻稻瘟病菌的毒力测定

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黑龙江科技信息 2016年第16期 268-268页

作者：柴恒金杜尔伯特蒙古族自治县红旗种畜场场部黑龙江杜蒙166200

我国是传统的农业大国,在我国农业整体发展的过程中,水稻发挥着十分重要的作用是我国十分重要的农业作物。在进行水稻种植的过程中,水稻稻瘟病会直接影响到水稻的整体生长情况以及最终的产量。我国在进行水稻稻瘟病的整体防治过程中主... 详细信息

我国是传统的农业大国,在我国农业整体发展的过程中,水稻发挥着十分重要的作用是我国十分重要的农业作物。在进行水稻种植的过程中,水稻稻瘟病会直接影响到水稻的整体生长情况以及最终的产量。我国在进行水稻稻瘟病的整体防治过程中主要采用的是杀菌剂。但是在对水稻稻瘟病菌进行防治的过程中,往往对杀菌剂的毒性没有很好的了解。这会影响到杀菌剂对于水稻稻瘟病菌的杀菌作用。因此应用杀虫剂对水稻稻瘟病,进行独立测定对于水稻稻瘟病菌的整体防治有着十分重要的作用。本文主要对4种杀菌剂进行毒力测定,为水稻稻瘟病菌的整体防治提供借鉴和帮助。

关键词：杀菌剂水稻稻瘟病菌毒力测定

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稻瘟病菌MGHSP90的生物信息学分析

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分子植物育种 2020年第9期18卷 2858-2864页

作者：叶文雨吕乐筱谢序泽廖海萍王哲许钰滢余文英鲁国东福建农林大学国家菌草工程技术研究中心福州350002 福建农林大学生命科学学院福州350002 福建农林大学植物保护学院福州350002

为了探讨稻瘟病菌热激蛋白MGHSP90的结构特征和性质差异,本研究对MGHSP90热激蛋白进行了生物信息学分析,结果表明,MGHSP90为热激蛋白,属于亲水蛋白、无信号肽、不具有跨膜结构、N-末端具有ATP酶保守结构域。亚细胞定位分析结果表明,该... 详细信息

为了探讨稻瘟病菌热激蛋白MGHSP90的结构特征和性质差异,本研究对MGHSP90热激蛋白进行了生物信息学分析,结果表明,MGHSP90为热激蛋白,属于亲水蛋白、无信号肽、不具有跨膜结构、N-末端具有ATP酶保守结构域。亚细胞定位分析结果表明,该蛋白定位于线粒体。磷酸化位点预测分析结果显示,MGHSP90热激蛋白预测到43个丝氨酸位点,24个苏氨酸位点和10个酪氨酸位点磷酸化位点。本研究为进一步研究稻瘟病菌热激蛋白MGHSP90基因的功能提供了一些参考依据。

关键词：水稻稻瘟病菌热激蛋白生物信息学

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嘧菌酯及水杨肟酸联合作用对黑龙江稻瘟病菌的毒力评价

嘧菌酯及水杨肟酸联合作用对黑龙江稻瘟病菌的毒力评价

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作者：韩路黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

本研究采用菌丝生长速率法测定阿米西达（25%嘧菌酯）对黑龙江省91个供试菌株有效抑制中浓度EC50为2.18μg·mL-1~ 7.96μg·mL-1,其敏感基线值为4.64μg·mL-1,抗性指数在0.4696～2.4434之间,均为敏感菌株,未发现抗药菌株... 详细信息

本研究采用菌丝生长速率法测定阿米西达（25%嘧菌酯）对黑龙江省91个供试菌株有效抑制中浓度EC50为2.18μg·mL-1~ 7.96μg·mL-1,其敏感基线值为4.64μg·mL-1,抗性指数在0.4696～2.4434之间,均为敏感菌株,未发现抗药菌株。在北纬N44°35′N46°36′一带的黑龙江省主要稻作区的稻瘟病菌对阿米西达浓度在4.0μg·mL-16.0μg·mL-1时敏感性较高。在阿米西达浓度为4.64μg·mL-（1有效抑制中浓度）时,对60%的供试菌株产孢有较明显的抑制作用,抑制率50%以上;对病菌孢子萌发抑制率在35.33%43.73%之间。进行阿米西达与稻瘟灵、三环唑对比防病实验结果表明稻瘟病菌对稻瘟灵和阿米西达比较敏感,有效防治中浓度(EC50)为4.69μg·mL-1,略高于稻瘟灵(EC50为3.20μg·mL-1),但明显低于三环唑(EC50为6.38μg·mL-1)。采用菌丝生长速率法测定嘧菌酯原药对黑龙江省91个供试菌株的抑制中浓度(EC50)为0.116μg·ml-10.797μg·ml-1,敏感基线为0.4370μg·mL-1;病菌抗性指数在0.2664～1.8240之间;在嘧菌酯浓度为0.44μg·mL-1时,对供试菌株产孢抑制率均在50%以上,对病菌孢子萌发抑制率在44.77%59.15%之间。嘧菌酯原药对10个供试菌株抑制孢子萌发的平均EC50值为0.6046μg·mL-1,高于抑制菌丝生长的EC50值。采用丁青A结合法研究嘧菌酯对供试菌株产黑色素的抑制作用,实验结果表明嘧菌酯对供试菌株产黑色素有一定抑制作用,但作用不太明显,在较高浓度(1.2μg·mL-1)下最高抑制率才达到56.96%,即使在浓度为1.5μg·mL-1的情况下,最高抑制率才达到62.03%。研究结果表明,10个供试稻瘟病菌菌株在高浓度嘧菌酯的连续4代培养后,对嘧菌酯的敏感性没有明显变化,抗性指数在0.790～1.148之间,但菌株间敏感度略有不同。用紫外线诱变未获得突变株。在高浓度嘧菌酯培养基诱变中,仅获得4个株突变菌株, 4个突变菌株对嘧菌酯的EC50值0.327μg·mL-10.661μg·mL-1之间,均属敏感菌株。采用菌丝生长速率法测定在水杨肟酸(100μg·mL-1)对嘧菌酯的协同作效果,药剂对黑龙江省91个稻瘟病菌的平均EC50值为0.334μg·mL-1,比单用嘧菌酯抑菌EC50值下降23.56%。但不同菌株存在一定差异,在91个供试菌株中,对78.02%的菌株表现出增效作用,但只有31.87%菌株表现显著增效（即F值≥1.5）。水杨肟酸对嘧菌酯抑制病菌产孢增效作用不明显,在供试10个菌株中,菌株FZYH、HGDH-5和ZYWD对水杨肟酸的增效作用表现明显,F值分别为4.94、2.26和1.88。水杨肟酸对嘧菌酯抑制病菌黑色素合成有明显增效作用,除FJCY菌株外,嘧菌酯对其它9个菌株抑制率分别增加了6.95～30.18个百分点,5个菌株增效F值大于1.5,表现为显著增效作用。高浓度药剂的连续4代培养后,水杨肟酸的加入提高了病菌对嘧菌酯的敏感性,多数菌株的F值大于1.0。诱变获得的4株突变菌株,与亲本F值比较,水杨肟酸对BYYF-2和FJJQ-4突变菌株的增效作用有所减弱,对BQBE-1和SHAA-3突变菌株的增效作用有明显增加。

关键词：水稻稻瘟病菌阿米西达嘧菌酯水杨肟酸

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西南地区稻瘟病菌对戊唑醇的抗性监测及抗性分子机理研究

西南地区稻瘟病菌对戊唑醇的抗性监测及抗性分子机理研究

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作者：鲜菲西南大学

学位级别：硕士

稻瘟病是影响水稻产量和稻米品质的重要病害,目前对于稻瘟病的防治依然以化学防治为主,西南地区是我国稻瘟病的常发区,防治药剂主要有三环唑、稻瘟灵等,药剂的长期使用所带来的抗药性问题给稻瘟病的防治带来了重大隐患。戊唑醇是广谱性... 详细信息

稻瘟病是影响水稻产量和稻米品质的重要病害,目前对于稻瘟病的防治依然以化学防治为主,西南地区是我国稻瘟病的常发区,防治药剂主要有三环唑、稻瘟灵等,药剂的长期使用所带来的抗药性问题给稻瘟病的防治带来了重大隐患。戊唑醇是广谱性的内吸性DMIs类杀菌剂,对于多种真菌的防治都有良好的效果,在我国很多地区开始用于防治稻瘟病,但在西南地区还未广泛使用。本研究拟通过对西南地区稻瘟病菌对戊唑醇的敏感性基线的建立,田间抗性监测,抗性菌株的生物学特性以及抗性分子机理等方面的研究,为该药剂在本地区用于防治稻瘟病提供理论指导。1.西南地区稻瘟病菌对戊唑醇的敏感基线随机选取分离自西南地区的稻瘟病菌野生菌株150株,通过菌丝生长速率法测定了它们对戊唑醇的敏感性,根据EC50值的分布建立了稻瘟病菌对戊唑醇的敏感基线。结果表明,EC50值的区间为0.0475～0.5996μg/mL,平均值为0.2154±0.1497μg/mL,其中最不敏感菌株的EC50值是最敏感菌株的12.62倍。敏感性频率分布呈连续性单峰曲线,因此本研究以供试菌株的EC50平均值作为西南地区稻瘟病菌对戊唑醇的敏感性基线。同时发现,分离自不同地区的稻瘟病菌对戊唑醇的敏感性呈现显著性差异:分离自四川绵阳的菌株最敏感,其平均EC50值为0.0872±0.0461μg/mL;贵州六枝特区和四川宣汉的菌株最不敏感,平均EC50值分别为0.4570±0.0855μg/mL和0.4436±0.1289μg/mL;四川绵阳的菌株与四川宣汉的菌株对戊唑醇的敏感性相差5.09倍。2.西南地区稻瘟病菌对戊唑醇的田间抗性分布使用菌丝生长速率法测定了随机选取的30株稻瘟病菌对戊唑醇的MIC值,并以此作为抗性监测的区分剂量对所有采集分离的菌株进行抗性监测。MIC值分布在1.5～4.0μg/mL之间,最大的MIC值为4.0μg/mL。因此,本研究以4.0μg/mL作为稻瘟病菌对戊唑醇的敏感菌株和抗性菌株的区分剂量。对分离自西南地区的1014株稻瘟病菌的监测结果表明,本地区稻瘟病菌对于戊唑醇主要表现为敏感,仅在重庆涪陵和四川宣汉各有一株病菌表现出低抗。虽然西南地区已经有对戊唑醇产生抗药性的菌株出现,但是抗性较低且频率较低,四川和重庆的的抗性菌株发生频率分别为0.33%和0.21%,因此在制定了合理的与其他药剂混用的策略下可以将戊唑醇作为西南地区进行稻瘟病防治的药剂,但是要做好田间抗性的实时监测工作,以延长药剂的使用寿命。3.稻瘟病菌戊唑醇室内抗性菌株的生物学特性通过稻瘟病菌野生菌株进行室内戊唑醇药剂驯化得到两株中抗菌株PWS2-1和PMY30-1,EC50值分别为2.5736μg/mL和1.7689μg/mL,抗性倍数为25.46和31.26。将其在无药的平板上连续培养8代以后,仍然表现为中抗,因此说明其抗性可以稳定遗传。对它们及其亲本菌株的生物学特性进行研究,结果表明,抗性菌株的生长速率显著低于其亲本菌株,产孢量也低于其亲本菌株,PWS2-1与PMY30-1的离体适合度分别为0.76和0.04,因此抗性菌株的离体适合度低于其亲本菌株。同时在水稻叶片上进行了孢子悬浮液的接种测定其致病性,结果表明,敏感菌株PWS2和PMY30的病斑长度分别为6.5±1.00mm和6.9±2.32mm,而抗性菌株PWS2-1和PMY30-1的病斑长度分别为3.6±0.52mm和5.0±0.90mm,说明抗性菌株的致病性显著低于其亲本菌株。测定其在不同的温度及pH值条件下的生长速率,结果表明,抗性菌株对温度和pH值的适应性与其亲本菌株基本一致。而对于不同作用机制的杀菌剂进行敏感性测定的结果表明,戊唑醇抗性菌株对于DMIs类杀菌剂烯唑醇、苯醚甲环唑存在正交互抗性,对于稻瘟灵、三环唑、稻瘟酰胺、吡唑醚菌酯则没有表现出交互抗性。4.稻瘟病菌对戊唑醇抗性的分子机理用CTAB法提取病原菌的DNA,使用特异性引物Cyp51-ⅠF:5’-ATGGGC CTTCTACAGGACACC-3’/Cyp51-ⅠR:5’-TTAGCGCCTCTCC CAGTAAATT-3’;和Cyp51-ⅡF:5’-CTACGCAGTCTTCGGGCT-3’/Cyp51-ⅡR:5’-ATGGCTTTCTT CTTCCC-3’分别对室内抗性菌株PWS2-1和PMY30-1及其亲本菌株PWS2和PMY30的cyp51-Ⅰ和cyp51-Ⅱ基因进行克隆,测序,比对,探寻抗性菌株的突变位点。结果表明,抗性菌株各自的突变位点并不一致:菌株PWS2-1的cyp51-Ⅰ基因未发生突变,cyp51-Ⅱ基因具有3个突变位点,分别为R163C、F253I和V257A;菌株PMY30-1的cyp51-Ⅰ基因具有1个突变位点,为R23G,而cyp51-Ⅱ基因未发生突变。同时对于抗性菌株PWS2-1和PMY3

关键词：水稻稻瘟病菌戊唑醇敏感性基线抗性监测分子机制

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长江中下游稻区稻瘟病菌对稻瘟灵和吡唑醚菌酯的抗性监测

长江中下游稻区稻瘟病菌对稻瘟灵和吡唑醚菌酯的抗性监测

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作者：梁梦琦中国农业科学院

学位级别：硕士

稻瘟病是水稻生产上危害最严重的病害之一,化学防治因其高效经济的特点目前仍是防控稻瘟病的主要措施,化学农药长期单一使用会带来病原菌产生抗药性的风险。长江中下游地区是我国水稻的主要产区,同时也是农药用量最大、滥用最严重的地... 详细信息

稻瘟病是水稻生产上危害最严重的病害之一,化学防治因其高效经济的特点目前仍是防控稻瘟病的主要措施,化学农药长期单一使用会带来病原菌产生抗药性的风险。长江中下游地区是我国水稻的主要产区,同时也是农药用量最大、滥用最严重的地区。因此,有必要针对性的开展对该地区不同杀菌剂及施药适期对稻瘟病防控效果进行评估,并对该地区稻瘟病菌抗药性问题进行监测和研究。本研究通过室内生测与田间药效试验相结合的方法比较了不同药剂对稻瘟病菌的室内抑菌作用和田间防控效果。结果表明,在长江中下游地区三环唑仍是防治穗颈瘟的特效杀菌剂,嘧菌酯、肟菌酯·戊唑醇和嘧菌酯·苯醚甲环唑等广谱杀菌剂对叶瘟具更好的防控效果。从施药时期看,始穗期是穗颈瘟防治的关键时期。当发病严重时在齐穗期再施一次药是必要的。在选用合适的药剂的前提下,破口前施药对穗颈瘟也有一定的防控作用。于2016-2017年从长江中下游12个地区采集并分离到895株稻瘟病菌,通过敏感性检测建立了该地区稻瘟病菌对稻瘟灵和吡唑醚菌酯的敏感性基线。用菌丝生长抑制法检测116个分离自长江中下游地区的稻瘟病菌株对稻瘟灵的敏感性。其EC50值在0.928-8.495 mg/L,敏感性相差9.154倍。该地区稻瘟病菌对稻瘟灵的敏感性基线为3.254±1.561 mg/L。考虑到旁路氧化途径对吡唑醚菌酯敏感性检测结果的影响,通过对比含与不含SHAM的吡唑醚菌酯对稻瘟病菌株的敏感性、菌落生长速率和旁路氧化贡献值F,确定50 mg/L为后续试验SHAM的浓度。在此基础上,通过菌丝生长抑制法检测该地区106个稻瘟病菌株对吡唑醚菌酯的敏感性,其EC50值为0.003-0.027mg/L,敏感性相差9倍,该地区稻瘟病菌对吡唑醚菌酯的敏感性基线为0.012±0.005 mg/L。通过区分剂量监测了稻瘟病菌对稻瘟灵和吡唑醚菌酯的抗性。通过测量最小抑制浓度值确定长江中下游地区稻瘟病菌对稻瘟灵抗性监测的区分剂量值为60 mg/L,对吡唑醚菌酯的抗性区分剂量值是1.4 mg/L。并以该值监测稻瘟病菌对稻瘟灵和吡唑醚菌酯的抗性。发现5株田间稻瘟灵低抗菌株,该地区稻瘟灵的抗性频率为0.559%。未监测到吡唑醚菌酯田间抗性菌株。检测了田间抗性菌株对稻瘟灵和其他杀菌剂的交互抗药性,结果表明,稻瘟灵与异稻瘟净、戊唑醇、嘧菌酯和吡唑醚菌酯之间不存在交互抗药性。但与稻瘟灵作用机制相同的异稻瘟净之间产生交互抗药性的风险较大。抗性菌株遗传性检测结果表明,田间稻瘟灵抗性菌株的抗药性不能稳定遗传。因此,抗性菌株不易成为田间的优势菌株,减少了田间抗药性爆发的风险。生产上吡唑醚菌酯尚未大规模应用,田间未发现抗性菌株,本研究通过室内药剂诱导得到稻瘟病菌对吡唑醚菌酯的1个中抗菌株和4个低抗菌株,并初步研究了其生物学特性。通过对比室内抗药性突变体和亲本菌株在菌丝生长速率和产孢量,结果表明部分抗性突变体离体适合度与亲本菌株相比显著下降。交互抗药性结果显示吡唑醚菌酯与其作用机制不同的稻瘟灵、多菌灵和戊唑醇之间没有交互抗药性,但与同属于QoI类杀菌剂的嘧菌酯之间存在正交互抗药性,今后防治稻瘟病时应避免甲氧基丙烯酸酯类药剂的连用。抗性突变体在无药剂条件下传代培养过程中,抗性水平有不同程度的下降,最后均变为敏感菌株。

关键词：水稻稻瘟病菌稻瘟灵吡唑醚菌酯敏感性基线抗药性监测

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黑龙江省稻瘟病菌培养性状和致病性及遗传多样性的分析

黑龙江省稻瘟病菌培养性状和致病性及遗传多样性的分析

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作者：周燕黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

由稻瘟病菌［Magnaporthe grisea (Hebert) Barr．］引起的水稻稻瘟病是黑龙江省主栽作物水稻的主要病害之一，其造成的产量损失约占总产量的5%，并且导致水稻品质降低。防治该病害的最经济有效措施是利用抗病品种，往往因病菌致病能力... 详细信息

由稻瘟病菌［Magnaporthe grisea (Hebert) Barr．］引起的水稻稻瘟病是黑龙江省主栽作物水稻的主要病害之一，其造成的产量损失约占总产量的5%，并且导致水稻品质降低。防治该病害的最经济有效措施是利用抗病品种，往往因病菌致病能力的改变而导致抗病品种种植一段时间后会逐渐丧失抗性，因而了解和掌握黑龙江省各地区稻瘟病菌群体毒性结构及其变化规律是非常必要的。本研究利用2013年在黑龙江省20个县（市、区）采集并分离的稻瘟病菌菌株，对其进行培养特性、产黑色素能力、遗传多样性及致病性等方面的研究，明确了黑龙江省稻瘟病菌的复杂性及各地区间存在的差异，为水稻品种的合理布局及稻瘟病的防控提供理论依据。研究结果如下： 1．对88个稻瘟病菌菌株进行培养特性方面研究，发现在PDA培养基上，43.18%的菌株的气生菌丝生长较密，36.36%菌株的菌落背面颜色为深色，55.68%菌株的菌落背面颜色形状为环状。不同地区的稻瘟病菌培养性状不同，稻瘟病菌生长速率与产孢能力没有相关性。 2．通过对黑龙江省59个稻瘟病菌菌株菌落背面颜色分析表明，72.9%菌株的菌落颜色为深色，说明黑龙江省稻瘟病菌产生黑色素能力较强，利用丁青A结合定量测定法对59个稻瘟病菌菌株产生黑色素能力进行定量分析表明，各菌株间产生黑色素量存在较大差异，最强与最弱的稻瘟病菌菌株之间产生黑色素浓度值相差203.5倍，通过对病菌产生黑色素的量与菌落颜色进行相关性分析发现两者相关性不显著。从地理区域看，黑龙江省各个地区采集的稻瘟病菌菌株产生黑色素的能力是不一的，产生黑色素能力较强的稻瘟病菌菌株多分布于黑龙江省中部和东部地区，从同一地点采集的不同稻瘟病菌菌株产生的黑色素能力也存在显著差异。 3．用11对SSR引物对181个稻瘟病菌菌株进行检测，在0.72相似水平上划分出11个宗谱，有7个特异性宗谱只含有1～3个菌株，在聚类分析中发现，同一地区的菌株部分没有聚到同一宗谱里。 4．利用90个稻瘟病菌株对黑龙江省43个主栽水稻品种的致病性进行研究，发现黑龙江省稻瘟病菌的致病性比较复杂并有一定的地域性差异。不同地区菌株的致病力差异较大，同一地区分离出的稻瘟病菌菌株致病力也存在着明显的差异，不同地区的稻瘟病蔨菌株之间毒力存在明显的差异，通过致病力菌株树状图发现，大部分菌株致病力比较一致，与稻瘟病菌遗传宗谱进行比较，发现宗谱与致病型之间没有一一对应关系。

关键词：水稻稻瘟病菌培养特性 SSR分析致病性分化

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西南地区稻瘟病菌对稻瘟灵和吡唑醚菌酯的抗性监测及抗性机理

西南地区稻瘟病菌对稻瘟灵和吡唑醚菌酯的抗性监测及抗性机理

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作者：陈杰西南大学

学位级别：硕士

稻瘟病(Rice blast)是危害水稻最重要的病害之一,给我国西南地区每年的水稻生产造成巨大的损失。目前化学防治仍是防治水稻稻瘟病的主要方式,然而长期广泛的使用化学药剂会导致抗药性的产生。本研究在2013-2014年间通过对贵川渝18个区... 详细信息

稻瘟病(Rice blast)是危害水稻最重要的病害之一,给我国西南地区每年的水稻生产造成巨大的损失。目前化学防治仍是防治水稻稻瘟病的主要方式,然而长期广泛的使用化学药剂会导致抗药性的产生。本研究在2013-2014年间通过对贵川渝18个区县水稻稻瘟病采样,共分离获得了902株稻瘟病菌(Magnaporthe grisea(Hebert)Barr)。通过监测采样地区稻瘟病菌对稻瘟灵和吡唑醚菌酯的抗性,发现已经出现了稻瘟病菌对稻瘟灵(Isoprothiolane)的低抗性菌株。室内人工诱导筛选,成功的获得了稻瘟病菌对吡唑醚菌酯(Pyraclostrobin)的高抗性突变体,并对突变体的主要生物学特性、抗性机理以及交互抗性进行研究。1.稻瘟病菌对稻瘟灵的敏感性基线及抗药性监测：采用菌丝生长速率法测定2013年分离自川渝地区100个稻瘟病菌野生单孢菌株对稻瘟灵的敏感性,结果表明其EC5o值在0.8746-8.1430 μg/mL之间,最不敏感菌株的ECso是最敏感的9.3倍,不同敏感性的菌株分布频率呈连续的单峰曲线分布,平均EC5o值为3.0764±1.5909 μg/mL,最低抑制浓度 (Minimal inhibition concentration,MIC)≤45μg/mL。根据以上研究结果,确定以3.0764±1.5909μg/mL作为西南地区稻瘟病菌对稻瘟灵的敏感性基线；确定以50 μg/mL作为稻瘟病菌对稻瘟灵的抗药性监测区分剂量,并以此剂量监测各地稻瘟病菌对稻瘟灵的抗性,结果发现1株来自重庆市涪陵区龙潭镇寿坝村的稻瘟病菌对稻瘟灵有低抗性,经测定其抗性指数为3.13。2.稻瘟病菌稻瘟灵室内抗性突变体的遗传稳定性：通过室内稻瘟灵对稻瘟病菌药剂驯化,获得了5个中抗突变体和1个高抗突变体。测定这些突变体在无药剂选择压力培养8代后对药剂的敏感性,结果它们对稻瘟灵均变为敏感,表明它们的抗药性不能稳定遗传。由于未能获得稳定抗稻瘟灵的稻瘟病菌突变体,所以未能进一步研究分析稻瘟病菌对稻瘟灵的抗药性机理。3.稻瘟病菌对吡唑醚菌酯的敏感性基线及抗药性监测：采用菌丝生长速率法测定了2013年分离自川渝地区100个稻瘟病菌野生单孢菌株对毗唑醚菌酯的敏感性,结果表明其ECso值在0.00313-0.02448 μg/mL之间,最不敏感菌株的EC5o是最敏感的7.8倍,不同敏感性的菌株分布频率呈连续的单峰曲线分布,平均EC50值为0.00917±0.00385 μg/mL,MIC≤0.8μg/mL。根据以上研究结果,确定以0.00917±0.00385 μg/mL作为西南地区稻瘟病菌对吡唑醚菌酯的敏感性基线：确定以1.0μg/mL作为稻瘟病菌对吡唑醚菌酯的抗药性监测区分剂量,并以此剂量监测各地稻瘟病菌对吡唑醚菌酯的抗性,结果表明所测菌株均为敏感菌株,未发现田间抗性菌株。4.稻瘟病菌对吡唑醚菌酯抗性突变体及主要生物学特性：通过室内吡唑醚菌酯对稻瘟病菌药剂驯化,获得了3个中抗突变体和1个高抗突变体。将这些菌株在无药剂选择压力下连续培养8代后,抗性突变体PYC40-Mut对吡唑醚菌酯的抗性水平依然保持在高抗水平,表明其抗药性可以稳定地遗传；另3个突变体的抗药性水平下降为敏感,因此以PYC40-Mut作为后续研究材料。PYC40-Mut敏感性测定表明,其对吡唑醚菌酯的EC50值为2.7383 μg/mL,抗性倍数为370倍,为高抗药性突变体。PYC40-Mut生物学特性测试结果表明,其单孢后代对吡唑醚菌酯敏感性与亲本菌株无显著性差异；离体适合度、活体适合度和综合适合度与亲本菌株相比均显著下降。5.稻瘟菌对吡唑醚菌酯的抗性机理：用CTAB法提取PYC40-Mut和其亲本菌株PYC40的基因组DNA,以引物Pgcytb-F 1 (5'-AGTCCTAGTGTAATGGAAGC-3')和Pgcytb-R1 (5'-ATC TTCAACGTGTTTAGCACC-3')对Cyt b基因进行PCR扩增,分别获得了PYC40-Mut和PYC40菌株Cyt b基因的部分碱基序列,测序比对发现PYC40-Mut有一处碱基位点发生改变,其Cyt b基因428位碱基由鸟嘌呤(G)突变成为胞嘧啶(C),导致其相应的143位氨基酸由甘氨酸(G)突变为丙氨酸(A),这可能是PYC40-Mut菌株对吡唑醚菌酯产生抗性的机理。6.交互抗性：稻瘟病菌吡唑醚菌酯抗性菌株平板交互抗性测定结果表明,吡唑醚菌酯与甲氧基丙烯酸酯类(Strobilurins)杀菌剂醚菌酯(Kresoxim-methy)和嘧菌酯(Azoxystrobin)之间存在正交互抗性,而与甾醇类的苯醚甲环唑(Difenoconazole)、三唑类的戊唑醇(Tebuconazloe)、黑色素合成抑制剂类的三环唑(Tricyclaz

关键词：水稻稻瘟病菌稻瘟灵吡唑醚菌酯抗药性抗性机理

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