检索结果-内蒙古大学图书馆

临床输血与检验 2022年第3期24卷 308-314页

作者：牛思颖徐嘉婕徐梦瑶张议丹夏利军江淼苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所国家卫健委血栓与止血重点实验室215007 苏州大学苏州医学院苏州大学附属独墅湖医院

目的研制一种合适的体外模型,用以观察病理血管条件(包括狭窄、血流紊乱、静脉瓣膜受损等)下血小板在血管壁的黏附功能。方法本研究设计了一种改良的平板流动小室装置,以不同剪切力、不同血管管腔直径对生理及病理状态下血小板的黏附进... 详细信息

目的研制一种合适的体外模型,用以观察病理血管条件(包括狭窄、血流紊乱、静脉瓣膜受损等)下血小板在血管壁的黏附功能。方法本研究设计了一种改良的平板流动小室装置,以不同剪切力、不同血管管腔直径对生理及病理状态下血小板的黏附进行了观测,同时对流经小室但未黏附的血小板进行聚集功能检测。结果带有荧光标记血小板的外周血以正常静脉流速流过胶原包被的流动小室,约5~8 min可观察到血小板呈片状黏附于管壁,最大血小板覆盖面积约60%;使用针对血小板黏附功能的抑制剂SZ-2能显著抑制血小板的黏附。同样的血小板在局部狭窄管腔和存在血管分支的管腔中黏附面积增大;流经局部狭窄管腔的血小板聚集率明显高于流经正常管腔的血小板。结论改良型平板流动小室能较好地模拟生理和血管病理条件下的血流状态,对于检测血小板功能、监测抗血栓药物疗效有较高的应用价值。

关键词：血小板黏附血小板聚集流动小室

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体外呼吸道上皮细胞流动小室细菌黏附模型的建立及初步应用研究

体外呼吸道上皮细胞流动小室细菌黏附模型的建立及初步应用研究

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作者：王若茜陆军军医大学

学位级别：硕士

研究背景及目的：　　鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)是医院感染重要病原菌，属机会致病菌，黏附性强是其主要特点，一旦定植难以清除。Ab定植和感染的主要部位是人体呼吸道，与上皮细胞的黏附是第一步，因此对其在呼吸道上... 详细信息

研究背景及目的：　　鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)是医院感染重要病原菌，属机会致病菌，黏附性强是其主要特点，一旦定植难以清除。Ab定植和感染的主要部位是人体呼吸道，与上皮细胞的黏附是第一步，因此对其在呼吸道上皮细胞的黏附开展深入研究有助于临床防治其感染。目前用于研究呼吸道上皮细胞与细菌黏附的体外模型通常采用24孔培养板模型，该模型虽操作简便，但存在培养环境封闭、不能模拟体内动态环境和无法实时观察等局限性。因此我们需建立一种能模拟体内动态环境，并且可方便实时观察的体外研究模型。　　流动小室(flow-chamber)是常用于体外观察和定量细菌生物膜(bacterial biofilm)形成的经典模型，与培养板模型相比，其结构开放并能动态观察，同时可避免细菌由于重力作用沉积对细菌生物膜的影响。目前尚未见其用于研究细菌在宿主细胞上的黏附，本研究拟通过在流动小室底部培养呼吸道上皮细胞，构建可用于研究细菌在宿主细胞上黏附的体外模型。　　该模型有望用于研究抗菌药物对细菌黏附行为影响的重要科学问题，既往的研究表明，亚抑菌浓度(sub-minimalinhibitory concentration,sub-MIC)抗菌药物可影响Ab的黏附行为，进而影响细菌的定植和感染的发生，最终影响感染的转归与结局。因此本研究将已建立的流动小室体外研究模型，初步评价亚-MIC抗菌药物对临床耐药Ab在呼吸道上皮黏附的影响，为进一步研究在感染治疗过程中细菌对细胞黏附的机制奠定基础。　　研究目的：　　建立能模拟体内环境、用于细菌与宿主细胞黏附研究的体外模型;将该模型初步应用于亚-MIC抗菌药物对Ab黏附呼吸道上皮细胞的影响。　　研究方法：　　第一部分体外呼吸道上皮细胞细菌黏附模型的建立　　1.流动小室模型的构建　　模型的建立以人呼吸道上皮细胞（HBE）、鲍曼不动杆菌（ATCC17978）标准菌株为研究对象，以流动小室为研究载体，通过在其底部培养一层HBE细胞，给以一定的接种细菌并静置1h后，接入流动系统，启动蠕动泵使培养液从供液瓶流出，流经气泡捕捉器和流动小室，最终流入收集瓶内，构建用于流动状态下细菌在细胞上初始黏附的体外模型。　　***细胞培养参数的确定　　HBE细胞培养参数分为两个部分进行确定：（1）静止状态。HBE细胞在静止状态下培养，参数包括培养液中血清的浓度、细胞培养温度、细胞培养时间和细胞的接种密度，以生长曲线确定HBE细胞在流动小室底部的生长周期;（2）流动状态。系统流动状态是实验研究的关键，以接入流动系统后HBE细胞的稳定性确定流动参数，其中流动相的流动时长和流速为考察的重要参数。　　3.流动系统参数的优化　　正交试验设计以贴壁细胞数量为指标，标准菌株ATCC17978在HBE上的黏附为研究对象，采用L9（34）正交试验对模型的重要参数流速、流动时间和流动相组分进行优化，确定流动小室中贴壁细胞数量最佳时的条件。　　4.模型中Ab在HBE细胞上黏附的观察和定量　　(1)荧光显微镜观察和定量　　采用SYTO9荧光标记ATCC17978，接入流动系统，流动1h后以荧光显微镜对细菌在宿主细胞上的黏附进行实时观察;获取图片后，采用ImageJ软件计算荧光强度，半定量HBE细胞上黏附的细菌数量。　　(2)平板菌落计数法定量Ab在HBE细胞上的黏附　　ATCC17978以2×108、108、5×107、2.5×107 CFU/ml接种量接种，接入流动系统1 h 后收集细胞，用细胞裂解液（0.25％胰酶和 0.2％ TritonX-100 等体积混合）200 μl处理细胞5 min，收集裂解液，稀释后涂布营养琼脂平板。　　同时以培养板黏附模型作对照，其方法为 24 孔培养板中铺满 HBE 细胞， ATCC17978以2×108、108、5×107、2.5×107 CFU/ml接种量接种，静止孵育1 h，使用细胞裂解液200μl处理细胞5 min，收集裂解液，稀释后涂布营养琼脂平板，计数。　　5. 模型中细胞免疫因子的检测　　实验组：将ATCC17978以2×108 CFU/ml的接种量感染流动小室内HBE细胞，静置1 h后接入流动系统，分别于流动30 min、60 min、90 min和120 min收集小室上清，以ELISA试剂盒对上清液中免疫因子TNF-α、IL-6和IL-8进行定量检测;以不接种细菌作为空白组。　　同时设置传统培养板模型作对照，相同处理方法，相同时间点测定 TNF-α、IL-6和IL-8。　　6. A549细胞和PAO1分别应用于该模型的适应性初步验证　　以A549细胞应用于该模型建立，同样的最优参数和实验方法与Ab进行黏附实验;以铜绿假单胞菌PAO1应用于该模型，于同样的最优参数和实验方法与HBE

关键词：流动小室呼吸道上皮细胞鲍曼不动杆菌细菌黏附细胞免疫

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流动小室制品微注塑过程的流痕形成问题研究

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工程塑料应用 2016年第9期44卷 62-65页

作者：黄兴谢迪皋许忠斌浙江大学化学工程与生物工程学院杭州310007 杭州鸿雁电器有限公司杭州310012

利用Moldflow模拟了流动小室的微注塑填充和保压过程,分析了不同尺寸参数的腔体中的压力和剪切速率分布。根据实验制品流痕仅存在于微结构处的特点,发现局部剪切增大导致的壁面滑移是流痕产生的主要原因,提出可通过减小注射速度、增加... 详细信息

利用Moldflow模拟了流动小室的微注塑填充和保压过程,分析了不同尺寸参数的腔体中的压力和剪切速率分布。根据实验制品流痕仅存在于微结构处的特点,发现局部剪切增大导致的壁面滑移是流痕产生的主要原因,提出可通过减小注射速度、增加制品总厚或改变浇口位置的方法消除流痕。研究结果表明,局部微结构的存在可能会对微注塑制品的产品质量产生显著的影响。

关键词：微注塑流动小室流痕数值分析

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一种检测猪红细胞免疫粘附功能的循环检测系统及方法

一种检测猪红细胞免疫粘附功能的循环检测系统及方法

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作者：尹伟侯震范阔海孙娜孙盼盼孙耀贵李宏全 030801 山西省晋中市太谷县杨家庄

本发明公开了一种检测猪红细胞免疫粘附功能的循环检测系统及方法，该系统包括：流动小室、垫圈、流动相储液瓶、蠕动泵、硅胶软管以及设置有载玻片的细胞培养皿，所述垫圈垫于所述载玻片边缘上，所述流动小室盖于垫圈上；再以硅胶软管... 详细信息

标准号: CN113533134B

本发明公开了一种检测猪红细胞免疫粘附功能的循环检测系统及方法，该系统包括：流动小室、垫圈、流动相储液瓶、蠕动泵、硅胶软管以及设置有载玻片的细胞培养皿，所述垫圈垫于所述载玻片边缘上，所述流动小室盖于垫圈上；再以硅胶软管将流动小室、流动相储液瓶、蠕动泵依次相连，构成循环检测系统；所述流动相储液瓶内注入免疫粘附致敏GFP‑***的猪红细胞悬液。本发明提供的检测猪红细胞免疫粘附功能的循环检测系统及方法，构建了一套循环检测体系，可用于流动相流速、剪切力以及最大保持时间等工作参数的检测和分析。

关键词：循环检测系统流动小室猪红细胞储液瓶流动相垫圈粘附硅胶软管蠕动泵流动相流速细胞培养皿工作参数循环检测依次相连剪切力载玻片种检测检测玻片构建可用悬液致敏分析

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体外呼吸道上皮细胞细菌黏附模型的建立

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第三军医大学学报 2018年第11期40卷 973-978页

作者：王若茜枉前孙凤军刘耀张镭李晓宇夏培元陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院药剂科重庆400038

目的基于流动小室的构架,建立一种用以研究细菌在呼吸道上皮细胞黏附的体外模型。方法以2 mg/mL牛胶原蛋白预包被流动小室后,接种1×10~5个HBE细胞,含20%血清的RPMI1640培养基,37℃,5%CO_2孵箱培养24 h铺满底部后用于实验;以流动小... 详细信息

目的基于流动小室的构架,建立一种用以研究细菌在呼吸道上皮细胞黏附的体外模型。方法以2 mg/mL牛胶原蛋白预包被流动小室后,接种1×10~5个HBE细胞,含20%血清的RPMI1640培养基,37℃,5%CO_2孵箱培养24 h铺满底部后用于实验;以流动小室中细胞数量为评价指标,正交设计考察流速、流动时长和流动相成分对细胞模型的影响,筛选最优实验条件;以正交实验结果为条件,细菌黏附量为指标,与常规用于细菌细胞黏附的培养板方法相比较,分别于2×10~8、10~8、5×10~7、2.5×10~7CFU/mL接种浓度下与细胞进行黏附实验,判定流动小室是否为细菌细胞黏附研究的可靠模型;以SYTO9荧光标记细菌的方法表征黏附于细胞的细菌量。结果优化得到最佳实验条件,影响因素主次为流速>流动时长>流动相组成,方差分析结果显示,流速和流动时长影响因素有显著差异(P<0.05),流动相组成无显著差异(P>0.05)。荧光染色后,该模型可实现细菌在呼吸道上皮细胞上黏附的荧光实时观察;细菌黏附的定量结果显示,随着感染复数增大,流动小室模型与常规培养板方法均检测出黏附细菌的增多,且呈线性关系;但同一感染复数下常规培养板方法所检测出的黏附菌量与流动小室模型相比显著增多(P<0.05)。结论在适宜的流速、流动时长下,该模型可用于研究细菌在呼吸道上皮细胞上黏附,并且较常规培养板方法具有更贴近体内环境、准确度高、可实时观察等优点。

关键词：流动小室细菌上皮细胞黏附

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一种检测猪红细胞免疫粘附功能的循环检测系统及方法

一种检测猪红细胞免疫粘附功能的循环检测系统及方法

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作者：尹伟侯震范阔海孙娜孙盼盼孙耀贵李宏全 030801 山西省晋中市太谷县杨家庄

标准号: CN113533134A

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一种模拟体内流体力学环境的实验设备及方法

一种模拟体内流体力学环境的实验设备及方法

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作者：黄国富段素娟柳星 330000 江西省南昌市象山北路128号

本发明涉及一种模拟体内流体力学环境的实验设备及方法，属于生物医学领域。所述设备的组件包括平板流动小室装置、定时开关、蠕动泵、真空泵、加热垫圈、储液瓶和水浴锅。本发明提供的一种模拟体内流体力学环境的实验设备及方法，不需... 详细信息

标准号: CN109628307A

本发明涉及一种模拟体内流体力学环境的实验设备及方法，属于生物医学领域。所述设备的组件包括平板流动小室装置、定时开关、蠕动泵、真空泵、加热垫圈、储液瓶和水浴锅。本发明提供的一种模拟体内流体力学环境的实验设备及方法，不需要额外的二氧化碳供给来维持生理pH值，且可实现稳定的用于对细胞等培养物加载流体切应力刺激，整个装置无需放置于培养箱操作，一方面大大降低了操作难度，另一方面很好解决了气瓶供气的不稳定性，整个实验可重复性好。

关键词：流体力学环境实验设备体内二氧化碳供给生物医学领域不稳定性定时开关加热垫圈可重复性流动小室组件包括储液瓶培养物培养箱切应力蠕动泵生理pH 水浴锅真空泵流体加载气瓶供气细胞刺激

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烟曲霉生物膜体外流动模型的建立及绿原酸对其干预作用

烟曲霉生物膜体外流动模型的建立及绿原酸对其干预作用

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作者：李冰广西医科大学

学位级别：硕士

目的:筛选能在体外流动模型中形成稳定烟曲霉生物膜的最佳培养条件参数。建立烟曲霉生物膜体外流动模型,并将其与同期静止培养的烟曲霉生物膜模型作对比,比较两培养模型中烟曲霉生物膜的形成能力,分析其应用价值。探索流动状态下金银花... 详细信息

目的:筛选能在体外流动模型中形成稳定烟曲霉生物膜的最佳培养条件参数。建立烟曲霉生物膜体外流动模型,并将其与同期静止培养的烟曲霉生物膜模型作对比,比较两培养模型中烟曲霉生物膜的形成能力,分析其应用价值。探索流动状态下金银花活性成分绿原酸（CRA）及其联合两性霉素B（AMB）对烟曲霉生物膜的破坏作用。方法:以本课题组前期体外静止模型实验中经结晶紫染色法鉴定为成膜能力较优的三株烟曲霉菌株（A.f 4、A.f 7、A.f 8）,25℃、30℃、37℃的温度条件,RPMI-1640、RPMI-1640+10%胎牛血清（FBS）、DMEM、DMEM+10%FBS为培养基,分别以浓度为1×10～5/ml、1×10～6/ml、1×10～7/ml的烟曲霉孢子接种于flow chamber流动装置中,光学显微镜及荧光显微镜下观察烟曲霉的生长情况,记录孢子萌芽时间、粘附能力、生长速度、菌丝生长情况等,筛选出烟曲霉的最佳培养条件参数。以该条件参数建立曲霉生物膜体外流动模型,并建立同期烟曲霉生物膜的静止模型,用FITC-Canavalia ensiformis（FITC-Con A）染液对各个生长阶段（8h、16h、24h、48h、72h）的烟曲霉生物膜进行胞外基质（ECM）染色,在激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）下观察并摄取烟曲霉生物膜的三维（3D）图像,COMSTAT软件定量分析生物膜3D图像,重复测量方差分析方法比较两模型不同时间点生物膜的平均厚度、生物量、基质覆盖率、平均扩散距离、粗糙系数、表面积与生物量比等生物膜的生长动力学指标。建立稳定的烟曲霉生物膜体外流动模型,分为空白组（加菌,不加药）、CRA组、AMB组、CRA+AMB组。于建模48h后分别按上述分组加入相应药物干预,空白组不干预。药物作用24h后,CLSM观察并摄取生物膜形态变化3D图像,并用COMSTAT软件对上述图像进行定量分析,以获取各组生物膜的平均厚度、生物量、粗糙系数、表面积与生物量比等指标,以单因素方差分析方法比较各组上述指标的差异。结果:（1）以37℃的RPMI-1640液体培养基为营养源,将烟曲霉4号菌株以1×10～6/ml的孢子接种浓度在flow chamber装置中培养,镜下可见孢子粘附良好,6-8h萌芽,长出45度分支,菌丝可正常延长,16h初现单层菌丝交叉成网格状结构,24h菌丝较为密集,随后胞外基质逐渐增多。CLSM观察体外流动模型和静止模型可发现,两模型中烟曲霉的生物膜随着时间的进展,菌丝逐渐增多,并伴随菌丝周围的胞外基质的增多。COMSTAT软件定量分析生物膜3D图像提示:流动模型中,BF的生物量由8h的（0.173±0.043）μm3/μm2逐渐上升到72h的（7.634±1.721）μm3/μm2;平均厚度由8h的（0.128±0.056）μm逐渐上升到72h的（11.589±2.093）μm;粗糙系数由8h的（1.972±0.016）逐渐下降到72h的（0.656±0.158）。静止模型中BF的生物量由8h的（0.210±0.090）μm3/μm2逐渐上升到72h的（18.602±1.123）μm3/μm2;平均厚度由8h的（0.153±0.065）μm逐渐上升到72h的（26.342±1.064）μm;粗糙系数由8h的（1.973±0.016）逐渐下降到72h的（0.397±0.085）。BF的生物量、平均厚度、基质覆盖率和平均扩散距离均随着培养时间的延长而升高,粗糙系数、表面积与生物量比随着培养时间的延长而降低。相同时间点下对比两模型的定量指标提示,静止模型形成的BF的生物量、平均厚度、基质覆盖率和平均扩散距离较流动模型的高,差异有统计学意义,P<0.05;静止模型生物膜的粗糙系数和表面积与生物量比较流动模型的低,前者差异有统计学意义,P<0.05。后者差异无统计学意义,P>0.05。（2）建立烟曲霉生物膜体外流动模型48h后,加入药物干预24h,荧光染色后CLSM观察胞外基质,结果提示:与空白组相比,单用AMB时胞外多糖和菌丝密度均无明显变化;单用绿原酸时菌丝光滑,胞外多糖减少,菌丝呈网格状;两者联用后,菌丝皱缩、断裂,菌丝密度和胞外基质均明显减少。COMSTAT软件分析提示:各组的生物量、平均厚度、粗糙系数和平均扩散距离的差别均有统计学意义,P<0.05;AMB组与空白组的生物量、平均厚度、平均扩散距离比较,差异无统计学意义,P>0.05;CRA组较空白组低,差异有统计学意义,P<0.05;CRA与AMB联用后生物量进一步降低,P<0.05。而粗糙系数则反之。结论:本实验使用flow chamber流动系统成功建立了烟曲霉生物膜体外流动模型。其中,4号烟曲霉、1×10～6/ml的孢子接种浓度、37℃、RPMI-1640培养基都是本实验中造模

关键词：烟曲霉生物膜流动小室绿原酸两性霉素B

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耐高压蒸汽灭菌,可调控压力与剪应力的流动小室系统

耐高压蒸汽灭菌,可调控压力与剪应力的流动小室系统

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作者：不公告发明人 100029 北京市朝阳区樱花东路2号中日友好医院临床医学研究所404室

本实用新型是一种耐高压蒸汽灭菌，可调节压力和剪应力的流动小室系统。由平行板流动小室、蠕动泵、硅胶管、储液试管，带连接头的橡胶塞，多通转接头，压力表或压力传感器，CO2培养箱，恒温水浴锅，显微镜组成。本实用新型采用耐高压... 详细信息

标准号: CN202011878U

本实用新型是一种耐高压蒸汽灭菌，可调节压力和剪应力的流动小室系统。由平行板流动小室、蠕动泵、硅胶管、储液试管，带连接头的橡胶塞，多通转接头，压力表或压力传感器，CO₂培养箱，恒温水浴锅，显微镜组成。本实用新型采用耐高压蒸汽灭菌的聚碳酸酯材料加工的平行板流动小室与不锈钢板结合使流动小室密封性良好，便于进行无菌实验研究；采用水浴锅加热方式对储液试管加热可以保证温度控制的有效性。本系统采用不同多压轮蠕动泵推动灌流液，由灌流液流速和平行板流动小室的几何尺度决定剪应力；采用手动气泵向体系中泵入气体达到设定的压力，该压力由于系统的密封性而得以维持。本实用新型可广泛应用于模拟机体生理与病理压力条件下，不同流动剪应力对细胞的影响，是开展流变学和生物力药理学研究的有力实验装置。

关键词：流动小室耐高压蒸汽灭菌剪应力密封性蠕动泵储液平行压力表聚碳酸酯材料流动小室系统恒温水浴锅流动剪应力压力传感器药理学研究泵入气体不锈钢板带连接头机体生理几何尺度加热方式实验装置试管加热手动气泵无菌实验压力条件硅胶管可调节培养箱生物力水浴锅橡胶塞转接头试管压轮显微镜病理细胞研究

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可施加电和剪切力刺激的具有微拓扑结构的平板流动腔

可施加电和剪切力刺激的具有微拓扑结构的平板流动腔

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作者：吕永钢董单娟邹杨 400044 重庆市沙坪坝区沙正街174号

本发明公开了一种可施加电和剪切力刺激的具有微拓扑结构的平板流动腔，由三层平板和两层垫片叠加组成，上平板(2)设置有流体进出口，上垫片(3)设置有导流槽(4)，中平板(5)设置矩形狭缝(6)，下垫片(10)设置有流动小室(18)，中平板(5)在... 详细信息

标准号: CN102936567B

本发明公开了一种可施加电和剪切力刺激的具有微拓扑结构的平板流动腔，由三层平板和两层垫片叠加组成，上平板(2)设置有流体进出口，上垫片(3)设置有导流槽(4)，中平板(5)设置矩形狭缝(6)，下垫片(10)设置有流动小室(18)，中平板(5)在位于流动小室(18)上方设有电极板(7)，下平板(11)在位于流动小室(18)下方放置电极板(16)，流动小室(18)四边分别放置一对电极(14)和电极(17)，电极板(16)由薄片(22)、PDMS膜(23)和石墨烯薄膜(24)组成，且在表面有微拓扑结构，在对细胞(19)施加不同模式和强度电和剪切力刺激的同时，实现对细胞(19)进行微拓扑结构调控，该装置结构简单紧凑，且可靠。

关键词：流动小室拓扑结构电极板垫片电极剪切力四边流体进出口石墨烯薄膜细胞矩形狭缝装置结构刺激导流槽流动腔叠加调控

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