检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2025年第5期46卷 74-79页

作者：王慧荣刘艺刘文俊杨丽华董春光韩文儒武守艳山西农业大学山西晋中030801

为了检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),根据IBRV gE和gB基因保守序列分别设计一对特异性引物,构建重组质粒作为标准品,经优化反应体系和反应条件建立了IBRV gE和gB基因的SYBR GreenⅡ荧光定量PCR检测方法。以建立的荧光定量PCR方法检测... 详细信息

为了检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),根据IBRV gE和gB基因保守序列分别设计一对特异性引物,构建重组质粒作为标准品,经优化反应体系和反应条件建立了IBRV gE和gB基因的SYBR GreenⅡ荧光定量PCR检测方法。以建立的荧光定量PCR方法检测重组质粒标准品pUC57-gE、pUC57-gB,结果显示浓度在10^(8)~10^(4)拷贝/μL时与Ct值有良好的线性关系,线性相关系数R2分别为0.997、0.996;该方法对重组质粒标准品pUC57-gE、pUC57-gB的最低检测限分别为4.74×10^(2)拷贝/μL、2.60×10^(2)拷贝/μL,敏感性较高;利用该方法检测IBRV、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、伪狂犬病病毒(PRV)、牛冠状病毒(BCoV)、巴氏杆菌、大肠埃希氏菌,只有IBRV检测为阳性,说明该方法特异性强;重复性试验结果显示批内、批间变异系数均低于1.5%,稳定性高。利用该方法和荧光定量PCR试剂盒分别对58份牛鼻拭子样品进行检测,结果显示两种方法符合率达98.3%。该方法具有强稳定性和高敏感性的特点,能为IBRV的检测和鉴别IBRV野毒株与gE基因缺失苗株提供技术支撑。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒荧光定量PCR gB和gE基因检测

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牛传染性鼻气管炎病毒ERA-LFD检测方法的建立与应用

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动物医学进展 2025年第2期46卷 79-85页

作者：郭衍冰侯绪森孙兴忠王军富王改丽郝良玉董航王雪磊刘杰王楠曹利利吉林省畜牧兽医科学研究院吉林长春130062 大安市疾病预防控制中心吉林大安131300 吉林农业大学动物医学院吉林长春130118 长春职业技术学院吉林长春130033

为建立可视化检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的酶促恒温扩增-侧向流动试纸(ERA-LFD)方法,根据IBRV gB基因的保守区域设计并筛选最佳引物和探针,通过优化反应条件建立IBRV ERA-LFD方法,并对其特异性、敏感性、重复性和符合性进行评估。... 详细信息

为建立可视化检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的酶促恒温扩增-侧向流动试纸(ERA-LFD)方法,根据IBRV gB基因的保守区域设计并筛选最佳引物和探针,通过优化反应条件建立IBRV ERA-LFD方法,并对其特异性、敏感性、重复性和符合性进行评估。结果显示,采用建立的方法检测牛呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、多杀性巴氏杆菌、弓形虫均无交叉反应,特异性强;建立方法最低检出IBRV阳性质粒的量为1.63×10^(1) copies/μL,比PCR方法高100倍,敏感性高;对相同样品进行批间和批内检测,结果均一致,重复性好;ERA-LFD与PCR方法检出的符合率为96%,且测序证实ERA-LFD检测结果无误。IBRV ERA-LFD的临床样本检测结果显示阳性率为2.08%,与PCR方法的结果相一致,说明IBRV ERA-LFD方法适于临床样品检测,为IBRV的临床快速检测和流行病学调查提供了工具。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒酶促恒温扩增侧向流动试纸检测方法

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牛传染性鼻气管炎病毒多表位嵌合蛋白的表达及免疫原性分析

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中国生物制品学杂志 2021年第2期34卷 141-145,151页

作者：仝晓丹王俊冉旭华倪宏波闻晓波黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 海南大学动物科技学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海南海口570228

目的表达牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)多表位嵌合蛋白,并分析其免疫原性。方法将已鉴定出的IBRV的gB、gC和gD抗原表位及破伤风毒素通用T细胞表位P2分别以GGGGS及AAYAAY为linker进行串联连接,用D... 详细信息

目的表达牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)多表位嵌合蛋白,并分析其免疫原性。方法将已鉴定出的IBRV的gB、gC和gD抗原表位及破伤风毒素通用T细胞表位P2分别以GGGGS及AAYAAY为linker进行串联连接,用DNASTAR Protean软件分析其抗原性,选择最佳连接组合化学合成嵌合蛋白基因序列。将合成的目的基因克隆至载体pET-28a(+),构建重组质粒pET-28a-P2-gB/gC/gD(GGGGS)和pET-28a-P2-gB/gC/gD(AAYAAY),转化至感受态*** BL21(DE3),表达重组蛋白,采用Ni-NTA Purification System纯化。将纯化蛋白与ISA206佐剂乳化,经后腿肌肉注射免疫中国白兔,100μg/(mL·只),共免疫3次,每次间隔3周。初次免疫后21、42和63 d采血,分离血清,间接ELISA法检测抗体水平。结果两种重组质粒经双酶切及测序鉴定,构建正确。重组蛋白P2-gB/gC/gD(GGGGS)和P2-gB/gC/gD(AAYAAY)在***中均以包涵体形式表达,纯化后产量分别可达12.4和15.3 mg/L。重组蛋白P2-gB/gC/gD(AAYAAY)诱导白兔的血清抗体水平显著高于重组蛋白P2-gB/gC/gD(GGGGS),且差异有统计学意义(P <0.05)。结论成功表达了IBRV多表位嵌合蛋白,且具有良好的免疫原性。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒抗原表位嵌合蛋白免疫原性

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牛传染性鼻气管炎病毒内标荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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中国兽医学报 2010年第6期30卷 738-743,747页

作者：季新成牛国辉员丽娟张彦明李鹏段晓东于学辉西北农林科技大学陕西杨凌712100 新疆出入境检验检疫局新疆乌鲁木齐83006 新疆大学新疆乌鲁木齐830000

根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列,设计高度保守的引物和荧光探针,并扩增包含有荧光PCR扩增区域的核酸片段,通过凝胶纯化回收,将该片段克隆至pMD18-T载体,经鉴定后获得目标模板。通过碱基重排和引物设计,用搭桥法PCR扩增,获得BHV1荧... 详细信息

根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列,设计高度保守的引物和荧光探针,并扩增包含有荧光PCR扩增区域的核酸片段,通过凝胶纯化回收,将该片段克隆至pMD18-T载体,经鉴定后获得目标模板。通过碱基重排和引物设计,用搭桥法PCR扩增,获得BHV1荧光定量PCR内标模板。对内标模板的添加量和反应条件进行优化,建立了含有内标物的荧光定量PCR检测体系。该体系可以检测到10个拷贝/PCR反应的重组质粒,对BHV1可检测到0.01TCID50的病毒粒子,灵敏度比常规PCR和病毒分离高10～100倍,与不加内标的荧光PCR检测灵敏度相当。更重要的是,内标模板可以对反应体系进行监测,指示并校正假阴性结果,从而达到提高PCR检测准确率的目的。对临床收集的40份牛精液(其中8份已经鉴定为阳性)和10份牛鼻腔拭子(其中2份已经鉴定为阳性)用该体系进行检测,均得到预期结果。该方法的建立可用来对临床样品中BHV1的快速检测和实验室的质量控制。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒荧光定量PCR 内标共扩增

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牛传染性鼻气管炎病毒gG蛋白的表达及gG-ELISA的建立

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生物工程学报 2007年第5期23卷 806-811页

作者：颜邦芬陈锃张书环林祥梅陈颖钰晁彦杰李德学宋念华陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所北京100029 湖北省动物疫病诊断中心武汉430064

以牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG。SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21（DE3）中呈可... 详细信息

以牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG。SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21（DE3）中呈可溶性及包涵体两种形式表达,重组蛋白质具有免疫学活性。包涵体蛋白经提纯、变性、复性后,作为包被抗原建立了gG-ELISA诊断方法。应用该方法与进口试剂盒（IDEXX）平行检测380份血清样品,两种方法的符合率为92%（351/380）。对6份病毒分离阳性血清的检测均为阳性,对非相关病原的阳性血清及中监所的阴性血清检测均为阴性,表明所建立的IBRVgG抗体的ELISA检测具有良好的灵敏度与特异性。对1248份奶牛血清样本进行了检测,进口牛群的IBRV抗体阳性率平均为21.7%,湖北本地中国黑白花奶牛的抗体阳性率在不同牧场之间变化很大,范围为0.0%-41.5%。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gG基因 ELISA 原核表达

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牛传染性鼻气管炎病毒内蒙古分离株gB、gC、gD基因的分子克隆与序列分析

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畜牧兽医学报 2012年第6期43卷 965-971页

作者：胡文兵关平原郝瑞峰赵鹏伟乌日罕内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 巴州动物卫生监督所库尔勒841000 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古动物疫病预防控制中心呼和浩特010010

对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)内蒙古分离株gB、gC、gD基因进行克隆和序列测定,结果表明IBRV内蒙古分离株gB、gC、gD基因序列分别为2 850、1 723、1 559bp,编码933、508、417个氨基酸组成的完整开放阅读框。序列比较和系统进化树分析结... 详细信息

对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)内蒙古分离株gB、gC、gD基因进行克隆和序列测定,结果表明IBRV内蒙古分离株gB、gC、gD基因序列分别为2 850、1 723、1 559bp,编码933、508、417个氨基酸组成的完整开放阅读框。序列比较和系统进化树分析结果显示:内蒙古分离株与其他毒株gB、gC、gD基因核苷酸序列的相似性为94.9%～99.9%,其推导的氨基酸相似性在90.3%～99.7%,不同IBRV毒株gB、gC、gD基因在核苷酸和氨基酸水平上高度保守。在系统进化树中内蒙古分离株与瑞典毒株亲缘关系较近,属于同一个分支。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gB基因 gC基因 gD基因分子克隆序列分析

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牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)在细胞内的DNA合成动态与形态发生过程

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微生物学报 1985年第4期25卷 306-312页

作者：王河丁明孝翟中和北京大学生物系

对IBRV感染牛肾细胞的DNA合成动态以及该病毒在细胞内的形态发生过程进行了研究。病毒DNA合成的速度在接种病毒后6小时出现一个峰值,随后减慢,并在病毒感染24小时前停止。核壳体的出现是在病毒感染后8小时细胞的细胞核内,而在这一时期... 详细信息

对IBRV感染牛肾细胞的DNA合成动态以及该病毒在细胞内的形态发生过程进行了研究。病毒DNA合成的速度在接种病毒后6小时出现一个峰值,随后减慢,并在病毒感染24小时前停止。核壳体的出现是在病毒感染后8小时细胞的细胞核内,而在这一时期细胞中还可见到极少量的成熟病毒。细胞核内的病毒核壳体装配在接种病毒后24小时左右停止,而病毒核壳体的成熟与释放过程则在这一时期达到高潮。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 DNA合成形态发生

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牛传染性鼻气管炎病毒LN01/08株灭活疫苗的研制

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中国预防兽医学报 2011年第1期33卷 54-57,61页

作者：冷雪赵炳武郭利夏铭崎吴永旺徐晓琴武华中国农业科学院特产研究所吉林吉林132109 必威安泰生物科技有限公司北京100176

为研制牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)灭活疫苗,本研究以国内分离鉴定的IBRV LN01/08株为种毒,优化病毒增殖条件,获得病毒滴度达108.0 TCID50/mL,将其灭活制备疫苗。为比较不同免疫佐剂的效果,分别以矿物质白油和Montanide ISA206佐剂配制... 详细信息

为研制牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)灭活疫苗,本研究以国内分离鉴定的IBRV LN01/08株为种毒,优化病毒增殖条件,获得病毒滴度达108.0 TCID50/mL,将其灭活制备疫苗。为比较不同免疫佐剂的效果,分别以矿物质白油和Montanide ISA206佐剂配制灭活疫苗,进行牛体免疫试验。临床观察和血清中和抗体检测结果表明,Montanide ISA206佐剂乳化的疫苗在降低副反应和增强免疫效果方面优于矿物质白油佐剂。应用MontanideISA206佐剂制备3批灭活疫苗,并对其安全性和免疫保护效果进行测定。结果表明该疫苗安全可靠,对强毒攻击可产生较好的抵抗力,攻毒保护率达80%。疫苗在2℃～8℃保存12个月后仍能保持良好的免疫效果。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒灭活疫苗免疫佐剂

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牛传染性鼻气管炎病毒LNM株致弱疫苗免疫效力的研究

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中国预防兽医学报 2011年第2期33卷 146-149页

作者：郭利冷雪张淑琴苗立光赵炳武武华中国农业科学院特产研究所吉林吉林132109

为检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体在免疫牛体内的产生及其消长规律,评价IBRV LNM株致弱疫苗的保护效力,并确定免疫持续期,本实验对免疫试验组牛每头颈部肌肉接种制备的IBRV LNM株致弱疫苗104.5 TCID50/mL,监测血清抗体效价,进行免... 详细信息

为检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体在免疫牛体内的产生及其消长规律,评价IBRV LNM株致弱疫苗的保护效力,并确定免疫持续期,本实验对免疫试验组牛每头颈部肌肉接种制备的IBRV LNM株致弱疫苗104.5 TCID50/mL,监测血清抗体效价,进行免疫期的确定。在疫苗免疫后的6个月、9个月和12个月分别抽取3头免疫组和两头对照组牛采用IBRV-LN01/08强毒株进行攻毒试验,每头牛的攻毒剂量为107.0 TCID50/mL。结果显示疫苗免疫后12个月时,中和抗体效价仍维持在1∶11以上。攻毒结果显示3个时间点强毒攻击后,疫苗对免疫牛均具有良好的保护力。研究表明IBRV弱毒疫苗可有效地保护免疫牛抵抗IBRV强毒株的攻毒,其免疫持续期最少为12个月。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒弱毒活疫苗效力免疫持续期

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牛传染性鼻气管炎病毒IBRV-LN01/08株的分离鉴定

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中国兽医科学 2010年第4期40卷 352-356页

作者：徐晓琴冷雪李真光武华中国农业科学院特产研究所吉林吉林132109 北京必威安泰生物科技有限公司北京100176

从辽宁省某牛场出现疑似牛传染性鼻气管炎症状的牛鼻拭子样品中分离出一株病毒,该病毒能在MDBK细胞上增殖,能产生牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）典型性细胞病变。通过间接免疫荧光试验、微量血清中和试验、PCR及病毒形态学观察鉴定,证明... 详细信息

从辽宁省某牛场出现疑似牛传染性鼻气管炎症状的牛鼻拭子样品中分离出一株病毒,该病毒能在MDBK细胞上增殖,能产生牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）典型性细胞病变。通过间接免疫荧光试验、微量血清中和试验、PCR及病毒形态学观察鉴定,证明该分离毒株为IBRV,并被命名为IBRV-LN01/08。根据IBRV的保守区核苷酸序列设计了1对鉴定引物,将扩增的目的片段进行克隆、测序及序列分析。结果表明,该片段序列与GenBank上登录的IBRV K22株的同源性为99.9%。动物回归试验结果显示,6~9月龄IBRV抗体阴性黄牛人工感染IBRV-LN01/08株F3代细胞培养物后,试验动物出现持续体温升高,流鼻涕,鼻内黏膜有白色糜烂溃疡及结节等牛传染性鼻气管炎的临床症状,表明该毒株具有一定的致病性。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒分离鉴定

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