检索结果-内蒙古大学图书馆

中国草食动物科学 2025年第1期45卷 44-49页

作者：谢世斌郑辉沙洲房琳琳尼博张慧董雅琴魏荣崔进青岛农业大学兽医学院青岛266000 中国动物卫生与流行病学中心青岛266032 农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方) 青岛266032

本研究旨在建立更加灵敏的牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)检测方法,为BRV的病原学调查及畜牧养殖行业疫病防控提供更加准确和灵敏的技术支持。根据BRV VP6基因组序列,利用Oligo7.56软件设计并合成特异性引物与探针,通过优化反应条件... 详细信息

本研究旨在建立更加灵敏的牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)检测方法,为BRV的病原学调查及畜牧养殖行业疫病防控提供更加准确和灵敏的技术支持。根据BRV VP6基因组序列,利用Oligo7.56软件设计并合成特异性引物与探针,通过优化反应条件,建立检测BRV的微滴式数字RT-PCR方法,同时开展特异性、敏感性和重复性试验,并将建立的方法应用于14份临床样品的检测。结果表明,本研究所建方法的最低检测限为1.83 copies/μL,具有良好的可重复性,与牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型均无交叉反应。对14份临床样品进行检测,共检测出4份阳性样品,阳性率为28.57%,检测结果与实时荧光定量RT-PCR检测结果的符合率为100.00%。综上说明,本研究建立的BRV微滴式数字RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可应用于临床样本的检测,为BRV的诊断和流行病学调查提供了技术支持。

关键词：牛轮状病毒 VP6基因微滴式数字RT-PCR

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牛轮状病毒VP4蛋白的原核表达及在鼠体内的免疫原性评价

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中国动物传染病学报 2025年

作者：尹梦丽刘景难尹欣悦高恒赟马忠臣陈创夫石河子大学动物科技学院绵羊健康养殖与人兽共患病防控协同创新中心动物健康养殖国际联合研究中心昌吉州动物疾病预防控制中心伊犁州动物疾病控制与诊断中心

构建牛轮状病毒（BRV）VP4基因重组表达载体，获得重组蛋白并对其免疫效果初步评价，为开发BRV候选基因工程疫苗奠定基础。对BRV VP4基因序列进行密码子偏好优化，构建BRV VP4大肠杆菌原核表达系统，将重组质粒转化到BL21（DE3）感受态... 详细信息

构建牛轮状病毒（BRV）VP4基因重组表达载体，获得重组蛋白并对其免疫效果初步评价，为开发BRV候选基因工程疫苗奠定基础。对BRV VP4基因序列进行密码子偏好优化，构建BRV VP4大肠杆菌原核表达系统，将重组质粒转化到BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达后分析重组蛋白表达形式。用纯化后重组蛋白与弗氏佐剂混合免疫小鼠。间接ELISA方法检测血清中特异性抗体IgG及亚型IgG1和IgG2a水平；最后通过中和试验检测血清中和抗体滴度。结果显示：本研究成功构建了VP4重组蛋白的原核表达系统；VP4重组蛋白表达大小约为80 kDa，与理论大小相符且表达形式为包涵体；VP4重组蛋白具有较高的反应原性；VP4重组蛋白免疫小鼠后能刺激其产生特异性IgG抗体，IgG1和IgG2a检测结果显示，免疫后IgG2a/IgG1的比值均大于1，即偏向于刺激小鼠Th1型细胞免疫。血清中和抗体水平随免疫天数具有增长趋势，42 d时达到顶峰，效价为1:92。本研究成功获得了VP4重组蛋白并制备了VP4蛋白亚单位疫苗，且在小鼠体内具有较好的免疫效果。

关键词：犊牛腹泻病牛轮状病毒 VP4蛋白原核表达中和试验

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牛轮状病毒检测方法研究进展

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吉林畜牧兽医 2025年第2期46卷 160-162页

作者：孙兴忠曹利利姚远宋延来王楠董航郭衍冰吉林省畜牧兽医科学研究院吉林长春130062 延边大学农学院吉林延吉133400

牛轮状病毒(BRV)是造成犊牛腹泻的主要病原之一,对新生犊牛易感,可引起严重的腹泻症状,重症可导致死亡,对养牛业造成巨大经济损失。该病与多种腹泻病症状相似,在临床上很难辨别,所以需借助实验室检测进行确诊。现阶段,BRV检测方法众多,... 详细信息

牛轮状病毒(BRV)是造成犊牛腹泻的主要病原之一,对新生犊牛易感,可引起严重的腹泻症状,重症可导致死亡,对养牛业造成巨大经济损失。该病与多种腹泻病症状相似,在临床上很难辨别,所以需借助实验室检测进行确诊。现阶段,BRV检测方法众多,而每一种方法都有各自的优缺点,本文主要以病原学检测、免疫学检测和分子生物学检测对应的方法分别论述,为该病临床检测提供一定的方向。

关键词：牛轮状病毒犊牛腹泻检测方法

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牛轮状病毒VP6重组蛋白化学发光免疫分析检测方法的建立

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中国兽医卫生 2025年第1期 36-43页

作者：王润清王媛媛孙航李琦翟新验孙雨张振杰北京农学院动物医学院中国动物疫病预防控制中心中国动物卫生与流行病学中心农业农村部环塔里木畜草资源利用重点实验室塔里木大学动物科学与技术学院

实验分析了牛轮状病毒VP6序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对所选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成的核苷酸序列连接至pET32a载体,构建重组质粒pET32a-VP6,将重组质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞株中,扩大培养并成... 详细信息

实验分析了牛轮状病毒VP6序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对所选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成的核苷酸序列连接至pET32a载体,构建重组质粒pET32a-VP6,将重组质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞株中,扩大培养并成功诱导表达出纯度较高的包涵体VP6蛋白,蛋白大小约为57 kDa,纯度约为94%,且VP6重组蛋白与其他疫病抗体无非特异性交叉。通过将纯化后的pET32a-VP6重组蛋白作为包被抗原构建牛轮状病毒抗体化学发光免疫分析检测方法,该方法特异性强,对其余牛类病原无交叉反应,且其组内与组间变异系数均低于12%,具有良好的稳定性与重复性,为开发更为成熟的牛轮状病毒抗体检测试剂盒奠定了基础,具有较高的应用推广价值。

关键词：牛轮状病毒 VP6蛋白原核表达蛋白纯化免疫分析化学发光

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牛轮状病毒抗原捕获ELISA方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2018年第12期40卷 1142-1146页

作者：常继涛张佳昕于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

为建立牛轮状病毒(BRV)抗原检测方法,本研究以BRV VP6蛋白的多克隆抗体为捕获抗体、VP7蛋白的G6/G10共享型单克隆抗体(MAb)为检测抗体,建立了BRV抗原捕获ELISA方法。特异性试验结果显示,该ELISA方法与牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒、牛细小... 详细信息

为建立牛轮状病毒(BRV)抗原检测方法,本研究以BRV VP6蛋白的多克隆抗体为捕获抗体、VP7蛋白的G6/G10共享型单克隆抗体(MAb)为检测抗体,建立了BRV抗原捕获ELISA方法。特异性试验结果显示,该ELISA方法与牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒、牛细小病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒以及阿卡斑病毒无交叉反应。敏感性试验结果显示,本研究建立的ELISA方法最低可以检出10^(4.2) TCID_(50)病毒,而商品化ELISA试剂盒和RT-PCR方法的最低检出限分别为10^(4.86) TCID_(50)和10^(3.36) TCID_(50)病毒。该方法组内和组间的变异系数均小于10%,表明重复性良好。应用该ELISA方法对67份牛腹泻粪便样品进行检测,结果显示BRV阳性率为18%,与商品化试剂盒和RT-PCR方法的符合率均为100%。本研究建立的抗原捕获ELISA方法可以用于BRV的规模化检测,为BRV的病原流行病学调查研究提供了有效的技术手段。

关键词：牛轮状病毒抗原捕获ELISA 检测单克隆抗体

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牛轮状病毒受体分析

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中华微生物学和免疫学杂志 1998年第6期18卷 449-452页

作者：李金慧訾自强任中原天津医科大学微生物学教研室

目的分析牛轮状病毒受体的理化性质及该受体在气管粘膜组织的分布。方法采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）、酶消化法、固相分析法对纯化的牛轮状病毒受体进行分析，以免疫组化法检测了新生牛气管粘膜细胞表面牛轮... 详细信息

目的分析牛轮状病毒受体的理化性质及该受体在气管粘膜组织的分布。方法采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）、酶消化法、固相分析法对纯化的牛轮状病毒受体进行分析，以免疫组化法检测了新生牛气管粘膜细胞表面牛轮状病毒受体。结果牛轮状病毒受体ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分子量为４８０００，该受体对胰蛋白酶及ＰｒｏｎａｓｅＥ蛋白酶敏感，经Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ及Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｕｒｅａｆａｃｉｅｎｓ神经氨酸酶作用后，受体失去结合病毒的生物学活性。免疫组化试验结果为阳性。结论实验结果表明牛轮状病毒受体是结构复杂的糖蛋白，唾液酸残基是受体与牛轮状病毒作用位点的组成部分。新生牛气管粘膜细胞表面有牛轮状病毒受体存在。

关键词：牛轮状病毒受体气管粘膜

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牛轮状病毒基因重配二价减毒疫苗接种怀孕母牛的免疫原性评价

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中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 481-484页

作者：常继涛于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为评价牛轮状病毒(BRV)基因重组二价减毒疫苗(LLR-85和R191株)对怀孕母牛的免疫反应,本研究将RVLLR-85(G10)和R191(G6)株等比例混合后进行乳化,肌肉途径接种怀孕7个～8个月的母牛。采用间接ELISA和病毒中和(V N)试验对接种牛血清抗BRV的... 详细信息

为评价牛轮状病毒(BRV)基因重组二价减毒疫苗(LLR-85和R191株)对怀孕母牛的免疫反应,本研究将RVLLR-85(G10)和R191(G6)株等比例混合后进行乳化,肌肉途径接种怀孕7个～8个月的母牛。采用间接ELISA和病毒中和(V N)试验对接种牛血清抗BRV的IgG、IgA以及V N抗体进行检测。结果显示,接种2周后抗体水平达到峰值,可以使原有的抗体滴度升高4倍～32倍,高滴度抗体可持续约2个月,接种母牛均未发生流产等副反应。犊牛通过饲喂初乳,可以在出生后1 d内获得最高水平的血清和肠道粘膜抗体。结果表明,BRV基因重组二价减毒疫苗对孕牛不但具有良好的安全性、而且其高滴度抗体可以通过初乳使新生犊牛获得有效的被动免疫。这些研究结果为该疫苗的临床应用提供了实验依据。

关键词：牛轮状病毒基因重配二价减毒疫苗怀孕母牛

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牛轮状病毒VP6蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

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中国兽医科学 2018年第11期48卷 1352-1357页

作者：李木子刘佳丽王瑞翀李一经王丽唐丽杰徐义刚乔薪瑗东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省疾病控制中心黑龙江哈尔滨150030

为建立检测牛轮状病毒（BRV）的双抗体夹心ELISA方法,本研究制备了家兔抗牛轮状病毒VP6蛋白的多克隆抗体,并以VP6蛋白为免疫原通过细胞融合和筛选获得了5株分泌抗BRV VP6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为5C9、3G10、6E11、4D1... 详细信息

为建立检测牛轮状病毒（BRV）的双抗体夹心ELISA方法,本研究制备了家兔抗牛轮状病毒VP6蛋白的多克隆抗体,并以VP6蛋白为免疫原通过细胞融合和筛选获得了5株分泌抗BRV VP6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为5C9、3G10、6E11、4D10和5A3。Western-blot和间接免疫荧光试验结果均表明,5株单抗与BRV具有良好的亲和性。以纯化的家兔抗BRV VP6蛋白多抗为捕获抗体,以4D10单抗为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA方法。敏感性试验表明,该方法对BRV的最低检出量（TCID50）为9.884×10^4/mL。特异性试验结果表明,与PRV、PEDV、BPV及TGEV均无交叉反应。板间和板内重复性试验结果显示,该方法具有良好的重复性。对95份临床样品进行检测,与RT-PCR方法比较,符合率为100%。综上,本研究建立的双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于BRV的快速检测。

关键词：牛轮状病毒 VP6蛋白单克隆抗体双抗体夹心ELISA

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牛轮状病毒检测方法的研究进展

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中国兽医学报 2024年第4期44卷 847-852页

作者：白和平张洪伟刘旭郭建军史秋梅王晓丹河北农业大学中兽医学院河北保定071000 承德市农林科学院河北承德067500 河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066004

牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)是引起犊牛腹泻的主要病原体,世界范围内腹泻样本中BRV感染率为20%~60%,该病的发生对全球的牛养殖业造成严重的危害。目前,尚无BRV特效抗病毒药物和高效的疫苗,早期诊断显得尤为重要。然而,国内外已建... 详细信息

牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)是引起犊牛腹泻的主要病原体,世界范围内腹泻样本中BRV感染率为20%~60%,该病的发生对全球的牛养殖业造成严重的危害。目前,尚无BRV特效抗病毒药物和高效的疫苗,早期诊断显得尤为重要。然而,国内外已建立了PCR、等温扩增、免疫组织化学技术、胶体金免疫层析技术、间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验、电化学生物传感器等检测方法,这些方法在BRV防制中发挥了重要作用。通过对现有BRV检测方法进行综述和比较,以期为BRV新型检测方法的建立及防控提供参考。

关键词：牛轮状病毒犊牛腹泻检测方法

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牛轮状病毒多克隆抗体制备及特性分析

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畜牧与兽医 2024年第7期56卷 72-77页

作者：孙心如孙敏周洪婷李素芬张雪寒周金柱贡嘎索朗斯珠李彬西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

旨在优化G6P[1]型牛轮状病毒(bovine rotavirus, BRV)在MARC-145细胞中的培养条件,制备其兔源多克隆抗体,并对制备的多抗进行效价检测及鉴定。对G6P[1]型BRV毒株NCDV进行不同病毒接种量及收毒时间优化,确定病毒在MARC-145细胞中的最佳... 详细信息

旨在优化G6P[1]型牛轮状病毒(bovine rotavirus, BRV)在MARC-145细胞中的培养条件,制备其兔源多克隆抗体,并对制备的多抗进行效价检测及鉴定。对G6P[1]型BRV毒株NCDV进行不同病毒接种量及收毒时间优化,确定病毒在MARC-145细胞中的最佳培养条件;以1×10^(7) TCID_(50) NCDV活毒作为免疫原免疫成年兔,制备兔源多克隆抗体;通过间接ELISA检测多抗效价,并通过间接免疫荧光试验(IFA)及中和试验鉴定其特异性。结果:NCDV毒株以感染比0.1、感染时间24 h为最佳培养条件,病毒滴度可至4.9×10^(6) TCID_(50)/mL;间接ELISA结果显示,多克隆抗体的效价为1∶51 200,表明NCDV具有良好的免疫原性;IFA及中和试验结果表明,NCDV多克隆抗体与G6P[1]型、G9P[1]型和G10P[11]型BRV毒株均能发生特异性反应,存在良好的交叉中和效应,表明制备的多抗具有良好的反应性。综上,本试验成功优化了NCDV毒株在MARC-145细胞中的增殖条件,并制备了高效价的兔源多克隆抗体,为后续BRV感染的血清学诊断及疫苗研发奠定了理论基础。

关键词：牛轮状病毒 NCDV毒株 MARC-145细胞多克隆抗体

来源：评论

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