检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2025年第4期56卷 1989-1994页

作者：匡尹之徐凤培周沛华南农业大学兽医学院广州510642

犬圆环病毒(canine circovirus, CanineCV)是一种与犬消化道疾病相关的病毒,该病毒于2012年在美国首次从犬中鉴定。随后,研究人员相继在狼、獾、北极狐、赤狐、豺中检测到了CanineCV。2016年,我国首次报道从犬中检测到CanineCV,然而,关... 详细信息

犬圆环病毒(canine circovirus, CanineCV)是一种与犬消化道疾病相关的病毒,该病毒于2012年在美国首次从犬中鉴定。随后,研究人员相继在狼、獾、北极狐、赤狐、豺中检测到了CanineCV。2016年,我国首次报道从犬中检测到CanineCV,然而,关于CanineCV在我国野生动物中的感染情况尚不清楚。采集一病死水獭的组织病料,利用PCR进行CanineCV的检测;设计CanineCV全基因组引物,对CanineCV阳性样本进行全基因组扩增、测序和基因序列分析。结果显示:通过PCR检测,发现1份水獭组织样本CanineCV阳性;通过全基因组扩增、测序、拼接,成功获得一条长度为2 063 nt的CanineCV全基因组序列;核苷酸同源性分析显示,该毒株与GenBank中其他毒株的基因序列同源性为84.6%~98.2%;遗传进化树分析发现,该毒株属于CanineCV-3型。首次在水獭中鉴定出CanineCV的感染,并成功获得了我国首条野生动物源CanineCV全基因组序列及其遗传进化信息。以上结果表明CanineCV感染水獭的潜在危害及其感染更多其他动物的可能性,从而提示人们应加强CanineCV感染不同动物的监测。

关键词：犬圆环病毒水獭流行病学遗传进化分析

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犬圆环病毒全基因组克隆与序列分析

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病毒学报 2016年第4期32卷 429-435页

作者：孙文超曹慧慧郑敏徐素萍张红云韦显凯苏姣秀何杰勇广西大学动物科技学院南宁530001 广西动物疫病预防控制中心南宁530001 玉林市动物疫病预防控制中心玉林537000 江州区动物疫病预防控制中心崇左532200

犬圆环病毒(Dog circovirus,DogCV)是近年来新发现的一种哺乳动物圆环病毒。为研究DogCV中国流行毒株基因组特性和遗传进化,以犬血清样品提取的DNA为模板,采用重叠PCR技术首次获得DogCV中国流行毒株的全基因组序列,命名为JZ98/2014。序... 详细信息

犬圆环病毒(Dog circovirus,DogCV)是近年来新发现的一种哺乳动物圆环病毒。为研究DogCV中国流行毒株基因组特性和遗传进化,以犬血清样品提取的DNA为模板,采用重叠PCR技术首次获得DogCV中国流行毒株的全基因组序列,命名为JZ98/2014。序列分析表明JZ98/2014全基因组长度为2063nt,编码3个主要开放阅读框:ORF V1(Rep蛋白,303个氨基酸)、ORF C1(Cap蛋白,270个氨基酸)和ORF C2(106个氨基酸)。同源性比较显示JZ98/2014与美国、欧洲流行毒株的全基因组序列同源性为82.1%-89.5%,而Rep和Cap基因同源性分别为82.1%-89.5%和84.6%-89.1%。遗传进化树分析显示,目前世界流行的DogCV存在多个分支,而JZ98/2014与美国、欧洲流行毒株处于不同分支。

关键词：犬圆环病毒基因进化分析

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犬圆环病毒Cap蛋白的生物信息学分析及原核表达

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中国动物传染病学报 2020年第2期28卷 86-91页

作者：汪伟辛佳亮杜倩韩知晓易驰喆闭璟珊曹亮庄忻雨张赫郑敏孙文超鲁会军金宁一广西大学动物科学技术学院南宁530004 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所长春130122 广西动物疫病预防控制中心南宁530000 温州大学病毒学研究所温州325035

犬圆环病毒(CanineCV)是近年被发现的圆环病毒属新成员,获取CaineCV Cap蛋白,为研究Cap蛋白的功能以及抗原表位奠定了基础。本研究以CaineCV GX2017株基因组作为模板,使用PCR方法扩增出Cap蛋白的基因序列,对其进行生物信息学分析,并克隆... 详细信息

犬圆环病毒(CanineCV)是近年被发现的圆环病毒属新成员,获取CaineCV Cap蛋白,为研究Cap蛋白的功能以及抗原表位奠定了基础。本研究以CaineCV GX2017株基因组作为模板,使用PCR方法扩增出Cap蛋白的基因序列,对其进行生物信息学分析,并克隆至pET-28a原,进行原核表达。结果表明:GX2017的N端2~26位氨基酸存在一个核定位信号,同时含有3个B细胞表位(aa7~aa14;aa150~aa174;aa233~aa253);第134位氨基酸为N-糖基化位点,第169和第238位氨基酸为O-型糖基化位点;进化分析表明,本研究的CanineCV Cap蛋白基因序列与欧美株同源性较低,且处在不同的分支;SDS-PAGE结果显示,重组Cap蛋白在*** BL21(DE3)中不能正确表达,切除了NLS的d(1-26)Cap蛋白能在*** BL21(DE3)中大量表达;Western blot 分析表明,该重组蛋白能与Anti-His 标签抗体发生特异性反应。本研究成功构建了pET-d(1-26)Cap重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中获得高水平表达,为进一步制备Cap蛋白的抗体奠定了基础。

关键词：犬圆环病毒 Cap蛋白生物信息学原核表达

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犬圆环病毒EvaGreen实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

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中国兽医学报 2023年第4期43卷 699-705页

作者：董杰刘若寒李守军周沛华南农业大学兽医学院广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室广东广州510642 华南农业大学兽医学院广东省宠物工程技术研究中心广东广州510642

建立了犬圆环病毒(canine circovirus,CanineCV)EvaGreen实时荧光定量PCR检测方法。用PCR方法克隆CanineCVRep基因中的高保守区,扩增的目的片段大小为217bp,将其克隆至pMD18-T载体上,构建PCR检测阳性参考质粒,并用阳性参考质粒,进行各... 详细信息

建立了犬圆环病毒(canine circovirus,CanineCV)EvaGreen实时荧光定量PCR检测方法。用PCR方法克隆CanineCVRep基因中的高保守区,扩增的目的片段大小为217bp,将其克隆至pMD18-T载体上,构建PCR检测阳性参考质粒,并用阳性参考质粒,进行各项反应条件优化。建立的标准曲线呈现出较高拟合性的线性回归,R2值为0.9995;该方法检测灵敏度为3.88×10^(1) copies/μL;在重复性试验中,组内和组间重复变异系数均小于2%,表明该方法具有良好的重复性;该方法对犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬流感病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型、犬冠状病毒等犬常见病原的检测均无交叉反应;临床样本检测表明,所建立的EvaGreen实时荧光定量PCR对CanineCV的阳性检出率为2.82%(5/177),高于普通PCR检测的CanineCV阳性率1.13%(2/177)。本研究成功建立了一种用于快速检测CanineCV的EvaGreen qPCR方法,该方法安全且具有较好的特异性、敏感性和重复性,可作为CanineCV感染的病原学检测工具。

关键词：犬圆环病毒 EvaGreen 实时荧光定量PCR

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犬圆环病毒Rep基因SYBR GreenⅠreal-time PCR方法的建立及应用

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中国兽医科学 2019年第12期49卷 1520-1526页

作者：韩知晓杜倩汪伟辛佳亮闫修魁梁莹莹朱远致何玄曹亮孙文超胡传活郑敏广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区动物疫病预防控制中心广西南宁530000 军事科学院军事兽医研究所吉林长春130122 沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110000 吉林医药学院检验学院吉林吉林132013 温州大学病毒学研究所浙江温州325035

为建立一种检测犬圆环病毒的快速诊断方法,本试验拟采用普通PCR方法扩增犬圆环病毒Rep基因,将目的基因克隆到T-Vector pMD19 (Simple),以测序正确的重组质粒作为模板,建立针对犬圆环病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,并... 详细信息

为建立一种检测犬圆环病毒的快速诊断方法,本试验拟采用普通PCR方法扩增犬圆环病毒Rep基因,将目的基因克隆到T-Vector pMD19 (Simple),以测序正确的重组质粒作为模板,建立针对犬圆环病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性和重复性试验。结果显示,Ct值与标准品在6.18×10^9~6.18×10^2copise/μL范围内呈良好的线性关系,其相关性为0.998,斜率为-3.671。检测下限为6.18×10^1copies/μL,且对猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、犬瘟热病毒、犬传染性肝炎病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型、狂犬病病毒等均无特异性扩增,所有稀释度标准品模板均在86.45℃出现特异性熔解峰。通过对临床样品进行检测,本方法对犬圆环病毒核酸的检出率为9.72%(7/72)。结果表明,本试验成功建立了针对犬圆环病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,可实现对犬圆环病毒快速、灵敏及准确的诊断。

关键词：犬圆环病毒 SYBR GreenⅠreal-time PCR Rep基因

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犬圆环病毒及犬细小病毒双重PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2017年第9期47卷 1140-1144页

作者：曹亮孙文超鲁会军田明尧刘云霞谢长占赵冠宇韩继成肖鹏鹏张金勇钱爱东金宁一吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122

为建立能同时检测犬圆环病毒(CanineCV)和犬细小病毒(CPV)的方法,根据CanineCV和CPV基因组的保守区域设计2对特异性引物,预期特异性扩增CanineCV和CPV的片段大小分别为984和668 bp。并将反应条件进行优化,建立了CanineCV和CPV的双重PCR... 详细信息

为建立能同时检测犬圆环病毒(CanineCV)和犬细小病毒(CPV)的方法,根据CanineCV和CPV基因组的保守区域设计2对特异性引物,预期特异性扩增CanineCV和CPV的片段大小分别为984和668 bp。并将反应条件进行优化,建立了CanineCV和CPV的双重PCR检测方法。特异性检测结果显示,该方法能特异性扩增CanineCV和CPV的目的条带,且未扩增出其他犬胃肠道病原;CanineCV和CPV的最低检出限分别为85.7和312 copies/L。对采集自广西地区的223份临床样品的检测结果显示,CanineCV的阳性率为2.24%(5/223)、CPV的阳性率为5.38%(12/223),后者与常规PCR检测方法相一致。结果表明,建立的双重PCR方法可以用于CanineCV和CPV的检测和流行病学调查。

关键词：犬圆环病毒犬细小病毒双重PCR

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犬圆环病毒ORF3基因的克隆及表达载体的构建

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中国病原生物学杂志 2018年第2期13卷 109-111,115页

作者：孙文超汪伟曹亮赵翠青赵海洋刘立明孟娟韩继成许汪王茂鹏陈征张涵郭丹丹陆祎婷夏秀秀郑敏鲁会军金宁一温州大学病毒学研究所浙江温州325035 军事兽医研究所广西动物疫病预防控制中心

目的克隆犬圆环病毒(Canine circovirus,CanineCV)ORF3基因,制备ORF3的抗体,为研究ORF3的功能奠定基础。方法以CanineCV基因组为模板,PCR扩增编码框ORF3全长序列。将ORF3基因克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET(28a)-O... 详细信息

目的克隆犬圆环病毒(Canine circovirus,CanineCV)ORF3基因,制备ORF3的抗体,为研究ORF3的功能奠定基础。方法以CanineCV基因组为模板,PCR扩增编码框ORF3全长序列。将ORF3基因克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET(28a)-ORF3。重组质粒转化入感受态细胞BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组蛋白ORF3,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果 PCR扩增出CanineCV编码框ORF3片段长度为318bp。构建的重组质粒pET(28a)-ORF3转化DE3后经IPTG诱导5h,表达分子质量单位(Mr)约为15×103蛋白,与预期相符。Western blot显示重组蛋白能被Anti-His标签抗体识别。结论成功构建了pET(28a)-ORF3重组原核表达质粒,并能在大肠杆菌中表达具有免疫反应性的ORF3,为抗ORF3抗体的制备奠定了基础。

关键词：犬圆环病毒 ORF3 原核表达

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犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

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动物医学进展 2017年第5期38卷 6-10页

作者：孙文超解长占赵冠宇曹亮郑敏曹慧慧张红云韦显凯韩继成温树波肖朋朋靖杰张萍鲁会军金宁一广西大学动物科技学院广西南宁53001 广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 广西玉林市动物疫病预防控制中心广西玉林537000

犬圆环病毒(DogCV)是圆环病毒科新发现的圆环病毒,旨在建立犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法。试验用PCR方法克隆犬圆环病毒ORF2基因保守区域,构建标准阳性质粒pClon007-ORF2。以标准阳性质粒pClon007-ORF2为模板对荧光定量PCR反应体... 详细信息

犬圆环病毒(DogCV)是圆环病毒科新发现的圆环病毒,旨在建立犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法。试验用PCR方法克隆犬圆环病毒ORF2基因保守区域,构建标准阳性质粒pClon007-ORF2。以标准阳性质粒pClon007-ORF2为模板对荧光定量PCR反应体系进行优化。结果表明,所建立的方法 Ct值与标准品在4.67×10~9 copies/μL^4.67×10~3 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-3.445。该方法检测灵敏度为4.67×10~1copies/μL。该方法对狂犬病病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型等犬常见病原的检测均无交叉反应;所有稀释度标准品模板均在83.35℃出现窄的特异性熔解峰。临床样品检测表明,所建立的实时荧光定量PCR对犬圆环病毒的阳性检测率为12.50%(4/32)。

关键词：犬圆环病毒 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR

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犬圆环病毒荧光RAA检测方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2022年第9期44卷 958-962页

作者：吕荞刘宇梦于子萍汪伟胡传活郑敏孙文超广西大学动物科学技术学院广西南宁530003 温州大学病毒学研究所浙江温州325035 广西动物疫病预防控制中心广西南宁530004

为建立一种高效、简便的犬圆环病毒(CCV)的检测方法,本研究针对CCV Rep基因设计了特异性引物和探针,同时构建了基于该病毒Rep基因的重组质粒标准品pCCV-Rep,经过优化后确定了CCV重组酶介导核酸等温扩增(RAA)检测方法引物、探针的最适浓... 详细信息

为建立一种高效、简便的犬圆环病毒(CCV)的检测方法,本研究针对CCV Rep基因设计了特异性引物和探针,同时构建了基于该病毒Rep基因的重组质粒标准品pCCV-Rep,经过优化后确定了CCV重组酶介导核酸等温扩增(RAA)检测方法引物、探针的最适浓度均为10μmol/L,在39℃恒温条件下20 min即可完成检测。利用该方法检测犬圆环病毒、狂犬病病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒等其他常见的犬源病毒,结果显示除CCV外,该方法对其他病毒均无交叉反应,特异性较强;将p CCV-Rep分别稀释为10~6拷贝/μL~10~0拷贝/μL后作为模板,进行敏感性试验,结果显示该方法最低检出限可达10~2拷贝/μL,敏感性较高;批内批间重复性试验结果均表明该方法具有良好的重复性。采用该方法与常规PCR方法同时检测82份犬粪便拭子,结果显示,该RAA方法检出阳性样品5份,检测结果与常规PCR一致。本实验首次建立的CCV荧光RAA检测方法简便、高效、特异、灵敏,为CCV的临床筛查与流行病学研究提供了可行技术。

关键词：犬圆环病毒重组酶介导核酸等温扩增技术检测方法

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犬圆环病毒病研究进展

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动物医学进展 2018年第4期39卷 97-100页

作者：孙文超汪伟曹亮易驰喆郑敏刘立明赵翠青鲁会军金宁一温州大学病毒学研究所浙江温州325035 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 广西动物疫病预防控制中心广西南宁530001 广西大学动物科技学院广西南宁530004

自2012年美国首次报道犬圆环病毒(CanineCV)以来,随后欧洲、北美洲及亚洲等地区陆续从腹泻犬中发现该病毒。犬圆环病毒可感染不同年龄段犬,尤其以幼龄犬感染率较高。该病毒可以感染狼和獾等食肉动物,经常与犬细小病毒发生混合感染,造成... 详细信息

自2012年美国首次报道犬圆环病毒(CanineCV)以来,随后欧洲、北美洲及亚洲等地区陆续从腹泻犬中发现该病毒。犬圆环病毒可感染不同年龄段犬,尤其以幼龄犬感染率较高。该病毒可以感染狼和獾等食肉动物,经常与犬细小病毒发生混合感染,造成犬的出血性腹泻。犬圆环病毒(CanineCV)与其他肠道病毒协同作用,加重胃肠道疾病。然而对于犬圆环病毒病的研究还没有完全深入,论文就目前已知犬圆环病毒病的病原特征与致病性、流行病学、诊断等方面的研究进展进行概述,为犬圆环病毒的研究提供参考。

关键词：犬圆环病毒病原学流行病学诊断

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