检索结果-内蒙古大学图书馆

中药药理与临床 2012年第3期28卷 23-25页

作者：张恩户乔慧王光建王国全赵子剑陕西中医学院药理教研室咸阳712046 怀化学院民族药用植物资源研究怀化418008

目的:建立牛黄上清片抗菌效价的微孔比浊法。方法:采用L9(34)正交表制备牛黄上清片供试品溶液,采用二倍微孔等倍稀释法,测定各供试品溶液对6种标准菌株的MIC和MBC,确定供试品溶液的制备方法和试验菌株;考察二倍微孔等倍稀释法中培养基p... 详细信息

目的:建立牛黄上清片抗菌效价的微孔比浊法。方法:采用L9(34)正交表制备牛黄上清片供试品溶液,采用二倍微孔等倍稀释法,测定各供试品溶液对6种标准菌株的MIC和MBC,确定供试品溶液的制备方法和试验菌株;考察二倍微孔等倍稀释法中培养基pH、板位等因素对抗菌结果(OD值)的影响;按照《中国药典》2010年版(二部)抗生素微生物检定法的比浊法原理,确定黄芩苷+栀子苷(5:2)为参照药物,以0.035g/ml(规定为1000 U/ml)为中心浓度,按剂距0.8配制终浓度,以二倍微孔等倍稀释法测定各溶液的OD差值,绘制黄芩苷+栀子苷(5:2)的量-效标准曲线,计算方程式;进行稳定性、重复性和平均回收率试验;对3各厂家的牛黄上清片进行效价测定,确定效价限度。结果 :牛黄上清片水煎醇沉法1.6号供试品溶液(10倍量水煎1.5小时,醇沉浓度为50%)对金黄色葡萄球菌的抗菌作用最强。培养基pH和板位对OD值的影响不大,选用pH7.0为培养基pH;黄芩苷+栀子苷(5:2)的中间浓度为0.035g/ml,其浓度在0.016～0.08g/ml范围内,光密度和溶液浓度对数呈较好的线性关系,标准曲线回归方程为y=-0.3291X-0.3978,r2=0.9738。误差项S2=0.0612,标准误差Sm=0.078,R的平均β的可信限率FL%=11.34%;供试品在5h内稳定性良好,RSD(%)为5.14;供试品重复性良好,RSD(%)为8.68;平均回收率为100.41%,RSD=1.9;由黄芩苷+栀子苷标准曲线方程计算得出,三个厂家的牛黄上清片效价分别为1431.03U/g、1396.55U/g、1448.28U/g。结论:牛黄上清片供试品的制备方法为:取牛黄上清片20片,去除糖衣,用乳钵碾成细粉。精密称取本品10g,加水200ml煎煮1.5h,过滤,滤液加乙醇使含醇浓度50%,沉淀过夜,过滤,滤液浓缩,用灭菌PBS液定容至10ml,即得。使用前用0.22μm微孔滤膜过滤。参照药物溶液的制备方法为:精密称取黄芩苷3.5714g和栀子苷1.4286g混匀,置于10ml的容量瓶中,加适量的无菌PBS溶解完全,稀释至刻度,做为标准品储备液,4℃保存,备用。试验菌株为金黄色葡萄球菌ATCC 25923,培养时间为6小时。测定方法为:配制pH值7.0抗生素Ⅲ号培养基和选取金黄色葡萄球菌标准菌株按照微孔比浊法测定抗菌效价,可信限率不得大于12%。本品每1g的效价不得少于1100黄芩苷和栀子苷5:2混合物单位。所建立的微孔比浊法用于牛黄上清片抗菌效价的测定,方法简便,稳定性、重复性和回收率好,基本符合抗生素微生物比浊法的要求。

关键词：牛黄上清片抗生素微生物检定法微孔比浊法

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