检索结果-内蒙古大学图书馆

牛传染性鼻气管炎病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

中国兽医科学 2020年第2期50卷 135-140页

作者：刘占悝刘泽余李智杰孙飞雁郭利中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室吉林长春130122 吉林农业大学吉林长春130118

为了检测牛传染性鼻气管炎病毒,本研究建立了牛传染性鼻气管炎病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。通过设计特异性引物扩增病毒基因,将扩增的目的片段(119 bp)连接到pMD19-T载体中,构建重组质粒。将重组质粒作为阳性标准品,用于S... 详细信息

为了检测牛传染性鼻气管炎病毒,本研究建立了牛传染性鼻气管炎病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。通过设计特异性引物扩增病毒基因,将扩增的目的片段(119 bp)连接到pMD19-T载体中,构建重组质粒。将重组质粒作为阳性标准品,用于SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立。结果显示,特异性引物扩增的目的片段约为119 bp,符合预期的大小,经测序鉴定所扩增的目的片段正确。敏感性结果显示,用该方法检测阳性质粒标准品的最低限度为3.04 X101 copies/mL,是Nano-PCR的10倍。将牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒3型与牛传染性鼻气管炎病毒进行特异性检测。结果显示,只有牛传染性鼻气管炎病毒被检测到,其他病毒均未有特异性的扩增曲线,表明该方法的特异性良好。批内和批间重复变异系数均小于1%,显示该方法具有良好的重复性。用建立的方法对20份疑似IBRV的临床样品进行检测,并与Nano-PCR检测方法进行对比,结果显示本方法的阳性样晶率高于Nano-PCR检测方法。本研究建立的牛传染性鼻气管炎病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,可用于牛传染性鼻气管炎病毒的检测。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒实时荧光定量PCR 检测方法

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牛传染性鼻气管炎病毒nano-PCR与LAMP及PCR检测方法的对比研究

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中国兽医科学 2017年第8期47卷 951-956页

作者：郭利李建友李家伟王楠程世鹏中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室特种动物分子生物学重点实验室吉林长春130112 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 安图县畜牧兽医总站吉林安图133600 吉林省动物疫病预防控制中心吉林长春130062

本研究应用金纳米颗粒与PCR结合建立了牛传染性鼻气管炎病毒(BoHV-1)纳米PCR(nanoPCR)新型检测方法和LAMP可视化检测方法,并与普通PCR方法进行对比研究。建立的BoHV-1纳米PCR新型分子检测方法和LAMP方法,特异性良好,敏感性与LAMP方法和... 详细信息

本研究应用金纳米颗粒与PCR结合建立了牛传染性鼻气管炎病毒(BoHV-1)纳米PCR(nanoPCR)新型检测方法和LAMP可视化检测方法,并与普通PCR方法进行对比研究。建立的BoHV-1纳米PCR新型分子检测方法和LAMP方法,特异性良好,敏感性与LAMP方法和常规PCR对比结果显示,nano-PCR方法敏感性是LAMP和普通PCR的10倍,最低检出量为2.23×102copies/L,是普通PCR的100倍;LAMP样品检测用时最短,50 min即可得到检测结果。临床样品的阳性检出率nano-PCR方法最高,检出阳性样品8/10份(弱阳性1份),普通PCR阳性检出率最低,检出阳性样品3/10份,LAMP检出6/10份。结果表明,nano-PCR敏感性和特异性更适合于临床样品的检测。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 nano-PCR 环介导等温扩增技术 PCR

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牛传染性鼻气管炎病毒致病机制研究进展

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动物医学进展 2017年第2期38卷 75-78页

作者：许健沈俊俊黄秀芬李永清北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100097

牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)主要引起牛的呼吸道、生殖道等炎症反应,也可以引起呼吸困难及流产。IBRV的致病机制尚不清楚,目前发现IBRV的非结构蛋白和结构糖蛋白与病毒毒力相关,不但影响病毒的复制及对宿主细胞的感染,同时也与病毒的免... 详细信息

牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)主要引起牛的呼吸道、生殖道等炎症反应,也可以引起呼吸困难及流产。IBRV的致病机制尚不清楚,目前发现IBRV的非结构蛋白和结构糖蛋白与病毒毒力相关,不但影响病毒的复制及对宿主细胞的感染,同时也与病毒的免疫逃逸密切相关。除此之外,IBRV通过诱导宿主细胞凋亡造成持续性感染及激活炎症复合体诱导严重的炎症反应,造成宿主广泛病理反应的发生。因此,探索IBRV毒力蛋白结构功能、IBRV感染诱导的细胞凋亡及宿主炎性复合体激活的分子机制,将成为未来IBRV研究的热点。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒毒力蛋白细胞凋亡炎症复合体

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牛传染性鼻气管炎病毒糖蛋白gC基因抗原活性区的克隆与表达

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畜牧与兽医 2008年第2期40卷 16-19页

作者：陈茹曾彩云罗琼谢青梅曹永长毕英佐广东出入境检验检疫局技术中心广东广州510623 华南农业大学动物医学院广东广州510642

通过聚合酶链式反应从牛传染性鼻气管炎病毒Bartha Nu/67株中扩增得到病毒gC基因并克隆至T载体pMD20T,再以后者为模板扩增gC蛋白第15-177位氨基酸对应的抗原活性区片段gCd。将gCd插入原核表达载体pET32a构建重组表达质粒pET32a-bhv1gCd... 详细信息

通过聚合酶链式反应从牛传染性鼻气管炎病毒Bartha Nu/67株中扩增得到病毒gC基因并克隆至T载体pMD20T,再以后者为模板扩增gC蛋白第15-177位氨基酸对应的抗原活性区片段gCd。将gCd插入原核表达载体pET32a构建重组表达质粒pET32a-bhv1gCd。限制性内切酶以及序列分析鉴定表明重组表达质粒克隆片段序列与阅读框正确。对重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）的培养物进行蛋白电泳,可检测到分子量约45ku的目的产物,IPTG诱导后5h表达量最高。免疫印迹试验结果证实,gCd重组蛋白与牛传染性鼻气管炎标准阳性血清发生特异性反应,表明gC抗原活性区片段在原核获得表达并具有良好的抗原性。该重组蛋白可用于建立ELISA等免疫诊断方法。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gC基因抗原活性区表达

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牛传染性鼻气管炎病毒gE基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

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内蒙古农业大学学报（自然科学版） 2012年第3期33卷 5-8页

作者：孙志明周伟光陈玉惠高晶希尼尼根关平原内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

目的建立1种特异、灵敏、高效的检测IBRV gE基因的荧光定量PCR方法,并为鉴别IBRV野毒株和gE基因缺失疫苗株的感染提供技术手段。方法根据IBRV gE基因保守序列,设计一对引物,建立荧光定量PCR反应体系和反应条件,利用10倍梯度稀释病毒DNA... 详细信息

目的建立1种特异、灵敏、高效的检测IBRV gE基因的荧光定量PCR方法,并为鉴别IBRV野毒株和gE基因缺失疫苗株的感染提供技术手段。方法根据IBRV gE基因保守序列,设计一对引物,建立荧光定量PCR反应体系和反应条件,利用10倍梯度稀释病毒DNA进行荧光定量PCR扩增,以检测本试验建立的荧光定量PCR的灵敏度。用IBRV、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、MDBK细胞、牛血清等进行特异性检测。用模拟样品进行临床应用试验。结果本试验建立的荧光定量PCR方法,其灵敏度约为70 DNA拷贝/μL,除了IBRV从其他病毒和样品未扩增出曲线,临床模拟样品检测结果为0.03TCID50。结论本试验建立的荧光定量PCR方法具有特异性强、灵敏性高、快速,低污染等优点,因此临床上可以用于IBRV的检测和病原学调查。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒荧光定量PCR 灵敏性特异性

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牛传染性鼻气管炎病毒攻毒方式的对比研究

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中国畜牧兽医 2012年第4期39卷 229-232页

作者：郭利张淑琴冷雪王炜武华中国农业科学院特产研究所吉林吉林132109

本试验旨在建立牛传染性鼻气管炎病毒的攻毒模型,明确病毒在牛体内的分布及确定最佳攻毒方式,建立牛传染性鼻气管炎的发病标准,用来评价IBRV LNM弱毒疫苗的保护效力。试验共使用健康断乳牛9头,设鼻内喷雾组、滴鼻组和对照共3组,每组3头... 详细信息

本试验旨在建立牛传染性鼻气管炎病毒的攻毒模型,明确病毒在牛体内的分布及确定最佳攻毒方式,建立牛传染性鼻气管炎的发病标准,用来评价IBRV LNM弱毒疫苗的保护效力。试验共使用健康断乳牛9头,设鼻内喷雾组、滴鼻组和对照共3组,每组3头牛。将实验室分离保存的IBRV LN01/08强毒株采用鼻内喷雾和滴鼻两种方式接种试验组动物后,连续14d,每日观察临床症状,监测体温及采集鼻拭子,对收集的试验数据进行对比分析。选取临床发病不同时期剖杀动物,采取主要脏器进行病毒分离。结果显示,所有动物攻毒后有不同程度的临床表现,以鼻内喷雾组临床表现最为严重,剖检可见肺部病变明显。病毒主要分布在呼吸道和眼结膜组织中。研究结果显示,采用IBRV自然感染方式攻击动物,喷雾方法攻毒临床效果明显强于滴鼻方式,保证了临床发病模型的建立,可以用来IBRV疫苗免疫效果评价,为研制IBR疫苗提供前提基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒攻毒方式

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牛传染性鼻气管炎病毒的分离鉴定及其遗传进化分析

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中国兽医科学 2019年第8期49卷 1006-1012页

作者：冷雪李东丽葛桂阳孙志博宫庆龙刘艺郜艳雪栾美慧徐宁杜锐吉林农业大学中药材学院

采集内蒙古地区疑似发生牛传染性鼻气管炎的发病牛的鼻拭子液,经MDBK细胞连续传代培养,分离获得1株病毒,该病毒在MDBK细胞上增殖致细胞病变。经PCR鉴定、间接免疫荧光试验和动物回归试验,证明该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),对... 详细信息

采集内蒙古地区疑似发生牛传染性鼻气管炎的发病牛的鼻拭子液,经MDBK细胞连续传代培养,分离获得1株病毒,该病毒在MDBK细胞上增殖致细胞病变。经PCR鉴定、间接免疫荧光试验和动物回归试验,证明该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),对牛具有较强的致病性,将其命名为IBRV NM8株。通过PCR扩增分别获得gB和gE全基因序列,遗传进化分析表明,IBRV NM8株g B和g E基因与BHV-1型参考毒株的同源性较高,位于同一进化分支,而与BHV-5型参考毒株位于不同的进化分支。NM8株gB基因与Cooper株、MN12株、Los Angeles株和NM06株等的亲缘关系相对较近,而g E基因与瑞典的Salwa株的亲缘关系较近,位于同一分支。上述研究结果将为我国IBRV流行病学研究提供新的数据,并为相关后续研究奠定基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒分离鉴定遗传进化分析

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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

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中国动物传染病学报 2023年

作者：刘兵商丘职业技术学院

为了建立一种牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）抗体检测方法，本研究对IBRV gD蛋白进行原核表达，以表达蛋白为包被抗原建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。结果显示：gD基因PCR扩增产物约945 bp，构建原核表达载体pET30a-gD，经IPTG诱导表... 详细信息

为了建立一种牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）抗体检测方法，本研究对IBRV gD蛋白进行原核表达，以表达蛋白为包被抗原建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。结果显示：gD基因PCR扩增产物约945 bp，构建原核表达载体pET30a-gD，经IPTG诱导表达，Western blot检测显示重组蛋白具有良好的反应活性，以纯化蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛肠道病毒（BEV）、牛副流感病毒3型（BPIV-3）、牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）阳性血清均为阴性，检测IBRV阳性血清的最低抗体检出效价为1:12 800，与病毒中和试验方法的符合率为96.15%，批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和8%，检测825份免疫疫苗牛血清样品和514份未免疫疫苗牛血清样品的阳性率分别为90.67%和7.39%。本研究建立的间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性、准确性、重复性，为IBRV的临床诊断、流行病学调查、免疫抗体监测、疫苗免疫效果评价等提供了一种简单快速的血清学检测方法。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白原核表达间接ELISA

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牛传染性鼻气管炎病毒壳膜蛋白VP 8的原核表达及抗血清制备

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中国兽医杂志 2019年第9期55卷 26-29,33页

作者：马振邦李霄阳许健王萍李永清江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045 北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京海淀100097

牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)是牛传染性鼻气管炎的病原体,IBRV壳膜蛋白VP8在病毒复制及致病过程中发挥重要作用。本试验将表达IBRV VP8基因的重组表达质粒pET-32a-VP8转化入表达宿主Transetta(DE3)菌株内,采用37℃,IPTG浓度为1.0 mol/L... 详细信息

牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)是牛传染性鼻气管炎的病原体,IBRV壳膜蛋白VP8在病毒复制及致病过程中发挥重要作用。本试验将表达IBRV VP8基因的重组表达质粒pET-32a-VP8转化入表达宿主Transetta(DE3)菌株内,采用37℃,IPTG浓度为1.0 mol/L诱导表达。将表达产物通过镍离子亲和层析纯化,将纯化的VP8融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清。结果表明,重组蛋白VP8以包涵体的形式存在,其相对分子质量约110 kDa,Western Blot分析结果表明:该蛋白与抗IBRV的血清能发生特异性反应,以其所制备的抗血清与IBRV及病毒壳膜蛋白VP8特异性结合。结果表明,我们获得的IBRV VP8蛋白具备良好的免疫原性,所制备的抗血清将为研究IBRV致病机理提供科学依据。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 VP8蛋白原核表达多克隆抗体

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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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动物医学进展 2020年第3期41卷 7-11页

作者：杨飞黄小洁刘丹侯力丹李建张敏郎洪武中国兽医药品监察所北京100081 国药集团动物保健股份有限公司湖北武汉430070

为制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白单克隆抗体,并对其免疫学特性进行分析与鉴定。用CHO细胞表达的IBRV-gD蛋白作为免疫原免疫8周龄的Balb/c小鼠,无菌取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,经小鼠腹腔注射,待... 详细信息

为制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白单克隆抗体,并对其免疫学特性进行分析与鉴定。用CHO细胞表达的IBRV-gD蛋白作为免疫原免疫8周龄的Balb/c小鼠,无菌取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,经小鼠腹腔注射,待小鼠腹腔膨胀后,收集腹水,纯化后进行单克隆抗体浓度、纯度、类及亚类、抗体效价、相对亲和常数、Western blot和间接免疫荧光测定。结果表明,筛选到2株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为4G3D4和9D7A7。4G3D4和9D7A7这2株单抗纯化后的浓度分别为2.6 mg/mL、1.6 mg/mL;亲和常数分别为2.30E+10、1.88E+09;抗体亚类均为IgG1,轻链为kappa链;且均能与IBRV发生特异性反应,与接种IBRV的MDBK细胞发生反应,产生特异性荧光;间接ELISA测定腹水效价分别为1∶204800、1∶12800。利用CHO细胞表达的IBRV-gD蛋白成功制备了2株单克隆抗体,为下一步建立特异性的IBRV检测方法奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白单克隆抗体

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