检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：谭小波广州医学院

学位级别：硕士

目的:研究APA微囊对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生长分化性状的影响,应用APA微囊技术将含有目的基因hBMP-2和Tet-On调控表达系统的BMSCs包裹后,在DOX诱导下调控表达hBMP-2蛋白,并证实所诱导表达的hBMP-2蛋白具有生物活性。为解决可调控hB... 详细信息

目的: 研究APA微囊对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生长分化性状的影响,应用APA微囊技术将含有目的基因hBMP-2和Tet-On调控表达系统的BMSCs包裹后,在DOX诱导下调控表达hBMP-2蛋白,并证实所诱导表达的hBMP-2蛋白具有生物活性。为解决可调控hBMP-2基因治疗骨缺损时,腺病毒载体转染异种或异属种子细胞移植所引起的免疫排斥反应提供实验支持。方法: 1.将Adeno-X-TRE-hBMP-2质粒转化感受态大肠杆菌中进行扩增。提取质粒,鉴定质粒后,用PacI内切酶消化构建线性化的Adeno-X-TRE-hBMP-2 DNA片段。 2.用Lipofectamine 2000将线性化Adeno-X-TRE-hBMP-2 DNA片段转染HEK293包装细胞,获得有感染能力的重组腺病毒颗粒。 *** Adeno-X TRE-βgal Control Virus Stock和BD Adeno-X Tet-On Virus Stock感染HEK293包装细胞扩增病毒;TCID50法( tissue culture infectious dose 50,TCID50法)测定病毒滴度。 4.通过对照组Adeno-X TRE-βgal与Adeno-X Tet-On病毒上清共感染BMSCs测定不同MOI值对应的吸光度,推测最佳MOI值。 5.分离培养BMSCs细胞,然后消化、传代、冻存第二代BMSCs细胞备用。 6.微囊化未转染的BMSCs细胞,并在微囊化后不同的时间点分别用荧光素二乙酸酯/溴化乙啶染色法(FDA/EB双染色法)测定微胶囊内细胞存活率及破囊后BMSCs细胞的生长分化特性。 7.在最佳MOI条件下,用重组的Adeno-X-TRE-hBMP-2与Adeno-X Tet-On病毒上清共感染BMSCs,用高压静电微囊发生仪将共感染的BMSCs包裹在APA微囊中,形成hBMP-2-BMSCs-微囊复合体。 8.分别用含浓度为1.0 ug/ml、10ug/ml、100 ug/ml、200 ug/ml和300 ug/ml的DOX培养液诱导hBMP-2-BMSCs-微囊复合体表达hBMP-2,然后通过WESTERN BLOTING法检测hBMP-2的表达并进行半定量,用ELISA法检测hBMP-2表达量与DOX诱导浓度与之间。 9.对DOX浓度为1.0 ug/ml时所分泌的hBMP-2诱导BMSCs成骨,用茜素红染色。结果: 1.酶切后凝胶电泳实验验证条带大小为2828bp的hBMP-2基因片段。 2.成功构建线性化重组Adeno-X-TRE-hBMP-2载体DNA片段。 3.获得较高滴度的Adeno-X-TRE-hBMP-2病毒颗粒,检测病毒滴度为3.2×108pfu/ml。 4.扩增大量的BD Adeno-X TRE-βgal Control Virus Stock及BD Adeno-X Tet-On Virus Stock病毒颗粒,检测滴度相同为1.0×108 pfu/ml。 5.成功分离、纯化、扩增BMSCs,APA微囊化BMSCs后细胞生长分化未改变,APA微囊内细胞存活率为70%-80%;破囊后细胞具有成骨潜力。 6.检测得到最佳MOI=60 pfu/cell。 7.在DOX的诱导下BMSCs-APA微囊复合体表达hBMP-2: 1)DOX在1.0ug/ml到200 ug/ml浓度范围内,随着浓度的增加,hBMP-2表达量增加。 2)DOX为300 ug/ml时,hBMP-2表达量有所下降。 8.成功运用BMSCs-APA微囊复合体所表达的hBMP-2诱导BMSCs成骨。结论: BMSCs细胞在APA微囊内存活良好,破囊以后其干细胞的生长分化特性未发生改变。在APA微囊内的hBMP-2修饰的BMSCs可在DOX诱导下实现hBMP-2高表达,DOX诱导浓度与hBMP-2表达呈剂量依赖关系,并证实在表达于细胞培养液的hBMP-2蛋白具有生物活性。

关键词：海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊骨形态发生蛋白 Tet-On表达系统骨缺损

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微囊化牛视网膜色素上皮细胞移植治疗伴Lewy小体形成帕金森病的实验研究

引用

中华神经外科杂志 2007年第10期23卷 783-786页

作者：刘学源杜望春蒋雨平洪震同济大学附属上海市第十人民医院神经科 200072 复旦大学附属华山医院神经科

目的观察微囊化牛视网膜色素上皮细胞(RPE)移植对伴Lewy小体形成帕金森病(PD)大鼠的治疗作用。方法用蛋白酶体选择性抑制剂lactacystin制作伴Lewy小体形成的PD模型;将微囊化牛RPE植入大鼠纹状体,移植分生理盐水对照组(NS)、RPE、空微囊(... 详细信息

目的观察微囊化牛视网膜色素上皮细胞(RPE)移植对伴Lewy小体形成帕金森病(PD)大鼠的治疗作用。方法用蛋白酶体选择性抑制剂lactacystin制作伴Lewy小体形成的PD模型;将微囊化牛RPE植入大鼠纹状体,移植分生理盐水对照组(NS)、RPE、空微囊(APA)及微囊化RPE(RPE-APA)四组;观察移植后旋转行为变化、纹状体中多巴胺(DA)和高香草酸(HVA)及酪氨酸羟化酶(TH)含量的变化。结果微囊化RPE的旋转行为在移植后第1周开始改善(改善程度为21.3%,与空微囊组相比P<0.05),第4周改善更加明显(改善程度为57.89%,与第1周相比P<0.05),并一直持续到第14周(改善程度为59.47%,与空微囊组相比P<0.05)。行为学改善的大鼠,纹状体内DA和HVA含量的变化同其行为学改善相符合。行为学有改善大鼠囊内细胞TH染色呈弱阳性,微囊周边的纹状体可见TH阳性纤维密度较空微囊组高。结论微囊化牛RPE脑内移植对伴Lewy小体形成PD大鼠有治疗作用。

关键词：帕金森病细胞移植牛视网膜色素上皮细胞海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠

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APA微囊细胞移植的免疫隔离作用

引用

四川解剖学杂志 2007年第4期15卷 38-40页

作者：蒋昌宇刘德明南昌大学医学院解剖教研室南昌330006

随着器官移植研究的深入,诸如移植物排斥反应、供体缺乏等一系列问题出现在人们面前。1980年,Lim等首次采用微囊免疫隔离技术进行胰岛微囊化移植研究,为人类解决这些问题提供了新思路。微囊化免疫隔离技术近些年取得了众多成就,目前研... 详细信息

随着器官移植研究的深入,诸如移植物排斥反应、供体缺乏等一系列问题出现在人们面前。1980年,Lim等首次采用微囊免疫隔离技术进行胰岛微囊化移植研究,为人类解决这些问题提供了新思路。微囊化免疫隔离技术近些年取得了众多成就,目前研究表明由海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)构成的微胶囊具有制作简便、体积小、生物相容性好等优点,[第一段]

关键词： APA微囊细胞移植免疫隔离作用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化免疫隔离技术移植物排斥反应胰岛微囊化生物相容性

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微囊化猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰的免疫隔离机制

引用

世界华人消化杂志 2005年第6期13卷 748-751页

作者：刘菲刘雁冰钟岚熊伍军赵中辛同济大学附属东方医院消化内科上海市200120 同济大学附属东方医院普外科上海市200120

目的:探讨微囊化猪肝细胞腹腔内移植对药物性肝衰大鼠的治疗作用,观察受体存活率、肝组织病理变化及大网膜的免疫隔离作用. 方法:以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)包裹乳猪肝细胞,体外观察APA微囊对NK细胞介导的细胞毒作用的隔离效... 详细信息

目的:探讨微囊化猪肝细胞腹腔内移植对药物性肝衰大鼠的治疗作用,观察受体存活率、肝组织病理变化及大网膜的免疫隔离作用. 方法:以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)包裹乳猪肝细胞,体外观察APA微囊对NK细胞介导的细胞毒作用的隔离效果.D-氨基半乳糖腹腔内注射诱导大鼠急性肝衰竭,48 h后将微囊化的猪肝细胞移植于大鼠腹腔内,观察移植大鼠存活率,免疫组化法检测大鼠大网膜内CD4、CD8、IgG和IgM的表达. 结果:微囊可有效保护囊内K562细胞不受NK细胞的杀伤.与裸肝细胞移植组相比,微囊化乳猪肝细胞移植组大鼠存活率显著提高(1wk存活率78.6% vs 66.7%, P=0.0 046;2 wk存活率42.9% vs 25.0%,P=0.0027, P<0.01).大网膜CD4、CD8、IgG表达较弱(P=0.0 342、P=0.0 197及P=0.0 445,P<0.05),而IgM表达无明显差异(P>0.05). 结论:APA微囊可有效隔离抗体及淋巴细胞介导的体液和细胞免疫反应.微囊化异种肝细胞移植可治疗大鼠急性肝衰,给予肝功能代谢支持,提高移植治疗效果.

关键词：免疫隔离机制细胞移植治疗海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化异种肝细胞移植肝细胞腹腔内移植 D-氨基半乳糖免疫组化法检测 APA微囊免疫隔离作用组织病理变化 K562细胞细胞免疫反应细胞介导存活率乳猪肝细胞

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微囊化人头皮毛乳头细胞体外培养及异种移植

引用

中华医学美学美容杂志 2005年第5期11卷 297-300页

作者：李宇蔡湘娜李国强林常敏纪影畅汕头大学医学院第一附属医院整形外科汕头515041 汕头大学医学院第一附属医院组织工程实验室汕头515041

目的探讨微囊化人头皮毛乳头细胞体外培养及异种移植的可行性,并对海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)微囊与海藻酸钠-BaCl2(barium-alginate,BA)微囊的物理、生物性能进行评价。方法采用“一步酶消化法... 详细信息

目的探讨微囊化人头皮毛乳头细胞体外培养及异种移植的可行性,并对海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)微囊与海藻酸钠-BaCl2(barium-alginate,BA)微囊的物理、生物性能进行评价。方法采用“一步酶消化法”分离、培养人头皮毛乳头细胞,分别用APA微囊与BA微囊包裹。对两种微囊的生物相容性、机械强度、免疫隔离效果及微囊内细胞活性进行比较。结果APA微囊生物相容性优于BA微囊(P<0.01),但机械强度低于BA微囊(P<0.01);成囊后短期BA微囊内细胞活性高于APA微囊(P<0.01),但APA微囊内细胞活性增高较快(P<0.05)。在微囊完整、表面无纤维化时,两种微囊均可起到良好的免疫隔离作用。结论微囊化人头皮毛乳头细胞可在体外及异种体内培养。综合评价APA微囊与BA微囊的利弊,在不同情况下选择不同的成囊方式是必要的。

关键词：毛囊毛乳头细胞培养微囊人头皮毛乳头细胞细胞体外培养异种移植微囊化海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠 APA微囊生物相容性一步酶消化法免疫隔离效果

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