检索结果-内蒙古大学图书馆

浙江农业学报 2013年第6期25卷 1298-1303页

作者：张上林孙丽英陈剑平安徽农业大学植物保护学院安徽合肥230036 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所/浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地/农业部植物保护与生物技术重点开放实验室/浙江省植物病毒重点开放实验室浙江杭州310021

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)是斐济病毒属的成员之一,可侵染玉米和水稻等作物,给亚洲地区的田间生产带来严重的损失。RBSDV有10条双链RNA(double strand RNA,dsRNA)基因组,编码12个蛋白。其中6个蛋白是病毒粒子的结构成分(P1,P2,P3,P4,P8,P... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)是斐济病毒属的成员之一,可侵染玉米和水稻等作物,给亚洲地区的田间生产带来严重的损失。RBSDV有10条双链RNA(double strand RNA,dsRNA)基因组,编码12个蛋白。其中6个蛋白是病毒粒子的结构成分(P1,P2,P3,P4,P8,P10),6个非结构蛋白分别为P5,P6,P7-1,P7-2,P9-1,P9-2。在非结构蛋白中,P5,P6和P9-1已被证实参与形成毒质结构,P7-1被认为可在细胞质中形成类似管状的结构作为病毒胞间扩散的通道,P7-2和P9-2的功能目前尚不明确。文章采用Pull-Down和液相色谱—质谱联用(LC-MS/MS)等技术来鉴定水稻蛋白(日本晴)与P7-2蛋白间可能存在的互作关系。通过Pull-Down实验分析,发现有4种水稻蛋白可与P7-2相结合,其中2个蛋白为转录相关蛋白,1个为氨基转移酶,还有1个为假定的分子伴侣60前体。实时荧光定量PCR分析显示,感病寄主中的转录相关蛋白和假定的分子伴侣60前体的表达量上调,而氨基转移酶的表达量降低。

关键词：水稻黑条矮缩病毒 P7-2基因原核表达蛋白质互作实时荧光定量PCR

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马铃薯Y病毒及水稻黑条矮缩病毒CP基因不同区段对发夹RNA介导的病毒抗性影响

马铃薯Y病毒及水稻黑条矮缩病毒CP基因不同区段对发夹RNA介导的病...

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作者：吴斌山东农业大学

学位级别：博士

RNA沉默是生物抵御外来核酸入侵以保持生物自身基因组完整性的一种高度保守的、序列特异的RNA降解机制,广泛存在于植物、动物、线虫和真菌等真核生物中。RNA介导的病毒抗性(RNA-Mediated Virus Resistance, RMVR)是近年来发展起来的一... 详细信息

RNA沉默是生物抵御外来核酸入侵以保持生物自身基因组完整性的一种高度保守的、序列特异的RNA降解机制,广泛存在于植物、动物、线虫和真菌等真核生物中。RNA介导的病毒抗性(RNA-Mediated Virus Resistance, RMVR)是近年来发展起来的一种新的抗病毒基因工程策略,它是以病毒核酸片段为转基因而诱导的转录后基因沉默,具有抗病程度高、抗性持久及生物安全性高等优点。在前期的研究中,人们发现并非所有符合条件的siRNA都同样有效,具体原因还不清楚,可能是“位置效应”(position effects)所致。本研究首先以马铃薯Y病毒(Potato virus Y, PVY)外壳蛋白基因(CP)不同区段50bp的序列为靶序列构建发夹RNA (hpRNA)结构的植物表达载体,系统性的比较PVY CP基因不同区段对RNA介导的病毒抗性的影响。在此基础上,以水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus, RBSDV) CP基因5’端、中间和3’端500bp的序列为靶序列,构建hpRNAi植物表达载体,转化水稻,进一步比较了不同位置的靶序列对RNA介导的病毒抗性的影响,筛选获得了高抗RBSDV的转基因水稻新材料。研究结果对有效地选择靶位点序列和高效地应用RMVR策略培育抗病毒转基因植物具有重大指导意义。研究结果和主要结论如下： 1.马铃薯Y病毒CP基因不同区段对发夹RNA介导的病毒抗性的影响将PVYN CP (801bp)划分为长度为50bp的16个短片段,进而利用PCR技术扩增CP基因5’端8个目的片段,反向重复插入植物表达载体pROKⅡ中,构建了具有hpRNA结构的植物表达载体pROK-CPs (pROK-CP1～pROK-CP8)。将构建好的16个重组植物表达载体(3’端的8个载体由姜芳构建)利用冻融法导入农杆菌EHA105,并瞬时侵染本生烟以验证其有效性。Northern blot结果显示,16个植物表达载体不仅均能在植物体内成功表达产生siRNA,而且瞬时表达的siRNA能对靶基因PVYCP的农达进行有效地下调。采用冻融法将构建成功的植物表达载体导入农杆菌LBA4404,叶盘法转化烟草NC89,经卡那霉素抗性筛选和PCR检测获得T0代转基因植株。T0代自交所获得的种子置于含卡那霉素的筛选培养基上进行筛选,选取抗性幼苗进行温室移栽并进行PCR检测,结果农明,转化pROK-CP1～pROK-CP8分别获得60、55、70、66、66、48、68和72株T1代转基因植株。以PVYN的病毒汁液为接种物,摩擦接种16个载体的转基因烟草(3’端的8个载体的转基因烟草山姜芳转化获得),通过症状观察及ELISA检测进行抗病性分析发现,转化pROK-CP1～pROK-CP4所得的转基因植株抗性植株比例均为0%,而转化pROK-CP5～pROK-CP16的转基因株系中抗性植株的比例分别为27.15%、6.27%、67.65%、70.83%、66.01%、61.34%、66.04%、23.59%、11.11%、55.56%、77.78%和67.25%。结果表明,以CP基因3’端为靶序列比以5’端为靶序列更能有效地介导对PVY的抗性。 T1代转基因植株的Northern blot杂交分析表明,转基因都在RNA水平上得到了表达,抗病植株中RNA的积累量明显低于同类型的感病植株,即抗性与RNA积累量呈负相关,同时,在所有转基因植株中均能检测到siRNA,表明植株对病毒的抗性是由RNA所介导的,但植株的抗病性与siRNA积累量之间没有明显的相关性。对T2代的转基因植株的抗病性分析结果表明,由hpRNA介导的PVY抗性可以在T2代植株中稳定遗传。 2.水稻黑条矮缩病毒CP基因不同区段对hpRNA介导的病毒抗性影响利用PCR技术扩增来自RBSDV CP5端、中间和3’端长度为500bp (nt89-588, nt589-1088, nt1089-1588)片段,构建hpRNAi植物表达载体RBSDV-CP5'、\RBSDV-CPM和RBSDV-CP3',酶切鉴定表明植物表达载体构建成功。将构建好的三个重组表达载体利用冻融法导入农杆菌EHA105中,采用农杆菌介导法转化镇稻88。转化RBSDV-CP5'、RBSDV-CPM和RBSDV-CP3'的转基因植株,经除草剂和PCR检测,分别获得19、21和22株T0代转基因阳性植株。将T0代自交结实后获得的T1代转基因植株,利用叶片涂抹PPT的方法,筛选T1代阳性转基因植株。每个株系各选取50株阳性植株,用来自山东济宁的带毒灰飞虱接种病毒RBSDV,病毒抗性的检测结果显

关键词：外壳蛋白基因位置效应马铃薯Y病毒水稻黑条矮缩病毒 RNA介导的病毒抗性

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感染水稻黑条矮缩病毒的玉米组织细胞的变化

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河北农业大学学报 2009年第6期32卷 89-91,100页

作者：任萍陈丹曹克强路银贵苗洪芹河北农业大学植物保护学院河北保定071000 河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心河北保定071000

在防虫网室内,人工接种水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarffijivirus,RBSDV)于3叶1心期至5叶1心郑单958玉米苗上。接种10 d后,每天调查症状,抽雄期测量植株上部幼嫩茎节长度;对接种病株和未接种健株的叶片进行横切;对茎节组织... 详细信息

在防虫网室内,人工接种水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarffijivirus,RBSDV)于3叶1心期至5叶1心郑单958玉米苗上。接种10 d后,每天调查症状,抽雄期测量植株上部幼嫩茎节长度;对接种病株和未接种健株的叶片进行横切;对茎节组织进行横切和纵切,荧光染色后,显微镜下观察横切片的细胞数量、形态变化,测量茎节纵切片的细胞长度。结果显示:与未接种的健康对照相比,受侵染的玉米叶片和茎节组织的韧皮部细胞畸形、数量剧增,且排列紊乱。感病植株的节间长度缩短,细胞伸长受阻。本研究通过组织细胞形态观察,明确了RBSDV侵染玉米后,所致内部组织细胞形态的变化和外部植株矮化、叶背蜡泪状突起等典型症状的相关性。

关键词：玉米粗缩病水稻黑条矮缩病毒细胞形态

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安徽省水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的分子检测和序列分析

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安徽农业大学学报 2013年第1期40卷 107-111页

作者：李祥宇闫德龙郑兆阳陈莉刘家成丁克坚江彤安徽农业大学植物保护学院合肥230036 安徽省植保总站合肥230001

近年来,水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)在安徽各稻区危害日益严重,生产上仅凭症状难以区分2种病毒。本研究建立的RT-PCR方法可以实现一次性检测和鉴定RBSDV和SRBSDV 2种病毒,根据RBSDV和SRBSDV S9保守序列设计... 详细信息

近年来,水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)在安徽各稻区危害日益严重,生产上仅凭症状难以区分2种病毒。本研究建立的RT-PCR方法可以实现一次性检测和鉴定RBSDV和SRBSDV 2种病毒,根据RBSDV和SRBSDV S9保守序列设计3个引物,不仅可以从单独感染RBSDV或SRBSDV的水稻样本中分别扩增出1条大小不同的特异性条带,而且还可以从感染RBSDV和SRBSDV的混合水稻样本中一次性扩增出2条大小不同的特异性条带。从安徽省庐江县、郎溪县、怀宁县和宣州市4个地区水稻田采集表现明显矮缩病症状的水稻样本,RT-PCR检测结果表明,庐江和郎溪水稻样本受到RBSDV侵染,怀宁和宣州水稻样本受到SRBSDV侵染。选取庐江县、郎溪县、怀宁县和宣州市各1个水稻样本,利用RT-PCR扩增出特异性条带,再分别克隆和测序。序列分析表明,庐江、郎溪2个样本的核苷酸序列与RBSDV-Shandong和RBSDV-Zhjr S9部分片段序列相似性高达99.3%～99.8%,且与RBSDV的亲缘关系最近,说明庐江和郎溪样本感染的病毒是RBSDV的2个分离物;怀宁、宣州2个样本的核苷酸序列与SRBSDV-Shangdong和RBSDV-2 S9部分片段序列相似性高达99.5%,且与SRBSDV亲缘关系最近,说明怀宁和宣州样本感染的病毒是SRBSDV的2个分离物。

关键词：水稻黑条矮缩病毒南方水稻黑条矮缩病毒 RT-PCR检测克隆序列分析

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双重RT-PCR法同时快速检测南方水稻黑条矮缩病毒和水稻黑条矮缩病毒

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江西农业大学学报 2012年第5期34卷 914-917页

作者：孙晓棠崔汝强贺浩华欧阳林娟胡丽芳彭小松陈小荣朱昌兰江西农业大学农学院/作物生理生态与遗传育种教育部重点实验室江西南昌330045

南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)和水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)在病害症状、传播介体及寄主等方面非常相似,田间很难对其进行诊断及鉴定。根据SRBSDV与RBSDV外壳蛋白(CP)基因核苷酸序列差异设计特异性引物,建立一种快速、准确的双重PT-PCR鉴... 详细信息

南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)和水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)在病害症状、传播介体及寄主等方面非常相似,田间很难对其进行诊断及鉴定。根据SRBSDV与RBSDV外壳蛋白(CP)基因核苷酸序列差异设计特异性引物,建立一种快速、准确的双重PT-PCR鉴别方法,为SRBSDV和RBSDV的流行监测提供技术支持。

关键词：南方水稻黑条矮缩水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白基因特异性检测

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南方水稻黑条矮缩病毒一步双重RT-PCR检测技术及其应用

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植物病理学报 2012年第1期42卷 84-87页

作者：王强周国辉张曙光华南农业大学资源环境学院广州510642

南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice blackstreaked dwarf virus，SRBSDV）是呼肠孤病毒科（Reoviridae）斐济病毒属（Fijivirus）的一个建议新种，自然条件下。

关键词：水稻黑条矮缩病毒检测技术南方 PCR 应用 RT 呼肠孤病毒科 virus

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水稻黑条矮缩病毒的研究进展

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中国农学通报 2012年第18期28卷 209-212页

作者：邓金奇戴良英湖南农业大学生物安全科学技术学院长沙410128

水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus,RBSDV)属于呼肠孤病毒科斐济病毒属第二组成员,其引起的水稻黑条矮缩病在中国稻区造成巨大的经济损失。文章简述了水稻黑条矮缩病的危害情况及病毒特性、病毒各个编码蛋白的研究现状... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus,RBSDV)属于呼肠孤病毒科斐济病毒属第二组成员,其引起的水稻黑条矮缩病在中国稻区造成巨大的经济损失。文章简述了水稻黑条矮缩病的危害情况及病毒特性、病毒各个编码蛋白的研究现状、应用基因工程控制病害等方面的研究进展,为今后对水稻黑条矮缩病的研究提供参考。

关键词：水稻黑条矮缩病毒功能防治

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水稻黑条矮缩病毒基因组片段6编码一个非结构蛋白

水稻黑条矮缩病毒基因组片段6编码一个非结构蛋白

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中国植物病理学会2005年学术年会暨植物病理学报创刊50周年纪念会

作者：方守国李大伟韩成贵于嘉林中国农业大学农业生物技术国家重点实验室和植物病理学系中国农业大学农业生物技术国家重点实验室和植物病理学系中国农业大学农业生物技术国家重点实验室和植物病理学系中国农业大学农业生物技术国家重点实验室和植物病理学系

水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarfvirus,RBSDV)属于呼肠孤病毒科 (Reoviridae),斐济病毒属(Fijivirus)。RBSDV基因组由10条线性的双链(ds) RNA组成(S1-S10),其中S6只含一个ORF,编码一个由792个氨基酸组成的分子量约为89．6 kDa的蛋白。本文利用pGEX-KG载体在大肠杆菌中表达了 RBSDV基因组片段6(S6)编码的蛋白(P6),经谷胱苷肽亲和层析柱纯化后免

关键词：水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白 RBSDV 基因组片段

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水稻黑条矮缩病毒S3编码蛋白是一种结构蛋白

水稻黑条矮缩病毒S3编码蛋白是一种结构蛋白

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中国植物病理学会2004年学术年会

作者：孙丽英方守国王朝辉李大伟韩成贵于嘉林中国农业大学中国农业大学中国农业大学中国农业大学中国农业大学中国农业大学

近年来,玉米粗缩病在我国主要玉米产区迅速蔓延,对我国的玉米生产构成了严重威胁,其病原是水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)。水稻黑条矮缩病毒湖北玉米分离物(Hbm)S3全长3572nt,起始于15～17nt的AUG,终止于3453～3455nt的UGA。该片段编码一个由... 详细信息

近年来,玉米粗缩病在我国主要玉米产区迅速蔓延,对我国的玉米生产构成了严重威胁,其病原是水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)。水稻黑条矮缩病毒湖北玉米分离物(Hbm)S3全长3572nt,起始于15～17nt的AUG,终止于3453～3455nt的UGA。该片段编码一个由1146个氨基酸组成的蛋白,分子量约为131kDa。本文通过原核表达Hbm-S3编码的蛋白为抗原制备抗血清并用Western blot来分析其功能。

关键词：水稻黑条矮缩病毒结构蛋白编码蛋白

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水稻黑条矮缩病毒（RBSDV）P7-2与部分水稻SKP1蛋白家族成员的互作分析

水稻黑条矮缩病毒（RBSDV）P7-2与部分水稻SKP1蛋白家族成员的互...

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：陶涛王倩陈相儒孙倩王颖张永亮王献兵郭泽建李大伟于嘉林韩成贵中国农业大学植物病理学系与农业生物技术国家重点实验室

SKP1蛋白能够连接Cullin1（CUL1）和F-box蛋白,形成SCF（SKP1/Cullin1/Fbox）E3泛素连接酶复合体,再由F-box蛋白特异识别靶标蛋白,从而介导靶标蛋白的泛素化,被泛素化的靶标蛋白又被26S蛋白酶体识别并降解。本实验室王倩博士曾用水稻黑... 详细信息

SKP1蛋白能够连接Cullin1（CUL1）和F-box蛋白,形成SCF（SKP1/Cullin1/Fbox）E3泛素连接酶复合体,再由F-box蛋白特异识别靶标蛋白,从而介导靶标蛋白的泛素化,被泛素化的靶标蛋白又被26S蛋白酶体识别并降解。本实验室王倩博士曾用水稻黑条矮缩病毒（RBSDV）的P7-2蛋白作为诱饵蛋白去筛选玉米的酵母cDNA文库,证明了P7-2蛋白能与玉米的SKP1蛋白互作,并且证明P7-2的C端是其与SKP1互作的关键区。在此基础上,我们用P7-2蛋白作为诱饵蛋白筛选了水稻的酵母cDNA文库,筛选到两个互作蛋白,其中一个是水稻的SKP1蛋白,另外一个是SKP1蛋白的同源类似蛋白。文献报道水稻中SKP1家族有30个成员。为了进一步明确哪些水稻SKP1家族蛋白成员能与RBSDV P7-2互作,我们用RT-PCR从日本晴水稻苗中克隆到了其中25个水稻SKP1蛋白家族成员的基因,并用酵母双杂交系统验证了这些蛋白是否与RBSDV P7-2互作。结果显示,RBSDV P7-2除了能与直接从文库中筛选出来的两个SKP1蛋白家族成员互作外,还能与6个水稻SKP1蛋白家族成员互作,而且P7-2与这个8个水稻SKP1蛋白家族成员互作的强度不一。用酵母三杂交系统验证P7-2、OSK1、OsCUL1三个蛋白的互作情况,结果显示,这三个蛋白在酵母三杂交系统中能够互作,推测P7-2能够与OSK1、OsCUL1蛋白形成类似SCF结构的复合体,从而干扰或者调控水稻内源蛋白泛素化途径的降解。

关键词：水稻黑条矮缩病毒 P7-2 水稻SKP1蛋白家族互作

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