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文献类型

87 篇 期刊文献
76 篇 专利
65 篇 学位论文
23 篇 会议
2 篇 成果
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254 篇 电子文献
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日期分布

学科分类号

167 篇 农学
- 155 篇 植物保护
- 18 篇 作物学
- 1 篇 园艺学
15 篇 理学
- 15 篇 生物学
8 篇 工学
- 8 篇 生物工程
- 1 篇 农业工程
4 篇 医学
- 3 篇 药学(可授医学、理...
- 1 篇 中药学(可授医学、...

主题

178 篇 水稻黑条矮缩病毒
33 篇 玉米粗缩病
28 篇 灰飞虱
23 篇 南方水稻黑条矮缩...
17 篇 水稻条纹病毒
15 篇 序列分析
12 篇 原核表达
11 篇 南方
11 篇 玉米
10 篇 水稻
8 篇 rna干扰
8 篇 rt-pcr
8 篇 转基因水稻
8 篇 virus
7 篇 酵母双杂交
7 篇 外壳蛋白
7 篇 呼肠孤病毒科
6 篇 cdna克隆
6 篇 白背飞虱
6 篇 检测

机构

28 篇 江苏省农业科学院
22 篇 山东农业大学
19 篇 浙江大学
15 篇 中国农业大学
9 篇 江苏省农业科学院...
9 篇 安徽农业大学
9 篇 中国农业科学院
8 篇 中国农业科学院植...
8 篇 华南农业大学
8 篇 湖南农业大学
7 篇 南京农业大学
7 篇 宁波大学
6 篇 浙江师范大学
6 篇 北京大学
6 篇 河北省农林科学院...
5 篇 浙江省农业科学院
5 篇 长江大学
4 篇 浙江省农业科学院...
4 篇 中国农业科学院作...
4 篇 湖北省荆州市植保...

作者

37 篇 周益军
26 篇 陈剑平
24 篇 周彤
21 篇 程兆榜
14 篇 孙枫
14 篇 季英华
12 篇 张恒木
12 篇 范永坚
12 篇 徐秋芳
10 篇 孙宗涛
9 篇 张合红
8 篇 苗洪芹
8 篇 羊健
7 篇 熊如意
7 篇 邸垫平
7 篇 孙丽英
7 篇 杜琳琳
7 篇 李大伟
7 篇 韩成贵
7 篇 chen jian-ping

语言

254 篇 中文

检索条件"主题词=水稻黑条矮缩病毒"

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排序：

水稻黑条矮缩病毒编码的P9-1蛋白功能初步研究

水稻黑条矮缩病毒编码的P9-1蛋白功能初步研究

引用

中国植物病理学会第九届全国会员代表大会暨2010年学术年会

作者：李永强贾蒙骜雷蕾周涛范在丰中国农业大学植物病理学系农业部植物病理学重点实验室

水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus,RBSDV)侵染水稻、玉米、小麦分别引起水稻黑条矮缩病、玉米粗缩病和小麦绿矮病,近些年来在我国东南部省市造成严重危害,有些地块绝收。RBSDV为呼肠病毒科斐济病毒属(Fijivirus)成员,... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus,RBSDV)侵染水稻、玉米、小麦分别引起水稻黑条矮缩病、玉米粗缩病和小麦绿矮病,近些年来在我国东南部省市造成严重危害,有些地块绝收。RBSDV为呼肠病毒科斐济病毒属(Fijivirus)成员,基因组由10条双链RNA组成,编码10个功能性蛋白,其中S9-1编码的非结构蛋白P9-1在病毒侵染中形成病毒质,可能对于病毒复制侵染具有重要作用。

关键词：水稻黑条矮缩病毒初步研究

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玉米自交系植株水稻黑条矮缩病毒的积累

玉米自交系植株水稻黑条矮缩病毒的积累

引用

作者：张爱红河北大学

学位级别：硕士

玉米粗缩病是一种严重危害玉米的病毒病害,该病是由水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf fijivirus, RBSDV)引起。RBSDV是一种双链RNA病毒,曾在中国、日本等国家流行,严重影响玉米产量。本文首先对应用间接酶联免疫法(ID-ELISA... 详细信息

玉米粗缩病是一种严重危害玉米的病毒病害,该病是由水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf fijivirus, RBSDV)引起。RBSDV是一种双链RNA病毒,曾在中国、日本等国家流行,严重影响玉米产量。本文首先对应用间接酶联免疫法(ID-ELISA)测定玉米叶片中RBSDV的实验条件进行探索,然后在抗病性鉴定的基础上,按照玉米粗缩病病情严重度分级标准,采集不同病级叶片,对不同抗性玉米自交系、不同病级植株体内的RBSDV增殖差异做了初步研究,同时确定了竞争酶联免疫方法对不同品种、不同病级植株体内内源激素的检测方法,对不同抗性玉米自交系中内源激素水平差异做了初步分析。将水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)主要外壳蛋白P10的单克隆抗体应用于玉米病株叶片中RBSDV的检测,对实验所需包被缓冲液、抗血清使用浓度、样品稀释度、样品储存条件作了一系列优化选择。结果显示：柠檬酸缓冲效果最好,PBS缓冲液次之,碳酸缓冲液最差；RBSDV P10单克隆抗体倍比稀释至1,000×、1,500×和2,000×,均可检测到RBSDV,标本OD值/阴性对照OD值(P/N)在2.631～5.027之间,选择2,000x的稀释浓度为最经济、高效；ID-ELISA检测RBSDV,经1/80稀释后,在新鲜和4℃保存1d的标样中,仍能检测出RBSDV，P/N值为2.836～2.681。但随稀释度增大,P/N值减小,因此抗原的研磨稀释使用浓度以1/10-20(W：V)为最好。在-20℃保存1周的标样中稀释10倍未检测到RBSDV，P/N值为1.555<2。可见,检测玉米叶片中的RBSDV的ID-ELISA适宜方法为：使用柠檬酸缓冲液(pH 6.1)、RBSDV P10单克隆抗体稀释浓度1：2000,用新鲜玉米叶片标样,研磨稀释10～20倍。在抗病性鉴定的基础上,根据玉米粗缩病的病情严重度分级标准,对已知抗性水平的抗、中抗和感病自交系材料逐株进行病情严重度分级调查。采集不同级别病株的新叶,用ID-ELISA检测病株叶片中的RBSDV相对浓度。结果显示：同一抗性水平、不同级别的自交系病株叶片内的RBSDV浓度有显著差异,随病株病级加大,病毒浓度升高；而相同病级、不同抗性水平自交系叶片内的RBSDV浓度无显著差别；但抗病自交系病株叶片中的病毒总浓度显著低于感病自交系材料。此试验结果表明：玉米粗缩病病株叶片内的病毒浓度与生物学症状呈正相关,病毒浓度越高,病情越重。RBSDV一旦侵入寄主,在抗病、感病和中抗的自交系植株体内均可增殖,并运转到新生叶片。此结论为揭示玉米抗粗缩病的机理奠定了基础。 ELISA检测植物内源激素具有专一、快捷、前处理简单、能够大批量同时测定等优点。本文研究了玉米叶片中4种激素：生长素(IAA)、细胞分裂素(ZR)、脱落酸(ABA)和赤霉素(GA3)的提取方法以及应用竞争ELISA对4种内源激素的检测方法。结果显示：在4级病株中IAA、ZR、GA3含量均低于健康植株；但ABA含量较健康植株高。

关键词：玉米自交系水稻黑条矮缩病毒玉米粗缩病积累

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南方水稻黑条矮缩病毒传毒介及其对水稻挥发物的响应

南方水稻黑条矮缩病毒传毒介及其对水稻挥发物的响应

引用

作者：蒲玲玲华南农业大学

学位级别：硕士

南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus，SRBSDV)，是2001年在我国南方首次发现的呼肠孤病毒科(Reoviridae)斐济病毒属(Fijivirus)的新种。在过去十年间，SRBSDV在我国华南、西南和长江中下游以及越南中北部... 详细信息

南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus，SRBSDV)，是2001年在我国南方首次发现的呼肠孤病毒科(Reoviridae)斐济病毒属(Fijivirus)的新种。在过去十年间，SRBSDV在我国华南、西南和长江中下游以及越南中北部迅速扩散，已成为我国及周边国家水稻生产的重大威胁。为了揭示病害流行规律，本研究对该病毒的主要传播介体种类及其传毒特性进行了系统深入的研究，并从水稻挥发物层面初步解析了病株对传毒介体寄主选择行为的影响。所得结果如下：\n 1.明确了主要传毒介体种类。白背飞虱(Sogatella furcifera，White-backedplanthopper，WBPH)是SRBSDV高效持久性传毒介体，灰飞虱(Laodelphax striatellus，Small brown planthopper，SBPH)和褐飞虱(Nilaparvata lugens，Brown planthopper，BPH)不能传毒。在分蘖至拔节期水稻病株上饲养扩繁的WBPH第二代群体中，高龄若虫及成虫的获毒率为83.0％；单头带毒成虫5 d内可使8～25株秧苗感病；WBPH不但可在水稻植株间传播病毒，还能将SRBSDV传至针叶期至一叶一心期玉米幼苗上，但无毒飞虱很难从4～5叶期感病玉米植株上取食获得病毒。极少数SBPH(3.7％)可从毒源水稻植株上取食获得SRBSDV，但不能将病毒传至健康水稻植株上。BPH不能从水稻病株上获毒。\n 2.明确了白背飞虱传毒参数。成虫及若虫最短获毒期均为5 min，随着获毒取食时间延长，获毒率逐渐提高，24 h后若、成虫获毒率分别达到50.0％和25.9％。成虫及若虫最短接毒期均为30 min，随着接毒取食时间延长，接毒率逐渐提高，24 h后接毒率为42.9％和54.3％。病毒在虫体内的循回期为6～14 d，多数为8～12d；循回期后，多数个体终身传毒，但部分个体呈间歇性传毒，间歇期为2～6 d。\n 3.与健株相比，染病水稻植株的挥发性气味对无毒白背飞虱成虫具有更强的引诱能力。在嗅觉选择试验中，60.0％飞虱选择病株，仅26.7％选择健株，另有13.3％不选择。这种选择偏好性在雌雄虫间不存在显著差异。\n 4.水稻病株与健株挥发物化学组份存在显著差异。利用固相微萃取法收集水稻挥发物，采用气相色谱-质谱联用仪共检测到14种主要化学成分，包括萜类和烃类物质各4种，酮类化合物2种，其他化合物4种。其中病株和健株相同的组分有12种；比对结果表明，水稻受SRBSDV侵染后，3种萜类化合物和4种烃类化合物的释放量明显下降，这可能是导致病株对白背飞虱引诱力增加的物质基础。\n 上述研究结果为SRBSDV防控对策的制订提供了理论依据，并为病害成灾机理的解析提供了新的线索。

关键词：水稻黑条矮缩病毒水稻挥发物传播介体寄主选择行为传毒特性

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番茄斑萎病毒和水稻黑条矮缩病毒CP和RdRp的转基因烟草构建

番茄斑萎病毒和水稻黑条矮缩病毒CP和RdRp的转基因烟草构建

引用

作者：顾珂山东农业大学

学位级别：硕士

水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)可侵染水稻、玉米、小麦等禾本科作物,引起水稻黑条矮缩病、玉米粗缩病等病害。其基因组有10条双链RNA(S1-S10),S1编码RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp),S10编码外壳蛋白(CP)。番茄斑... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)可侵染水稻、玉米、小麦等禾本科作物,引起水稻黑条矮缩病、玉米粗缩病等病害。其基因组有10条双链RNA(S1-S10),S1编码RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp),S10编码外壳蛋白(CP)。番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)能够侵染70科900多种植物,病害在世界范围内都有分布。其基因组包括三条单链RNA(L、M和S);RNA L为负义RNA,其互补链编码RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp),RNA S为双义RNA,其互补链编码核衣壳蛋白(N)。这两种病害均可造成严重的生产危害和经济损失,为进一步对这两种RNA病毒进行分子生物学水平研究,本研究旨在构建含有TSWV和RBSDV CP和RdRp蛋白的转基因烟草,尝试建立其反向遗传学体系。基于双元载体pROKⅡ,构建了分别含有RBSDV和TSWV CP和RdRp的pROKⅡ-TS-CP、pROKⅡ-TS-CP-8H、pROKⅡ-RB-CP、pROKⅡ-RB-CP-8H、pROKⅡ-TSRdRp、pROKⅡ-TS-RdRp-8H、pROKⅡ-RB-RdRp、pROKⅡ-RB-RdRp-8H等8个不带His标签或带His标签的转基因载体。采用农杆菌介导的叶盘法分别将8个载体转化普通烟(Nicotiana tabacum,NC89),普通烟叶片经过预培养、共培养、选择培养,筛选出抗性愈伤组织,将获得不定芽转入生根培养基获得完整的再生植株。通过DNA、RNA及蛋白水平检测表明,已得到含有TSWV CP(带有His标签)和RBSDV CP(带有His标签)的单价普通烟,其他单、双价转基因烟草正在培养和生长中。

关键词：反向遗传学体系番茄斑萎病毒水稻黑条矮缩病毒 CP RdRp 转基因

来源：评论

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受体类蛋白1调控寄主应答水稻黑条矮缩病毒侵染机制的研究

受体类蛋白1调控寄主应答水稻黑条矮缩病毒侵染机制的研究

引用

作者：侯士辉安徽农业大学

学位级别：硕士

植物在长期的进化过程中形成了多层次的防御反应来抵抗外界病原物的入侵。其中,质膜上的模式识别受体类蛋白(receptor like protein,RLP)在识别外界的真菌、细菌、病毒等相关分子模式的过程中扮演着重要的作用,然而由于RLP在细胞胞内缺... 详细信息

植物在长期的进化过程中形成了多层次的防御反应来抵抗外界病原物的入侵。其中,质膜上的模式识别受体类蛋白(receptor like protein,RLP)在识别外界的真菌、细菌、病毒等相关分子模式的过程中扮演着重要的作用,然而由于RLP在细胞胞内缺乏关键的激酶结构域并不能直接将信息传递至胞内,需要与相应的配体激酶相互结合形成复合物才能将信号分子传递至胞内,进而激活一系列的生化反应引起植物的免疫反应。本研究中,我们发现水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)侵染水稻后会显著诱导OsRLP1基因(>LOC＿Os06g04830)的表达,利用OsRLP1相关突变体研究其在病毒侵染过程中的作用,发现OsRLP1通过与受体激酶OsSOBRI1的互作参与病原相关分子触发的免疫反应(PAMP-triggered immunity,PTI)。主要结果如下:1.本实验室前期研究发现RBSDV侵染水稻后诱导了OsRLP1基因的上调表达,表明OsRLP1基因可能在RBSDV侵染过程中发挥了重要的作用。本实验通过构建OsRLP1的相关转基因水稻,进行人工接毒RBSDV研究OsRLP1在水稻防御病毒侵染中的作用。结果表明,与对照组日本晴(NIP)相比,过表达株系OE-RLP1的发病症状轻,发病率低,病毒含量少,而CRISPR/cas9敲除突变体株系osrlp1-cas则呈现出相反的结果。说明OsRLP1基因正向调控水稻对RBSDV侵染的抗性。2.进一步探究OsRLP1抗病的分子机制,即检测RBSDV侵染后PTI相关基因的表达,发现RBSDV侵染的水稻,水稻体内的PTI通路相关基因OsWRKY70、OsMPK3、OsMPK6、OsKS4、OsPAL显著性上调,而在OsRLP1敲除突变体中,这些基因不被诱导。flg22处理野生型水稻后发现PTI途径的相关基因OsWRKY70、OsKS4、OsPAL表达上调,而flg22处理Osrlp1-cas突变体后PTI相关基因没有被诱导,说明OsRLP1可能会参与激活PTI途径相关基因的上调。在拟南芥中研究表明受体激酶SOBIR1通常是受体类相关蛋白和激酶的关键配体之一。本研究通过双分子荧光互补实验发现OsRLP1和OsSOBIR1蛋白互作,并进一步探究OsSOBIR1在PTI途径中的作用。与野生型水稻植株对照相比,flg22处理的OsSOBIR1缺失突变体ossob-cas体内PTI途径的相关基因OsWRKY70、OsKS4、OsPAL并没有被诱导,说明OsSOBIR1可能参与PTI途径相关基因的上调。3.研究了OsSOBIR1基因在病毒侵染中的作用。对OsSOBIR1的缺失突变体ossob-cas株系人工接毒RBSDV,与对照相比,病毒侵染的ossob-cas株系更为矮小,发病率更低;实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹实验检测水稻体内的病毒含量,结果表明ossob-cas突变体中病毒含量也显著低于对照NIP,说明SOBIR1突变后降低了水稻对RBSDV的抗性。综上所述,本研究对OsRLP1相关突变体和OsSOBIR1突变体进行人工接毒实验发现OsRLP1及其互作蛋白OsSOBIR1正调控病毒对水稻的侵染,进一步研究病毒侵染过程中PTI途径的相关基因发生变化,证明了OsRLP1通过与受体激酶OsSOBIR1相互作用参与PTI途径,这些结果将为今后筛选新的抗病品种和制定更好的防治病毒病策略提供新的思路。

关键词：水稻黑条矮缩病毒受体类蛋白1 受体激酶OsSOBIR1 病原相关分子模式触发的免疫反应

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原核表达双链RNA抗水稻黑条矮缩病毒和水稻条纹病毒研究

原核表达双链RNA抗水稻黑条矮缩病毒和水稻条纹病毒研究

引用

作者：孙润泽山东农业大学

学位级别：硕士

水稻是一种重要的粮食作物,水稻的高产稳产对于保障粮食安全有重要的战略意义。水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf disease, RBSDV)和水稻条纹病毒(Rice stripe virus, RSV)是危害水稻的两种主要病毒病害,每年给水稻生产带来... 详细信息

水稻是一种重要的粮食作物,水稻的高产稳产对于保障粮食安全有重要的战略意义。水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf disease, RBSDV)和水稻条纹病毒(Rice stripe virus, RSV)是危害水稻的两种主要病毒病害,每年给水稻生产带来巨大经济损失。目前我国水稻病毒病防治主要以化学防治为主。而化学防治又存在诸如农药残留,污染生态环境和诱发传毒介体抗药性等问题。RNA介导的病毒抗性(RNA-mediated virus resistance)指依托于基因工程技术,构建包含病毒基因发夹RNA的植物表达载体,转化植物,以抵抗病毒侵染。目前利用该策略已转化获得多种抗病毒转基因植物。RNA介导的病毒抗性具有表型近乎免疫、抗性持久、生物安全性高等特点。尽管如此,由于公众出于对转基因植物生态风险和食品安全性的考虑,抗病毒转基因植物的应用仍然受到极大地限制。用细菌等原核生物表达病毒dsRNA处理植物,通过RNA沉默技术抵御病毒侵染,为我们提供另一条有效途径。本研究选取RBSDV和RSV的外壳蛋白基因(Coat Protein, CP)作为靶序列,利用PCR技术分别扩增两个CP基因的中间区域长度为400bp的cDNA片段,分别构建发夹RNA (hpRNA)结构的原核表达载体,转入大肠杆菌M-JM1091acY菌株中,经IPTG诱导,均可表达400bp的dsRNA。对单一变量温度、IPTG终浓度、诱导时间进行初步筛选,然后优化组合三个变量,进行诱导表达优化实验。结果显示,dsRNA的最适表达条件是在0.4mmol/L IPTG和32℃条件下,诱导3h, dsRNA的相对表达量最大。在病毒传毒介体飞虱迁飞时期即秧田期,用稀释不同倍数的表达载体菌液破碎液喷施水稻幼苗,进行水稻田间病毒防效实验。统计结果显示,喷施终浓度2.4×10-3μg/μL pGEM-RBSDVCP400表达载体菌液破碎液的水稻发病率为25.1%,喷施终浓度2.4×10。μg/μL pGEM-RSVCP400dsRNA表达载体菌液破碎液的水稻发病率为11.7%,与同组其他稀释浓度相比发病率最低；而喷施TE缓冲液和水的对照组发病率分别为56.1%和62.8%；表明原核表达双链RNA可以有效地抵抗RBSDV和RSV的侵染。Northern blot检测显示,用原核表达dsRNA处理的水稻植株中,可以分别检测到RBSDV和RSV的siRNA,表明抗性是由RNA介导的。

关键词：水稻黑条矮缩病毒水稻条纹病毒原核表达双链RNA RNA沉默

来源：评论

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芜菁花叶病毒的种群遗传学与水稻黑条矮缩病毒山东分离物的分子特性

芜菁花叶病毒的种群遗传学与水稻黑条矮缩病毒山东分离物的分子特...

引用

作者：陈佳山东农业大学

学位级别：硕士

芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)为世界性分布的病毒,在28个国家和地区中TuMV的危害性仅次于黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaic virus,CMV),是侵染蔬菜作物的第二大病毒。水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarfvirus,RBSDV)引起玉米粗缩病,给我国玉米生产造成了严重损失。本研究测定了2007～2008年两年间山东省十字花科蔬菜上58个TuMV分离物3′-端基因组(包括部分NIb、完整CP和部分3′-UTR)序列,扩增产物长度为1082 bp,其中包含28 bp NIb序列、867 bp CP序列及187 bp非编码区序列(3′-UTR)。CP基因编码288个氨基酸。将这58个TuMV分离物CP基因与GenBank上下载的122个TuMV中国分离物的CP基因进行系统进化分析,发现中国TuMV分离物可以分为3个组,分别为basal-BR组、Asian-BR组和world-B组。basal-BR组分离物只在山东省、河北省、浙江省和河南省发现。 basal-BR组可进一步分为3个亚组,basal-BRⅡ亚组是泰安和潍坊萝卜上TuMV分离物的主流株系。basal-BRⅢ亚组分离物只在山东泰安发现,并且呈爆发趋势。中国的和日本的basal-BRⅠ亚组和basal-BRⅡ亚组分离物分别属于同一个种群,而中国和日本的basal-BRⅢ亚组分离物分别属于两个不同的种群。对2005年～2008年间泰安和潍坊地区萝卜上TuMV分离物进行核苷酸多样性分析发现,2007年泰安地区萝卜上TuMV分离物CP编码区所承受的选择压力最小,2006年潍坊地区萝卜上TuMV分离物CP编码区所承受的选择压力最大。对台湾、四川、山东、云南、浙江和北京这6个省市的TuMV分离物进行核苷酸多样性分析发现,四川省的TuMV分离物CP基因所处的选择压力是这6个省市中最大的,而浙江分离物CP基因所处的选择压力最小。利用RT-PCR技术,从山东省临沂和泰安两地表现矮化、粗缩病症状的玉米上扩增到水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)4个分离物S10片段,克隆了该基因并测定了其核苷酸序列。扩增片段长1801 bp,其中5′-UTR为21 bp,3′-UTR长度为103 bp,中间为1677 bp的开放阅读框(22-1698),编码558个氨基酸的衣壳蛋白。在根据S10片段序列构建的系统树中,这4个分离物和GenBank中的其它14个RBSDV分离物可分为A、B两组,其中A组又可分为两个亚组。重组分析发现Ly-m2可能是由Zhjs和Ly-ml重组得来的。

关键词：芜菁花叶病毒水稻黑条矮缩病毒种群统计学核苷酸多样性系统进化

来源：评论

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应用酵母双杂交系统分析水稻黑条矮缩病毒蛋白间相互作用

应用酵母双杂交系统分析水稻黑条矮缩病毒蛋白间相互作用

引用

作者：庞艳苹中国农业大学

学位级别：硕士

蛋白质是生命功能的物质基础，揭示蛋白与蛋白间的相互作用，已成为揭示蛋白质组复杂体系与蛋白质功能模式的先导。\n 本文采用酵母双杂交技术检测水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)蛋白间的相互作用。通过RT-PCR扩增ORF开放阅读框的编码序列... 详细信息

蛋白质是生命功能的物质基础，揭示蛋白与蛋白间的相互作用，已成为揭示蛋白质组复杂体系与蛋白质功能模式的先导。\n 本文采用酵母双杂交技术检测水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)蛋白间的相互作用。通过RT-PCR扩增ORF开放阅读框的编码序列，扩增的片断分别与质粒载体pGBKT7和pGADT7连接重组为诱饵质粒和靶蛋白质粒。检测转化酵母AH109的诱饵质粒是否具有自激活发生以及重组诱饵蛋白的毒性。结果发现只有重组质粒pGBKT7-S7-2具有自身激活作用，因此不能用做酵母双杂交筛选。将pGBKT7和pGADT7的重组质粒共转化酵母AH109检测蛋白间是否具有相互作用，通过SD/-Leu-Trp-His-Ade培养基筛选得到了pGBKT7-S9-1和pGADT7-S9-1，pGBKT7-S10和pGADT7-S10的阳性克隆，然后用β-半乳糖苷酶印膜法检测阳性克隆内LacZ报告基因的表达，PCR扩增阳性克隆，进一步验证了阳性克隆的正确性，从而筛选出了具有自身相互作用的S9-1和S10基因编码的蛋白。

关键词：酵母双杂交水稻黑条矮缩病毒蛋白质相互作用

来源：评论

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抗水稻条纹病毒（RSV）无选择标记转基因水稻的培育与水稻黑条矮缩病毒（RBSDV）外壳蛋白多克隆抗体的制备

抗水稻条纹病毒（RSV）无选择标记转基因水稻的培育与水稻黑条矮...

引用

作者：姜雅元山东农业大学

学位级别：硕士

水稻条纹叶枯病和水稻黑条矮缩病是在水稻上普遍发生、危害严重的病毒病。水稻条纹叶枯病病的病原为水稻条纹病毒（Rice stripe virus, RSV）。RSV侵染水稻后，心叶褪绿、出现捻转，枯叶呈圈弧状下垂，严重时心叶枯死，最终导致水稻产... 详细信息

水稻条纹叶枯病和水稻黑条矮缩病是在水稻上普遍发生、危害严重的病毒病。水稻条纹叶枯病病的病原为水稻条纹病毒（Rice stripe virus, RSV）。RSV侵染水稻后，心叶褪绿、出现捻转，枯叶呈圈弧状下垂，严重时心叶枯死，最终导致水稻产量明显降低，甚至绝产。水稻黑条矮缩病的病原为水稻黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus，RBSDV）。感染RBSDV的水稻在生长早期比正常植株分蘖多，出现明显矮缩、叶色浓绿、叶脉产生白色蜡质短条状突起，感病植株即使存活到成熟，也表现为生长严重受阻。两种病毒均由灰飞虱持久性传播。近年来，水稻条纹叶枯病和水稻黑条矮缩病在各地有不同程度的流行，给水稻生产造成严重损失。RNA介导的病毒抗性（RNA-Mediated VirusResistance，RMVR）是近年来发展的一种抗病毒基因工程策略，通过降解侵染的病毒RNA，使入侵的病毒不能在植物体内复制积累，从而使转基因植物达到抗病毒目的。选择标记基因的应用为植物抗病毒基因工程提供了便利的选择体系，然而选择标记基因对环境和生物的潜在威胁也引起了公众的担忧，影响转基因技术产业化发展。培育无选择标记的转基因植物是解决抗性标记基因安全性问题的有效途径之一。另一方面，在对田间病毒病害流行规律和抗病育种方面的研究中，均需要快速、灵敏和准确的检测方法，由于RBSDV在寄主植株中不稳定、提纯难度大，难以获得高质量的抗血清。通过原核表达并纯化病毒外壳蛋白，可制备高效率的抗血清，建立准确灵敏的检测体系，为田间样品的大量检测提供基础。本研究利用双T-DNA系统，以RSV CP基因中间400bp片段为靶序列构建hpRNAi植物表达载体，转化水稻愈伤组织，获得了无选择标记基因的抗RSV水稻新种质，为抗RSV水稻育种奠定基础。克隆了大小为1801bp的RBSDV CP基因全长序列，原核表达RBSDV CP蛋白，蛋白经纯化免疫家兔获得了灵敏度高、特异性强的多克隆抗血清，可广泛用于田间样品的大量检测。主要研究结果和结论如下：（1）抗RSV无选择标记转基因水稻的培育以获得的RSV CP基因为模板，PCR扩增RSV CP基因中间400nt片段。将扩增的片段反向插入双T-DNA植物表达载体pCAMBIA-1300DT中的PLD基因内含子两侧，构建了hpRNAi植物表达载体pDTRSVCP。经PCR检测和酶切鉴定表明双T-DNA表达载体构建成功。将构建的植物表达载体pDTRSVCP利用冻融法导入农杆菌EHA105，通过农杆菌介导转化临稻10愈伤组织，经过潮霉素B筛选和PCR鉴定，获得15株潮霉素抗性T0代转基因植株，有7株同时含有hpt基因和RSV CP基因。将同时含有标记基因hpt和RSV CP基因的T0代转基因植株自交，获得的T1代转基因植株中hpt基因和RSV CP基因发生分离，其中4个株系只含有RSV CP基因。将获得的T1代分离株系自交产生T2代植株，获得了无选择标记的、目的基因稳定遗传的临稻10转基因植株。对获得T2代无选择标记转基因植株进行RSV抗性检测，结果显示获得2个高抗RSV的转基因株系，植株的感病率均在5%以下，低于野生型对照植株（感病率为38%）。对获得的高抗转基因植株进行Southern和Northern杂交分析。Southern结果显示，目的基因以低拷贝整合于水稻基因组中；Northern结果显示，抗RSV转基因植株中RNA积累量明显低于同类感病植株，转基因植株均检测到siRNA存在，表明转基因植株的病毒抗性是由RNAi介导的。（2）水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白多克隆抗体的制备以提取的山东济宁感染RBSDV水稻总RNA为模板，反转录获得cDNA。通过RBSDV CP特异引物扩增得到RBSDV CP基因。将RBSDV CP基因插入原核表达载体pET30-a(+)，利用大肠杆菌BL21（DE3）成功表达了融合组氨酸标签的His-RBSDV CP蛋白。用纯化的His-RBSDV CP融合蛋白免疫家兔，获得了多克隆抗血清。ELISA检测结果显示，抗血清的效价为1:81000；Western blot鉴定结果显示，多克隆抗血清能与感染RBSDV的水稻植株提取液中的病毒外壳蛋白发生特异反应，而阴性对照无目的条带，表明制备的多克隆抗血清灵敏度高、特异性强，可广泛用于实验室及田间样品的大量检测。

关键词：水稻条纹病毒水稻黑条矮缩病毒 RNA干扰无选择标记转基因水稻多克隆抗血清

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水稻黑条矮缩病毒冰冻毒源的活化方法

水稻黑条矮缩病毒冰冻毒源的活化方法

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作者：李莉王锡锋董海波李红伟周广和刘艳吴蓓蕾 100193 北京市海淀区圆明园西路2号

本发明涉及“水稻黑条矮缩病毒冰冻毒源的活化方法，”属于生物技术领域。本发明把带有水稻黑条矮缩病毒的叶片冰冻保持活性，再喂食介体昆虫使其带毒，再由介体昆虫将水稻黑条矮缩病毒传播给健康植株，使植物病毒冰冻毒源活化，本发明... 详细信息

标准号: CN101775373B

本发明涉及“水稻黑条矮缩病毒冰冻毒源的活化方法，”属于生物技术领域。本发明把带有水稻黑条矮缩病毒的叶片冰冻保持活性，再喂食介体昆虫使其带毒，再由介体昆虫将水稻黑条矮缩病毒传播给健康植株，使植物病毒冰冻毒源活化，本发明的方法可以按需接种，非常简单易行，为昆虫传播植物病毒提供了一种新的策略。

关键词：水稻黑条矮缩病毒昆虫植物病毒毒源介体简单易行生物技术领域活化方法健康植株活化传播叶片接种

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