检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2003年第11期23卷 858-861页

作者：李玉华李海玲吴永林陈宣洪黄玉仙俞永新保井孝太郎成都生物制品研究所 610063 中国药品生物制品检定所日本国东京都神经科学综合研究所

目的　通过研究流行性乙型脑炎活疫苗减毒株基因稳定性 ,从分子水平证实流行性乙型脑炎活疫苗的遗传稳定性。方法　分析流行性乙型脑炎活疫苗主种子、工作种子及其相应的疫苗病毒E蛋白基因核苷酸和氨基酸序列 ,并与其强毒株和基因库中... 详细信息

目的　通过研究流行性乙型脑炎活疫苗减毒株基因稳定性 ,从分子水平证实流行性乙型脑炎活疫苗的遗传稳定性。方法　分析流行性乙型脑炎活疫苗主种子、工作种子及其相应的疫苗病毒E蛋白基因核苷酸和氨基酸序列 ,并与其强毒株和基因库中乙脑病毒减毒株 (AF315 119)比较。结果　乙脑活疫苗主种子、工作种子及其相应的疫苗病毒的E蛋白基因核苷酸序列完全相同。这些病毒E蛋白的氨基酸序列与基因库中乙脑病毒弱毒株 (AF315 119)比较显示第E4 4 7位点氨基酸有差异。结论　乙脑病毒活疫苗减毒株遗传学特性稳定。

关键词：流行性乙型脑炎病毒活疫苗株 SA14-14-2 基因稳定性 E蛋白

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流行性乙型脑炎病毒E蛋白多表位肽在毕赤酵母中分泌表达及其免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 485-489,507页

作者：钟登科黄艺珠魏建超康乐曹瑞兵周斌陈溥言上海农林职业技术学院上海201600 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后的E蛋白多表位肽(MP)序列克隆入酵母表达载体p PICZα-A,构建分泌型重组酵母表达质粒p PICZ-MP,经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母X-33,阳性重组子经甲醇... 详细信息

为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后的E蛋白多表位肽(MP)序列克隆入酵母表达载体p PICZα-A,构建分泌型重组酵母表达质粒p PICZ-MP,经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母X-33,阳性重组子经甲醇诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白(rMP)。通过测定rMP免疫小鼠的抗体水平、抗体亚型、中和抗体和CTL,以评价该多表位疫苗在小鼠模型上的免疫原性。结果表明:成功构建了表达JEV E蛋白多表位抗原的重组酵母菌株X33(pPICZ-MP),能分泌表达多表位肽r MP。纯化后的r MP免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应,其中和抗体水平、CTL活性均与活病毒疫苗组差异不显著(p>0.05),且能保护小鼠免受致死量JEV的攻击。构建的JEV E蛋白多表位疫苗具有良好的免疫原性,能够刺激小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答反应,为流行性乙型脑炎多表位疫苗研制提供新的思路。

关键词：流行性乙型脑炎病毒多表位疫苗毕赤酵母免疫原性

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流行性乙型脑炎病毒在二倍体细胞上的适应性

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中国生物制品学杂志 2007年第7期20卷 500-502页

作者：王辉张月兰张颖张晋杨阳张占银罗书荣钟书声北京天坛生物制品股份有限公司北京100024

目的研究流行性乙型脑炎病毒在二倍体(2BS)细胞上的传代适应性,确定在2BS细胞上培养乙脑病毒的条件和方法。方法通过病毒毒力和免疫原性检测,观察在不同培养条件下乙脑病毒在2BS细胞上的增殖情况。结果pH值在7·4～7·6之间、... 详细信息

目的研究流行性乙型脑炎病毒在二倍体(2BS)细胞上的传代适应性,确定在2BS细胞上培养乙脑病毒的条件和方法。方法通过病毒毒力和免疫原性检测,观察在不同培养条件下乙脑病毒在2BS细胞上的增殖情况。结果pH值在7·4～7·6之间、人血白蛋白含量为0·2%、病毒稀释度为1:1000时,病毒维持液培养的病毒滴度最高。在2BS细胞上传50代的病毒滴度均在7·0logLD50以上,且差异无显著意义。连续传代后病毒的免疫原性下降。结论建议用于建立病毒种子库的流行性乙型脑炎病毒,在2BS细胞上传代不应超过3代。

关键词：流行性乙型脑炎病毒二倍体细胞传代适应性

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流行性乙型脑炎病毒(JEV)全长感染性克隆的制备及恢复病毒的获得

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病毒学报 2003年第4期19卷 313-319页

作者：黄莺贾丽丽孙志伟王志伟俞炜源俞永新军事医学科学院生物工程研究所蛋白质工程室北京100071 中国药品生物制品检定所疫苗一室北京100050

根据JEV病毒减毒株SA14-14-2基因组序列,设计覆盖全长的4对重叠引物,以提取的活疫苗病毒RNA为模板,RT-PCR扩增出4个片段,并克隆到质粒载体中,进一步构建两个半端分子克隆,然后将全长cDNA序列克隆到一个新改造的低拷贝质粒载体pBR-kpn中... 详细信息

根据JEV病毒减毒株SA14-14-2基因组序列,设计覆盖全长的4对重叠引物,以提取的活疫苗病毒RNA为模板,RT-PCR扩增出4个片段,并克隆到质粒载体中,进一步构建两个半端分子克隆,然后将全长cDNA序列克隆到一个新改造的低拷贝质粒载体pBR-kpn中,构建我国流行性乙型脑炎病毒(JEV)基因组全长cDNA克隆。经过体外转录后得到的转录子转染BHK-21细胞,重新获得JEV的恢复病毒,通过生物学特性、分子生物学水平、蛋白水平等几个方面对恢复病毒进行鉴定。结果获得了稳定的全长cDNA克隆,转录子转染BHK-21细胞后,第4天开始出现细胞病变(CPE),第6～7天时CPE为 ,经过Vero细胞进一步放大培养后,间接免疫荧光实验和RT-PCR实验均为阳性。证实了构建的JEV的全长cDNA克隆有感染性,为进一步的研究奠定了基础。

关键词：流行性乙型脑炎病毒感染性克隆恢复病毒质粒载体

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流行性乙型脑炎病毒结构蛋白编码基因的重组构建

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中国医科大学学报 2005年第5期34卷 385-387页

作者：冯国和王玉梅刘宁刘沛王占英竹上勉中国医科大学附属第二医院感染科辽宁沈阳110004 日本金泽医科大学综合医学研究所

目的:建立流行性乙型脑炎病毒(JEV)C、prME,E等结构蛋白编码基因克隆。方法:病毒感染C6/36细胞,RT-PCR法依次获取该病毒结构蛋白基因并进行DNA测序分析,PCR克隆法将PCR产物分别构建于真核表达载体pcDNA 3.1的BamH I与EcoR I酶切位点并... 详细信息

目的:建立流行性乙型脑炎病毒(JEV)C、prME,E等结构蛋白编码基因克隆。方法:病毒感染C6/36细胞,RT-PCR法依次获取该病毒结构蛋白基因并进行DNA测序分析,PCR克隆法将PCR产物分别构建于真核表达载体pcDNA 3.1的BamH I与EcoR I酶切位点并依次命名为pJC、pJME与pJE,通过DNA测序、电泳以及限制性内切酶分析加以鉴定。结果:JEV C、prME与E基因片段分别为380、2 001以及1 500 bp,各基因测序结果与发表的JEV JaGAr-01株相对应序列相一致,从重组质粒释出的插入子分别与各基因大小相符合。结论:pJC、pJME与pJE重组质粒分别含有C、prME与E蛋白编码基因。

关键词：流行性乙型脑炎病毒重组质粒 DNA测序限制性内切酶分析

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流行性乙型脑炎病毒E蛋白多表位肽在毕赤酵母中分泌表达及其免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2017年第4期39卷 296-300,507页

作者：钟登科黄艺珠魏建超康乐曹瑞兵周斌陈溥言上海农林职业技术学院上海201600 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为构建流行性乙型脑炎病毒（JEV） E蛋白多表位疫苗，本研究将人工合成的优化后E蛋白多表位肽（MP）序列克隆于酵母表达载体pPICZα-A中，构建分泌型重组酵母表达质粒pPICZ-MP后电转化导于毕赤酵母X-33中，重组酵母菌组子经甲醇诱导表... 详细信息

为构建流行性乙型脑炎病毒（JEV） E蛋白多表位疫苗，本研究将人工合成的优化后E蛋白多表位肽（MP）序列克隆于酵母表达载体pPICZα-A中，构建分泌型重组酵母表达质粒pPICZ-MP后电转化导于毕赤酵母X-33中，重组酵母菌组子经甲醇诱导表达重组蛋白（rMP）。将其免疫小鼠后，通过测定rMP免疫小鼠的抗体水平、抗体亚型、中和抗体和CTL，以评价该多表位疫苗在小鼠模型的免疫原性。结果显示正确构建了表达JEV E蛋白多表位抗原的重组酵母菌株X33 （pPICZ -MP），并分泌表达多表位肽rMP ；纯化后的rMP免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应，其中和抗体水平、CTL活性均与活病毒疫苗组无显著差异（p〉0.05），而且能保护小鼠免受致死量JEV的攻击。上述结果表明本研究以酵母菌表达的JEV E蛋白多表位疫苗具有良好的的免疫原性，能够刺激小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答反应，为流行性乙型脑炎多表位疫苗研制提供了新的思路。

关键词：流行性乙型脑炎病毒多表位疫苗毕赤酵母免疫原性

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流行性乙型脑炎病毒NS4A蛋白基因的克隆及其在大肠埃希菌的表达

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中国医科大学学报 2005年第6期34卷 497-499页

作者：冯国和王玉梅刘宁王占英刘沛竹上勉中国医科大学附属第二医院感染科辽宁沈阳110004 日本金泽医科大学综合医学研究所

目的:克隆及表达流行性乙型脑炎病毒(JEV)NS4A蛋白基因。方法:JEV JaGAr-01株感染C6/36细胞,RT-PCR法获取JEV NS4A蛋白基因并采用AB I PRSMTM310 Genetic Analyzer进行DNA测序分析,PCR克隆方法将RT-PCR产物构建于原核表达载体PET-3 a的B... 详细信息

目的:克隆及表达流行性乙型脑炎病毒(JEV)NS4A蛋白基因。方法:JEV JaGAr-01株感染C6/36细胞,RT-PCR法获取JEV NS4A蛋白基因并采用AB I PRSMTM310 Genetic Analyzer进行DNA测序分析,PCR克隆方法将RT-PCR产物构建于原核表达载体PET-3 a的BamH I与EcoR I酶切位点并命名为pNS4A,电泳进行限制性内切酶分析。结果:JEV NS4A蛋白基因大小为446 bp,DNA测序与发表的JEV JaGAr-01株相对应的DNA序列相符合,酶切后从重组质粒释出的插入子与JEV NS4A蛋白基因大小相一致。pNS4A在原核细胞内表达的特异蛋白分子量约16 kDa,与JEV NS4A蛋白理论计算相一致。结论:获取的JEV NS4A蛋白基因来自于JaGAr-01野生株,pNS4A在大肠埃希菌中表达的蛋白产物为JEV NS4A蛋白。

关键词：流行性乙型脑炎病毒 pNS4A DNA测序限制性内切酶分析蛋白表达

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流行性乙型脑炎病毒GSS株prM、E和NS1蛋白基因的克隆及在非复制型痘苗病毒中的表达

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病毒学报 2003年第3期19卷 210-216页

作者：王文玲陆柔剑陆振华王世峰付士红邓瑶李仁清辛伟梁国栋阮力中国疾病预防控制中心病毒病预防与控制研究所 100052

克隆流行性乙型脑炎(乙脑)病毒野毒(JEV)GSS株前膜蛋白信号序列、前膜蛋白(prM)、包膜蛋白(E)、非结构蛋白-1(NS1)和非结构蛋白NS2a的编码基因,并与非复制型痘苗病毒载体NTV进行同源重组,构建了乙脑病毒非复制型重组痘苗病毒疫苗株NTVA(... 详细信息

克隆流行性乙型脑炎(乙脑)病毒野毒(JEV)GSS株前膜蛋白信号序列、前膜蛋白(prM)、包膜蛋白(E)、非结构蛋白-1(NS1)和非结构蛋白NS2a的编码基因,并与非复制型痘苗病毒载体NTV进行同源重组,构建了乙脑病毒非复制型重组痘苗病毒疫苗株NTVA(E/L)JEV。通过PCR和Southernblot检测证明,在非复制型痘苗病毒中有乙脑病毒prM信号序列、prM、E、NS1和NS2a基因的插入:Westernblot检测证明,重组病毒可以在细胞内成功地表达prM、E和NS1蛋白,并可将prM、E和NS1蛋白分泌到细胞培养上清中;免疫荧光检测证明,E和NS1蛋白主要分布在细胞膜上。电镜下可见分泌到细胞外的病毒样颗粒。

关键词：流行性乙型脑炎病毒蛋白基因克隆非复制型痘苗病毒表达

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流行性乙型脑炎病毒在自然界的保存与扩散及传播媒介

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中华实验和临床病毒学杂志 2008年第2期22卷 140-142页

作者：邓淑珍张海林李金梅梁国栋云南省地方病防治所云南省病毒立克次体研究中心云南大理671000 大理学院公共卫生学院中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所脑炎室传染病预防控制国家重点实验室

流行性乙型脑炎（简称乙脑）国际上称为日本脑炎（Japanese encephalitis），是由蚊虫等吸血昆虫叮咬感染乙脑病毒引发的急性传染病。病死率较高，而且后遗症严重，对人类健康危害较大。乙脑也是一种人兽共患的自然疫源性疾病。本病主... 详细信息

流行性乙型脑炎（简称乙脑）国际上称为日本脑炎（Japanese encephalitis），是由蚊虫等吸血昆虫叮咬感染乙脑病毒引发的急性传染病。病死率较高，而且后遗症严重，对人类健康危害较大。乙脑也是一种人兽共患的自然疫源性疾病。本病主要分布在亚洲和西太平洋地区^[1,2]，

关键词：流行性乙型脑炎病毒传播媒介自然界自然疫源性疾病扩散保存乙脑病毒人类健康危害

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流行性乙型脑炎病毒一步法RT-LAMP检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2010年第10期32卷 773-776页

作者：杜鹃宋永刘立科华荣虹黑龙江大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150080 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立一种简便、快速、灵敏、特异的乙型脑炎病毒(JEV)检测方法,本研究根据GenBank中登录的25株流行性JEV基因组序列,设计3对特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,优化反应体系,建立了一步法反转录-LAMP(RT-LAMP)检测方法。该方法检测时... 详细信息

为建立一种简便、快速、灵敏、特异的乙型脑炎病毒(JEV)检测方法,本研究根据GenBank中登录的25株流行性JEV基因组序列,设计3对特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,优化反应体系,建立了一步法反转录-LAMP(RT-LAMP)检测方法。该方法检测时间短,灵敏度比常规RT-PCR方法高,可检测出103TCID50/0.2mL JEV;特异性强,对猪细小病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒等常见猪病毒均无交叉反应。结果判定时只需要在扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料,就可以直接在可见光或紫外光下观察颜色变化。该方法简便快捷,省时省力,是一种适用于基层实验室快速、准确检测流行性JEV的方法。

关键词：流行性乙型脑炎病毒反转录环介导等温扩增技术

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