检索结果-内蒙古大学图书馆

中国水稻科学 2016年第4期30卷 356-362页

作者：丁新伦谢荔岩张洁吴祖建福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒重点实验室福州350002

为鉴定与水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)侵染引起的水稻根系发育不良的相关蛋白,解析根系发育不良症状的形成机理以及水稻草矮病毒与水稻互作的分子机制,采用双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)结合基质辅助激光解析串联飞行... 详细信息

为鉴定与水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)侵染引起的水稻根系发育不良的相关蛋白,解析根系发育不良症状的形成机理以及水稻草矮病毒与水稻互作的分子机制,采用双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)结合基质辅助激光解析串联飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)对RGSV侵染水稻后根系的差异表达蛋白进行分离和鉴定,并对鉴定的差异表达蛋白进行GO聚类分析和KEGG生物通路注释。结果表明,差异倍数大于2的蛋白质点有56个,其中,表达丰度升高的点有34个,表达丰度下降的点有22个;质谱成功鉴定出27个蛋白质点,分属于25种蛋白质。GO聚类分析表明差异表达蛋白涉及14个生物学过程,在生物功能上分属10类。细胞组件分析显示差异表达蛋白定位于不同的细胞部位。KEGG通路分析显示差异蛋白参与了12个生物通路。

关键词：水稻草矮病毒水稻根系差异表达蛋白双向荧光差异凝胶电泳基质辅助激光解析串联飞行时间质谱技术

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水稻草矮病毒NS6基因在大肠杆菌中的表达及植物表达载体的构建

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病毒学报 2001年第1期17卷 90-92页

作者：张春嵋谢荔岩林奇英谢联辉福建农业大学植物病毒研究所福建福州35002

Large amount of disease-specific protein(SP) accumulated in the rice plant cells infected by rice grassy stunt virus(RGSV). It was deduced that the protein was encoded by NS6 gene on genomic vRNA6 and thus referred to as NS6 *** its function is unknown. In an effort to prove the above deduction and to elucidate the function of NS6 protein of RGSV, we constructed a bacterial expression plasmid pGTNS6 producing a fusion protein of glutathione S-transferase (GST) and NS6 protein, and a plant expression vector pCBTNSv6 containing NS6 gene. A recombinant plasmid pTNSv 6 containing the coding region of NS6 gene and the non-coding region at its 5’ terminus, cloned by RT-PCR from purified RNAs of Shaxian isolate of RGSV, was used as the start point. Western blot analysis showed that the fusion protein reacted strongly with antisera raised against RGSV-SP, which served as evidence of the ***105 of Agrobacterium tumefasciens containing pCBTNSv6 has been obtained and the transformation of rice is underway.

关键词：水稻草矮病毒 NS6基因植物表达载体大肠杆菌表达

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水稻草矮病毒在水稻原生质体中的表达

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微生物学报 2004年第4期44卷 530-532页

作者：林丽明吴祖建金凤媚谢荔岩谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福州350002

通过建立水稻原生质体培养体系 ,经多聚鸟氨酸 (PLO)介导将提纯的水稻草矮病毒 (Ricegrassystuntvirus,RGSV)接种到水稻原生质体内 ,利用酶联免疫吸附法 (ELISA)及蛋白免疫印迹法 (Westernblot) ,研究RGSV在水稻原生质体内的生长周期及... 详细信息

通过建立水稻原生质体培养体系 ,经多聚鸟氨酸 (PLO)介导将提纯的水稻草矮病毒 (Ricegrassystuntvirus,RGSV)接种到水稻原生质体内 ,利用酶联免疫吸附法 (ELISA)及蛋白免疫印迹法 (Westernblot) ,研究RGSV在水稻原生质体内的生长周期及其编码蛋白的表达情况。结果表明 :RGSV在接种后 2 4h左右开始在原生质体内复制 ,36h左右达到最大值。NS6在 1 5h左右开始表达 ,在

关键词：水稻草矮病毒水稻原生质体表达纤细病毒属基因组

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水稻草矮病毒血清学和分子检测方法的比较

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中国病毒学 2000年第4期15卷 361-366页

作者：张春嵋林奇英谢联辉福建省植物病毒学重点实验室福建农业大学植物病毒研究所福州350002

将间接ELISA、非放射性分子杂交和RT PCR三种方法应用于水稻草矮病毒 (RGSV)的检测。结果表明 ,利用自制的融合蛋白GST NC的抗血清检测RGSV的灵敏度为 1mg鲜重的病株叶片或 84ng提纯病毒 ,利用地高辛 (DIG)标记的DNA探针NC的点杂交方法... 详细信息

将间接ELISA、非放射性分子杂交和RT PCR三种方法应用于水稻草矮病毒 (RGSV)的检测。结果表明 ,利用自制的融合蛋白GST NC的抗血清检测RGSV的灵敏度为 1mg鲜重的病株叶片或 84ng提纯病毒 ,利用地高辛 (DIG)标记的DNA探针NC的点杂交方法检测RGSV的灵敏度为 50 μg病叶或 6ng病毒 ,而RT PCR的检测灵敏度则为 10 μg病叶或 2ng的病毒 ,对上述三种方法的灵敏度和可操作性也进行了比较。

关键词：水稻草矮病毒血清学检测分子检测

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水稻草矮病毒核衣壳蛋白基因克隆及在大肠杆菌中的表达

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中国病毒学 2000年第2期15卷 200-203页

作者：张春嵋吴祖建林奇英谢联辉福建农业大学植物病毒研究所福州350002

Based on the known RNA sequence of rice grassy stunt virus , IRRI isolate (RGSV IR), the cDNA of nucleocapsid protein (NCP) gene was obtained by RT PCR, with genomic RNAs of Shaxian isolate (RGSV SX) as template. The cDNA was then cloned into pGEM T vector and sequenced. The results showed that the nucleotide sequence between the two isolates was 99.4% identical. A bacterial expression plasmid pGTNCP which produced a fusion protein with molecular weight of about 62?kD was constructed using the cDNA clone and vector pGEX 2T. Western blot analysis showed that the fusion protein reacted strongly with antibodies raised against RGSV particles.

关键词：水稻草矮病毒 NCP RT-PCR 基因克隆基因表达

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水稻草矮病毒SP基因转化水稻及其在水稻原生质体内的转录和表达

水稻草矮病毒SP基因转化水稻及其在水稻原生质体内的转录和表达

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作者：金凤媚福建农林大学

学位级别：硕士

水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus，RGSV)为纤细病毒属(Tenuivirus)的一个成员，在生物学性质及基因组结构等方面具有许多特性，是研究病毒与寄主互作机制的理想材料。RGSV含有6个单链RNA(singal strand RNA，ssRNA)片段，均采用... 详细信息

水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus，RGSV)为纤细病毒属(Tenuivirus)的一个成员，在生物学性质及基因组结构等方面具有许多特性，是研究病毒与寄主互作机制的理想材料。RGSV含有6个单链RNA(singal strand RNA，ssRNA)片段，均采用双义编码策略，这在植物病毒中是很独特的。该病毒的全基因组核苷酸序列已经测定，但对基因及其编码蛋白的功能还知之甚少。 SP(disease specific protein，SP)是由水稻草矮病毒RNA6正义链编码的一种病害特异蛋白，该蛋白在寄主体内大量积累，但在带毒昆虫体内的表达量很低，这说明该蛋白在病毒与寄主的互作中可能起着重要作用。本文通过转基因技术，将RGSV SP基因转入水稻中，以期为研究该基因在病毒与寄主基因的互作及其与病毒致病性的关系奠定基础；并通过病毒侵染原生质体技术，来检测SP基因在寄主体内的转录和表达情况。由张春嵋博士提供的植物表达载体，通过与动员质粒PRK2013和农杆菌LBA4404进行三亲交配，将目的基因导入农杆菌中。分别利用未成熟胚、经分裂扩繁的幼胚和成熟胚作为受体材料，进行愈伤组织诱导。这些受体材料与含目的基因的农杆菌进行共培养后，在有选择压力的条件下进行筛选、分化，最后再生获得转基因植株。分别经PCR和Southern点杂交分析，结果表明目的基因已整合到水稻基因组中。RT-PCR-Southern点杂交结果表明目的基因已在植株体内进行了转录。对再生植株的初步观察没有发现与病毒侵染类似的症状。为了进一步研究SP基因在寄主体内的表达周期，我们建立了水稻原生质体培养体系，用聚赖氨酸介导的方法将提纯的RGSV接种到水稻原生质体内，并利用地高辛标记制备的核酸探针，按不同时间取样，进行Northern点杂交实验。结果表明：接种8h后能检测到mRNA的积累，在24-32h达到最大值，随后慢慢下降，但仍有表达。利用SP抗血清进行Dot-ELISA检测结果表明：SP在12h开始表达，32h达到最高值，随后逐渐降低。

关键词：水稻草矮病毒 SP基因转化悬浮细胞水稻原生质体

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水稻草矮病毒基因组vRNA3 NS3基因的克隆、序列分析及原核表达

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农业生物技术学报 2003年第2期11卷 187-191页

作者：林丽明吴祖建谢联辉林奇英福建农林大学植物病毒研究所福州350002 福建农林大学植物病毒研究所

根据RGSV(ricegrassystuntvirus )-IR分离物的RNA3序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增出RGSV-SX分离物的NS3基因,并进行序列测定及原核表达。结果表明,NS3基因由588个核苷酸组成,编码22.9kD蛋白。构建了可在*** DH5α中表达的质粒pGTNS3,... 详细信息

根据RGSV(ricegrassystuntvirus )-IR分离物的RNA3序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增出RGSV-SX分离物的NS3基因,并进行序列测定及原核表达。结果表明,NS3基因由588个核苷酸组成,编码22.9kD蛋白。构建了可在*** DH5α中表达的质粒pGTNS3,经IPTG诱导,SDS-PAGE分离纯化得到分子量为49.0kD的GST-NS3融合蛋白,并制备抗血清。应用Westernblot分析寄主水稻(Oryzasativa)和介体昆虫体内NS3基因表达产物,仅在感病水稻植株中检测到NS3蛋白,而在提纯病毒、介体昆虫体内则未检测到。

关键词：水稻草矮病毒 NS3基因克隆序列分析表达

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水稻草矮病毒SP基因转化水稻及其抗性分析

水稻草矮病毒SP基因转化水稻及其抗性分析

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作者：林健清福建农林大学

学位级别：硕士

由水稻草状矮化病毒（Rice grassy stunt virus，RGSV）RNA6正义链编码的非结构蛋白在被水稻草矮病毒侵染的植株细胞内有大量的聚集，形成了不定型的内含体或针状结构，称为病害特异蛋白SP（disease specific protein，SP）。该蛋白与... 详细信息

由水稻草状矮化病毒（Rice grassy stunt virus，RGSV）RNA6正义链编码的非结构蛋白在被水稻草矮病毒侵染的植株细胞内有大量的聚集，形成了不定型的内含体或针状结构，称为病害特异蛋白SP（disease specific protein，SP）。该蛋白与病害症状表现密切相关，为可能的致病相关蛋白，但其具体功能尚不清楚。本研究利用根癌农杆菌介导法将RGSV SP基因导入水稻，通过对转基因水稻植株进行表型分析和病毒抗性评价，以进一步探讨SP基因的功能及其与寄主基因的互作关系。根据RGSV菲律宾北方分离物（RGSV-IR）序列合成SP基因特异引物，通过RT-PCR从RGSV沙县分离物（RGSV-SX）中获得了SP基因片段的cDNA克隆。序列分析结果表明，RGSV-SX SP基因全长为540个核苷酸，碱基组成为A 33.5％;C 17.7％;G 20.7％;T 28.1％，与已报道的RGSV-IR分离物SP基因的核苷酸序列同源性为100％。分别用XbaI／SacI、XhoI／SacI、BamHI／SacI双酶切阳性克隆子并回收相应的目的片段，将其连接到经过同样双酶切的植物表达载体pEmu-mcs-N、pKYLX71：35S及pCBTNSv6上，得到含有SP基因的植物表达载体pEmu-SP、pK-SP和pCB-SP，并分别通过DNA直接转化法或三亲交配法转入农杆菌中。利用农杆菌介导的水稻转化系统将SP基因分别转入台农67、嘉南8号水稻品种，经筛选、分化，获得58株再生植株。PCR和PCR-Southern杂交结果表明有31株转化水稻植株的目的基因已整合到水稻基因组中，转化阳性率达53％;PCR-SSCP和序列测定分析结果表明外源基因在转基因水稻植株中结构完整，未发生基因突变、缺失等变异;Northern点杂交结果表明目的基因在多数转基因水稻植株体内已进行了转录;ELISA和Western blot分析表明目的基因在3株转基因水稻体内得到了不同程度的表达。转基因水稻表型初步观察结果表明，RGSV SP基因单独转化水稻后，不会引起类似病毒侵染的症状，推测水稻草矮病病害症状可能不是由SP蛋白单独所致，而是由该蛋白与其他蛋白协同作用的结果。温室内，T0代转基因水稻对RSV抗性测定结果表明，与对照相比，转基因水稻对水稻条纹病毒具有一定的抗性，表现出发病症状减轻，发病时间福建农林大学硕士学位论文明显延迟，且这种抗性与SP基因的表达量不存在正相关，推测这种抗性可能不是由病毒编码的蛋白质所介导的，而是由转基因（病毒基因）所转录的 RNA介导的。 Tl代转基因水稻遗传分析及PCR一Southem杂交结果表明，外源基因能够从TO代遗传给Tl代，其分离基本符合孟德尔3:1、15:1的遗传规律。对 Tl代转基因水稻RSV抗性进行了跟踪测定，结果表明多数TO代转基因水稻对RSV的抗性能够遗传给Tl代，不同株系及同一株系不同单株对RSV 的抗性表现存在抗性分离和抗性减弱现象。

关键词：水稻草矮病毒 SP基因农杆菌介导法转基因水稻基因功能抗性分析

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水稻草矮病毒福建分离物全基因组序列的测定及其编码蛋白的亚细胞定位分析

水稻草矮病毒福建分离物全基因组序列的测定及其编码蛋白的亚细胞...

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作者：刘妍福建农林大学

学位级别：硕士

水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus，RGSV)属纤细病毒属，由其引起的水稻草状矮化病在20世纪70年代曾经在南亚、东南亚大面积流行，造成了严重的经济损失，由介体褐飞虱进行持久性方式，不经卵传播。RGSV具有双义编码策略，是一种... 详细信息

水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus，RGSV)属纤细病毒属，由其引起的水稻草状矮化病在20世纪70年代曾经在南亚、东南亚大面积流行，造成了严重的经济损失，由介体褐飞虱进行持久性方式，不经卵传播。RGSV具有双义编码策略，是一种双义的多组分RNA病毒，由6种ssRNA组成，编码12个蛋白。利用RT‐PCR的方法，扩增得到了福州分离物的全基因组序列。对其序列分析显示，RGSV各个基因的核酸序列和氨基酸序列与日本分离物的同源性均在98%以上。将RGSV基因组与纤细病毒属其他病毒比对后发现，RGSV的RNA3和RNA4为RGSV所特有，与其它纤细病毒属成员的RNA片段均没有同源性，这两个蛋白可能是RGSV与同为纤细病毒属其它成员间具有诸多差异的根本原因。利用植物瞬时表达系统，将RGSV部分基因重组到pEarly Gate101载体上，转化农杆菌后注射烟草，在共聚焦显微镜下观察这些基因在本氏烟细胞内的定位情况。结果显示，P1可在本氏烟细胞中形成颗粒点状结构，P2可在细胞核内形成颗粒，P3定位于细胞核与细胞质中，P4可定位于细胞核，P5大量积累于细胞膜附近，并且自身互作形成多聚体，P6是病害特异性蛋白，可在本氏烟细胞中大量积累表达，PC6是运动蛋白，在可定为于细胞壁与胞间连丝。将构建好的入门载体pDONR221质粒连接到pDEST8TM载体上，将所获得的重组转移质粒转化DH10Bac感受态细胞，以获得重组的bacmid DNA，将bacmid质粒转染Sf9昆虫细胞，通过免疫荧光技术观察目的蛋白在昆虫细胞内的亚细胞定位，连接P2的重组杆状病毒定位在细胞膜上，连接P6的重组杆状病毒侵染的Sf9细胞的整个细胞质中都带有荧光，重组的含PC5的重组杆状病毒侵染Sf9细胞，绿色荧光以点状的形式分布在细胞质中。蛋白是生命活动的直接体现者，了解蛋白质的亚细胞定位信息，可以为我们推断蛋白质的生物学功能提供必要的帮助，同时对蛋白质的其他研究，如相互作用、进化等也能提供必要的信息。

关键词：水稻草矮病毒亚细胞定位荧光蛋白免疫荧光技术

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水稻草矮病毒中国沙县分离物基因组RNA3片段的克隆及序列分析

水稻草矮病毒中国沙县分离物基因组RNA3片段的克隆及序列分析

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中国植物病理学会2006年学术年会

作者：林丽明吴祖建林奇英谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建农林大学植物病毒研究所福建农林大学植物病毒研究所福建农林大学植物病毒研究所

利用RT-PCR技术合成并扩增了水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)中国沙县分离物(RGSV-SX)基因组RNA3片段的cDNA,将PCR产物克隆在载体pGEM-T-easy上, 并进行序列测定,核苷酸序列分析结果表明,RGSV-SX分离物RNA3的全长为3120个... 详细信息

利用RT-PCR技术合成并扩增了水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)中国沙县分离物(RGSV-SX)基因组RNA3片段的cDNA,将PCR产物克隆在载体pGEM-T-easy上, 并进行序列测定,核苷酸序列分析结果表明,RGSV-SX分离物RNA3的全长为3120个核苷酸,其碱基组成为A 35．7％,C 14．9％;G 16．O％;T 33．4％。GC含量为31．0％,AT含量为69．0％,

关键词：分离物水稻草矮病毒克隆及序列分析基因组

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