检索结果-内蒙古大学图书馆

河南农业科学 2009年第7期38卷 127-129页

作者：林建国胡瑛王常高蔡俊湖北工业大学生物工程学院工业微生物湖北省重点实验室湖北武汉430068

从海洋双rna病毒(MABV)Y-6毒株基因组中克隆到VP2 e基因,将其连接到GST融合表达载体pGEX-6P-1,在大肠杆菌中表达,并对其表达条件进行了优化。通过温度和诱导物浓度优化试验,经SDS-PAGE和Western-Blot检测表明,在温度为37℃、IPTG浓度为0... 详细信息

从海洋双rna病毒(MABV)Y-6毒株基因组中克隆到VP2 e基因,将其连接到GST融合表达载体pGEX-6P-1,在大肠杆菌中表达,并对其表达条件进行了优化。通过温度和诱导物浓度优化试验,经SDS-PAGE和Western-Blot检测表明,在温度为37℃、IPTG浓度为0.1mmol/L时,表达的融合蛋白含量最高,占细菌总蛋白的28.6%。

关键词：海洋双rna病毒 VP2e基因克隆表达

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水生动物双rna病毒的研究进展

引用

武夷科学 2014年第1期30卷 162-167页

作者：葛均青龚晖陈超福建省农业科学院生物技术研究所福建福州350003

水生动物双rna病毒(Aquabirnavirus,ABV)隶属双rna病毒科Birnaviridae,是一类可引起水生动物爆发传染性病毒病的病原,在世界范围内给水产养殖业造成了巨大损失,其代表种为传染性胰脏坏死病毒(Infectious Pancreatic Necrosis Virus,IPNV... 详细信息

水生动物双rna病毒(Aquabirnavirus,ABV)隶属双rna病毒科Birnaviridae,是一类可引起水生动物爆发传染性病毒病的病原,在世界范围内给水产养殖业造成了巨大损失,其代表种为传染性胰脏坏死病毒(Infectious Pancreatic Necrosis Virus,IPNV)。ABV的基因组包括两段分节的rna,以负链rna为模板进行病毒基因组复制,编码5种成熟的蛋白;本文结合ABV的功能基因、致病机理、诊断检测及免疫防治等近年研究的热点做一综述,以期为研究者提供参考。

关键词：水生动物双rna病毒传染性胰脏坏死病毒海洋双rna病毒研究进展

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MABV VP2、VP3基因及SVCV G、M基因在家蚕细胞中的表达

MABV VP2、VP3基因及SVCV G、M基因在家蚕细胞中的表达

引用

作者：何时雨福建农林大学

学位级别：硕士

海洋双rna病毒（MABV）能够引起海洋生物尤其是鱼贝类生物的腹水病等，该病的暴发给海产养殖业带来巨大的经济损失。MABV隶属于双rna病毒科水生生物双rna病毒属，传染性胰腺坏死病毒（IPNV）是该属的代表种。VP2和VP3为MABV病毒的主要... 详细信息

海洋双rna病毒（MABV）能够引起海洋生物尤其是鱼贝类生物的腹水病等，该病的暴发给海产养殖业带来巨大的经济损失。MABV隶属于双rna病毒科水生生物双rna病毒属，传染性胰腺坏死病毒（IPNV）是该属的代表种。VP2和VP3为MABV病毒的主要结构蛋白，常用于该病毒的诊断和疫苗设计。鲤春病毒血症病毒（SVCV）引起的鲤春病毒血症（SVC）是一种急性、出血性、高致死性的传染性疾病，它的流行给各国特别是欧洲的水产养殖业带来了巨大的经济损失。近年来，该病已扩展到美洲和亚洲，成为鱼类重要的传染性疾病。SVCV隶属于弹状病毒科水泡性病毒属，G蛋白是其囊膜蛋白，M蛋白是其基质蛋白，二者都是病毒的主要结构蛋白，常用于该病毒的诊断和疫苗设计。本研究利用家蚕杆状病毒表达系统实现了MABV主要结构蛋白基因VP2e和VP3以及SVCV囊膜蛋白基因G和基质蛋白基因M在家蚕细胞中的表达。首先，以PCR扩增获得了VP2e、VP3及G蛋白、M蛋白基因；其次，与载体PMD19-T连接，验证正确后，再将其分别克隆到载体pFastBac HTB和pFastBacI上，获得了转移质粒pHTB-VP2e、pHTB-VP3以及pF1-G和pF1-M；然后，将转移质粒转化具家蚕杆状病毒（BmNPV）Bacmid的*** BmDH10Bac感受态细胞，经蓝白斑筛选，PCR验证后，获得了重组Bacmid His-VP2e/rBm、His-VP3/rBm以及G/rBm和M/rBm；最后，提取重组Bacmid DNA，利用脂质体转染家蚕Bm5细胞，获得了重组杆状病毒His-VP2e/vBm、His-VP3/vBm及G/vBm和M/vBm。收集感染病毒细胞，经SDS-PAGE、Western blot分析，表明，VP2e、VP3及G、M基因在家蚕细胞内成功进行了表达。这为进一步研究MABV VP2e、VP3和SVCV G蛋白、M蛋白的功能，开发快速诊断试剂盒及利用这些表达蛋白进行MABV和SVCV的疫苗研究奠定了研究基础。通过对SVCV G蛋白的生物信息学分析，我们发现其具有信号肽、跨膜域等，我们构建了表达SVCV G蛋白不同结构域片段的重组病毒Bacmid，为阐明G蛋白的结构域打下了研究基础。首先，将增强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因克隆至载体pcDNA3.1，构建载体pcDNA3.1-EGFP。然后，分别克隆G蛋白基因的不同片段至pcDNA3.1-EGFP，构建载体pcDNA3.1-EGFP-G、pcDNA3.1-EGFP-GA、pcDNA3.1-EGFP-GB、pcDNA3.1-EGFP-G(1-466)。再分别将EGFP-G、EGFP-GA、EGFP-GB、EGFP-G(1-466)等基因片段克隆至转移载体pFastBac I，构建转移质粒pF1-EGFP-G、 pF1-EGFP-GA、 pF1-EGFP-GB和pF1-EGFP-G(1-466)；提取转移质粒DNA，转化*** BmDH10Bac感受态细胞，获得了重组Bacmid EGFP-G/rBm、 EGFP-GA/rBm、 EGFP-GB/rBm和EGFP-G(1-466)/rBm；将进一步通过在家蚕细胞中融合表达这些基因片段及EGFP，明确SVCV G蛋白的信号肽、跨膜域等蛋白的结构域。

关键词：海洋双rna病毒 VP2e VP3 鲤春病毒 G蛋白 M蛋白家蚕杆状病毒表达系统

来源：评论

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海洋双rna病毒(MABV)vp2e和vp3基因在昆虫细胞中的高效表达

引用

农业生物技术学报 2006年第4期14卷 612-617页

作者：徐海君杨章女林建国张传溪浙江大学昆虫科学研究所杭州310029 浙江大学昆虫科学研究所

海洋双rna病毒(Marinebirnavirus,MABV)可引起多种海洋鱼贝的腹水病等病症。利用RT-PCR技术得到了MABVY-6株系A片段的cDNA,进而克隆了病毒的外壳蛋白VP2e的抗原决定簇区642bp片段(vp2e)和另一结构蛋白VP3编码区序列。通过转座作用构建... 详细信息

海洋双rna病毒(Marinebirnavirus,MABV)可引起多种海洋鱼贝的腹水病等病症。利用RT-PCR技术得到了MABVY-6株系A片段的cDNA,进而克隆了病毒的外壳蛋白VP2e的抗原决定簇区642bp片段(vp2e)和另一结构蛋白VP3编码区序列。通过转座作用构建了重组杆状病毒表达载体,在昆虫细胞中对VP2e和VP3进行了表达。SDS-PAGE检测和薄层扫描表明,VP2e和VP3与增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)融合蛋白表达量分别占整个昆虫细胞蛋白的15.8%和8.2%。用HisTag单抗和MABV病毒多抗对表达的VP2e融合蛋白进行Westernblot检测,结果表明表达产物具有很好的抗原性。同样,用HisTag单抗和VP3多抗对表达的VP3融合蛋白进行的Westernblot检测,证明融合蛋白表达正确,并且表达产物可溶,易于纯化。实验结果为该病毒结构蛋白和MABV疫苗研究提供了基础。

关键词：海洋双rna病毒 VP2e VP3 杆状病毒表达系统表达纯化

来源：评论

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