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1 篇 学位论文

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1 篇 鸡卵白蛋白诱导免...
1 篇 牛ⅱ型胶原诱导性关...
1 篇 th1选择性抑制
1 篇 免疫抑制
1 篇 马索亚内酯
1 篇 信号转导及转录激...

机构

1 篇 上海中医药大学

作者

1 篇 林思默

语言

1 篇 中文

检索条件"主题词=牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型"

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排序：

基于JAK/STAT通路研究马索亚内酯对免疫调节作用的影响

基于JAK/STAT通路研究马索亚内酯对免疫调节作用的影响

引用

作者：林思默上海中医药大学

学位级别：硕士

目的在课题组前期关于虫草提取物对肝炎作用的基础上,研究马索亚内酯(C-10 Massoia Lactone,C-10ML)对于免疫调节作用的影响。为自身性免疫疾病的药物研究提供新的可能。1.通过丝裂原诱导T淋巴细胞增殖,研究C-10ML对于辅助性T细胞(Th)... 详细信息

目的在课题组前期关于虫草提取物对肝炎作用的基础上,研究马索亚内酯(C-10 Massoia Lactone,C-10ML)对于免疫调节作用的影响。为自身性免疫疾病的药物研究提供新的可能。1.通过丝裂原诱导T淋巴细胞增殖,研究C-10ML对于辅助性T细胞(Th)的调节作用及机制。2.建立鸡卵白蛋白(OVA)诱导免疫应答小鼠模型,进一步确定C-10ML在体内对于Th细胞的作用及机制。3.建立牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)模型,探讨C-10ML对于关节炎的治疗作用。方法1.细胞增殖及毒性实验检测C-10ML对于淋巴细胞增殖的调控作用。2.流式细胞术分析C-10ML对于辅助性T细胞亚群比例的影响。3.酶联免疫吸附测定法检测细胞培养液上清以及血清中的细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-2以及IL-10的含量;以及OVA小鼠血清中特异性抗体的含量变化。4.实时定量聚合酶链式反应法检测辅助性T细胞亚群转录因子表达的变化。5.蛋白质印迹法法检测JAK/STAT信号通路目的蛋白的变化。6.建立OVA免疫应答模型并进行药物干预,探讨C-10ML对于体内细胞免疫以及体液免疫的药效,同时通过细胞水平、转录水平、细胞因子水平以及目的蛋白表达来研究其作用机制。7.建立CIA模型后药物干预,通过关节炎评分、细胞特异性增殖、血清特异性抗体含量的变化以及形态学数据验证C-10ML对于关节炎的药效。结果1.C-10ML在体外对于丝裂原诱导以及抗体诱导的T淋巴增殖表现出显著的抑制作用(p<0.001),并具有量效关系。2.C-10ML免疫调节的作用机制(1)细胞水平,C-10ML能够降低Th1的比例。(2)转录水平上,对于Th1的特异性转录因子T-bet具有显著的抑制作用(p<0.001),具有量效关系;但对于其他Th细胞亚群转录因子影响不大。(3)细胞因子水平上,C-10ML在作用24小时,对于炎症因子IL-2以及Th1所分泌的细胞因子IFN-γ有显著的抑制作用(p<0.001),并具有量效关系。(4)对于JAK/STAT通路上目的蛋白STAT1、STAT5的表达量及其磷酸化水平进行分析,C-10ML对于STAT1蛋白磷酸化影响在6小时最为显著,能够显著抑制STAT1的磷酸化,并具有量效关系。3.C-10ML对于OVA小鼠的细胞免疫以及体液免疫效果。(1)OVA诱导免疫应答小鼠后,小鼠血液中OVA特异性抗体的含量显著上升(p<0.001),C-10ML给药组抗体含量有显著下降(p<0.001)。(2)OVA诱导免疫应答小鼠后,取小鼠淋巴细胞体外OVA特异性诱导,模型组的增殖率较正常组有显著的提高(p<0.001),而C-10ML给药组与模型组相比有显著的抑制增殖作用(p<0.001)。4.C-10ML对于OVA小鼠的免疫调节作用机制研究(1)细胞水平上,C-10ML给药组对于模型组能降低Th1的比例,并同时提高Treg的比例。(2)转录水平上,模型组相较正常组能够促进T-bet的表达(p<0.001),抑制GATA3以及Foxp3的表达(p<0.001),对于RoRγt没有影响(p>0.05)。而C-10ML给药组均能显著逆转(p<0.001)。(3)细胞因子水平上,模型组血清中的IFN-γ含量显著上升(p<0.001),药物干预后能够有效的抑制IFN-γ的分泌(p<0.001)。各组淋巴细胞在OVA特异性诱导作用下,模型组IL-2的分泌有显著的上升(p<0.01),给药组相较于模型组有显著的抑制作用(p<0.01)。(4)蛋白水平,给药组相较于模型组能够抑制STAT1的磷酸化和促进STAT5的磷酸化。5.C-10ML对于CIA模型小鼠的治疗作用C-10ML给药组对于模型组明显降低了关节炎评分(p<0.05),从形态学上C-10ML干预后,小鼠病变关节组织病理改变显著减轻,炎症细胞浸润也有明显改善。C-10ML给药组也表现出显著的细胞免疫以及体液免疫效应。结论1.C-10ML具有对于T淋巴细胞体外增殖的免疫抑制活性。2.C-10ML对于Th1细胞的显著的选择性抑制作用可能与STAT蛋白有关。3.C-10ML在体内具有细胞免疫以及体液免疫的抑制活性,其机制与体外相同。4.C-10ML能够改善CIA小鼠关节炎,缓解症状。

关键词：马索亚内酯免疫抑制 Th1选择性抑制信号转导及转录激活因子鸡卵白蛋白诱导免疫应答牛ⅱ型胶原诱导性关节炎模型

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