检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2019年第9期46卷 900-908页

作者：吴彩霞刘朝明颜泉梅张全军赵宇欧阳振樊娜娜赖良学吉林大学动物医学学院长春130062 中国科学院广州生物医药与健康研究院广州510530

Tiki1基因是哈佛大学儿童医学院贺熹教授实验室发现的一个对蛙头部的诱导起到决定性作用的新基因,但Tiki1基因在小鼠等啮齿类动物中缺失,因此无法利用小鼠等小动物来研究其在哺乳动物中的作用.本文利用CRISPR/Cas9系统结合体细胞克隆技... 详细信息

Tiki1基因是哈佛大学儿童医学院贺熹教授实验室发现的一个对蛙头部的诱导起到决定性作用的新基因,但Tiki1基因在小鼠等啮齿类动物中缺失,因此无法利用小鼠等小动物来研究其在哺乳动物中的作用.本文利用CRISPR/Cas9系统结合体细胞克隆技术构建Tiki1基因修饰猪模型,研究Tiki1基因在猪发育中的作用.我们利用贺熹教授团队提供的人Tiki1基因序列,在猪的基因组数据库中比对出与其同源性最高的一段序列设计2个靶位点(g1和g2).以设计的靶位点构建打靶质粒转染猪胎儿成纤维细胞,经细胞筛选、PCR扩增及测序共鉴定了52个单细胞克隆株.最终选择靶位点g1为纯合双敲的5个单细胞克隆株和靶位点g2为纯合双敲的3个单细胞克隆株作为构建Tiki1基因敲除猪的核供体.我们共计构建了720个重组胚胎,分别植入3头代孕母猪,其中有1头经B超检测成功怀孕并妊娠到期产下13头发育正常的克隆猪,经测序鉴定其中12头为Tiki1基因双敲除猪模型,Tiki1基因敲除克隆猪健康存活至今.结果表明Tiki1基因对于猪早期发育的作用机理不同于蛙,其在猪早期发育的过程中的具体作用机理有待后续进一步的深入研究.

关键词： CRISPR/Cas9 Tiki1 基因打靶猪模型

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利用TALEN技术构建猪内源性基因Tiki1打靶猪模型

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农业生物技术学报 2019年第10期27卷 1858-1868页

作者：吴彩霞刘朝明颜泉梅欧阳振赵宇张全军樊娜娜赖良学吉林大学动物医学学院中国科学院广州生物医药与健康研究院

Tiki1基因(TraB domain containing protein 2A)在蛙(Xenopus laevis)头部诱导发生过程中起着决定性的作用,但Tiki1在哺乳动物乃至人(Homo sapiens)的早期发育中的功能尚不清楚,与人类在生理学、病理学上都极为相近的猪(Sus scrofa)成... 详细信息

Tiki1基因(TraB domain containing protein 2A)在蛙(Xenopus laevis)头部诱导发生过程中起着决定性的作用,但Tiki1在哺乳动物乃至人(Homo sapiens)的早期发育中的功能尚不清楚,与人类在生理学、病理学上都极为相近的猪(Sus scrofa)成为研究Tiki1功能的理想哺乳动物模型。本研究利用转录激活因子样效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease, TALEN)基因编辑技术针对猪内源性基因Tiki1外显子4设计了1对TALEN质粒,并在猪孤雌激活胚胎水平上进行了TALEN质粒的体外活性检测,比较了设计的TALEN质粒以不同浓度注射时打靶效率及对胚胎发育的影响,并进行了细胞的转染和筛选,结合体细胞核移植技术构建了Tiki1基因打靶猪模型。本研究共计构建了1 922枚基因编辑克隆胚胎并植入8头代孕母猪子宫内,其中3头怀孕到期并顺利分娩,共计获得12头活猪和1头死胎,经酶切鉴定和测序鉴定结果表明其中有4头属于预期的Tiki1基因打靶阳性猪模型。将Tiki1基因打靶阳性猪模型和WT配种,经过足月后顺产分娩获得5头F1代成活仔猪,进一步测序鉴定基因敲除情况,结果表明构建的Tiki1基因打靶阳性猪模型是可以生殖系遗传的,不是嵌合体。本研究首次采用TALEN技术对猪基因组内源性基因Tiki1进行定点修饰,成功且高效率地构建了猪内源性基因Tiki1敲除的大动物模型,为实现大动物高效的基因编辑提供了有力的工具,也为将来建立各种生物医药模型和农业基因改良猪提供了技术基础。

关键词：转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)基因编辑技术 Tiki1 基因打靶猪模型

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帕金森综合症猪模型的建立及异种器官移植供体猪的培育

帕金森综合症猪模型的建立及异种器官移植供体猪的培育

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作者：周小青中国科学院大学

学位级别：博士

帕金森病(Parkinson's disease，PD)又称帕金森综合症，是一种仅次于阿尔兹海默症(Alzheimer disease，AD)的第二大进行性中枢神经系统退行性疾病，主要表现为静止时颤抖、僵直、动作迟缓、平衡感差等。它的发病人群主要集中于中老... 详细信息

帕金森病(Parkinson's disease，PD)又称帕金森综合症，是一种仅次于阿尔兹海默症(Alzheimer disease，AD)的第二大进行性中枢神经系统退行性疾病，主要表现为静止时颤抖、僵直、动作迟缓、平衡感差等。它的发病人群主要集中于中老年人群，尤其是60岁以上的老人。它的病因目前不明，据推测其发病机制和遗传因素、环境因素以及自身年龄因素相互作用有关。遗传因素主要是指各种疾病相关基因的突变，比如PARK2、PINK1、J-1、LRRK2基因等。PINK1和PARK2基因皆为PD相关致病基因，与常染色体隐形遗传早发性PD综合症密切相关，其中单个基因的突变即可诱发早发性PD综合症，然而单个基因突变所诱发的PD症状并不明显，因此我们设想如果同时突变这两个基因是否能加快PD症状的产生或是表现出更好的PD症状。　　现阶段的帕金森动物模型主要为果蝇、斑马鱼、小鼠和大鼠等小动物模型，无法真实地反应人类帕金森症状。因此我们预备建立一种大动物模型——帕金森模型猪，以便更加真实地模拟人类帕金森病症。与小鼠相比，猪在进化上与人类更为接近，猪的神经系统、消化系统、皮肤、营养需要、骨骼发育以及矿物质代谢等都与人类极其相似;相比于大、小鼠的无脑沟和脑回，猪的大脑结构有脑沟和脑回，且容量等与人类大脑非常相似;而且其基因表达模式，病理发生过程更接近于人类。通过对多种神经退行性疾病猪模型的研究发现，猪能模拟出多种小鼠模型无法模拟的疾病表型。因此，猪可以作为一种理想的帕金森综合症动物模型。　　我们针对猪的PARK2和PINK1基因的外显子分别设计了gRNA，将其和Cas9载体共转染巴马小型猪的胎儿成纤维细胞后，获得了纯合的PARK-/-/INK1-/-双基因敲除的细胞系，其双基因的双敲概率高达38.1％。选择状态较好的几株细胞系混合后作为核供体，进行体细胞核移植和胚胎移植。我们总共移植了1729个重组胚胎，分别植入10头代孕母猪，其中有四头怀孕到期并自然分娩，总共产下20头克隆仔猪。经测序鉴定，20头仔猪全部为阳性，即PARK2-/-/P INK1-/-双基因敲除克隆猪。在用PINK1和Parkin抗体进行免疫荧光染色后可发现:WT仔猪大脑中可观察到染色明显的PINK1和Parkin蛋白，而PARK2-/-/PINK1-/-双基因敲除克隆仔猪的大脑组织中检测不到PINK1和Parkin蛋白的表达，表明PINK1和PARK2基因的敲除确实导致其编码蛋白的缺失。历经一年半的培育，我们现已获得了F1代18头，其中10头母猪，8头公猪，皆为PARK2和PINK1基因单敲，即杂合子，表明PARK2-/-/PINK1-/-双基因敲除克隆猪的突变是可以生殖系遗传的。　　本次研究获得的PARK2-/-/PINK1-/-双基因敲除克隆猪可作为帕金森症大动物模型，用于研究其发生机制和评估相关治疗药物的有效性和安全性;并且本次研究将新兴的CRISPR/Cas9技术与体细胞克隆相结合，不仅使猪基因打靶效率更高、更为精确，而且在一个世代内首次实现了大动物双基因的等位敲除。该技术路线的建立将大大加速多基因修饰猪制备，对农业而言，可促进猪的生产性能的改良;对于生物医药领域，也可加速大动物疾病模型的建立。

关键词：帕金森症猪模型异种器官移植供体猪

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低免疫原性人类胚胎干细胞及Pdx1敲除猪模型的建立

低免疫原性人类胚胎干细胞及Pdx1敲除猪模型的建立

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作者：卢鹏飞中国科学院大学

学位级别：博士

本研究分为二部分：\n (1)建立低免疫原性的人类胚胎干细胞\n 供体细胞表面的人类白细胞抗原(Human leukocyte antigens，HLAs)与受体间的不兼容性将会引起免疫排斥反应。尽管人类胚胎干细胞(human embryonicstem cells，hESCs)... 详细信息

本研究分为二部分：\n (1)建立低免疫原性的人类胚胎干细胞\n 供体细胞表面的人类白细胞抗原(Human leukocyte antigens，HLAs)与受体间的不兼容性将会引起免疫排斥反应。尽管人类胚胎干细胞(human embryonicstem cells，hESCs)在体外培养的条件下具有无限增殖、自我更新或分化为几乎所有机体细胞类型的多向潜能，但是若直接将由胚胎干细胞分化的功能性细胞用于移植，却存在引发机体免疫排斥反应的风险。免疫排斥极大地阻碍了人类胚胎干细胞的临床应用。在本博士学位论文中，我们通过在人类胚胎干细胞敲除Ⅰ类人类白细胞抗原的轻链即β-2-microglobulin基因，建立了兼容性人类胚胎干细胞。我们发现，β-2-microglobulin基因敲除的人类胚胎干细胞不在细胞表面表达Ⅰ类人类白细胞抗原，但该人类胚胎干细胞表达人类胚胎干细胞特异性标记分子且具有与野生型人类胚胎干细胞相同的分化潜能。同时，我们的实验结果表明β-2-microglobulin基因敲除的人类胚胎干细胞与野生型人类胚胎干细胞相比，具有较低的免疫原性。\n 总之，我们的研究结果显示，可以通过在人类胚胎干细胞敲除Ⅰ类人类白细胞抗原，建立低免疫原性的人类胚胎干细胞。我们的发现将有利于推动人类胚胎干细胞的临床应用，促进基于人类胚胎干细胞的移植治疗应用发展。\n (2) Pdx1敲除猪模型的建立\n 猪在解剖、生理及一些疾病进程等方面与人类极其相似。因此，与其它传统的实验动物相比，是更为理想的人类疾病模式动物。然而，传统的基于同源重组(Homologous recombination，HR)基因打靶技术只在ES细胞中才有较高的效率，到目前为止，尚未建立真正意义上的猪ES细胞系。HR在体细胞中效率极低，严重阻碍了猪这一模式动物的科学研究。最近的研究发现，转录激活子样效应因子核酸酶(Transcription activator-like effectornucleases，TALENs)介导的基因修饰技术在定点修饰基因组中非常有效，并已成功地应用在果蝇、斑马鱼、小鼠、大鼠以及人类等物种细胞中。最近的一个研究，将猪的胰腺移植给糖尿病患者，并发现具有较强的治疗作用，表明猪与人类胰腺的高度相似性。根据已有报道，Pdx1基因是调控胰腺发育的关键基因，Pdx1+/-小鼠表现出糖尿病的特征;Pdx1-/-的小鼠表现为胰腺缺失，基于建立的新型的猪遗传操作模型，本博士学位论文通过TALENs介导的基因修饰，敲除猪的Pdx1基因研究Pdx1对猪胰腺发育的影响，并将此动物模型用于研究糖尿病和药物筛选及研究人类胰腺的发育机制。

关键词：低免疫原性人类胚胎干细胞 Pdx1基因猪模型基因敲除胰腺发育

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中国兽医学报 2020年第7期40卷 1366-1371页

作者：吴彩霞刘朝明颜泉梅张全军欧阳振赵宇樊娜娜赖良学中国科学院广州生物医药与健康研究院广东广州510530 吉林大学动物医学学院吉林长春130062

动物模型是科学研究不可缺少的工具,特别是对于人类疾病相关的研究,受到取材和伦理道德的限制,很多研究无法直接在人体中进行,必须首先依靠动物模型进行广泛的试验和评估。猪的心血管系统在结构和功能上与人类非常相似,例如脉搏,在静息... 详细信息

动物模型是科学研究不可缺少的工具,特别是对于人类疾病相关的研究,受到取材和伦理道德的限制,很多研究无法直接在人体中进行,必须首先依靠动物模型进行广泛的试验和评估。猪的心血管系统在结构和功能上与人类非常相似,例如脉搏,在静息状态下,人的脉搏每分钟60~90次,猪的则为65~80次。猪的动脉循环系统几乎是人的动脉循环系统的复制品。目前,以猪作为动物模型来研究动脉粥样硬化和心肌梗塞等心血管疾病,是猪作为人类疾病模型应用最为成功的范例之一。PPARγ是噻唑烷二酮类药物的靶点,科学家们利用小鼠的研究结果表明,噻唑烷二酮类药物在治疗糖尿病的同时对心血管系统也有保护作用,但由于小鼠心血管系统与人类相差甚远,使得小鼠的研究结果与近年临床上观察到的病人心脏毒副作用不一致。因此,科学家们急需建立与人类更为接近的大动物模型来研究糖尿病及其心血管并发症,由于猪的心血管系统与人类接近,猪成为理想的研究糖尿病和心血管疾病的动物模型。我们共计构建了1100枚重构胚胎,分别移植到5头受体猪内,经B超鉴定3头怀孕,共计出生8头猪,经PCR鉴定8头全为阳性猪模型。结果表明我们利用体细胞核移植技术成功建立了糖尿病和心血管病相关的重要靶点基因PPARγ过表达转基因克隆猪模型。

关键词：糖尿病心血管病 PPARγ 转基因克隆猪模型

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脊髓损伤猪模型建立的一般过程

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中国老年学杂志 2016年第20期36卷 5182-5184页

作者：符策岗曾艳赵红卫刘扬肖运祥陈海丹三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院脊柱外科脊柱微创中心脊柱医学与创伤研究所湖北宜昌443000 三峡大学医学院

脊髓损伤（SCI）的发病率随着现代交通和建筑事业的发展而逐年上升,给患者及患者家属带来极大的精神及经济负担。尽管对于SCI患者的临床处理已经有一定提高且可采用多种手段限制继发性损伤,但患者神经功能的恢复依旧有限,众多患者依然... 详细信息

脊髓损伤（SCI）的发病率随着现代交通和建筑事业的发展而逐年上升,给患者及患者家属带来极大的精神及经济负担。尽管对于SCI患者的临床处理已经有一定提高且可采用多种手段限制继发性损伤,但患者神经功能的恢复依旧有限,众多患者依然长期伴随神经功能不全或丧失。因此,科研工作者们尝试从多方面找寻SCI治疗的方式和方法,例如干细胞移植〔1〕、MicorRNA调节通路〔2〕、神经再生〔3〕、低温〔4〕、电刺激〔5〕、

关键词：脊髓损伤猪模型

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猪模型在吻合血管的异体骨组织移植中的应用

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中国实用手外科杂志 2001年第4期15卷 220-221页

作者：李忠哲李庆秦北京积水潭医院手外科，北京100035

吻合血管的异体骨组织移植将极大地拓展重建外科的领域,这种移植具有潜在的供体来源不受限制、移植部位自由的特点.为了详细记录这种异体移植的结果,马塞诸塞州立医院整形外科实验室利用大型动物模型进行了一系列实验(结果见下文).为了... 详细信息

吻合血管的异体骨组织移植将极大地拓展重建外科的领域,这种移植具有潜在的供体来源不受限制、移植部位自由的特点.为了详细记录这种异体移植的结果,马塞诸塞州立医院整形外科实验室利用大型动物模型进行了一系列实验(结果见下文).为了提供背景资料,我们利用大鼠模型进行的先期实验表明:吻合血管的异体骨组织移植与器官移植对于排斥反应的敏感性相类似,更加一致的是基因差异决定排斥的时间和强度;同时发现环孢菌素A的应用对于异体骨组织移植的成活和骨关节功能的恢复是有效的,但一旦停药,移植物最终将被排斥.在移植中肢体的每种组织成分(皮肤、皮下组织、肌肉、肌腱、骨、血管)产生的宿主排斥反应的时间和强度是不同的,通过选择性的改变移植成分、γ射线照射、供体骨髓移植被发现可以有效改善排斥反应.长期移植成功的异体骨组织移植,应该避免长期应用免疫抑制剂而引起的宿主中毒反应,移植骨可以愈合且可以负重而不伴有骨折和再吸收.

关键词：猪模型吻合血管异体骨组织移植排斥反应免疫系统

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猪模型肾灌注的多层螺旋CT与荧光微球的无创性测量

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国际医学放射学杂志 2011年第5期 484-485页

作者： S.Lemoine M.Papillard A.Belloi N.Rognant D.Fouque M.Laville 王微微 Departments of Nephrology and Radiology Hpital Edouard HerriotHospices Civils de Lyon5 place d' ArsonvalPavillon P69437Cedex 03LyonFrance

目的建立猪模型,通过外周导管低速率注射对比剂(即3mL/s),应用伽马变量扩展模型来验证多层螺旋CT肾灌注测量的可靠性,并以荧光微球法作为参照进行对比。

关键词：猪模型荧光微球多层螺旋 CT

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猪模型在泌尿外科住院医师输尿管镜操作培训中的应用:附视频

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中华腔镜泌尿外科杂志（电子版） 2014年第1期8卷 13-15页

作者：王晓庆郝元元王海明陈岐辉侯宇川王春喜吉林大学第一医院泌尿外科长春130021

目的评价猪模型在住院医师输尿管镜技术培训中的应用效果。方法雌性猪4只,全身麻醉后由8名住院医师进行输尿管镜及输尿管支架管置入术。结果输尿管镜检查均顺利,每人重复操作3次,平均检查时间为(7.5±1.4)min,所有支架管均成功留置... 详细信息

目的评价猪模型在住院医师输尿管镜技术培训中的应用效果。方法雌性猪4只,全身麻醉后由8名住院医师进行输尿管镜及输尿管支架管置入术。结果输尿管镜检查均顺利,每人重复操作3次,平均检查时间为(7.5±1.4)min,所有支架管均成功留置,平均留置时间(4.5±1.3)min。无输尿管穿孔、剥脱等并发症。所有实验猪均正常苏醒,术后8 h正常进食,3例出现轻度血尿。术后2 d观察实验猪活动正常,进食及排便均正常,血尿消失。结论猪模型是输尿管镜技术较好的培训模型,接近真实手术,值得推广。

关键词：输尿管镜培训猪模型

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基于猪模型和腔镜模拟训练器的3D腔镜系统对比评价

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中国医院建筑与装备 2024年第7期25卷 27-32页

作者：卢如意孙静金以勒毛彬张倩冯靖祎浙江大学医学院附属第一医院医学工程与物资部杭州310003 浙江大学医学院附属第一医院浙江省医疗器械临床评价技术研究重点实验室杭州310003

基于文献分析、小组讨论、德尔菲法(专家咨询法)等方法,确定了3D腔镜系统评价指标,制定了评价标准及专家评价表,邀请多家医院、多个研究领域的临床专家对品牌A和品牌B两款产品基于猪模型以及腔镜模拟训练器进行对比评价。在该研究样本量... 详细信息

基于文献分析、小组讨论、德尔菲法(专家咨询法)等方法,确定了3D腔镜系统评价指标,制定了评价标准及专家评价表,邀请多家医院、多个研究领域的临床专家对品牌A和品牌B两款产品基于猪模型以及腔镜模拟训练器进行对比评价。在该研究样本量下,结果显示:在动物实验中品牌A共计25项指标中的24项指标评分结果与品牌B没有显著性差异,在立体感这一指标上显著优于品牌B;在腔镜模拟训练器下,品牌A的视野、清晰度、景深等15项指标的评分结果与品牌B差异无统计学意义,但分辨能力、抗反光能力、图像保真性、视疲劳以及总体印象这5项指标的评分与品牌B差异有统计学意义。该研究采用t检验统计学方法分别对比了在动物实验研究中以及腔镜模拟训练器下,专家对品牌A和品牌B各项指标的评分结果以及参评专家对两款设备的总体表现、景深等方面发表的个人建议,可为企业在设备功能和性能改进方面提供参考。

关键词： 3D腔镜系统猪模型腔镜模拟训练器医疗设备评价

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