检索结果-内蒙古大学图书馆

计量学报 2021年第11期42卷 1522-1527页

作者：牛春艳张永卓杨佳怡董莲华傅博强王晶中国计量科学研究院北京100029

为研制猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)质粒核酸标准物质,建立数字PCR方法,并联合多家实验室利用数字PCR方法对标准物质进行合作定值,探讨了合作定值过程中影响质粒定值准确性的因素,并评定了标准物质不确定度。研制的两种质粒核酸标准... 详细信息

为研制猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)质粒核酸标准物质,建立数字PCR方法,并联合多家实验室利用数字PCR方法对标准物质进行合作定值,探讨了合作定值过程中影响质粒定值准确性的因素,并评定了标准物质不确定度。研制的两种质粒核酸标准物质已获得国家二级标准物质证书(编号GBW(E) 091038及GBW(E)091039),可为检测方法提供定量标准,用于方法评价、产品质量控制等诸多方面。

关键词：计量学猪繁殖与呼吸综合症病毒质粒核酸数字PCR 标准物质合作定值

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

高致病性猪繁殖与呼吸综合症特异性转移因子的制备方法

高致病性猪繁殖与呼吸综合症特异性转移因子的制备方法

引用

作者：宋勤叶袁洪兴逯纪成陈桂清孙泰然 073000 河北省保定市灵雨寺街289号

本发明公开了一种高致病性猪繁殖与呼吸综合症特异性转移因子的制备方法，属于兽药技术领域。其包括下述步骤：（1）无菌采用经过高致病性猪繁殖与呼吸综合症病毒抗原免疫的猪的脾脏，去除被膜和结缔组织，冲洗，剪碎；（2）加入无菌生... 详细信息

标准号: CN103446182B

本发明公开了一种高致病性猪繁殖与呼吸综合症特异性转移因子的制备方法，属于兽药技术领域。其包括下述步骤：（1）无菌采用经过高致病性猪繁殖与呼吸综合症病毒抗原免疫的猪的脾脏，去除被膜和结缔组织，冲洗，剪碎；（2）加入无菌生理盐水，用高速组织捣碎机绞碎，制成匀浆；（3）匀浆反复冻融8次后，于4℃下4000r/min离心15min，收取上清液；（4）将上清液置于透析袋内进行透析，收集透析外液，过滤除菌，加入冷冻保护剂，混合后分装，-20℃保存。本发明能够特异性提高猪繁殖与呼吸综合征疫苗的免疫效果，改善或增强猪的免疫功能和抗感染能力，具有预防和治疗猪繁殖与呼吸综合症，降低发病率和死亡率的作用。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症高致病性上清液匀浆猪繁殖与呼吸综合症病毒猪繁殖与呼吸综合征高速组织捣碎机特异性转移因子无菌生理盐水抗感染能力冷冻保护剂反复冻融过滤除菌结缔组织抗原免疫免疫功能免疫效果透析外液制备方法透析袋脾脏被膜分装剪碎绞碎兽药透析无菌一种去除冲洗发病率死亡率疫苗加入混合保存收取收集治疗预防公开改善增强进行

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

PRRSV XH-GD株Nsp2部分缺失感染性克隆的构建

引用

中国预防兽医学报 2013年第1期35卷 10-14页

作者：张民泽谢杰雄郭泗虎王衡闫明菲赵孟孟黄震粟硕孙龙张桂红华南农业大学兽医学院广东广州510642

为研究Nsp2编码区不同区域缺失对病毒体外复制的影响,本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XH-GD株反向遗传操作平台的基础上构建了pOK-AaBCD、pOK-AbBCD、pOK-AcBCD等3种Nsp2编码区部分缺失的感染性重组质粒。将这3种感染性质粒分别... 详细信息

为研究Nsp2编码区不同区域缺失对病毒体外复制的影响,本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XH-GD株反向遗传操作平台的基础上构建了pOK-AaBCD、pOK-AbBCD、pOK-AcBCD等3种Nsp2编码区部分缺失的感染性重组质粒。将这3种感染性质粒分别转染Marc-145细胞进行不同Nsp2缺失株的病毒拯救,结果显示,只有在Nsp2编码区缺失105个氨基酸的缺失株XH-GD-Δ105能够在Marc-145细胞中增殖,表明这一缺失区域为病毒复制的非必需,而其他两种感染性质粒则未拯救出相应的缺失重组病毒。本研究为进一步研究Nsp2的基因序列的缺失与PRRSV毒力之间的关系奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 Nsp2部分缺失感染性克隆

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

重庆地区流行的PRRSV的ORF5基因变异分析

引用

中国预防兽医学报 2009年第5期31卷 403-406页

作者：赵秦王永才张森吴俊伟王孝友马跃西南大学荣昌校区动物医学系重庆荣昌402460 重庆市养猪科学研究院重庆荣昌402460

为了分析重庆地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF5基因变异情况,我们通过RT-PCR扩增采自重庆地区不同猪场高热病病猪肺组织样本中PRRSV的ORF5全序列,并对其进行生物信息学分析。结果8个病例样本中有5个成功扩增出ORF5全序列... 详细信息

为了分析重庆地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF5基因变异情况,我们通过RT-PCR扩增采自重庆地区不同猪场高热病病猪肺组织样本中PRRSV的ORF5全序列,并对其进行生物信息学分析。结果8个病例样本中有5个成功扩增出ORF5全序列。系统进化分析表明它们与国内2006年～2007年间的分离株亲缘关系较近,而与更早的分离株和疫苗MLV株亲缘关系较远。此外,推导氨基酸序列分析表明重庆地区流行的PRRSV与以JXA1株等为代表的同期其它地区分离株比较在ORF5的2个线性抗原表位中均存在独特的变异。本研究结果不仅揭示了重庆地区流行的PRRSV ORF5基因的变异特征,而且提示在PRRSV的防控措施中ORF5基因的变异应受到高度的重视。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒变异反转录-聚合酶链式反应高热病

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒受体CD163的HEK293细胞系的建立

引用

中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 163-166页

作者：牛军伟郭龙军谷伟红黄明明李忍骆晓蕾王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)受体CD163的HEK293细胞系,本研究采用RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞(PAM)总RNA中扩增CD163基因并将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1(+)中,构建重组质粒pc DNA-CD163。将该重组质粒转染HEK293细... 详细信息

为构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)受体CD163的HEK293细胞系,本研究采用RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞(PAM)总RNA中扩增CD163基因并将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1(+)中,构建重组质粒pc DNA-CD163。将该重组质粒转染HEK293细胞,并利用G418筛选、纯化,获得了稳定表达CD163受体蛋白的HEK293CD163细胞系。RT-PCR、流式细胞术及western blot检测结果表明,该细胞系在传代至15代后,CD163在HEK293细胞中仍然能够稳定表达。在该细胞系中接种PRRSV后进行间接免疫荧光及噬斑试验检测表明,病毒能够通过CD163感染HEK293CD163细胞并在其中增殖。该细胞系的建立为进一步研究PRRSV的侵入细胞和致病机制提供了病毒在体外增殖的易感细胞系。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 CD163 稳定表达 HEK293细胞系

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗猪瘟重组活载体疫苗及DNA疫苗的构建及其生物学特性分析

抗猪瘟重组活载体疫苗及DNA疫苗的构建及其生物学特性分析

引用

作者：刘燕中国农业科学院

学位级别：博士

猪瘟（CSF）是危害我国养猪业最严重的传染病之一。尽管猪瘟兔化弱毒疫苗（HCLV）及综合防制措施的广泛应用,已控制了猪瘟的大规模流行,但该病仍在我国广大养猪地区呈非典型性和地方性流行。伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征也是两种严重... 详细信息

猪瘟（CSF）是危害我国养猪业最严重的传染病之一。尽管猪瘟兔化弱毒疫苗（HCLV）及综合防制措施的广泛应用,已控制了猪瘟的大规模流行,但该病仍在我国广大养猪地区呈非典型性和地方性流行。伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征也是两种严重危害养猪业的传染病。以上三种传染病是目前导致母猪繁殖障碍的主要病因,而且在临床上此三种病原混合感染的情况比较普遍。因此,开发有效的联合疫苗,制定合理的免疫程序,综合防制这些传染病对养猪业的健康发展具有重要意义。 1、抗猪瘟DNA疫苗的构建及免疫效力研究据报道,牛疱疹病毒Ⅰ型（BHV-1）的VP22蛋白具有促进细胞转导作用。本试验首先应用PCR扩增了CSF病毒（CSFV）E2基因和BHV-1 VP22基因。将E2基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1+,获得重组质粒pcDE2,再将VP22基因连接到E2基因的下游,获得重组质粒pcDEV。将这些重组质粒转染293-T细胞,通过Western Blot分析证明E2基因获得表达;间接免疫荧光检测发现含VP22基因的重组质粒表达的E2蛋白在细胞内呈弥漫性分布,表明VP22具有胞内蛋白转导作用。进一步以鼠及兔为动物模型评价以上两种重组质粒的免疫效力。首先将21只BALB/c小鼠分三组（每组7只）,分别肌肉注射pcDNA3.1+、pcDE2、pcDEV,共免疫3次,每次间隔2周（每次每只鼠注射100ggDNA）。分别于首免后2周、4周、6周采血,用IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒检测抗体。结果显示,通过3次免疫后,pcDE2和pcDEV免疫组均产生了针对E2蛋白的抗体,pcDEV产生的抗体滴度最高,表明VP22促进了E2蛋白的表达或提呈。将9只白兔随机分成3组（每组3只）,分别注射pcDNA3.1+、pcDE2、pcDEV,免疫三次,每次间隔两周,两后腿胫前肌肌肉注射,每只每次500μg。分别于首免后2周、4周、6周耳静脉采血,分离血清,监测抗体变化,结果显示二免后,两个重组质粒免疫组即发生了血清抗体阳转,其中pcDEV免疫组阳转率和抗体水平均高于pcDE2组。首免后7周,对所有家兔静脉注射1:40的484代猪瘟兔化病毒（淋巴脾脏毒）（1mL/只）,攻毒之前三天每隔12h测温一次,攻毒24h后,每隔6h测体温一次,连续测96h。结果显示空质粒pcDNA3.1+免疫组3只兔在攻毒后24-48h左右开始发热,持续约36h,并呈定型热反应:pcDEV免疫组3只兔在攻毒后体温、食欲、精神状态均正常;pcDE2免疫组1只兔各项指标均正常,另外2只于48h有过性发热反应,持续约12h,体温高出正常0.5℃。本试验结果表明BHV-1的VP22基因与CSFV的E2基因融合表达可促进E2蛋白的转导及免疫效果。 2、表达多个外源基因的重组伪狂犬病毒的构建及其生物学特性分析表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5蛋白的重组伪狂犬病毒（PRV）已在本实验室构建成功,动物试验证明此重组病毒疫苗免疫猪可有效抵抗PRRSV和PRV的攻击。本试验在此成功的基础上进一步将CSFV的E2基因插入到重组PRV中,期望获得可以表达PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白的重组PRV。首先构建了含PRV TK基因片段的重组质粒,再将SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒与分别在CMV启动子控制下的含有CSFV E2基因表达盒和PRRSV GP5基因表达盒插入到TK基因中形成转移载体,通过同源重组将转移载体中的目的基因插入到PRV Bartha-K61株TK基因中,

关键词：猪瘟病毒伪狂犬病毒猪繁殖与呼吸综合症病毒核酸疫苗牛疱疹病毒I型VP22基因活载体疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白研究进展

引用

中国畜牧兽医 2016年第8期43卷 2183-2189页

作者：刘亚丽丁耀忠张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730046

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种遍布于全世界的高度传染性疾病,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)。感染PRRSV后,最先在机体内进行表达的是非结构蛋白(nonstructural proteins,NSPs),PRRSV基因组编码区经翻译后至少产生14种NSPs(NSP1α、NSP1β、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5、NSP6、NSP7a、NSP7b、NSP8、NSP9、NSP10、NSP11、NSP12),这些NSPs在病毒增殖、病毒毒力、免疫学特性等方面都发挥着重要作用。作者就NSPs的研究进展进行简要概述,以期为PRRS疫苗研发及技术防控奠定基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒非结构蛋白免疫学特性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5核酸疫苗的研究

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5核酸疫苗的研究

引用

作者：希尼尼根四川农业大学

学位级别：博士

本研究在对从四川省分离的猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）SC1和SC2株进行细胞培养特性、电镜观察和RT—PCR鉴定的基础上，对ORF5基因进行克隆、鉴定和序列分析，构建了ORF5基... 详细信息

本研究在对从四川省分离的猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）SC1和SC2株进行细胞培养特性、电镜观察和RT—PCR鉴定的基础上，对ORF5基因进行克隆、鉴定和序列分析，构建了ORF5基因和猪白细胞介素2（IL-2）真核表达载体（核酸疫苗），利用Marc-145细胞、小鼠和猪作为模型研究ORF5核酸疫苗在Marc-145细胞中表达、在仔猪和小鼠体内的动态分布及安全性、诱导仔猪体液免疫和细胞免疫的能力、IL-2的免疫增强等作用进行了系统研究，获得如下结果： 1．猪繁殖与呼吸综合征病毒四川分离株ORF5基因的序列及分析：本研究对SC1和SC2分离株的ORF5基因分别进行pGEM-T载体克隆与测序，并进行了同源性比较和进化树分析，结果，SC-1、SC-2分离株ORF5基因序列与VR-2332株的十分相似，其核苷酸同源性达到99％，氨基酸同源性为98-99％，而与LV株相差甚远，其核苷酸及氨基酸同源性仅为57％和54％，在进化程度上四川分离株与美洲型PRRSV有很近的亲缘关系，表明，这两株PRRSV分离毒可能属于美洲型。同时用BioEdit、TMHMM-2.0、TreeView等软件对该基因所推测的GP5进行了分析，结果表明SC1、SC2分离株的GP5各有6个潜在的疏水区、2个跨膜区和一个潜在的信号肽。 ***-ORF5基因真核表达质粒的构建及在Marc-145细胞中表达：采用BamHI和EcoRI酶切，通过定向粘末段连接法，分别构建SC1和SC2分离株ORF5基因真核表达质粒pcDNA-SC1-ORF5（核酸疫苗pcDNA-PRRSV-SC1-ORF5）和pcDNA-SC2-ORF5（核酸疫苗pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5），并用脂质体转染法和电穿孔转染法将pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5在Marc-145细胞中进行了表达。结果表明，两种转染法都能高效转染pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5质粒，但后者比前者转染的表达时间提前3小时；从特异性荧光结果看，两者转染表达的效果差异不大，分别在转染后26h和23h可用荧光抗体技术检测到特异荧光，并在转染后56h达到高峰。 ***-ORF5基因真核表达质粒DNA在小鼠和仔猪体内的动态分布及安四川农业大学博士学位论文全性研究:以pCDNA一PRRSv一sCZ一ORFS免疫小鼠和仔猪，分不同时间段采集组织样品，通过PcR检测pCDNA一PRRSv一ScZ一oRFS质粒在小鼠和仔猪体内的动态分布情况。结果表明，肌注小鼠后，pCDNA一PRRSV一SCZ一ORFS迅速分布到小鼠其他组织器官中，在脑组织中存留时间最短，只有6周;在注射部位存留的时间最长，可达到14周以上;在血液和心肌中能存留10周;肝脏、肾脏、脾脏和肺组织中能存留8周。肌注仔猪后，同样发现pCDNA一PRRSV一SCZ一ORFS分布到仔猪其他组织器官中。同时未发现pcDNA一PRRSv一sCZ一oRFS与宿主细胞染色体整合现象。 4.猪白细胞介素2（IL一2）真核表达质粒的构建及其应用:构建猪白细胞介素 2（IL一2）真核表达载体pCDNA一IL一2，并与pCDNA一PRRSV一SCZ一ORFS共同免疫仔猪，观察工L一2对pcDNA一PRRSv一SCZ一ORFS的免疫增强效果。试验结果表明，儿一2对 PcDNA一PRRSV一SCZ一ORFS诱导的体液免疫和细胞免疫应答有明显的增强作用。 5.检测猪繁殖与呼吸综合征抗体间接ELISA方法的建立:本实验以Marc一145 细胞增殖、梯度离心法获得的PRRSV一SCZ病毒作为包被抗原建立了检测PRRS抗体间接ELISA方法，通过实验证明该方法具有特异性强、敏感度高、重复性好等特点，适宜作为PRRSV ORFS核酸疫苗免疫猪后抗体的检测。 ***一ORFS核酸疫苗诱导仔猪体液免疫的研究:pCDNA一PRRSv一SCZ一ORFS 分3种剂量和2种免疫途径对仔猪进行免疫后，用间接ELISA法检测仔猪的体液免

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 ORF5 核酸疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

引用

中国预防兽医学报 2018年第1期40卷 24-28页

作者：李志杰提金凤李舫王志远刁玉荣山东畜牧兽医职业学院山东潍坊261061

为建立检测感染猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒(PRRSV)或PRRSV弱毒疫苗免疫后猪群体内抗体水平的方法,本研究以PRRSV GP5基因的原核表达蛋白为包被抗原,建立了间接ELISA抗体检测方法。利用RT-PCR扩增PRRSV GP5基因,将其克隆于p GEX-6p-1中... 详细信息

为建立检测感染猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒(PRRSV)或PRRSV弱毒疫苗免疫后猪群体内抗体水平的方法,本研究以PRRSV GP5基因的原核表达蛋白为包被抗原,建立了间接ELISA抗体检测方法。利用RT-PCR扩增PRRSV GP5基因,将其克隆于p GEX-6p-1中构建原核重组表达载体p GEX-6P-GP5,转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,以梯度尿素法对表达蛋白纯化后,以其为包被抗原,利用方阵试验对间接ELISA方法进行优化,最终确定了GP5蛋白的最佳包被浓度是150 ng/孔,被检血清的最佳稀释倍数为80倍。试验结果显示,该检测方法的特异性、敏感性、重复性很强。从山东各地采集203份猪血清样品进行检测,结果显示该检测方法与商品化PRRSV抗体检测试剂盒(法国LSI)检测结果的符合率为96.5%。本研究建立的间接ELISA方法,为猪群体内PRRSV抗体水平的检测提供了重要的检测手段,在疫苗免疫效果的评价方面有着广泛的应用。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 GP5蛋白原核表达间接ELISA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp7蛋白的表达与纯化

引用

河南农业科学 2012年第5期41卷 141-144页

作者：刘永晖张改平乔松林刘明阳蒋志政王蕊万博鲍登克王爱萍郑州大学生物工程系河南郑州450001 河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002

为了解nsp7重组蛋白的免疫学活性,采用RT-PCR的方法从猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PRRSV)BJ-4毒株中扩增得到nsp7基因,将基因连接到pET-28a载体并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达,利用Ni-NTA进行亲和纯化,通过SDS-PAGE和Western-blot对... 详细信息

为了解nsp7重组蛋白的免疫学活性,采用RT-PCR的方法从猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PRRSV)BJ-4毒株中扩增得到nsp7基因,将基因连接到pET-28a载体并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达,利用Ni-NTA进行亲和纯化,通过SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行分析和鉴定,通过间接ELISA方法研究了重组蛋白的免疫学活性。结果表明,成功制备了nsp7重组蛋白,间接ELISA结果表明,重组蛋白具有良好的免疫活性,为建立nsp7特异性抗体的间接ELSIA检测方法及PRRS诊断试剂盒的研制奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 nsp7蛋白 BJ-4病毒原核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：