检索结果-内蒙古大学图书馆

猪CD151转基因PK-15细胞系构建及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒的易感性

微生物学报 2013年第5期53卷 507-514页

作者：黄燕燕郭睿张钰张鑫宇夏晓莉孙怀昌扬州大学兽医学院扬州225009

【目的】建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)易感的猪CD151转基因PK-15细胞系,研究CD151分子在PRRSV感染猪源细胞中的作用。【方法】用RT-PCR从猪肺泡巨噬细胞中扩增CD151全长cDNA,测序正确后克隆入真核表达载体pcDNA3;用重组载体pcDNA-CD151转染PK-15细胞,经G418抗性筛选获得转基因细胞系PK15-CD151,用RT-PCR和免疫荧光试验检测CD151表达;用VR-2332株PRRSV分别感染PK-15细胞、PK15-CD151细胞、MARC-145细胞和3D4-CD163细胞,定期观察细胞病变,用RT-PCR和免疫荧光试验检测病毒RNA基因组和病毒抗原,用半数组织细胞感染剂量测定病毒滴度。【结果】从猪巨噬细胞中克隆得序列正确的猪CD151 cDNA;从重组载体转染的PK-15细胞培养中筛选得G418抗性细胞克隆,并能正确表达猪CD151分子;在PRRSV感染后,PK15-CD151细胞虽然不表现明显的细胞病变,但能检测到病毒RNA基因组和病毒抗原,并能产生较高滴度的感染性病毒;该细胞系已在体外传30代以上,第10、20、30代细胞的PRRSV滴度无明显变化。【结论】猪CD151基因转染能使非易感PK-15细胞获得对PRRSV的易感性,提示猪CD151参与PRRSV感染猪源细胞。

关键词：猪CD151 转基因细胞系猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒

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TUNEL法检测PRRSV感染Marc-145细胞凋亡的研究

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中国预防兽医学报 2007年第1期29卷 42-45页

作者：汪铭书程安春刘伍梅刘芳李雪梅张平英周毅陈孝跃四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心四川雅安625014 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川雅安625014 四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心四川雅安625014 四川农业大学水产学院四川郫县611730 四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心四川雅安625014

为了研究PRRSV诱导Marc-145细胞凋亡的动态变化规律,收集PRRSV-SC1株感染Marc-145细胞后0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h和相同时间点未接种病毒的细胞样品,采用TUNEL法进行细胞凋亡的检测.结果表明,PRRSV能诱导Marc-145细... 详细信息

为了研究PRRSV诱导Marc-145细胞凋亡的动态变化规律,收集PRRSV-SC1株感染Marc-145细胞后0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h和相同时间点未接种病毒的细胞样品,采用TUNEL法进行细胞凋亡的检测.结果表明,PRRSV能诱导Marc-145细胞发生凋亡;在PRRSV感染后24 h开始出现凋亡,48 h凋亡更加明显,72 h达到高峰,随后细胞凋亡水平又有所下降,在感染后144 h,细胞的凋亡水平低于正常组.

关键词：猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒细胞凋亡 TUNEL法

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副猪嗜血杆菌、PCV2及PRRSV多联RT-PCR检测方法的建立及其应用

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中国兽医学报 2018年第8期38卷 1513-1518页

作者：罗尚星范京惠刘宝京邸晶美代飞常彦嫣孔园园左玉柱河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北农业大学动物科技学院河北保定071001

副猪嗜血杆菌（***）、猪圆环病毒2型（PCV2）及猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒（PRRSV）是引起猪呼吸系统疫病的3种重要病原，根据GenBank中这3种病原的基因组序列，选择基因序列的高保守区，分别设计合成了3对特异性引物进行3种病原的多... 详细信息

副猪嗜血杆菌（***）、猪圆环病毒2型（PCV2）及猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒（PRRSV）是引起猪呼吸系统疫病的3种重要病原，根据GenBank中这3种病原的基因组序列，选择基因序列的高保守区，分别设计合成了3对特异性引物进行3种病原的多重PCR，并对反应条件进行优化。利用建立的多重PCR方法，对河北省2012-2013年发生呼吸系统疾病的412份猪病料进行检测，并随机选择其中的57份，同时进行单一PCR检测，以确定2种方法检测结果的符合程度。结果表明，3对引物能特异扩增出大小分别为469，829，219bp的目的条带。灵敏度检测试验表明，***，PCV2和PRRSV的最低检测量分别为52．7，335．0，137．0Pg。412份临床样品检测结果显示，***在2012年的阳性率为44．2％，2013年为45．1％，提示这2年引起猪呼吸道疫病的主要病原是***。

关键词：副猪嗜血杆菌猪圆环病毒2型猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒多重RT-PCR

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断奶仔猪圆环病毒2型与多杀性巴氏杆菌混合感染的诊断

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中国兽医杂志 2014年第4期50卷 34-36页

作者：朱洪伟张贵山张艳秋徐佳萍章秀婷邢秀梅杨福合中国农业科学院特产研究所吉林长春130112 吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地吉林长春130112 吉林省东丰药业股份有限公司鹿场吉林东丰136313

仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）主要是由猪圆环病毒2型（PCV2）感染6～8周龄仔猪所引起的一种以渐进性消瘦、黄疸、间质性肺炎及淋巴系统退化为主要症状的传染病[1-3].该病毒主要感染猪的免疫器官,造成免疫系统功能降低,该病发病... 详细信息

仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）主要是由猪圆环病毒2型（PCV2）感染6～8周龄仔猪所引起的一种以渐进性消瘦、黄疸、间质性肺炎及淋巴系统退化为主要症状的传染病[1-3].该病毒主要感染猪的免疫器官,造成免疫系统功能降低,该病发病症状与猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）等病毒感染相似,且也易混合感染,此外,PMWS也常引起细菌继发混合感染,给养猪业造成了巨大的经济损失[2-5].

关键词：猪断奶后多系统衰竭综合征猪圆环病毒2型混合感染多杀性巴氏杆菌猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒诊断免疫系统功能发病症状

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地高辛标记cDNA探针检测猪繁殖与呼吸综合征病毒

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畜牧与兽医 2007年第5期39卷 43-45页

作者：李广明姜平李玉峰秦承学南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

本研究以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)S1株ORF7基因为模板,通过RT-PCR技术扩增出394 bp的cDNA。用PCR纯化试剂盒纯化PCR产物,并以此为模板制备出地高辛标记的cDNA探针。特异性试验表明,该探针仅与PRRSV核酸反应,与PPV、PRV、FMDV、HCV... 详细信息

本研究以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)S1株ORF7基因为模板,通过RT-PCR技术扩增出394 bp的cDNA。用PCR纯化试剂盒纯化PCR产物,并以此为模板制备出地高辛标记的cDNA探针。特异性试验表明,该探针仅与PRRSV核酸反应,与PPV、PRV、FMDV、HCV及PCV2的核酸反应为阴性。敏感性检测表明,采用CSPD化学发光检测时,硝酸纤维素膜上最低检出量为62.5 pg;尼龙膜上最低检出量为0.5 pg。应用该探针,在尼龙膜上对10份PRRSV阳性病料的组织RNA样品进行检测,结果均为阳性,与RT-PCR检测结果一致,证明该方法可用于PRRSV临床样品检测。

关键词：地高辛标记探针斑点杂交化学发光猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒

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转猪CD151基因PK-15细胞系建立及其对PRRSV易感性研究

转猪CD151基因PK-15细胞系建立及其对PRRSV易感性研究

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作者：黄燕燕扬州大学

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)主要感染猪巨噬细胞,导致严重的免疫抑制。在细胞培养中,PRRSV能感染原代猪肺巨噬细胞和MARC-145等非洲绿猴肾细胞系。CD151是PRRSV3'UTR RNA... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)主要感染猪巨噬细胞,导致严重的免疫抑制。在细胞培养中,PRRSV能感染原代猪肺巨噬细胞和MARC-145等非洲绿猴肾细胞系。CD151是PRRSV3'UTR RNA结合蛋白,猴源CD151在PRRSV感染MARC-145细胞中发挥重要作用,但猪CD151在PRRSV感染猪源细胞中的作用尚无研究报道。本研究根据发表的序列设计引物,通过RT-PCR从猪肺泡巨噬细胞中扩增CD151编码序列,序列测定结果显示扩增产物与发表的猪CD151核苷酸序列同源性为99.7%。将猪CD151编码序列克隆至真核表达载体pCDNA3.0,将重组质粒pCDNA3.0-CD151转染PK-15细胞,用G418抗性筛选获得CD151+PK-15细胞克隆,RT-PCR检测结果显示能检测到预期的762bp条带。用VR-2332株PRRSV分别感染MARC-145细胞、CD151-K-15细胞和CD151+PK-15细胞,定期观察病变,结果显示MARC145出现明显的细胞病变,而CD15-PK-15细胞和CD151+PK-15细胞无细胞病变,但CD151+PK15细胞为PRRSV抗体间接免疫荧光试验检测阳性,RT-PCR检测ORF5基因阳性。这些研究结果表明：猪CD151基因转染能使PRRSV非易感细胞PK-15获得易感性。

关键词：猪CD151 基因克隆 PK-15细胞转染猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒

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猪流感的发生与防治

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黑龙江畜牧兽医（下半月） 2011年第12期 88-89页

作者：董玉龙李春红张瑞华河北北方学院理学院河北张家口075000 河北北方学院动物科技学院河北张家口075131

猪流行性感冒,简称猪流感（Swine influenza,SI）,是由正黏病毒科猪流感病毒（Swine influenza virus,SIV）引起的猪的一种急性、热性和高度接触性呼吸道疾病。其特征为突发、咳嗽、呼吸困难、发热、衰竭及迅速转归,而且极易引起猪呼吸... 详细信息

猪流行性感冒,简称猪流感（Swine influenza,SI）,是由正黏病毒科猪流感病毒（Swine influenza virus,SIV）引起的猪的一种急性、热性和高度接触性呼吸道疾病。其特征为突发、咳嗽、呼吸困难、发热、衰竭及迅速转归,而且极易引起猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒、猪伪狂犬病病毒和传染性胸膜肺炎放线杆菌等病原的继发或混合感染.

关键词：猪流感病毒发生与防治猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒传染性胸膜肺炎放线杆菌猪伪狂犬病病毒猪流行性感冒呼吸道疾病呼吸困难

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当前我国猪病流行动态与防治对策

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兽医导刊 2011年第11期 12-14页

作者：陈焕春中国工程院华中农业大学

一、当前猪病流行趋势1．新的疫病不断增多，病原变异加快，毒力增强。圆环病毒中PCV2a基因组的1042核苷酸发生胸苷激酶的缺失即为PCV2b，PCV2b的毒力大于PCV2a。猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒表现Nsp2基因的部分缺失和ORF5基因糖基化位... 详细信息

一、当前猪病流行趋势 1．新的疫病不断增多，病原变异加快，毒力增强。圆环病毒中PCV2a基因组的1042核苷酸发生胸苷激酶的缺失即为PCV2b，PCV2b的毒力大于PCV2a。猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒表现Nsp2基因的部分缺失和ORF5基因糖基化位点的增加。口蹄疫病毒中传统新猪毒和泛亚毒疫苗对O型耿马属口蹄疫保护率不高。

关键词：猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒流行动态猪病口蹄疫病毒防治 ORF5基因 a基因组糖基化位点

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1例保育猪呼吸道疾病的诊断报告

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江西畜牧兽医杂志 2018年第6期37卷 51-53页

作者：张有美郭银燕罗士仙肖昌暾泰和县澄江农业综合服务站江西吉安343700 泰和县畜牧局泰和县灌溪农业综合服务站

江西泰和某猪场保育猪发生严重的呼吸道疾病,送检6头已死亡的保育猪。通过临床发病特征、病理剖检等初步诊断,推测导致死亡的可能病原为猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)等病毒感染,继发细菌感染。取样送至江... 详细信息

江西泰和某猪场保育猪发生严重的呼吸道疾病,送检6头已死亡的保育猪。通过临床发病特征、病理剖检等初步诊断,推测导致死亡的可能病原为猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)等病毒感染,继发细菌感染。取样送至江西农业大学预防兽医学实验室进行RT-PCR/PCR检测结果表明,发病猪PRRSV、PCV-2和猪瘟病毒(CSFV)阳性,同时,从发病猪肺脏和心包积液中分离出了一株副猪嗜血杆菌(HPS)经16SrDNA检查确定分离菌为HPS。综上,保育猪发生呼吸道疾病的致病因素为PRRSV、PCV-2、CSFV混合感染,继发HPS感染。药敏试验结果显示分离HPS对诺氟沙星、阿米卡星高度敏感。根据此诊断结果,为该猪场提供了防治呼吸道病的措施。

关键词：猪呼吸道疾病诊断报告保育猪猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒继发细菌感染江西农业大学 PRRSV PCV-2

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噬菌体肽库技术筛选抗PRRSV肽及其应用

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畜牧与饲料科学 2012年第3期33卷 23-25页

作者：侯凤香刘珂李培德涂宜强陈溥言涂国众温州科技职业学院动物科学系浙江温州325006 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

噬菌体展示肽库是一种被广泛用于抗原表位鉴定,结合蛋白筛选的技术。该试验利用噬菌体展示技术筛选与猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)ORF1B复制酶蛋白相互作用的蛋白,并进一步验证筛选蛋白的抗病毒作用。以表达纯化的PRRSV ORF1B蛋白... 详细信息

噬菌体展示肽库是一种被广泛用于抗原表位鉴定,结合蛋白筛选的技术。该试验利用噬菌体展示技术筛选与猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)ORF1B复制酶蛋白相互作用的蛋白,并进一步验证筛选蛋白的抗病毒作用。以表达纯化的PRRSV ORF1B蛋白CTD包被高亲和性96孔板作为靶蛋白,应用T7噬菌体展示技术对随机12肽库cDNA文库进行筛选,并分析测序筛选的克隆。将筛选出的克隆序列合成后,在体外验证合成多肽的抗PRRSV效果。结果表明,在4轮的噬菌体筛选后,共得到87个阳性克隆,经测序鉴定出11个筛选的12肽,并通过体外抗病毒试验得到P10是一个具有高抗病毒活性的12肽。试验结果为PRRSV的抗病毒研究奠定了基础。

关键词：噬菌体展示肽库猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒抗病毒

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