检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：郑金娟延边大学

学位级别：硕士

背景:桦褐孔菌是一种非常珍贵的具备抗氧化、抗肿瘤、预防高血糖和抑炎等功能的药用真菌,本实验室已证明桦褐孔菌多糖(Inonotus obliquus polysaccharides,IOP)可抑制脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨噬细胞表达和分泌IL-6、TNF... 详细信息

背景:桦褐孔菌是一种非常珍贵的具备抗氧化、抗肿瘤、预防高血糖和抑炎等功能的药用真菌,本实验室已证明桦褐孔菌多糖(Inonotus obliquus polysaccharides,IOP)可抑制脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨噬细胞表达和分泌IL-6、TNF-α等细胞因子。NLRP3炎症小体活化后可引起炎症相关细胞因子的过度表达以及分泌,介导炎症的发生。当NLRP3炎症小体的活化被抑制,其参与的炎症相关疾病可能被改善。IOP的抗炎作用机制是否与NLRP3炎症小体通路有关,至今未见研究报道。目的:利甩LPS诱导的体外炎症细胞模型，明确IOP的抗炎机制是否与NLRP3炎症小体信号通路有关。方法:本研究选择IOP作为研究对象。首先,复苏RAW264.7细胞,分为正常组和四种浓度的药物组,药物浓度分别为20、40、80、160μg/mL,培养24h后,使用MTT法检测不同浓度的IOP对RAW264.7细胞的药物毒性,判断IOP的药物安全性。其次,使用LPS(lμg/mL)刺激RAW264.7细胞构建的体外炎症细胞模型。将细胞分为正常组(Normal)、模型组(LPS)以及实验组(LPS+IOP),进行以下实验。第一部分,IOP(40μg/mL)与LPS共同作用于RAW264.7细胞6 h/24h后分别提取细胞内RNA以及蛋白质,通过RT-PCR法检测TNF-αmRNA的表达以及WB法检测Phospho-NF-κB-p65、COX2蛋白水平表达量,判断IOP对LPS处理的炎症细胞模型炎症分子及通路的影响。第二部分,使用IOP与LPS共同作用于RAW264.7细胞6 h/24 h后,分别提取细胞内RNA以及蛋白质,通过RT-PCR法检测NLRP3炎症小体各组分及其下游IL-18和IL-1βmRNA的表达。利用WB法检测NLRP3炎症小体各组分及其下游IL-18和IL-1β的蛋白水平表达量的改变。同时,收集IOP与LPS共同作用于RAW264.7细胞24h后的细胞上清液,用ELISA法对上清液中IL-18和IL-1β蛋白水平进行进一步验证检测。判断NLRP3在炎症发生和处理中的作用。最后,进行验证实验,使用WB法检测基因转染后 β-actin 以及 NLRP3siRNA1、NLRP3siRNA2、NLRP3siRNA3 的沉默效果。将细胞分为阴性对照组(NC-siRNA)、模型组(LPS)、实验组(LPS+IOP)、基因沉默后LPS处理组(LPS+siRNA)组以及基因沉默后LPS+IOP处理组(LPS+IOP+siRNA)组。NLRP3基因沉默24 h后,再通过LPS作用于基因沉默后的细胞24 h,提取蛋白,通过WB技术对NLRP3炎症小体组成蛋白的进行检测。结果:MIT结果表明不同浓度的IOP对RAW264.7细胞的存活率差异无统计学意义即对细胞不具有药物毒性。RT-PCR结果显示,Normal组与LPS组相比,细胞内TNF-αmRNA表达增加(P<0.05),LPS+IOP组TNF-αmRNA表达与LPS组相比,明显下降(P<0.05)。同时,与LPS组相比,LPS+IOP组细胞内NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18 和 IL-1βmRNA 的表达明显下降(P<0.05)。WB 结果显示,相比于LPS组,LPS+IOP组细胞内COX2的蛋白表达明显减少(P<0.05);NF-κB-p65的磷酸化水平也明显被抑制(P<0.05)。此外,与Normal组相比,LPS组NLRP3炎症小体明显活化,其下游的促炎性细胞因子IL-18以及IL-1β的表达也明显升高,而IOP逆转了这种改变(P<0.05)。ELISA结果表明,LPS+IOP组促炎性细胞因子IL-18以及IL-1β在细胞培养上清液中的表达与LPS组相比有下降的趋势(P<0.05)。NLRP3基因沉默实验结果显示,与LPS组相比,LPS+siRNA组以及LPS+IOP+siRNA组明显抑制了 LPS引起的NLRP3、Caspase-1和ASC的表达升高(P<0.05),LPS+siRNA组与LPS+IOP+siRNA组相比没有统计学意义(P>0.05)。结论:IOP抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症,其机制可能是通过调节NF-κB核转录和NLRP3炎症小体的活化来实现。

关键词：桦褐孔菌多糖炎症细胞模型 NLRP3炎症小体细胞因子

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CGS21680对脂多糖诱导的小胶质细胞炎症细胞模型白细胞介素-1β表达的影响

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中国临床神经科学 2018年第2期26卷 121-125页

作者：梅培娜郑浏璞陈叙伟王莉叶朦倩郑荣远侯圣陶温州医科大学附属第一医院温州325000 南方科技大学脑科学研究中心生物系深圳518055

目的探讨CGS21680对脂多糖(LPS)诱导的小鼠大脑皮质小胶质细胞炎症细胞模型白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法采用新生小鼠大脑皮质小胶质细胞原代培养技术,将培养的小胶质细胞随机分组,设为对照组(加入单纯的DMEM/F12完全培养基)... 详细信息

目的探讨CGS21680对脂多糖(LPS)诱导的小鼠大脑皮质小胶质细胞炎症细胞模型白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法采用新生小鼠大脑皮质小胶质细胞原代培养技术,将培养的小胶质细胞随机分组,设为对照组(加入单纯的DMEM/F12完全培养基)、LPS组(制作小胶质细胞炎症细胞模型)、CGS21680组(小胶质细胞炎症细胞模型基础上叠加CGS21680处理),CGS21680组再按CGS21680不同浓度分为0.1、1和10μmol·L^(-1)CGS21680亚组。ELISA检测各组24 h后IL-1β含量。结果 CGS21680组较LPS组小胶质细胞IL-1β表达量显著下降。结论 CGS21680可明显抑制LPS诱导的小鼠大脑皮质小胶质细胞的炎症反应。

关键词：小胶质细胞炎症细胞模型腺苷A2A受体脂多糖白细胞介素-1β

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基于炎症细胞模型的草珊瑚抗炎活性部位筛选

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福建中医学院学报 2010年第5期20卷 35-38页

作者：谢勇曾建伟郑燕芳林培玲梁一池福建中医药大学药学院福建福州350108

目的探讨草珊瑚不同萃取部位的抗炎作用。方法采用系统溶剂法按极性由低到高分离得到草珊瑚石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水提取物4个部位,建立RAW264.7细胞炎症模型,对各部位抑制细胞炎症因子NO表达进行研究,通过MTT... 详细信息

目的探讨草珊瑚不同萃取部位的抗炎作用。方法采用系统溶剂法按极性由低到高分离得到草珊瑚石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水提取物4个部位,建立RAW264.7细胞炎症模型,对各部位抑制细胞炎症因子NO表达进行研究,通过MTT法测定各部位对RAW264.7细胞增殖的影响及评价细胞毒性分极。结果通过RAW264.7炎症模型的筛选,草珊瑚乙酸乙酯部位(100～200μg/mL)和多糖部位(100～400μg/mL)均可显著抑制模型细胞NO的表达(P<0.01),并可显著抑制RAW264.7细胞增殖水平,且其细胞毒性分级均为1级或以下。结论草珊瑚多糖和乙酸乙酯部位是草珊瑚抗炎作用的主要活性部位。

关键词：草珊瑚抗炎活性增殖有效部位炎症细胞模型

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家兔小肠上皮细胞LPS炎症细胞模型的构建

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畜禽业 2017年第8期28卷 1-3页

作者：付陆赵明德赖松家西南医科大学实验动物中心四川泸州646000 四川农业大学动物遗传研究所四川成都611130

试验采用Ⅰ型胶原酶(collagenaseⅠ)消化法分离培养刚出生未哺乳仔兔原代IEC细胞,并进行纯化和鉴定,以及使用LPS诱导构建纯化后的F3代IEC炎症细胞模型。结果表明:采用胶原酶Ⅰ(0.2%)消化法可以成功分离培养原代IEC,经纯化和CK-18单克隆... 详细信息

试验采用Ⅰ型胶原酶(collagenaseⅠ)消化法分离培养刚出生未哺乳仔兔原代IEC细胞,并进行纯化和鉴定,以及使用LPS诱导构建纯化后的F3代IEC炎症细胞模型。结果表明:采用胶原酶Ⅰ(0.2%)消化法可以成功分离培养原代IEC,经纯化和CK-18单克隆抗体鉴定纯度可达95%以上。终浓度1000ng/mL的LPS作用IEC培养体系24h,可使IL-1β、TNF-α的含量显著高于对照组(P<0.01)。试验结论:1000ng/mL的LPS诱导家兔IEC细胞24h,可成功构建IEC炎症细胞模型,为研究肠道和IEC免疫调控机制,提供了合适的细胞模型。

关键词：家兔 IEC LPS 炎症细胞模型

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基于炎症细胞模型的灰毡毛忍冬抗炎活性研究

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现代中药研究与实践 2015年第5期29卷 35-39页

作者：白仲杰任群利俸婷婷赵致周英林冰贵州大学贵州贵阳550025 贵州省中药民族药创制工程中心贵州贵阳550025 贵州省药食同源植物资源研究开发中心贵州贵阳550025

目的探讨灰毡毛忍冬不同极性萃取部位的抗炎活性。方法采用系统溶剂法按极性由低到高分离得到灰毡毛忍冬石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇、水等5个极性萃取部位;建立LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型,对各部位抑制细胞炎症因子N... 详细信息

目的探讨灰毡毛忍冬不同极性萃取部位的抗炎活性。方法采用系统溶剂法按极性由低到高分离得到灰毡毛忍冬石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇、水等5个极性萃取部位;建立LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型,对各部位抑制细胞炎症因子NO表达进行研究;根据2010版药典山银花中绿原酸含量的测定方法,测定各个部位绿原酸的含量。结果随着萃取部位样品浓度的增加,抗炎活性也随之增加;在同一浓度下,随着各个部位极性从大到小,五个萃取部位的抗炎活性逐渐增加;此外,随着绿原酸含量的逐渐减小,抗炎活性逐渐增加。结论灰毡毛忍冬各极性萃取部位对于炎症模型NO的表达均有显著的抑制作用。

关键词：灰毡毛忍冬含量测定抗炎活性炎症细胞模型

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基于LPS诱导的体外炎症模型建立羊耳菊抗炎活性成分的PK-PD结合模型

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中国中药杂志 2022年第23期47卷 6308-6319页

作者：周杰张青陈艺薛寸李月婷黄勇郑林黄静陈思颖巩仔鹏贵州医科大学药学院、贵州省药物制剂重点实验室、省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室、民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

该文旨在基于脂多糖(LPS)诱导的体外炎症模型建立羊耳菊抗炎活性成分的PK-PD结合模型,以期阐明羊耳菊抗炎活性成分在炎症细胞内的动态变化与其药效消长之间的相互关系。首先采用1μg·mL^(-1)LPS诱导RAW264.7细胞24 h后,建立体外炎... 详细信息

该文旨在基于脂多糖(LPS)诱导的体外炎症模型建立羊耳菊抗炎活性成分的PK-PD结合模型,以期阐明羊耳菊抗炎活性成分在炎症细胞内的动态变化与其药效消长之间的相互关系。首先采用1μg·mL^(-1)LPS诱导RAW264.7细胞24 h后,建立体外炎症模型。然后比较400μg·mL^(-1)的羊耳菊提取物干预后其含有的木犀草苷(luteolin,LUT)、绿原酸(chlorogenic acid,CA)、隐绿原酸(cryptochlorogenic acid,CCA)、3,4-二咖啡酰基奎宁酸(3,4-dicaffeoylquinic acid,3,4-DCQA)、4,5-二咖啡酰基奎宁酸(4,5-dicaffeoylquinic acid,4,5-DCQA)等5个抗炎活性成分在正常细胞和炎症细胞中的药代动力学。同时取各时间点细胞上清液测定炎症因子NO和TNF-α作为药效研究,与药动学部分通过WinNonlin 8.2软件中的Phoenix Model进行拟合,建立羊耳菊提取物中LUT、CA、CCA、3,4-DCQA、4,5-DCQA等5个成分的整合PK-PD结合模型。结果表明,与正常细胞相比,5个成分在模型细胞中摄取增加或下降,T_(max)提前,吸收变快,MRT、t_(1/2)延长,CL_(z/F)和V_(z/F)有增加或减少的趋势。以NO为药效指标时,羊耳菊中多效应成分整合后的PK-PD模型为E=7.45×[1-Ce^(5.74)/(78.245.74+Ce^(5.74))];以TNF-α为药效指标时,羊耳菊中多效应成分整合后的PK-PD模型为E=79.28×[1-Ce^(6.45)/(85.106.45+Ce^(6.45))]。研究结果提示炎症状态会改变羊耳菊的细胞药代动力学过程,而且羊耳菊活性成分发挥抗炎的作用可能与下调炎症细胞中NO和TNF-α的分泌有关,且NO和TNF-α可能为羊耳菊活性部位作用于炎症相关作用靶点。

关键词：羊耳菊抗炎活性成分炎症细胞模型细胞药代动力学 PK-PD模型

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麦胚球蛋白的体外抗炎活性研究

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河南工业大学学报（自然科学版） 2017年第2期38卷 63-68页

作者：毕振原黄继红刘娜冯军伟纪小国李海月赵祎张亚奇河南工业大学生物工程学院河南郑州450001 河南省食品工业科学研究所有限公司河南郑州450000

麦胚球蛋白是一种优质蛋白,在改善身体机能和消除炎症方面有着重要的研究价值。通过脂多糖(LPS)干预巨噬细胞建立炎症细胞模型,对提取麦胚球蛋白的体外抗炎活性进行了探究。通过体外细胞培养研究了麦胚球蛋白对RAW264.7细胞的细胞毒性;... 详细信息

麦胚球蛋白是一种优质蛋白,在改善身体机能和消除炎症方面有着重要的研究价值。通过脂多糖(LPS)干预巨噬细胞建立炎症细胞模型,对提取麦胚球蛋白的体外抗炎活性进行了探究。通过体外细胞培养研究了麦胚球蛋白对RAW264.7细胞的细胞毒性;利用Griess法研究了麦胚球蛋白对RAW264.7细胞经LPS诱导前后NO产生量的影响;利用ELISA法检测实验组对炎症细胞模型中细胞因子TNF-α含量的影响。结果表明:麦胚球蛋白能显著降低经LPS诱导RAW264.7细胞因子TNF-α和NO的含量,并存在一定的剂量依赖关系。麦胚球蛋白抗炎活性的研究为功能性保健品及抗炎药品原料开发提供了思路。

关键词：麦胚球蛋白 RAW264.7细胞炎症细胞模型抗炎活性

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麦胚球蛋白的抗炎活性及组织修复作用研究

麦胚球蛋白的抗炎活性及组织修复作用研究

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作者：毕振原河南工业大学

学位级别：硕士

麦胚球蛋白是一种优质蛋白,在改善身体机能和消除炎症方面有着重要的研究价值。麦胚球蛋白的开发利用及提取都属于小麦精深加工领域。本课题从麦胚球蛋白的水洗盐提、体外生物活性分析、创面组织修复效果评估进行较为全面的研究,旨在为... 详细信息

麦胚球蛋白是一种优质蛋白,在改善身体机能和消除炎症方面有着重要的研究价值。麦胚球蛋白的开发利用及提取都属于小麦精深加工领域。本课题从麦胚球蛋白的水洗盐提、体外生物活性分析、创面组织修复效果评估进行较为全面的研究,旨在为麦胚资源的高附加值利用提供较系统的理论基础,为进一步开发功能性保健品及抗炎药品原料开发提供了思路。主要研究包含以下内容:试验采用水洗盐提法制备麦胚球蛋白,以麦胚球蛋白对小鼠成纤维细胞L929活性为指标,通过单因素和响应面设计研究了工艺过程中关键控制点:盐浓度、提取温度、提取时间对麦胚球蛋白提取工艺进行了研究。麦胚球蛋白的最好提取条件是:盐浓度2.89%,提取时间1.86 h,提取温度30.45℃,在此条件下,获得的麦胚球蛋白对小鼠成纤维细胞L929的增殖指数达到67.89±2.31%。经氨基酸分析表明,麦胚球蛋白中必需氨基酸的含量均明显高于麦胚,各氨基酸含量较为均衡,离散程度最小。相比于前人的盐提-酸沉、Osborne分级分离、盐酶协同提取工艺,在麦胚球蛋白的提取工艺中首次以麦胚蛋白对小鼠成纤维细胞L929的生物活性为指标对麦胚球蛋白的工艺进行优化。此工艺大大提高了麦胚球蛋白的商业及其他应用价值,拓宽了麦胚资源的应用领域。(2)试验采用体外细胞培养研究了麦胚球蛋白对RAW264.7细胞的体外生物学活性,实验研究显示麦胚球蛋白有显著的抗炎作用,各种浓度麦胚球蛋白对RAW264.7细胞无毒性,能够显著促进正常RAW264.7的NO产生量;各浓度的麦胚球蛋白均能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的产生,且随着浓度的升高抑制效应愈加显著;对促炎因子TNF-α有明显的抑制作用,说明麦胚球蛋白在与促炎因子相关的炎症疾病中起到一定的抗击炎症的作用。麦胚球蛋白在浓度为500～800μg/mL范围内对小鼠成纤维细胞L929具有明显的增殖作用,且随着浓度的升高,细胞增殖指数明显升高。从细胞水平证实了麦胚球蛋白在与促炎因子相关的炎症疾病中起到抗炎症和组织修复功能,为进一步利用动物实验评估麦胚蛋白对创面组织的修复作用提供理论基础。(3)试验建立大鼠Ⅲ度烧伤模型,分析麦胚蛋白对小鼠创面组织的修复作用,与模型组比较,麦胚球蛋白对烧伤大鼠创面愈合效果明显(P<0.01)。通过烧伤创面组织病理学观察,表明麦胚球蛋白对创面组织具有明显的修复作用。麦胚球蛋白对烧伤大鼠创面具有显著的修复作用,促进了创面的愈合;模型组大鼠创面组织中蛋白含量、SOD活性均明显低于正常组(P<0.01),MDA、HOP与EGF均明显高于正常组(P<0.01),说明模型组大鼠创面组织发生了显著变化;麦胚球蛋白作用后,蛋白含量、EGF含量、SOD活性显著升高(P<0.01),HOP含量显著降低(P<0.01)。实验表明,随麦胚球蛋白显著改善了创面组织的各理化指标,为创面组织的恢复提供了良好条件;通过对烧伤大鼠免疫功能研究,烧伤大鼠的免疫功能紊乱,麦胚球蛋白显著降低了因烧伤引起的免疫器官的肿大,对免疫器官有一定的保护作用;对烧伤的大鼠外周血淋巴细胞亚群有明显的调节作用。麦胚球蛋白能够显著的提高烧伤大鼠的免疫功能。总之,本课题研究内容为开发功能性保健品及抗炎药品原料开发提供理论参考。

关键词：麦胚球蛋白抗炎活性炎症细胞模型创面组织修复免疫活性

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山银花谱效关系的研究

山银花谱效关系的研究

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作者：白仲杰贵州大学

学位级别：硕士

本论文根据近年来对于中药材质量分析问题的重新审查,相对于以往的通过单体性化学成分来定义中药材的质量,中药材谱效关系的提出,运用现代数据分析手段结合中药材的指纹图谱分析和其药理活性的测定,构建的谱效关系模型更能科学的解释中... 详细信息

本论文根据近年来对于中药材质量分析问题的重新审查,相对于以往的通过单体性化学成分来定义中药材的质量,中药材谱效关系的提出,运用现代数据分析手段结合中药材的指纹图谱分析和其药理活性的测定,构建的谱效关系模型更能科学的解释中药材的质量问题。本研究以贵州三个批次的山银花为主要研究对象,首先通过考察不同的色谱条件,确定山银花的HPLC指纹图谱的色谱测定条件;利用溶剂的极性差异和柱层析方法对山银花的不同极性部位分段,并且根据先前确定的色谱条件,检测各个分段部位的HPLC图谱,得到各个图谱峰数据。其次,本研究利用脂多糖(LPS)刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞,构建炎症细胞反应模型,通过Griess反应测定培养液中NO的分泌量,发现对照组和脂多糖(LPS)刺激组中NO的分泌量有显著性差异,从而确定炎症细胞模型成功构建。最后,运用此细胞炎症模型,以培养液中细胞对炎症因子NO、TNF-α、IL-6的分泌量为指标,测定灰粘毛忍冬的抗炎活性,发现各个分段部位对炎症因子NO、TNF-α、IL-6的分泌量均有一定的抑制作用。最后,本研究通过对文献的调查,分析了今年来运用到中药谱效关系模型构建中常用的数据处理方法,从各自的处理方法的优缺点结合本研究的实际情况,最终确定了利用偏最小二乘回归分析结合先前得到的各个分段部位的HPLC图谱数据及其抗炎活性数据构建山银花抗炎活性的谱效关系模型。

关键词：山银花指纹图谱 RAW264.7巨噬细胞炎症细胞模型偏最小二乘回归分析

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灰毡毛忍冬对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎症因子的影响

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山地农业生物学报 2015年第2期34卷 52-56页

作者：白仲杰任群利俸婷婷赵致周英林冰贵州大学贵州省中药民族药创制工程中心贵州贵阳550025 贵州省药食同源植物资源研究开发中心贵州贵阳550025

采用LPS刺激巨噬细胞RAW264.7建立体外的炎症模型,探讨灰毡毛忍冬不同极性萃取部位抗炎活性和作用机制。用MTT法检测灰毡毛忍冬不同极性萃取部位对RAW264.7细胞的毒性作用;ELISA法检测灰毡毛忍冬不同极性萃取部位对IL-6和TNF-α表达情... 详细信息

采用LPS刺激巨噬细胞RAW264.7建立体外的炎症模型,探讨灰毡毛忍冬不同极性萃取部位抗炎活性和作用机制。用MTT法检测灰毡毛忍冬不同极性萃取部位对RAW264.7细胞的毒性作用;ELISA法检测灰毡毛忍冬不同极性萃取部位对IL-6和TNF-α表达情况的影响;结果显示:灰毡毛忍冬不同极性萃取部位在一定的剂量范围内均能抑制炎症因子IL-6和TNF-α表达,其中石油醚部位(100μg/m L)对IL-6表达量以及水部位(100μg/m L)对TNF-α表达量没有显著性的抑制作用,而乙酸乙酯部位对IL-6表达量和TNF-α表达量的抑制作用都最为明显。灰毡毛忍冬不同极性萃取部位都有抗炎活性,并且各个部位均有浓度依赖性。

关键词：灰毡毛忍冬不同极性部位抗炎活性炎症细胞模型

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