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中国生化药物杂志 2012年第3期33卷 248-250页

作者：郑燕影魏群利南京军区南京总医院江苏南京210002 徐州医学院药学院临床药理教研室江苏徐州221009

目的建立附子总生物碱的提取工艺。方法通过正交试验,以制附子总生物碱含量为指标,考察料液比,提取时间和提取温度等工艺参数对总生物碱提取效果的影响。结果优选出的最佳提取条件为:附子粉加10倍量的55%乙醇,浸泡1 h,70℃回流提取2次,... 详细信息

目的建立附子总生物碱的提取工艺。方法通过正交试验,以制附子总生物碱含量为指标,考察料液比,提取时间和提取温度等工艺参数对总生物碱提取效果的影响。结果优选出的最佳提取条件为:附子粉加10倍量的55%乙醇,浸泡1 h,70℃回流提取2次,每次1.0 h。结论该提取工艺操作简单,无有毒有机溶剂残留,具有良好的可操作性。

关键词：消可宁制附子总生物碱提取工艺正交试验

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中药复方消可宁颗粒剂增加糖尿病大鼠微动脉抗氧化应激作用

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徐州医学院学报 2010年第12期30卷 840-843页

作者：王欣周士东闫长栋巩玉森魏群利柳红徐州医学院病理学教研室江苏徐州221002 西安电子科技大学校医院陕西西安710071 徐州医学院生理学教研室徐州医学院药学院

目的探讨消可宁颗粒剂对糖尿病大鼠微动脉氧化损伤的保护作用及机制。方法采用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型。糖尿病造模成功后21天,处死大鼠,无菌条件下取出肠系膜微动脉进行离体灌注,血管内分别给予1、3和5 g/L消可宁溶液,在培养箱... 详细信息

目的探讨消可宁颗粒剂对糖尿病大鼠微动脉氧化损伤的保护作用及机制。方法采用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型。糖尿病造模成功后21天,处死大鼠,无菌条件下取出肠系膜微动脉进行离体灌注,血管内分别给予1、3和5 g/L消可宁溶液,在培养箱中培养24、48、72 h后,用比色法检测各组肠系膜微动脉中超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)的活性。用Western blotting方法检测肠系膜微动脉中锰超氧化物歧化酶(Mn-superoxide dismutase,Mn-SOD)含量。结果糖尿病组大鼠肠系膜微动脉SOD活性、Mn-SOD含量较正常对照组低(P<0.05),经过不同浓度消可宁处理后SOD活性、Mn-SOD含量逐渐恢复,随着消可宁浓度增高和作用时间延长SOD活性则恢复较明显,消可宁浓度为5 g/L。培养72 h时Mn-SOD含量与正常对照组之间的差异无统计学意义。糖尿病组大鼠肠系膜微动脉XOD活性较正常对照组高(P<0.05),经过不同浓度消可宁处理后XOD活性逐渐降低,随着消可宁浓度增高和作用时间延长则XOD活性降低较明显(P<0.05)。结论糖尿病时微动脉发生氧化应激损伤,消可宁可以抵抗微动脉氧化应激损伤。其机制可能与消可宁可以有效地抑制糖尿病微动脉XOD活性,提高SOD活性和含量,减少氧自由基生成有关。

关键词：消可宁氧化应激糖尿病大鼠

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中药复方消可宁颗粒对糖尿病大鼠微动脉内皮细胞的保护作用及机制研究

中药复方消可宁颗粒对糖尿病大鼠微动脉内皮细胞的保护作用及机制...

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作者：王欣徐州医科大学

学位级别：硕士

目的:观察中药复方消可宁颗粒对糖尿病大鼠微动脉内皮细胞的保护作用,初步探讨消可宁是否具有保护血管内皮细胞的作用及可能机制。　　方法:1.采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)一次性腹腔注射(60mg/kg),制备糖尿病大鼠模型。2.无菌... 详细信息

目的:观察中药复方消可宁颗粒对糖尿病大鼠微动脉内皮细胞的保护作用,初步探讨消可宁是否具有保护血管内皮细胞的作用及可能机制。　　方法:1.采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)一次性腹腔注射(60mg/kg),制备糖尿病大鼠模型。2.无菌条件下分离正常及糖尿病大鼠肠系膜组织并在体式显微镜下仔细分离肠系膜一级动脉。糖尿病大鼠微动脉内分别给予1g/L、3g/L和5g/L消可宁,在培养箱中培养。3.给予不同大小切应力进行体外血管灌流,,收集灌流液,用DAN法检测各组微动脉内皮细胞NO释放量。4.生化法测定各组微动脉中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、黄嘌呤氧化酶(xanthineoxidase,XOD)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)及诱导型一氧化氮合酶(induce nitric oxide synthase,iNOS)活性。*** blot方法检测各组微动脉中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)和锰.超氧化物歧化酶(Mn-superoxide dismutase,Mn-SOD)蛋白表达。***染色方法观察各组微动脉内皮细胞形态学变化。　　结果:1.糖尿病组大鼠肠系膜微动脉内皮细胞NO释放量比正常对照组低(P＜0.05),经过不同浓度消可宁处理后NO释放量增加。同时随着血管切应力增加,各组大鼠微动脉内皮细胞NO释放量均逐渐增加。2.糖尿病组大鼠肠系膜微动脉SOD活性较正常对照组低(P＜0.05),经过不同浓度消可宁处理后SOD活性恢复,消可宁浓度高作用时间长则SOD活性恢复较明显,Western blot反映同样结果。3.糖尿病组大鼠肠系膜微动脉XOD活性较正常对照组高(P＜0.05),经过较高浓度消可宁作用较长时间后,XOD活性明显降低(P＜0.05)。4.与正常对照组相比,糖尿病组大鼠肠系膜微动脉TNOS活性下降、eNOS表达减少(P＜0.05),而iNOS活性与正常组的差异无统计学意义(P=0.93)。经过不同浓度消可宁处理后,TNOS活性增高,增加消可宁浓度延长作用时间对恢复TNOS活性作用明显(P＜0.05)。消可宁作用72h时,各浓度组eNOS蛋白表达增加。***染色:与正常对照组相比,糖尿病组血管内皮细胞肿胀,与血管内壁连接松散,大部分内皮细胞脱落于管腔内。消可宁作用72h时,1g/L消可宁处理组仍可见肿胀的内皮细胞,并脱落于管腔内;5g/L消可宁处理组血管内皮细胞脱落较少,仍见部分肿胀的内皮细胞,但大部分内皮细胞与正常对照组形态相似。　　结论:1.糖尿病时微动脉内皮细胞受到损伤,消可宁对内皮细胞有保护作用。2.消可宁可能通过恢复内皮细胞eNOS蛋白的活性与含量,增加内皮细胞NO释放,达到保护内皮细胞的目的。3.消可宁可以有效的抑制糖尿病微动脉XOD活性,提高SOD活性和含量,减少内皮细胞氧化损伤,保护血管内皮细胞。

关键词：中药复方消可宁氧化应激一氧化氮内皮细胞糖尿病

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消可宁颗粒减少ONOO^-形成保护高糖条件下内皮细胞的实验研究

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中华中医药学刊 2009年第11期27卷 2426-2428页

作者：赵凤辉巩玉森魏群利柳红徐州医学院病理教研室江苏徐州221002 南京军区南京总医院临床药理科江苏南京210002

目的:观察体外高糖培养条件下,消可宁颗粒对血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(induce nitric oxide synthase,iNOS)、一氧化氮(nitric oxide,NO)及过氧亚硝酸阴离子(peroxynitrite,ONOO-)的影响。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV-304,分常规培养组、高糖对照组和不同浓度消可宁组,检测NOS和NO的吸光度,计算出活力或含量。用免疫组织化学方法检测ONOO-生成的标记物一硝基酪氨酸(nitrotyrosine,NT)的表达。结果与高糖对照组比较,消可宁组eNOS活力明显增加,iNOS活力降低,NO含量下降,NT表达减少。并具有剂量与时间依赖性。结论:消可宁可以抑制iNOS活性,并降低NO含量,减少血管内皮细胞内ONOO-形成而发挥抗氧化作用。

关键词：人脐静脉内皮细胞消可宁一氧化氮一氧化氮合酶过氧亚硝酸阴离子

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消可宁防治2型糖尿病胰岛素抵抗的临床研究

消可宁防治2型糖尿病胰岛素抵抗的临床研究

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作者：扈东兵山东中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察以健脾补肾、化痰活血、清热解毒为组方原则的消可宁方对2型糖尿病胰岛素抵抗的防治效果并探讨其机理。方法:提出2型糖尿病胰岛素抵抗的病机为脾肾两虚为本,瘀血痰浊热毒阻滞为标,临床应以健脾补肾、化痰活血、清热解毒为主要... 详细信息

目的:观察以健脾补肾、化痰活血、清热解毒为组方原则的消可宁方对2型糖尿病胰岛素抵抗的防治效果并探讨其机理。方法:提出2型糖尿病胰岛素抵抗的病机为脾肾两虚为本,瘀血痰浊热毒阻滞为标,临床应以健脾补肾、化痰活血、清热解毒为主要治疗大法,据此精心挑选金代医家李东垣名方当归六黄汤加减而成消可宁方,并进行了临床疗效观察。按照WHO及国家卫生部有关标准制定了2型糖尿病胰岛素抵抗较为完善的诊疗评价标准,设对照组共观察2型糖尿病胰岛素抵抗患者60例。随机分为消可宁治疗组30例,降糖甲对照组30例,均以2个月为一个疗程。以患者症状体征、血糖、血糖面积、糖基化血红蛋白、胰岛素释放、胰岛素敏感指数、胰岛素抵抗指数、胰岛素面积、体重指数及腰臀围指数、血脂系列、血液流变学、炎性因子(TNF-a、IL-6)等为主要观察指标,进行了疗效观察和对比。结果:临床观察发现:①消可宁能明显改善患者的症状、体征,疗效明显优于对照组(P<0.05);②明显改善患者的血糖、血糖面积、糖化血红蛋白,治疗前后有显著性差异(P<0.01),且疗效优于对照组(P﹤0.01);③明显降低空腹、餐后胰岛素水平及胰岛素面积,并且随着上述指标的改善,胰岛素敏感指数明显升高,胰岛素抵抗指数显著下降,治疗前后自身对照有显著性差异(P<0.01),与对照组相比也有显著性差异(P<0.05);④明显降低患者体重、腰臀围指数,与治疗前相比,有显著性差异(P<0.01)。与对照组相比也有显著性差异(P<0.01);⑤明显降低患者的TC、TG、LDL-CH、VLDL-CH水平,升高HDL-CH水平,明显改善患者血液流变学各项指标,与治疗前相比有显著性差异(P<0.01),与对照组相比也有显著性差异(P<0.05);⑥明显降低患者炎性因子(TNF-a、IL-6)水平,与治疗前相比有显著性差异(P<0.01),与对照组相比也有显著性差异(P<0.01)。消可宁治疗组疾病综合总疗效为:显效率43.3%,有效率46.6%,无效率10%,总有效率90%。结论:“健脾补肾、化痰活血、清热解毒”的治法与2型糖尿病胰岛素抵抗的病机是相吻合的,以此为治则组成的消可宁可有效地防治2型糖尿病胰岛素抵抗的发生发展,值得深入研究和进一步开发。

关键词：消可宁 2型糖尿病胰岛素抵抗健脾补肾、化痰活血、清热解毒

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消可宁颗粒剂对高糖环境下内皮细胞的保护作用

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徐州医学院学报 2008年第10期28卷 678-681页

作者：巩玉森赵凤辉闫长栋魏群利柳红徐州医学院病理学教研室江苏徐州221002 徐州医学院生理学教研室江苏徐州221002 南京军区南京总医院药理科江苏南京210000

目的观察消可宁颗粒剂对高糖条件下培养的人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)的保护作用。方法苏木精-伊红染色观察体外培养的不同消可宁浓度下的ECV-304细胞形态学改变和四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定ECV-304细胞增殖活性。结果①高糖对照组EC... 详细信息

目的观察消可宁颗粒剂对高糖条件下培养的人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)的保护作用。方法苏木精-伊红染色观察体外培养的不同消可宁浓度下的ECV-304细胞形态学改变和四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定ECV-304细胞增殖活性。结果①高糖对照组ECV-304细胞生长抑制,变小变圆,出现不同程度的空泡变性。各消可宁组ECV-304细胞出现不同程度的细胞恢复。②80 g/L和100 g/L消可宁组可减轻高糖对ECV-304细胞的生长抑制,与高糖对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。结论高糖引起ECV-304细胞损伤,对其生长增殖具有明显的抑制作用。消可宁可有效减轻高糖对ECV-304细胞的损伤和生长抑制,从而保护内皮细胞。

关键词：消可宁内皮细胞高糖保护作用

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复方消可宁颗粒剂对高糖诱导的内皮细胞氧化应激的保护作用

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中国中西医结合肾病杂志 2008年第11期9卷 995-996页

作者：巩玉森闫长栋柳红赵凤辉魏群利徐州医学院病理学教研室徐州221000 南京军区南京总医院药理科南京210000

目的:观察消可宁颗粒剂对高糖培养的人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)黄嘌呤氧化酶(XOD)、超氧化物岐化酶(SOD)及超氧阴离子(O2-.)的影响。方法:体外培养ECV-304细胞,分空白对照组(Ⅰ)、高糖对照组(Ⅱ)和5个消可宁浓度递增组(Ⅲ～Ⅶ)。药... 详细信息

目的:观察消可宁颗粒剂对高糖培养的人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)黄嘌呤氧化酶(XOD)、超氧化物岐化酶(SOD)及超氧阴离子(O2-.)的影响。方法:体外培养ECV-304细胞,分空白对照组(Ⅰ)、高糖对照组(Ⅱ)和5个消可宁浓度递增组(Ⅲ～Ⅶ)。药物干预后,检测XOD、O2-.和SOD的吸光度,计算出活力。结果:各消可宁组XOD含量较高糖对照组显著下降,SOD活力明显增加及O2-.生成减少,两组比较有统计学差异(P<0.05)。结论:消可宁可能通过降低内皮细胞XOD、减少O2-.生成,增加SOD活力,从而抗御氧化应激,保护血管内皮。

关键词：消可宁内皮细胞黄嘌呤氧化酶超氧阴离子超氧化物岐化酶氧化应激

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中药复方消可宁颗粒对高糖引起血管内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

中药复方消可宁颗粒对高糖引起血管内皮细胞氧化损伤的保护作用及...

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作者：赵凤辉徐州医科大学

学位级别：硕士

目的: 观察中药复方消可宁颗粒对高糖培养人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)生长的影响，针对高糖对内皮细胞氧化损伤机制，初步探讨消可宁是否具有抗氧化应激保护血管内皮细胞的作用及可能机制。方法: 1.体外培养人脐静脉内皮细胞株(... 详细信息

目的: 观察中药复方消可宁颗粒对高糖培养人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)生长的影响，针对高糖对内皮细胞氧化损伤机制，初步探讨消可宁是否具有抗氧化应激保护血管内皮细胞的作用及可能机制。方法: 1.体外培养人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)，分为七组：常规培养组：葡萄糖浓度为5.5mM;高糖对照组：葡萄糖浓度为30mM;不同浓度消可宁组(消可宁浓度按生药计算，分别配制成终浓度为20g/L、40g/L、60g/L、80g/L、100g/L，葡萄糖浓度为30mM);分别培养12、24、48小时。 2.细胞HE染色，观察细胞的形态变化。 3.采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)比色法测定细胞增殖活性，观察高糖以及不同浓度消可宁对ECV-304细胞生长的影响。 4.生化测定细胞上清液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、超氧阴离子(supeoxide，O2)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase，XOD)及总一氧化氮合酶(total nitric oxide synthase，TNOS)、诱导型一氧化氮合酶(induce nitric oxidesynthase，iNOS)、一氧化氮(nitric oxide，NO)的活性或含量。 5.免疫组织化学法检测各组细胞中过氧亚硝酸阴离子(peroxynititrite，ONOO)生成标记物--硝基酪氨酸(nitrotyrosine，NT)。*** blot测定各组细胞上清液中内皮细胞型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达。结果: 1.各组内皮细胞形态观察，细胞培养48小时，高糖对照组细胞变小变圆，部分细胞脱落，随消可宁剂量增大，作用时间延长，上述现象逐渐减少。 ***实验结果显示：高糖引起ECV-304细胞生长抑制，消可宁则可减轻其抑制，但只有在消可宁作用48h时出现统计学意义，与常规培养组相比，高糖对照组及20～60g/L消可宁组细胞生长抑制率均较高，差异有统计学意义(t分别为4.5755，4.2092及3.2561，P<0.05或<0.01)。80、100g/L消可宁组减轻高糖对内皮细胞的生长抑制，差异具有统计学意义(t值分别为2.9077，3.5128;P<0.05)，而与常规培养组的差异无统计学意义(t=1.6678，1.0627;P>0.05)。 3.各组生化指标改变：(1)与常规培养组比较，其余各组内皮细胞SOD活力均减低，XOD活性及O2-均有升高，以高糖对照组尤为明显，各消可宁组SOD活力有所恢复，XOD活性及O2-较高糖对照组减低，并具剂量和时间依赖性。O2-与SOD和XOD的相关性分析显示，与SOD成负相关(r=-0.838，P<0.01)，与XOD呈正相关(r=0.606，P<0.01);(2)高糖对照组中eNOS活力降低、iNOS活力升高和NO产生增加最为明显，消可宁组细胞eNOS活力有所恢复，iNOS活力及NO得到有效控制，且具有剂量时间依赖性。 4.免疫细胞化学染色结果显示：与常规对照组比较，高糖对照组内皮细胞中NT的表达率高，随着消可宁浓度的增加，NT表达率逐渐减少，100g/L消可宁组细胞中NT表达率较常规对照组的差异均无统计学意义(P>0.05)。 *** blot蛋白测定结果显示：高糖对照组eNOS蛋白的含量最低并具统计学意义(P<0.05)，消可宁各组细胞总蛋白中eNOS蛋白的含量恢复或增加。结论: 1.高糖引起ECV-304细胞氧化损伤，对其生长具有明显抑制作用，并具有时间依赖性;而消可宁可以减轻高糖对内皮细胞的生长抑制，保护内皮细胞，并具有浓度和时间依赖性。 2.消可宁具有抗氧化作用，对高糖状态下ECV-304细胞保护机制可能为：(1)消可宁有效的抑制细胞内XOD活性、减少了O2-产生，同时提高了SOD活性，促进O2-清除;(2)消可宁在一定程度上能够恢复eNOS活性，抑制iNOS的活性，减少NO，继而明显减少ONOO-产生。

关键词：消可宁高糖 ECV-304 细胞氧化损伤

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消可宁早期防治糖尿病肾病的临床观察

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中国中西医结合肾病杂志 2007年第5期8卷 280-281页

作者：魏群利陆晓和汤淏刘翠萍刘超南京军区南京总医院南京210002 南京医科大学第一附属医院南京210029

目的观察消可宁早期防治糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的临床疗效。方法对符合纳入标准的患者,随机分为消可宁治疗组(以下简称消可宁组)和DN对照组(以下简称对照组)。对照组给予常规饮食、运动及降糖治疗,消可宁组在此基础上同... 详细信息

目的观察消可宁早期防治糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的临床疗效。方法对符合纳入标准的患者,随机分为消可宁治疗组(以下简称消可宁组)和DN对照组(以下简称对照组)。对照组给予常规饮食、运动及降糖治疗,消可宁组在此基础上同时给予消可宁口服液治疗,两组均观察治疗前后24h尿白蛋白排泄量。结果消可宁组临床总有效率显著高于对照组(P<0.05),24h尿白蛋白排泄量治疗后较治疗前明显减少(P<0.05),对照组无显著改变。结论消可宁可阻止或延缓早期糖尿病肾病的发生与发展。

关键词：糖尿病肾病 24 h尿白蛋白排泄量消可宁

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