检索结果-内蒙古大学图书馆

槲皮素通过Nrf2/GPX4信号通路缓解玉米赤霉烯酮诱导的猪小肠上皮细胞铁死亡

中国兽医学报 2025年第3期45卷 527-534,593页

作者：陈海燕卢慧芳曹智高孙攀峰刘守铉宋超河南农业职业学院现代牧业学院河南郑州451450 河南牧业经济学院动物医药学院河南郑州457499

基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路研究槲皮素抑制玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)诱导IPEC-J2猪小肠上皮细胞铁死亡的作用机制。体外培养IPEC-J2细胞,ZEN处理(25mg/L)的同时给予不同浓度槲皮素干预(10、20... 详细信息

基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路研究槲皮素抑制玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)诱导IPEC-J2猪小肠上皮细胞铁死亡的作用机制。体外培养IPEC-J2细胞,ZEN处理(25mg/L)的同时给予不同浓度槲皮素干预(10、20、40μmol/L)。生化法检测各组细胞培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平;荧光探针检测细胞中Fe^(2+)、活性氧(ROS)和脂质过氧化水平;Western blot检测Nrf2、长链酯酰辅酶A合成酶4(ACSL4)和GPX4蛋白表达水平。将IPEC-J2细胞分为对照组、ZEN组、槲皮素组和ML385(Nrf2抑制剂)+槲皮素组,除对照组外其余各组均接受ZEN处理,并采用槲皮素和ML385进行干预,检测Nrf2/GPX4通路相关蛋白表达和铁死亡指标(LDH、Fe^(2+)、MDA和GSH)变化。结果显示,与对照组比较,ZEN组细胞存活率、T-AOC及GSH、SOD水平、Nrf2和GPX4蛋白表达降低(P<0.05),细胞LDH释放率、Fe^(2+)及ROS、脂质过氧化、MDA水平及ACSL4蛋白表达升高(P<0.05)。与ZEN组比较,槲皮素组细胞存活率、细胞T-AOC、SOD及GSH水平、Nrf2和GPX4蛋白表达升高(P<0.05),细胞LDH释放率、Fe^(2+)及ROS、脂质过氧化、MDA水平及ACSL4蛋白表达降低(P<0.05)。与槲皮素组比较,ML385+槲皮素组细胞Nrf2及GPX4蛋白表达和GSH水平降低(P<0.05),细胞LDH释放率、Fe^(2+)及MDA水平升高(P<0.05)。综上,槲皮素能够抑制ZEN诱导的IPEC-J2细胞铁死亡,其作用机制可能与其激活Nrf2/GPX4信号通路有关。

关键词：玉米赤霉烯酮槲皮素猪小肠上皮细胞铁死亡 Nrf2/GPX4

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猪小肠上皮细胞分离培养与鉴定

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动物营养学报 2015年第5期27卷 1477-1484页

作者：詹康左晓昕陈银银贡笑笑占今舜赵国琦扬州大学动物科学与技术学院扬州225009

为建立功能性永生化的猪小肠上皮细胞系,并为猪肠道营养吸收与免疫调控以及仔猪肠道疾病发病机制的研究提供细胞模型,本试验采用组织块培养法来分离纯化猪小肠上皮细胞,并通过细胞角蛋白18、细胞增殖曲线、核型分析来鉴定猪小肠上皮细... 详细信息

为建立功能性永生化的猪小肠上皮细胞系,并为猪肠道营养吸收与免疫调控以及仔猪肠道疾病发病机制的研究提供细胞模型,本试验采用组织块培养法来分离纯化猪小肠上皮细胞,并通过细胞角蛋白18、细胞增殖曲线、核型分析来鉴定猪小肠上皮细胞。结果表明:1)采用组织块培养法能够成功培养猪小肠上皮细胞并稳定传11代。2)本试验获得的猪小肠上皮细胞角蛋白18抗原鉴定为阳性,染色体核型为二倍体。3)倒置显微镜下观察培养至第11代的猪小肠上皮细胞仍然保持着上皮细胞的特征,呈现"铺路石"和上皮样形态。培养11代后的猪小肠上皮细胞间隙开始变大,规则不明显,细胞开始凋亡。第15代的猪小肠上皮细胞则出现大量凋亡并从瓶底脱落,仅有很少细胞贴壁生长。综上所述,采用组织块培养法能够获得生物学功能稳定的猪小肠上皮细胞系并能正常传11代,可为细胞的永生化提供试验素材。

关键词：猪小肠上皮细胞功能性肠道营养与免疫永生化

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猪源粪肠球菌对猪小肠上皮细胞黏附及致炎作用的影响

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中国动物保健 2025年第3期 9-10页

作者：李跃强乐陵市畜牧业发展中心

本文根据猪源粪肠球菌的分离与鉴定得到猪源粪肠球菌N8与N41菌株，通过革兰氏染色、显微镜观察等实验室检测方法，分析不同猪源粪肠球菌对猪小肠上皮细胞黏附情况。结果显示通过荧光定量PCR技术分析发现，粪肠球菌会引起IPEC-J2细胞出... 详细信息

本文根据猪源粪肠球菌的分离与鉴定得到猪源粪肠球菌N8与N41菌株，通过革兰氏染色、显微镜观察等实验室检测方法，分析不同猪源粪肠球菌对猪小肠上皮细胞黏附情况。结果显示通过荧光定量PCR技术分析发现，粪肠球菌会引起IPEC-J2细胞出现不同程度的炎症水平，同时会增加阳性细胞因子表达，通过该作用可加快上皮—间质转化。本文主要分析猪源粪肠球菌对猪小肠上皮细胞黏附及致炎作用机制，为防范与干预猪源粪肠球菌提供参考。

关键词：猪源粪肠球菌猪小肠上皮细胞黏附致炎

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猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建

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中国动物传染病学报 2019年第2期27卷 19-24页

作者：李慧春陈鹏飞李先斌丁思嘉王康张文超杨德强李林徐晶晶虞凌雪姜一峰高飞于海童光志周艳君中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 上海交通大学农业与生物学院上海200240 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IECs)是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主体内感染的靶细胞,为了研究PEDV在体内与宿主细胞蛋白之间的互作关系以便于揭示其致病机理,本研究以IECs为研究对象,... 详细信息

猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IECs)是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主体内感染的靶细胞,为了研究PEDV在体内与宿主细胞蛋白之间的互作关系以便于揭示其致病机理,本研究以IECs为研究对象,提取了IECs的总RNA,利用SMART技术经过反转录、扩增和纯化获得双链cDNAs后,将其与pGADT7-Rec和carrier DNA共同转化至酵母Y187菌株,进行选择性培养基(SD/-Leu)筛选以及文库容量及质量的鉴定。结果显示,本研究构建的IECs-cDNA文库其库容量为1.3×10~8 pfu/mL,插入cDNA片段长度为250～2500 bp,文库阳性率达100%。本研究结果表明构建的IECs-cDNA文库具有较好的多态性,为后续研究PEDV与宿主细胞蛋白之间的互作关系提供了有力支持。

关键词：猪流行性腹泻病毒猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库

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猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

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中国畜牧兽医 2014年第10期41卷 33-37页

作者：徐天石达陈建飞谷凤丽时洪艳张鑫冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA（ds-cDNA）,通过同源重组的... 详细信息

为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA（ds-cDNA）,通过同源重组的方法构建猪IEC酵母双杂交cDNA文库。结果显示,文库的滴度为8.4×108 CFU/mL,插入的ds-cDNA片段大小为0.5~2.0kb,平均长度约为1.1kb,文库重组率为100%。此文库为筛选与猪腹泻病毒相互作用的宿主蛋白及进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础,为研制有效的药物或疫苗提供了依据。

关键词：猪腹泻病毒猪小肠上皮细胞酵母双杂交 cDNA文库

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热休克蛋白70上调表达对热应激猪小肠上皮细胞凋亡的影响

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动物营养学报 2020年第4期32卷 1867-1874页

作者：孙汇蕾仲庆振李明晔 MOLAWA M N 吉林农业大学动物科技学院长春130118 动物生产及产品质量安全教育部重点实验室长春130118 吉林省动物营养与饲料科学重点实验室长春130118

本试验以谷氨酰胺作为热休克蛋白70(HSP70)诱导剂,从细胞凋亡线粒体信号转导途径探讨HSP70对热应激猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)凋亡相关因子的影响。试验以体外培养的猪小肠上皮细胞为模型,分别加入不同浓度(1、2、4、6、8、10 mmol/L)谷... 详细信息

本试验以谷氨酰胺作为热休克蛋白70(HSP70)诱导剂,从细胞凋亡线粒体信号转导途径探讨HSP70对热应激猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)凋亡相关因子的影响。试验以体外培养的猪小肠上皮细胞为模型,分别加入不同浓度(1、2、4、6、8、10 mmol/L)谷氨酰胺的培养基中培养24 h,提取总RNA和总蛋白,用实时荧光定量PCR和Western blot检测HSP70 mRNA和蛋白的相对表达量,筛选出谷氨酰胺诱导HSP70表达的最佳浓度。取对数生长期的细胞分为3组,分别为对照组(Con组,37℃培养12 h)、热应激组(Hs组,42℃培养12 h)、谷氨酰胺组(Gln组,6 mmol/L谷氨酰胺、42℃培养12 h)。采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测HSP70、凋亡酶激活因子-1(Apaf-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的mRNA和蛋白的相对表达量。结果表明:谷氨酰胺对HSP70上调表达呈先上升后下降的趋势,6 mmol/L的谷氨酰胺诱导时HSP70 mRNA和蛋白相对表达量最高,显著高于其他浓度(P<0.05),作为后续试验中Gln组的诱导条件。与Con组相比,Hs组细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),HSP70、Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01),而Bcl-2 mRNA和蛋白的相对表达量极显著降低(P<0.01)。与Hs组相比,Gln组细胞凋亡率极显著降低(P<0.01),但仍极显著高于Con组(P<0.01);Gln组HSP70 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01);Gln组Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量极显著降低(P<0.01),但极显著高于Con组(P<0.01);Gln组Bcl-2 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01),但极显著低于Con组(P<0.01)。由此可见,上调HSP70的表达可有效缓解热应激导致的猪小肠上皮细胞凋亡。

关键词：热休克蛋白70 猪小肠上皮细胞凋亡线粒体通路半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶

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大豆球蛋白通过p38丝裂原活化蛋白激酶/c-Jun氨基端激酶信号通路引起猪小肠上皮细胞损伤

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动物营养学报 2019年第4期31卷 1718-1724页

作者：彭成璐张瑜舒迎霜贺濛初夏晓冬冯士彬李玉王希春李锦春吴金节安徽农业大学动物科技学院合肥230061

通过体外培养猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),研究不同浓度大豆球蛋白(11S)对猪小肠上皮细胞的影响。试验分为6组:A、B、C、D、E、F组,其中A组为对照组,其余各组分别在培养液中添加1、5、10、5、5 mg/mL的11S,并且在E、F组分别添加1μmol/L的c... 详细信息

通过体外培养猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),研究不同浓度大豆球蛋白(11S)对猪小肠上皮细胞的影响。试验分为6组:A、B、C、D、E、F组,其中A组为对照组,其余各组分别在培养液中添加1、5、10、5、5 mg/mL的11S,并且在E、F组分别添加1μmol/L的c-Jun氨基端激酶(JNK)和p38抑制剂。培养24 h后,用CCK-8法检测细胞存活率;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞一氧化氮(NO)、5-羟色胺(5-HT)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)含量;Western blot检测细胞磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化p38(p-p38)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞Bcl-2/Bcl-xL相关凋亡蛋白(Bad)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3) mRNA相对表达量。结果表明:1)与A组相比,C、D组细胞存活率极显著降低(P<0.01); E、F组细胞存活率显著或极显著高于C组(P<0.05或P<0.01)。2)与A组相比,C、D组NO、5-HT、IL-6、IL-10含量均极显著增加(P<0.01);与C组相比,E、F组NO、5-HT、IL-6、IL-10含量显著或极显著降低(P <0.05或P <0.01)。3)与A组相比,C、D组p-JNK、p-p38蛋白表达量显著或极显著增加(P <0. 05或P <0. 05),C、D组Bcl-2蛋白表达量极显著降低(P<0.01);与C组相比,E、F组p-JNK、p-p38蛋白表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),E、F组Bcl-2蛋白表达量显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01)。4)与A组相比,B、C和D组Bcl-2/Bax极显著降低(P<0.01),C、D组Bax/Bcl-xL、Bad和caspase-3 mRNA相对表达量显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01);与C组相比,E、F组Bcl-2/Bax极显著增加(P<0.01),E、F组Bax/Bcl-xL和caspase-3 mRNA相对表达量极显著降低(P <0.01),F组Bad mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01)。结果说明,11S通过p38 MAPK/JNK信号通路引起猪小肠上皮细胞损伤。

关键词：大豆球蛋白猪小肠上皮细胞 c-Jun氨基端激酶 p38

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ACE2对猪流行性腹泻病毒体外感染传代猪小肠上皮细胞的影响

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畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 1238-1248页

作者：任莉鑫张静怡徐沙沙杨柳张兴翠宋振辉西南大学动物医学院重庆402460 重庆市畜牧科学院重庆402460 西南大学医学研究院免疫学研究中心重庆402460

为探究血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)在猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染仔猪过程中发挥的作用,本研究通过转录组学分析仔猪肠道ACE2在PEDV感染前后表达的变化情况,然后利用猪... 详细信息

为探究血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)在猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)感染仔猪过程中发挥的作用,本研究通过转录组学分析仔猪肠道ACE2在PEDV感染前后表达的变化情况,然后利用猪小肠上皮细胞(porcine intestinal epithelial cells, IPEC-J2细胞)模型,通过RT-qPCR、Western blot检测PEDV感染后ACE2的mRNA、蛋白表达水平的变化。过表达与抑制表达ACE2后通过RT-qPCR、Western blot、TCID50检测PEDV复制水平。结果显示,PEDV感染IPEC-J2后ACE2的mRNA及蛋白表达水平均显著下调,与转录组学结果一致。过表达ACE2组PEDV感染量显著上升,抑制表达ACE2组PEDV感染量显著下降。本研究在细胞水平上验证了ACE2在PEDV感染过程中的作用,即PEDV感染能够使ACE2表达量下降,在IPEC-J2细胞中过表达ACE2能提高PEDV复制水平,抑制ACE2的表达可降低PEDV复制水平。

关键词：血管紧张素转换酶2 ACE2 猪流行性腹泻病毒猪小肠上皮细胞

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动物营养学报 2014年第9期26卷 2752-2760页

作者：苏文芹方热军湖南农业大学动物科学技术学院长沙410128

本试验旨在研究不同浓度降钙素基因相关肽（CGRP）对猪小肠上皮细胞钠离子依赖型Ⅱb磷转运蛋白（NaPi-Ⅱb）表达和磷吸收的影响。选用第3～8代猪小肠上皮细胞进行试验,按单因素试验设计,将试验细胞分为1个对照组和5个CGRP（1×10-11... 详细信息

本试验旨在研究不同浓度降钙素基因相关肽（CGRP）对猪小肠上皮细胞钠离子依赖型Ⅱb磷转运蛋白（NaPi-Ⅱb）表达和磷吸收的影响。选用第3～8代猪小肠上皮细胞进行试验,按单因素试验设计,将试验细胞分为1个对照组和5个CGRP（1×10-111×10-7mmol/L）试验组,每组设6个重复。用4-甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞生长速度,采用比色法测定CGRP干预24 h后细胞上清液磷含量,用RT-PCR法检测NaPi-Ⅱb mRNA相对表达量,以及蛋白质印迹（Western blot）法检测NaPi-Ⅱb蛋白表达。结果表明：与对照组相比,不同浓度CGRP对细胞生长没有显著影响（P〉0.05）;各试验组均极显著或显著地促进了磷的吸收和NaPi-Ⅱb mRNA的相对表达量（P〈0.01或P〈0.05）;除1×10-10mmol/L组外均显著提高了NaPi-Ⅱb蛋白的表达（P〈0.05）。研究结果表明,CGRP通过诱导小肠上皮细胞中NaPi-Ⅱb的表达促进细胞磷的吸收,其中以1×10-9、1×10-8mmol/L浓度的CGRP促进效果较为显著。

关键词：猪小肠上皮细胞降钙素基因相关肽磷吸收 NaPi-Ⅱb

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11S通过NF-κB信号通路引起猪小肠上皮细胞损伤

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浙江农业学报 2019年第3期31卷 384-391页

作者：彭成璐张瑜丁雪东李玉冯士彬王希春李锦春吴金节安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230061

通过体外培养猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),研究大豆球蛋白(11S)对猪小肠上皮细胞的影响。将IPEC-J2细胞分为6组[A(对照组)、B、C、D、E和F],各组中分别添加0、1、5、10、5、5 mg·mL^(-1)的11S,并且在E组和F组分别添加1μmol·L^(... 详细信息

通过体外培养猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),研究大豆球蛋白(11S)对猪小肠上皮细胞的影响。将IPEC-J2细胞分为6组[A(对照组)、B、C、D、E和F],各组中分别添加0、1、5、10、5、5 mg·mL^(-1)的11S,并且在E组和F组分别添加1μmol·L^(-1)吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)和1μmol·mL^(-1) Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)。分别于8、16、24 h,用CCK-8法检测细胞存活率,用ELISA法检测细胞一氧化氮(NO)、二胺氧化酶(DAO)、5-羟色胺(5-HT)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)含量,用western blot法检测细胞p-NF-κB p65、iNOS、COX-2的蛋白表达量,用qPCR法检测细胞NF-κB p65、IKKβ、iNOS、IKKα、COX-2 mRNA的相对表达量。结果表明:11S可以降低猪小肠上皮细胞存活率,添加PDTC和L-NAME可以提高小肠上皮细胞存活率;11S可促进NO、DAO、5-HT和IL-6的分泌,降低IL-10的分泌,增加p-NF-κB p65、iNOS、COX-2的蛋白表达量及NF-κB p65、IKKβ、iNOS、IKKα、COX-2 mRNA的相对表达量,添加PDTC和L-NAME可抑制11S的作用。综上,11S可引起猪小肠上皮细胞损伤,随着11S浓度的增大,损伤程度增加,PDTC和L-NAME可以降低11S对细胞的损伤。

关键词：大豆球蛋白猪小肠上皮细胞信号通路

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