检索结果-内蒙古大学图书馆

高等学校化学学报 2002年第8期23卷 1483-1488页

作者：白泉孔宇耿信笃西北大学现代分离科学研究所现代分离科学陕西省重点实验室西安710069

用疏水相互色谱 (HPHIC)对还原胍变性牛胰岛素在疏水界面上的折叠与复性进行了研究 .结果表明 ,采用普通流动相时 ,对还原胍变胰岛素的复性效果较差 ,而采用氧化型流动相可使其复性效率提高到 66% ,并用反相色谱 (RPLC)、紫外吸收光谱... 详细信息

用疏水相互色谱 (HPHIC)对还原胍变性牛胰岛素在疏水界面上的折叠与复性进行了研究 .结果表明 ,采用普通流动相时 ,对还原胍变胰岛素的复性效果较差 ,而采用氧化型流动相可使其复性效率提高到 66% ,并用反相色谱 (RPLC)、紫外吸收光谱、荧光光谱及 MALDI-TOF对其复性效果进行了验证 .同时与体积排阻色谱 (SEC)和稀释法对还原胍变胰岛素的复性结果进行了比较 .结果表明 ,SEC根本无法使还原胍变胰岛素复性 ,而稀释法的复性效率仅有 2 % .这进一步表明 HPHIC是变性蛋白复性的有效工具 ,变性蛋白在疏水界面折叠过程中 ,蛋白质与固定相之间的疏水相互作用对蛋白折叠起着关键性的作用。

关键词：疏水色谱还原型胍变性牛胰岛素折叠特性蛋白体积排阻色谱稀释法复性

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牛胰岛素去折叠过程的高效液相色谱法分析

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色谱 1997年第5期15卷 420-422页

作者：董方霆廖杰蔡耘沈世杰军事医学科学院国家生物医学分析中心

建立了反相高效液相色谱法动态监测牛胰岛素在二硫苏糖醇存在下去折叠的过程。牛胰岛素在二硫苏糖醇作用下，首先发生构象变化，形成稳定的中间体后进一步断裂分子间的二硫键，形成Ａ链和Ｂ链。去折叠过程通过基质辅助激光解吸附质谱得... 详细信息

建立了反相高效液相色谱法动态监测牛胰岛素在二硫苏糖醇存在下去折叠的过程。牛胰岛素在二硫苏糖醇作用下，首先发生构象变化，形成稳定的中间体后进一步断裂分子间的二硫键，形成Ａ链和Ｂ链。去折叠过程通过基质辅助激光解吸附质谱得到了鉴定。

关键词：高效液相色谱牛胰岛素二硫苏糖醇去折叠

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毛细管区带电泳监测牛胰岛素的去折叠过程

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分析化学 2001年第5期29卷 538-541页

作者：董标董方霆王京兰钱小红军事医学科学院国家生物医学分析中心!北京100850

用毛细管区带电泳监测了二硫苏糖醇作用下二硫键还原引起的牛胰岛素去折叠全过程 ,同时用离线的基质辅助激光解吸 /电离飞行时间质谱配合确证。从毛细管电泳谱图能直接观察胰岛素去折叠过程中发生的变化 ,获得蛋白质去折叠信息。结果表... 详细信息

用毛细管区带电泳监测了二硫苏糖醇作用下二硫键还原引起的牛胰岛素去折叠全过程 ,同时用离线的基质辅助激光解吸 /电离飞行时间质谱配合确证。从毛细管电泳谱图能直接观察胰岛素去折叠过程中发生的变化 ,获得蛋白质去折叠信息。结果表明 ,毛细管区带电泳作为监测蛋白质构象变化的一种有效手段 ,方法简便、快速、灵敏度高、样品消耗量少

关键词：毛细管区带电泳牛胰岛素基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱蛋白质去折叠

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牛胰岛素事件及其科学社会学研究

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自然辩证法通讯 1992年第1期14卷 26-34页

作者：黄祥云浙江省台州地区行署办公室

中国科学家从1958年8月开始,经过七年多时间的艰苦努力,于1965年9月17日在世界上第一次用化学方法成功地合成结晶牛胰岛素,在国内外引起了巨大轰动,这是中华人民共和国在化学基础研究方面取得的第一项世界级水平的成果(以下简称牛胰岛... 详细信息

中国科学家从1958年8月开始,经过七年多时间的艰苦努力,于1965年9月17日在世界上第一次用化学方法成功地合成结晶牛胰岛素,在国内外引起了巨大轰动,这是中华人民共和国在化学基础研究方面取得的第一项世界级水平的成果(以下简称牛胰岛素事件)。国内外对胰岛素合成的概况作了大量报道,发表了一些总结性或评论性的文章。但是,迄今为止,还没有人对此进行具体的、客观的科学社会学分析。本文在积累大量具体材料的基础上,重构中国现代科技史上这一历时七年多、十分引人注目的基础研究事例;把科学史的案例分析与科学社会学研究结合起来,指出科研组织良性运行的条件,构建政治—科学互动的新模式。

关键词：结晶牛胰岛素科学社会学

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牛胰岛素的酰胺化反应及其六酰胺产物的分离及鉴定

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生物化学杂志 1991年第1期7卷 1-7页

作者：朱应麒 S.C.Joseph Fu C.Y.Lai 中国科学院上海生物工程实验基地 200233 Department of Biochemistry UMDNJ-New Jersey Medical school Roche Institute of Molecular Biology

牛胰岛素用1％三氟化硼甲醇溶液反应后所得六甲酯与饱和氨甲醇溶液反应,在室温下约经144小时可完全酰胺化。反应过程用红外光谱及酰胺含量分析测定。所得酰胺化粗产品经Sephadex G-75凝胶层析可以将胰岛素六酰胺化合物从其聚合物中分离... 详细信息

牛胰岛素用1％三氟化硼甲醇溶液反应后所得六甲酯与饱和氨甲醇溶液反应,在室温下约经144小时可完全酰胺化。反应过程用红外光谱及酰胺含量分析测定。所得酰胺化粗产品经Sephadex G-75凝胶层析可以将胰岛素六酰胺化合物从其聚合物中分离提纯。由红外光谱、紫外光谱及圆二色散光谱测定表明:牛胰岛素的六酰胺化合物的构象与胰岛素有很大不同,其生物活性也丧失殆尽。

关键词：牛胰岛素酰胺化反应六酰胺胰岛素

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牛胰岛素淀粉样纤维化及其细胞毒性作用的研究

牛胰岛素淀粉样纤维化及其细胞毒性作用的研究

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作者：王一敏陕西师范大学

学位级别：硕士

胰岛素是胰脏中胰岛β细胞分泌的一种相对分子质量较小的蛋白质激素,它的主要功能是降低体内血糖含量,因此临床上常用于治疗糖尿病。但是胰岛素药物在生产、运输、储存利临床应用中常常会形成淀粉样蛋白聚集,这些淀粉样聚集体可能具有... 详细信息

胰岛素是胰脏中胰岛β细胞分泌的一种相对分子质量较小的蛋白质激素,它的主要功能是降低体内血糖含量,因此临床上常用于治疗糖尿病。但是胰岛素药物在生产、运输、储存利临床应用中常常会形成淀粉样蛋白聚集,这些淀粉样聚集体可能具有免疫原性和其他副作用,从而影响其疗效。本实验室前期的研究表明,20种常见氨基酸对牛胰岛素蛋白具有一定的稳定作用。本研究筛选出五种具有代表性的氨基酸,研究其对胰岛素纤维化的抑制作用机理。此外,为进一步探索胰岛素淀粉样纤维的形成动力学机制,纤维化过程中的蛋白结构改变,以及不同纤维形态的生物效应,我们采用人红细胞为体外实验模型,对胰岛素淀粉样纤维的细胞毒性作用进行了分析,并通过对细胞膜胆固醇修饰,研究不同细胞膜脂质组成与淀粉样纤维毒性作用的关系,同时与淀粉样肽Aβ25-35的细胞毒性作用进行比较。实验结果表明,氨基酸对胰岛素淀粉样纤维的形成有延迟作用,延迟作用的不同可导致不同的纤维形态,Arg的延迟作用最强;胰岛素纤维对红细胞有溶血作用,这种作用与纤维的形态无关,其溶血机制与Aβ25-35也不一样。本研究揭示了蛋白质或多肽淀粉样纤维的细胞毒性与纤维形态无关,而与蛋白在自组装过程中形成的β折叠结构有关,也与细胞膜的脂质构成密切相关。实验主要方法和结论: 一、氨基酸对胰岛素淀粉样纤维形成的抑制作用 1.胰岛素淀粉样纤维形成过程的ThT荧光及电泳分析牛胰岛素在pH1.6,57℃的条件下,可在2 h左右开始形成淀粉样纤维。ThT荧光曲线与纤维的生长过程相一致,该过程主要包括三个阶段:成核,生长和纤维形成阶段。通过ThT荧光测定、蛋白纤维的巯基测定及聚丙烯酰胺凝胶电泳等实验技术,研究了在氨基酸存在的条件下,胰岛素淀粉样纤维形成的动力学机制。 2.氨基酸对胰岛素淀粉样纤维形成具有抑制作用 ThT荧光结果表明加入氨基酸有效地延迟了纤维的生长,并且不同氨基酸的延迟作用各不相同。在我们所选的五种氨基酸中His延迟时间最短,之后依次是Pro、Thr和Gin,延迟作用最强的是Arg,这可能与Arg具有分子伴侣作用,能够促进蛋白分子折叠的作用有关。 3.氨基酸对胰岛素淀粉样纤维的形貌影响在氨基酸的作用下,胰岛素淀粉样纤维的形态发生了一定程度的改变。透射电镜结果显示,加His后与不加任何氨基酸处理的胰岛素纤维形态相似,都是中空结构,但加His后形成的纤维较短并聚集成束状;加Pro、Thr和Gin处理形成的纤维之间的形态相似,无中空的束状纤维结构;而加Arg处理后观察明显的纤维状聚集。 4.氨基酸对胰岛素淀粉样纤维形成过程中巯基生成的影响在胰岛素纤维化过程中对可能生成的的巯基进行检测,结果表明胰岛素纤维化涉及二硫键断裂而产生自由巯基,该反应与纤维生长的过程一致。加入氨基酸后,自由巯基生成有所延迟.但Arg处理后不能抑制巯基生成,与其抑制纤维生成的作用并不相关。由此可推测Arg仅是抑制蛋白纤维的形成而并不抑制蛋白去折叠或是形成中间体状态。二、胰岛素淀粉样纤维的细胞毒性作用 1.胰岛素淀粉样纤维导致红细胞聚集作用和溶血作用采用人红细胞为实验模型,研究了胰岛素淀粉样纤维的细胞毒性作用。结果表明低浓度的胰岛素淀粉样纤维能够导致红细胞聚集,而高浓度的纤维能够导致红细胞溶血。几种纤维对细胞的作用大致相同,其形态上的差别并没有使其细胞毒性发生变化。 2.胆固醇修饰后胰岛素淀粉样纤维与Aβ（25-35）的细胞毒性作用差异胰岛素淀粉样纤维的细胞毒性与细胞膜的脂质构成密切相关。将红细胞经胆固醇修饰后,再用胰岛素淀粉样纤维和Aβ（25-35）相互作用,结果显示:采用Aβ（25-35）处理时,去胆固醇对红细胞有保护作用,加胆固醇反而有促进红细胞溶血作用。与此相反,胰岛素淀粉样纤维处理时去胆固醇促进红细胞溶血作用,加胆固醇有保护作用。这可能源于两者具有不同的分子量和一级序列,从而导致完全不同的细胞毒性机制。

关键词：氨基酸牛胰岛素淀粉样纤维细胞毒性溶血

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高湿度环境下衬底表面对牛胰岛素聚集的影响

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科学通报 2011年第12期56卷 956-961页

作者：刘建华刘京松谭菊花张莹莹吴钟良李宾周星飞宁波大学物理系宁波315211 中国科学院上海应用物理研究所上海201800

利用原子力显微镜观察了牛胰岛素(bovine insulin)在高湿度环境下(相对湿度大于90%)、在4种不同衬底表面上的聚集行为.在高湿度环境下,衬底表面会形成一层纳米级水膜,牛胰岛素分子会在水膜中扩散、迁移、聚集.原子力显微镜观察表明,牛... 详细信息

利用原子力显微镜观察了牛胰岛素(bovine insulin)在高湿度环境下(相对湿度大于90%)、在4种不同衬底表面上的聚集行为.在高湿度环境下,衬底表面会形成一层纳米级水膜,牛胰岛素分子会在水膜中扩散、迁移、聚集.原子力显微镜观察表明,牛胰岛素在不同衬底表面呈现出形式多样的聚集状态:在MICA表面形成排列比较规则的纤维;在APS-MICA表面呈现出较杂乱的聚集状态;在高温热解石墨(HOPG)表面蛋白分子主要吸附在HOPG的台阶上,堆积成高点并沿着台阶呈线状排列;在OTS-MICA表面,部分区域出现团聚,小部分聚集成纤维状.这些结果表明:在高湿度条件下,不同衬底表面对牛胰岛素的聚集有很大影响,可以利用不同性质的衬底表面来调制牛胰岛素的聚集.

关键词：湿度表面牛胰岛素聚集原子力显微镜

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3.0分辨率[L-Met]^(B0)牛胰岛素的晶体结构研究

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中国科学（B辑） 1991年第10期 1040-1046页

作者：宋海卫常文瑞梁栋材中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100080

基于[L-Met]_(BO)牛胰岛素(LMBBI)晶体的对称性和分子密堆积法的基本原理,确定了只使用一维的旋转和一维的平移即可确定分子在晶胞中的位置和取向的结构测定方案,依据此方案,使分子置换法的旋转函数的计算和用R因子搜索法精化旋转平移... 详细信息

基于[L-Met]_(BO)牛胰岛素(LMBBI)晶体的对称性和分子密堆积法的基本原理,确定了只使用一维的旋转和一维的平移即可确定分子在晶胞中的位置和取向的结构测定方案,依据此方案,使分子置换法的旋转函数的计算和用R因子搜索法精化旋转平移位置的计算大大简化。运用生物大分子刚体修正技术对模型进行了初步精化,用能量极小化的立体化学制约的最小二乘修正技术并辅以差值Fourier图人工分析对模型进行了调整和精化。在最终的电子密度图上,B链N端加长的L-Met在独立区两个分子中的表现比较清晰,相对于三方二锌猪胰岛素分子,B链N端的构象发生了较大的变化。

关键词：牛胰岛素晶体结构 LMBBI

来源：评论

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还原型牛胰岛素在疏水界面上的折叠

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西北大学学报（自然科学版） 2000年第2期30卷 126-130页

作者：白泉孔宇张养军耿信笃西北大学现代分离科学研究所现代分离科学陕西省重点实验室陕西西安710069

用疏水色谱 ( HPHIC)对还原变性的牛胰岛素在疏水界面上的折叠规律进行了研究 ,对于未还原的胍变和脲变 insulin来说 ,胍变 insulin用 HPHIC法可以完全复性 ,而脲变 insulin只能部分复性。对于还原变性的 insulin,HPHIC对胍变、脲变 ins... 详细信息

用疏水色谱 ( HPHIC)对还原变性的牛胰岛素在疏水界面上的折叠规律进行了研究 ,对于未还原的胍变和脲变 insulin来说 ,胍变 insulin用 HPHIC法可以完全复性 ,而脲变 insulin只能部分复性。对于还原变性的 insulin,HPHIC对胍变、脲变 insulin只能部分复性。在非氧化型流动相中 ,它们的复性情况较差 ,而采用氧化型流动相 ,有助于二硫键的正确对接 ,可大大提高胍变和脲变 insulin的复性效率。此外 ,还发现有 insulin折叠中间体存在。

关键词：蛋白折叠疏水界面二硫键配对牛胰岛素还原型

来源：评论

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1.葡萄球菌核酸酶R及葡萄球菌核酸酶R型N端片段--SNR141的晶体学研究;2.B0-(L-精氨酸)牛胰岛素晶体结构测定

1.葡萄球菌核酸酶R及葡萄球菌核酸酶R型N端片段--SNR141的晶体学...

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作者：叶升中国科学院生物物理研究所

学位级别：博士

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