检索结果-内蒙古大学图书馆

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第4期33卷 467-471页

作者：张恒木陈剑平程晔雷娟利薛庆中浙江大学农业与生物技术学院!杭州310029 浙江大学农业与生物技术学院浙江省农业科学院病毒学实验室!杭州310021 杭州310029

应用RT PCR技术克隆了 3个中国水稻黑条矮缩病毒 (riceblack streakeddwarfvirus,RBSDV)分离株基因组片段S9,并测定了它们的全序列。结果表明 :RBSDV浙江分离株 (RBSDV Zj)基因组片段S9全长 190 0nt(EMBL登录号为AJ2 97430 ) ,RBSDV河... 详细信息

应用RT PCR技术克隆了 3个中国水稻黑条矮缩病毒 (riceblack streakeddwarfvirus,RBSDV)分离株基因组片段S9,并测定了它们的全序列。结果表明 :RBSDV浙江分离株 (RBSDV Zj)基因组片段S9全长 190 0nt(EMBL登录号为AJ2 97430 ) ,RBSDV河北分离株 (RBSDV Heb)基因组片段S9全长 1898nt(EMBL登录号为AJ2 9742 9) ,湖北分离株S9全长 190 0nt(EMBL登录号为AJ2 9170 6 )。 3个分离株S9均含有两个开放阅读框(ORF) ,分别编码约 40kD和 2 4kD的多肽。3个中国分离株之间的核苷酸同源性高达 98.5 %～ 98.8% ,与日本分离株S9的核苷酸同源性均为 89.9%～ 90 .2 % ,而与意大利MRDVS8同源性仅为 85 .3%～ 86 .4%。我们发现ORF2十分保守 ,4个RBSDV分离株S9的ORF2同源性高达为 97.6 %～ 10 0 % ,与意大利MRDVS8的ORF2同源性也高达 94.3%。

关键词：水稻黑条矮缩病毒基因组片段S9 序列分析

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水稻黑条矮缩病毒P7-1基因对水稻的遗传转化及转基因植株的抗病性分析

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中国水稻科学 2018年第4期32卷 342-348页

作者：袁平平孙枫倪海平朱佳慧周益军蒋选利徐秋芳贵州大学农学院贵阳550025 江苏省农业科学院植物保护研究所南京210014

【目的】通过在水稻中过量表达水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus,RBSDV)P7-1基因,分析RBSDV P7-1是否是导致水稻不育的重要致病因子,并明确过量表达P7-1转基因植株对病毒的抗性。【方法】采用RT-PCR方法从感病植物中... 详细信息

【目的】通过在水稻中过量表达水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus,RBSDV)P7-1基因,分析RBSDV P7-1是否是导致水稻不育的重要致病因子,并明确过量表达P7-1转基因植株对病毒的抗性。【方法】采用RT-PCR方法从感病植物中扩增获得RBSDV P7-1基因,构建p CAMBIA-1300-P7-1载体,通过农杆菌转化法获得转基因水稻,观察水稻是否能够正常结实,并采用人工接种病毒方法分析转基因植株的抗性。【结果】过量表达RBSDV P7-1的转基因水稻生长、结实正常。在接种7 d和14 d时转基因植株中病毒积累量显著低于野生型对照,但在28 d时部分转基因株系中病毒积累量高于对照,接种30 d时转基因植株的发病率与对照无明显差异。【结论】在水稻中过量表达RBSDV P7-1不影响水稻的结实;转基因水稻在RBSDV侵染早期可抑制病毒的积累,但在后期对病毒的抗性与对照没有明显差异。

关键词：水稻黑条矮缩病毒过量表达育性抗性评价

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水稻黑条矮缩病毒第七号片段的cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达

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微生物学报 2003年第4期43卷 442-447页

作者：钟永旺周洁庄斌全魏春红李毅北京大学生命科学学院北京100871

运用RT PCR技术 ,根据玉米粗缩病毒S6的末端序列设计引物 ,从玉米粗缩病感病材料中克隆得到一条 2 2kb长的cDNA片段 ,序列分析表明 ,该片段全长 2 1 93bp ,含两个开放阅读框 ,分别编码 41 0kD和 36 3kD的多肽。序列分析结果表明 ,该c... 详细信息

运用RT PCR技术 ,根据玉米粗缩病毒S6的末端序列设计引物 ,从玉米粗缩病感病材料中克隆得到一条 2 2kb长的cDNA片段 ,序列分析表明 ,该片段全长 2 1 93bp ,含两个开放阅读框 ,分别编码 41 0kD和 36 3kD的多肽。序列分析结果表明 ,该cDNA片段及其编码产物与水稻黑条矮缩病毒S7的cDNA序列及编码产物存在最高的相似性 ,推测该cDNA片段为水稻黑条矮缩病毒的S7片段 ,而不是玉米粗缩病毒的S6。分别将该片段的两个阅读框克隆到原核表达载体pET2 1 d及pGEX KG中 ,经IPTG诱导后 ,两种蛋白均得到了高效的表达。表达产物回收后制备并得到了高效价的抗血清。

关键词：水稻黑条矮缩病毒 cDNA克隆大肠杆菌表达

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水稻黑条矮缩病毒基因组片段S7的cDNA克隆及全序列分析

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微生物学报 2002年第2期42卷 200-207页

作者：张恒木陈剑平雷娟利程晔薛庆中浙江省农业科学院病毒学实验室杭州310021 浙江大学农业与生物技术学院杭州310029

应用RT PCR技术克隆了 2个水稻黑条矮缩病毒 (riceblack streakeddwarfvirus,RBS DV)中国分离物 ,即浙江分离物和河北分离物的基因组片段S7,并测定了他们的全序列。结果表明 :RBSDV浙江分离物 (RBSDV Zj)基因组片段S7全长 2 1 93nts(EMB... 详细信息

应用RT PCR技术克隆了 2个水稻黑条矮缩病毒 (riceblack streakeddwarfvirus,RBS DV)中国分离物 ,即浙江分离物和河北分离物的基因组片段S7,并测定了他们的全序列。结果表明 :RBSDV浙江分离物 (RBSDV Zj)基因组片段S7全长 2 1 93nts(EMBL登录号为AJ2 9742 7) ,RBSDV河北分离物基因组片段S7全长 2 1 90nts(EMBL登录号为AJ2 9742 8) ,二者均含有两个开放阅读框 (openreadingframe,ORF) ,分别编码约 41kD和 3 6kD多肽 ,2个中国分离物核苷酸同源性高达 99% ,相应的ORF编码的多肽同源性分别为 1 0 0 %和 94 4% ,与日本RBSDV基因组片段S7核苷酸同源性为 93 4%和 93 8% ,相应ORF编码的多肽同源性分别为98 1 % (ORF1 )、96 5 %和 97 8% (ORF2 ) ,与意大利MRDVS6核苷酸同源性为 85 1 %和85 3 % ,相应多肽同源性分别为 92 3 % (ORF1 )、85 5 %和 86 8% (ORF2 )。

关键词：水稻黑条矮缩病毒基因组片段S7 序列分析 cDNA克隆

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水稻黑条矮缩病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国农业科学 2012年第7期45卷 1285-1292页

作者：周彤杜琳琳范永坚周益军江苏省农业科学院植物保护研究所/江苏省植物病毒病诊断检测技术中心南京农业大学植物保护学院

【目的】建立一种快速、灵敏的逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)检测寄主植物和传毒介体体内的水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)。【方法】合成4条针对RBSDV S10核苷酸序列6个位点的特异性引物。分别对引物... 详细信息

【目的】建立一种快速、灵敏的逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)检测寄主植物和传毒介体体内的水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)。【方法】合成4条针对RBSDV S10核苷酸序列6个位点的特异性引物。分别对引物浓度、MgSO4浓度、反应温度和时间进行优化。将感病水稻总RNA梯度稀释后进行灵敏性检验并与RT-PCR比较分析。选择RBSDV和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)验证该方法的特异性。用本RT-LAMP方法检测田间病株。【结果】RT-LAMP检测方法可排除SRBSDV的干扰而特异地检测植物和飞虱体内的RBSDV,与RT-PCR灵敏性基本一致。检测结果易于判定。【结论】RT-LAMP检测方法适合寄主植物和介体体内RBSDV的快速检测。

关键词：水稻黑条矮缩病毒 RT-LAMP 检测

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水稻黑条矮缩病毒基因组S7编码的2个非结构蛋白在病株中的表达检测

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中国水稻科学 2012年第1期26卷 9-15页

作者：吕明芳羊健张恒木陈剑平浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所/浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地/农业部植物保护与生物技术重点开放实验室/浙江省植物病毒重点开放实验室浙江杭州310021

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)基因组片段S7含有2个非重叠的阅读框,所编码的蛋白分别为p7a和p7b。根据RBSDV S7序列(EU111804)设计特异性引物分别扩增编码p7a和p7b蛋白的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pSBET上,再以大肠杆菌BL2... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)基因组片段S7含有2个非重叠的阅读框,所编码的蛋白分别为p7a和p7b。根据RBSDV S7序列(EU111804)设计特异性引物分别扩增编码p7a和p7b蛋白的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pSBET上,再以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS或BL21(DE3)pLysE为宿主菌进行高水平表达,利用纯化的蛋白免疫小鼠,制备了p7a和p7b蛋白的特异性抗血清。蛋白质印迹分析表明p7a和p7b蛋白均在水稻病株中表达,但p7a含量较为丰富,易于在病株中检测到,而p7b在病株中含量则很低;在病毒粒子中,两者均未检测到任何信号,表明两者均为RBSDV的非结构蛋白。

关键词：水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白原核表达

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水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)S3和S10基因组非编码区对翻译的调控作用

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植物病理学报 2019年第3期49卷 355-361页

作者：袁婷王增辉于成明耿国伟苏陈禹原雪峰山东农业大学植物保护学院植物病理学系山东省农业微生物重点实验室泰安271018 山东农业大学生科学院泰安271018 山东农业大学植物保护学院农药系泰安271018

水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)基因组含有5’帽子,无3’poly(A)尾巴,且不同基因组片段的5’和3’末端序列均十分保守。本研究以RBSDV S3和S10为对象,分析其非编码区对翻译的调控作用。研究发现S3和S10的5’... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)基因组含有5’帽子,无3’poly(A)尾巴,且不同基因组片段的5’和3’末端序列均十分保守。本研究以RBSDV S3和S10为对象,分析其非编码区对翻译的调控作用。研究发现S3和S10的5’UTR在有无帽子时均可以正向调控报告基因Fluc的翻译,具备核糖体内部进入位点(IRES)活性,且5’末端的基因组保守序列及邻近序列与IRES活性密切相关;而对应的3’UTR则抑制5’UTR对翻译的正调控效应,其分子基础是5’UTR和3’UTR之间的RNA-RNA互作,且该互作也抑制帽子依赖型翻译的效率。这是首次关于有帽子植物RNA病毒中IRES元件的报道,研究结果对了解植物双链RNA病毒基因组非编码区对翻译的调控作用具有重要科学意义。

关键词：水稻黑条矮缩病毒 5’帽子不依赖帽子翻译核糖体内部进入位点 RNA-RNA互作

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水稻黑条矮缩病毒江苏玉米分离物全基因组序列及进化分析

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植物病理学报 2016年第4期46卷 443-452页

作者：王增辉王德亚王国鲁侯艳敏赵凯茜于成明张振甲师科荣李向东原雪峰山东农业大学植物保护学院山东省农业微生物重点实验室泰安271018 山东农业大学动物科技学院泰安271018

利用RT-PCR从江苏玉米上克隆水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)的全基因组,其基因组10个片段核苷酸数目和蛋白编码情况与已报道的RBSDV分离物基本一致。基因组的序列一致性分析和系统进化树表明,RBSDV基因组片段间存在频繁的RNA重排现象;江苏玉... 详细信息

利用RT-PCR从江苏玉米上克隆水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)的全基因组,其基因组10个片段核苷酸数目和蛋白编码情况与已报道的RBSDV分离物基本一致。基因组的序列一致性分析和系统进化树表明,RBSDV基因组片段间存在频繁的RNA重排现象;江苏玉米分离物(JS)与湖北玉米分离物(HuB)和河北小麦分离物(HeB)的整体亲缘关系较近,而与安徽分离物(AH-MX8)的整体亲缘关系最远。综合本研究及前人对S8和S10的研究,RBSDV基因组不同片段的进化中RNA重组的作用不同:S1、S2和S4中没有RNA重组;S3、S5、S6、S8和S10中存在低频率重组;S7和S9存在较高频率重组,其中S7的高频率重组尤为显著。

关键词：水稻黑条矮缩病毒系统进化树重组重排进化

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水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白基因的克隆、原核表达及抗体制备

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植物保护学报 2014年第1期41卷 35-40页

作者：宋云枝姜雅元毕吕杰温孚江朱常香山东农业大学作物生物学国家重点实验室山东省作物生物学重点实验室泰安271018

为探讨水稻黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus，RBSDV）的种群变异，采用RT-PCR方法从感染RBSDV山东分离物RBSDV-JN1的水稻中克隆该病毒的S10片段，并进行序列分析，进而构建包含RBSDV-JN1的CP基因的原核表达载体，导入大... 详细信息

为探讨水稻黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus，RBSDV）的种群变异，采用RT-PCR方法从感染RBSDV山东分离物RBSDV-JN1的水稻中克隆该病毒的S10片段，并进行序列分析，进而构建包含RBSDV-JN1的CP基因的原核表达载体，导入大肠杆菌Escherichia coli BL21（DE3）诱导表达；并以表达的融合蛋白为抗原，制备病毒的多克隆抗体。结果显示：S10片段全长为1 801 bp，包含1个1 677 bp编码框，编码558个氨基酸的外壳蛋白（CP）；与GenBank已注册的19个RBSDV的CP基因序列相比较发现，病毒各分离物间核苷酸的序列相似性为90.5%~99.8%，氨基酸的序列相似性为95.9%~100.0%；地理位置较近的分离物间序列相似性较高，RBSDV种群分布呈现区域性差异。原核表达载体pET-RBSDV-CP经IPTG诱导，获得了分子量约为63 kD带有His标签的目的蛋白。用该蛋白制备的多克隆抗体经ELISA、Western blot和Dot-blot ELISA检测显示，效价为1：81 000，且具有良好的特异性。

关键词：水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白序列分析原核表达多克隆抗体

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水稻黑条矮缩病毒基因组片段6编码一种非结构蛋白

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华北农学报 2007年第6期22卷 5-8页

作者：方守国王朝辉韩成贵李大伟于嘉林中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100094

水稻黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus，RBSDV）是引起我国水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病的病原。引起玉米粗缩病的RBSDV湖北分离物10条基因组dsRNA全序列已被确定，其中基因组片段6（S6）全长序列为2645bp，只含有一个阅... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus，RBSDV）是引起我国水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病的病原。引起玉米粗缩病的RBSDV湖北分离物10条基因组dsRNA全序列已被确定，其中基因组片段6（S6）全长序列为2645bp，只含有一个阅码框（82—2460nt），编码一个分子量约为89．6kDa的蛋白（P6）。为进一步研究该蛋白的生物学功能，在大肠杆菌中表达了RBSDV基因组片段6编码的P6蛋白并制备了相应的抗血清。Western blotting分析显示，P6抗血清不与纯化的RBSDV粒子蛋白发生反应，而在被RBSDV感染的玉米叶片和带毒的传播介体——灰飞虱中可检测到P6。此结果表明，RBSDV—S6编码的蛋白是一种非结构蛋白。

关键词：水稻黑条矮缩病毒基因组片段6 原核表达非结构蛋白

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