检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：刘光瑞甘肃农业大学

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合症是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus , PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。PRRSV含有8个开放阅读框,其中GP5蛋白(EP)和膜蛋白(MP)具有... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合症是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus , PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。PRRSV含有8个开放阅读框,其中GP5蛋白(EP)和膜蛋白(MP)具有很强的免疫原性,一直是重组疫苗的研究热点。本实验利用复制缺陷型腺病毒载体首次成功构建了同时携有EP和MP的重组腺病毒。在构建重组腺病毒的试验中,首先用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5和ORF6,将ORF5和ORF6用口蹄疫病毒2A序列串联,再将连接好的E+2A+M基因亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,经筛选获得了重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/E+2A+M;然后在大肠杆菌BJ5183内将此重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体pAdEasy进行同源重组,获得了插有外源基因的重组腺病毒质粒pAd/E+2A+M;最后,经PacⅠ酶切线性化后转染低代次293细胞,成功地得到含有E+2A+M基因的重组腺病毒。本试验为研制表达猪繁殖与呼吸综合症病毒E和M基因的重组复制缺陷型腺病毒活载体疫苗奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 GP5 膜蛋白复制缺陷型腺病毒同源重组

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猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白研究进展

引用

中国畜牧兽医 2016年第8期43卷 2183-2189页

作者：刘亚丽丁耀忠张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730046

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种遍布于全世界的高度传染性疾病,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)。感染PRRSV后,最先在机体内进行表达的是非结构蛋白(nonstructural proteins,NSPs),PRRSV基因组编码区经翻译后至少产生14种NSPs(NSP1α、NSP1β、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5、NSP6、NSP7a、NSP7b、NSP8、NSP9、NSP10、NSP11、NSP12),这些NSPs在病毒增殖、病毒毒力、免疫学特性等方面都发挥着重要作用。作者就NSPs的研究进展进行简要概述,以期为PRRS疫苗研发及技术防控奠定基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒非结构蛋白免疫学特性

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猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株GP3截短蛋白的原核表达及T细胞表位的初步筛选

猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株GP3截短蛋白的原核表达及T细胞表位...

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作者：车志芬郑州大学

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiration Syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种高度接触性传染病,其主要特征是引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎和仔猪呼吸困难等。由于其引起免疫抑制和继发性感染... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiration Syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种高度接触性传染病,其主要特征是引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎和仔猪呼吸困难等。由于其引起免疫抑制和继发性感染,再加上生产上所用的PRRSV疫苗免疫效果不佳或无免疫保护作用,所以PRRSV一直是严重危害养猪业的重要病原之一。而前人的研究结果表明,激发机体T细胞免疫反应有利于抑制PRRSV复制或者控制PRRS疫情,而由PRRSV结构蛋白GP3诱导的T细胞免疫反应具有良好的免疫保护效果。因此筛选GP3蛋白的T细胞表位,并在此基础上,研发预防或治疗PRRSV的分子药物,这对PRRSV的防控意义重大。本实验首先根据GenBank中PRRSV BJ-4 ORF3的基因序列设计其上下游引物,上下游引物的酶切位点分别是EcoRⅠ和HindⅢ,然后使用RT-PCR的方法扩增ORF3基因全长,长度约765bp,再将其与克隆载体pMD19-T连接并送至生物公司进行测序,以测序正确的重组质粒pMD19-T-ORF3为模板扩增缺失N末端疏水序列的基因片段tGP3（truncated GP3）,将其亚克隆到pET-32a载体中构建原核表达重组质粒pET-32a-tGP3,然后将其导入大肠杆菌BL21（DE3）内,使用IPTG诱导表达,并通过Western-Blot进行鉴定,结果成功的表达了tGP3重组蛋白,大小约43KDa。接着对重组菌的表达条件进行了优化,使其能更高效的表达,同时也对重组蛋白进行可溶性分析,发现它以包涵体的形式存在。于是对重组菌进行扩大培养,并使用尿素梯度法对获得的大量重组蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE电泳分析纯化的目的蛋白的纯度,结果显示蛋白条带单一,即目的蛋白纯度较高。使用ELISA方法,将纯化的重组蛋白与PRRSV阳性血清和阴性血清进行反应,发现重组蛋白能很好的与PRRSV阳性血清结合,即获得目的蛋白具有良好的免疫原性。按照9个氨基酸重叠合成总长度为18个氨基酸的方法,将截短的GP3蛋白分成24个肽段并交予生物公司合成,将合成的肽段按照3-5个为一组分成5个肽库。将纯化的tGP3重组蛋白对4-6周龄的Balb/c小鼠进行免疫,并设立0M尿素对照组。共免疫4次,第四次免疫之后1星期,对两组小鼠剪尾采血,通过ELISA方法,检测血清中抗tGP3蛋白多抗血清的效价,发现纯化的tGP3重组蛋白能够强烈的激起小鼠的体液免疫。接着分别取出多抗血清效价较高的和0M尿素组多抗血清效价较低的小鼠的脾脏并分离获得淋巴细胞,每组肽库中的肽段均以20μg/ml的终浓度进行体外刺激,24h后,收集细胞上清,按照IFN-γELISA试剂盒操作说明,检测阳性鼠、阴性鼠细胞因子IFN-γ的分泌情况,结果显示肽库3和肽库5对应的阳性鼠的OD450值分别是0.339和0.371,是阴性鼠OD450值得2.1倍以上,该实验结果初步表明,纯化的tGP3重组蛋白免疫小鼠之后刺激其产生了细胞免疫,也初步证实了合成的多肽分成肽库时,肽库3和肽库5即GP3蛋白氨基酸序列的120-209aa中含有GP3蛋白的T细胞表位。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 GP3蛋白原核表达 T 细胞表位

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猪三种主要繁殖障碍病原多重PCR检测方法的建立

猪三种主要繁殖障碍病原多重PCR检测方法的建立

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作者：顾文源河北农业大学

学位级别：硕士

目前猪瘟(Classical swine fever virus，CSFV)、猪伪狂犬(Porine pseudorabies virus，PRV)、猪繁殖与呼吸综合症(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)是导致猪繁殖障碍疫病的主要病原。这三种病原常出现混合感染，增加了鉴别诊断难度。多重PCR方法具有特异性好、敏感性高且可同时检测多种病原的优点更适于疫病诊断。\n 本实验针对CSFV、PRRSV和PRV的高保守区域设计了3对引物分别用于扩增其目的基因序列，扩增产物大小分别为570bp、232bp、173bp。对三个单一PCR方法分别进行了退火温度、引物浓度、酶浓度和Mg2+浓度的优化，最终确定退火温度为54℃，上下游引物(10μmol/L)加入量为1μL，酶（5μ/μL）加入量为0.5μL，Mg2+(25 mM)终浓度为3mM。在此基础之上，建立了检测PRRSV和PRV的双重PCR方法及检测CSFV、PRRSV和PRV的多重PCR方法。经条件优化后的双重PCR方法退火温度为54℃，PRRSV和PRV上下游引物(10μmol/L)最佳用量为1μL，酶（5μ/μL）加入量为0.5μL，Mg2+(25 mM)终浓度为4mM。多重PCR检测方法的反应条件中退火温度确定为54℃，Mg2+(25 mM)终浓度确定为5mM，各上下游引物(10μmol/L)加入量确定为1μL，酶(5μ/μL)加入量为1μL。该方法可以检测到的CSFV、PRRSV和PRV最低含量分别为23.88pg、13.1pg、14.6pg。\n 利用本试验所建立的多重PCR检测方法对从河北省9个市县收集的168份临床出现繁殖障碍症状猪的组织样品进行检测。结果显示，CSFV、PRRSV、PRV的单纯感染分别为41例、36例和11例，阳性率分别为24.4％、21.4％和6.6％。CSFV与PRRSV、PRRSV与PRV、CSFV与PRV的混合感染分别为10例、1例和2例，阳性率分别为5.9％、1.2％与0.6％。CSFV、PRRSV与PRV混合感染有1例。说明猪场猪群中普遍存在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合症和猪伪狂犬病，同时提示我们要对猪瘟与猪繁殖与呼吸综合症引起重视并加强防疫。

关键词：猪繁殖障碍疫病猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合症病毒猪伪狂犬病毒聚合酶链反应

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母猪繁殖障碍综合征的诊断防制

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畜禽业 2016年第12期27卷 2-3页

作者：尚永春何菊芸邵春松蔡岩喊和平云南省芒市五岔路乡农业综合服务中心云南芒市678400 云南省龙陵县动物疫病预防控制中心云南省陇川县城子镇农业综合服务中心云南省芒市轩岗乡农业综合服务中心云南省德宏州动物疫病预防控制中心

母猪繁殖障碍综合征又称母猪繁殖障碍性疾病．是由猪繁殖与呼吸综合症病毒、伪狂犬病毒、细小病毒病、圆环病毒病、日本乙型脑炎病毒所引起的，在临床上引起妊娠母猪流产、产死胎、木乃伊、弱仔、畸形胎、少仔和公、母猪不育症的一类疾... 详细信息

母猪繁殖障碍综合征又称母猪繁殖障碍性疾病．是由猪繁殖与呼吸综合症病毒、伪狂犬病毒、细小病毒病、圆环病毒病、日本乙型脑炎病毒所引起的，在临床上引起妊娠母猪流产、产死胎、木乃伊、弱仔、畸形胎、少仔和公、母猪不育症的一类疾病，是当前危害规模养殖场、户主要的疫病，严重地阻碍养猪业的发展。

关键词：繁殖障碍综合征母猪流产猪繁殖与呼吸综合症病毒繁殖障碍性疾病日本乙型脑炎病毒防制诊断伪狂犬病毒

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猪蓝耳病的诊断与防治

引用

吉林畜牧兽医 2017年第7期38卷 35-35页

作者：谢百锋吉林省公主岭市永发乡畜牧兽医站吉林公主岭136107

猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸综合症，是由猪繁殖与呼吸综合症病毒引起的一种猪的高度接触性传染病，不同猪的品种、年龄、性别均可发生，但妊娠母猪和仔猪最易感染。前几年该病曾广泛流行，给养猪户造成了较大的经济损失。笔者在基层实际... 详细信息

猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸综合症，是由猪繁殖与呼吸综合症病毒引起的一种猪的高度接触性传染病，不同猪的品种、年龄、性别均可发生，但妊娠母猪和仔猪最易感染。前几年该病曾广泛流行，给养猪户造成了较大的经济损失。笔者在基层实际工作中，遇到多起该病例，根据该病的流行特点，结合当地实际情况，采取了综合防控措施，控制了该病的进一步流行，现将发病、诊断和综合控制措施报道如下。

关键词：猪蓝耳病猪繁殖与呼吸综合症病毒诊断综合控制措施防治接触性传染病妊娠母猪经济损失

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一起猪繁殖与呼吸综合症和链球菌病混合感染的诊治

引用

广西畜牧兽医 2015年第6期31卷 306-307页

作者：黄燕玲广西南宁雷克斯商贸有限公司广西南宁530001 广西大学广西南宁530004

猪繁殖与呼吸综合症（ Reproductive and respir-atory syndrome， PRRS）简称“蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合症病毒引起的，仔猪感染该病毒后，可引起呼吸困难、呼吸急促和咳嗽等，母猪则表现为流产、早产和死胎等。该病是一种免疫... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合症（ Reproductive and respir-atory syndrome， PRRS）简称“蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合症病毒引起的，仔猪感染该病毒后，可引起呼吸困难、呼吸急促和咳嗽等，母猪则表现为流产、早产和死胎等。该病是一种免疫抑制性疾病，猪体感染后免疫力下降，从而导致机体易感染其他病原体（如猪瘟病毒、链球菌和放线杆菌等），使疾病更加复杂和严重。猪链球菌病（ Strep-tococcus suis）是一种人畜共患病，主要引起猪关节炎、心内膜炎、脑膜炎和败血症等，该病多发于3周龄～12周龄的猪，尤其是保育猪易感染此病。2014年4月底，梧州市某规模猪场发生猪蓝耳病与猪链球菌病混合感染，现将诊治结果报告如下。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒猪链球菌病混合感染诊治免疫抑制性疾病猪蓝耳病免疫力下降人畜共患病

来源：评论

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一种安全高效的动物精液消毒剂及其制备方法

一种安全高效的动物精液消毒剂及其制备方法

引用

作者：况洪 610041 四川省成都市高新区芳草街36号瑞升花园9-B-1157号

本发明为了填补市面上动物精液消毒剂的空白，提供了一种安全高效的动物精液消毒剂及其制备方法。按重量计，包括以下组分：聚维酮碘4.0％-6.0％、抗菌肽0.5％-1.0％、维生素0.2％-0.3％、乙二胺四乙酸0.1％－0.2％和蒸馏水余量。采用... 详细信息

标准号: CN104304237B

本发明为了填补市面上动物精液消毒剂的空白，提供了一种安全高效的动物精液消毒剂及其制备方法。按重量计，包括以下组分：聚维酮碘4.0％-6.0％、抗菌肽0.5％-1.0％、维生素0.2％-0.3％、乙二胺四乙酸0.1％－0.2％和蒸馏水余量。采用聚维酮碘与抗菌肽的混合物作为精液消毒剂用于经济动物的精液净化消毒杀菌。经试验证明它能够完全杀灭公猪精液中最常见的五种危害最大的病毒：猪瘟病毒（CSFV）、猪圆环病毒（PCV-2）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV），以及其他大多数病原微生物，同时对精子活力及保存时间有一定延长效果，对受精卵、胚胎无毒无害。

关键词：消毒剂动物精液聚维酮碘抗菌肽精液病原微生物猪繁殖与呼吸综合症病毒蒸馏水乙二胺四乙酸猪伪狂犬病毒猪细小病毒猪圆环病毒受精卵保存时间公猪精液精子活力经济动物净化消毒无毒无害制备方法猪瘟病毒混合物重量计杀灭一种维生素杀菌胚胎病毒填补试验危害证明完全安全

来源：评论

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一种广谱粘膜免疫防控猪繁殖与呼吸综合症的疫苗组合物及其应用

一种广谱粘膜免疫防控猪繁殖与呼吸综合症的疫苗组合物及其应用

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作者：张澍吕宏亮北京市朝阳区管庄双柳北街1号院3号楼5单元702

本发明公开了一种广谱粘膜免疫防控猪繁殖与呼吸综合症的疫苗组合物及其应用，所述疫苗组合物由灭活纯化的完整猪繁殖与呼吸综合症病毒抗原和稳定增效剂组成，所述抗原来源于高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HP-PRRSV-JXM-F5株，其微生... 详细信息

标准号: CN104548084A

本发明公开了一种广谱粘膜免疫防控猪繁殖与呼吸综合症的疫苗组合物及其应用，所述疫苗组合物由灭活纯化的完整猪繁殖与呼吸综合症病毒抗原和稳定增效剂组成，所述抗原来源于高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HP-PRRSV-JXM-F5株，其微生物保藏号是：CGMCC？NO.9453。所述稳定增效剂包括：必需和非必需氨基酸混合物、Ⅰ类干扰素诱导剂、双糖、多元醇、尿素或尿素衍生物、EDTA或EDTA盐、表面活性剂以及缓冲溶液。本发明的疫苗组合物高度安全，具有广谱粘膜免疫的保护作用。并且提高了规模化生产过程猪繁殖与呼吸综合症病毒原液、半成品、成品的贮存稳定性，特别是在极端温度的环境中能够保持抗原结构完整、效价不下降，有利于高热地区猪繁殖与呼吸综合症病毒疫苗的贮存及使用。

关键词：疫苗组合物猪繁殖与呼吸综合症病毒稳定增效剂粘膜免疫抗原广谱高致病性猪繁殖与呼吸综合征猪繁殖与呼吸综合症病毒疫苗猪繁殖与呼吸综合症非必需氨基酸干扰素诱导剂微生物保藏号表面活性剂规模化生产尿素衍生物贮存稳定性高度安全高热地区缓冲溶液极端温度抗原结构灭活纯化混合物多元醇防控双糖效价一种原液半成品尿素完整贮存病毒下降应用公开组成保持

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稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒受体CD163的HEK293细胞系的建立

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中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 163-166页

作者：牛军伟郭龙军谷伟红黄明明李忍骆晓蕾王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)受体CD163的HEK293细胞系,本研究采用RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞(PAM)总RNA中扩增CD163基因并将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1(+)中,构建重组质粒pc DNA-CD163。将该重组质粒转染HEK293细... 详细信息

为构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)受体CD163的HEK293细胞系,本研究采用RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞(PAM)总RNA中扩增CD163基因并将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1(+)中,构建重组质粒pc DNA-CD163。将该重组质粒转染HEK293细胞,并利用G418筛选、纯化,获得了稳定表达CD163受体蛋白的HEK293CD163细胞系。RT-PCR、流式细胞术及western blot检测结果表明,该细胞系在传代至15代后,CD163在HEK293细胞中仍然能够稳定表达。在该细胞系中接种PRRSV后进行间接免疫荧光及噬斑试验检测表明,病毒能够通过CD163感染HEK293CD163细胞并在其中增殖。该细胞系的建立为进一步研究PRRSV的侵入细胞和致病机制提供了病毒在体外增殖的易感细胞系。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 CD163 稳定表达 HEK293细胞系

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