检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2018年第5期38卷 33-39页

作者：郝燕妮李婷范佳鑫李罗牛凌芳欧俐苹吴小候罗春丽重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆市重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院重庆400016

目的：探讨shPLCε对膀胱癌T24细胞瓦伯格效应的影响及其相关机制。方法：（1）慢病毒感染T24细胞,葡萄糖测定试剂盒和乳酸测试盒分别检测细胞葡萄糖利用和乳酸生成情况;q-PCR、Western blot分别检测PLCε、CDC25A及瓦伯格效应相关分子... 详细信息

目的：探讨shPLCε对膀胱癌T24细胞瓦伯格效应的影响及其相关机制。方法：（1）慢病毒感染T24细胞,葡萄糖测定试剂盒和乳酸测试盒分别检测细胞葡萄糖利用和乳酸生成情况;q-PCR、Western blot分别检测PLCε、CDC25A及瓦伯格效应相关分子的表达。（2）转染sh CDC25A质粒,q-PCR、Western blot检测CDC25A的表达;Western blot检测瓦伯格效应相关分子的表达情况。结果：（1）慢病毒干扰PLCε后,T24细胞利用葡萄糖和生成乳酸的能力降低,同时下调CDC25A、PKM2、GLUT1、LDHA的表达。（2）干扰CDC25A的表达后可抑制PKM2、GLUT1、LDHA的表达。结论：shPLCε通过下调关键分子CDC25A的表达抑制膀胱癌T24细胞的瓦伯格效应,从而为膀胱癌的治疗提供了新思路。

关键词： PLCε CDC25A 膀胱癌瓦伯格效应

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

在肝细胞肝癌辐射抵抗中miR-873/NDFIP1对瓦伯格效应的调控机制

在肝细胞肝癌辐射抵抗中miR-873/NDFIP1对瓦伯格效应的调控机制

引用

作者：张玉宇吉林大学

学位级别：博士

肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）为主的原发性肝癌在全世界恶性肿瘤的发病率居第六位,死亡率居第四位,放射治疗作为HCC重要的局部治疗手段已广泛应用于临床。临床实际治疗中由于大部分HCC患者病灶体积较大,并且HCC常伴有乏... 详细信息

肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）为主的原发性肝癌在全世界恶性肿瘤的发病率居第六位,死亡率居第四位,放射治疗作为HCC重要的局部治疗手段已广泛应用于临床。临床实际治疗中由于大部分HCC患者病灶体积较大,并且HCC常伴有乏氧坏死组织显著降低了辐射敏感性;国内患者大多伴有慢性病毒性肝炎、肝硬化等基础肝脏疾病,导致正常肝细胞组织对射线的耐受性差;肝癌病灶周围的脊髓、胃和小肠等均属于对辐射敏感的器官,临床上难以给予根治性的放疗剂量。上述原因最终导致放疗疗效不理想。因此,围绕HCC在乏氧条件下的能量代谢和辐射抗性的调控机制的进行研究,有助于提高HCC局部放疗疗效,并为靶向治疗提供新的分子靶点。研究背景:电离辐射通过间接诱发氧自由基诱导肿瘤细胞DNA的单链及双链损伤杀伤肿瘤细胞。肿瘤微环境的乏氧导致肿瘤细胞的活性氧和氧自由基显著减少,导致辐射抗性的发生。肿瘤细胞即使在氧供应充足和线粒体功能正常的情况下,仍然采用有氧糖酵解的方式摄取葡萄糖转化为乳酸,而不利用氧化磷酸化的方式供能,这种的现象叫做瓦伯格效应,是恶性肿瘤细胞能量代谢的主要特征。有氧糖酵解中的代谢产物如乳酸、丙酮酸、谷胱甘肽和NADPH等酸性物质累积,这些氧化还原剂可高效地清除活性氧和氧自由基,上调了内源性抗氧化能力,进一步导致了辐射抗性的发生。micro RNA是肿瘤发生和发展的重要调控因子,众多学者发现mi R-873在胶质母细胞瘤、结直肠癌和肺腺癌等不同的恶性肿瘤中异常表达,通过靶向调控不同的靶基因发挥癌基因或抑癌基因的作用。文献报道mi R-873可参与NF-κB、ERK、PI3K/AKT和Wnt/β-catenin等多种信号通路的调控。然而,mi R-873在HCC发生发展中的表达情况以及在HCC能量代谢和辐射抗性关系等生物学功能方面尚未见报道。研究目的:肿瘤细胞通过瓦伯格效应维持自身的快速持续增殖,并促进辐射抗性的发生。阐明乏氧微环境中HCC的能量代谢和辐射抗性的分子调控机制,对提高HCC局部放疗疗效具有重要的意义。研究方法:基于以上研究现状,本研究首先检测了86对HCC组织样本（肿瘤组织和癌旁组织）中的mi R-873表达,并与临床信息的相关性进行统计学分析。采用细胞增殖、迁移和侵袭实验探讨mi R-873在HCC的生物学功能。通过细胞克隆形成实验、MTT、流式细胞术等方法探讨mi R-873对HCC辐射抗性的影响。通过糖代谢相关实验和气相色谱质谱（GC-MS）分析法追踪13C标记的葡萄糖的代谢产物通量等方法对mi R-873能量代谢途径和相关指标进行分析、阐明其与瓦伯格效应的关系。应用公共mi RNA数据库进行预测其调控的靶基因为NDFIP1,并应用荧光素酶报告基因、q RT-PCR和免疫组化等方法进行研究其二者的靶向调控关系。通过gain-and-loss方法重复上述实验证实NDFIP1在HCC发生发展中的生物学功能与瓦伯格效应的关系。应用Western Blot、q RT-PCR、IHC等方法从体内、外实验检测其上、下游的调控信号通路分子。研究结果:1.体内、外检测mi R-873在HCC中表达水平及与临床信息的相关性分析（1）mi R-873在HCC组织中的表达与临床信息的相关性本研究收集了86对HCC患者的肿瘤和癌旁组织,检测mi R-873的表达,并深入分析HCC中mi R-873的表达水平与患者基本信息、肿瘤相关指标和临床预后等信息（患者年龄、性别、肿瘤大小、病理分级、临床分期、淋巴血管转移、生存期和复发时间等临床治疗预后情况）的相关性,统计学分析了HCC中mi R-873表达的临床意义。结果显示,肝癌组织中的mi R-873呈高表达,明显高于癌旁组织。而且mi R-873的表达量与肿瘤临床分期、淋巴结转移及远处转移等恶性程度呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关,并且与HCC患者生存期和复发时间呈负相关,多因素分析显示HCC的临床分期和mi R-873的表达高低为预后的不良因素。（2）mi R-873在肝癌细胞和正常细胞的表达采用q RT-PCR方法检测了5种肝癌细胞系（SMMC-7721、Hep G2、Hep3B、SKHEP-1、MHCC97H）和3种人正常肝细胞系（L02、7701、7702）中mi R-873的表达水平,得出与正常肝细胞系相比,肝癌细胞系中的mi R-873均呈高表达（p<0.01）。综上得出mi RNA-873在HCC中作为癌基因可能发挥重要作用。2.探讨mi R-873在HCC中的生物学功能（1）过表达mi R-873基因对HCC增殖、迁移和侵袭的影响通过逆转录病毒转染法,将mi R-873 mimics转染到SMMC-7721细胞中,构建稳定mi R-873过表达的SMMC-7721细胞系（SM

关键词： miR-873 NDFIP1 肝细胞肝癌瓦伯格效应辐射抗性 HIF-1α AKT/mTOR信号通路

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

瓦伯格效应促进生物合成的生化机制与模型

引用

生命的化学 2015年第3期35卷 418-424页

作者：纪冰琰曹致宁成梦骆严浙江大学医学部基础医学院生物化学系杭州310058 浙江大学生命科学学院求是生命科学班杭州310058 浙江大学医学部求是生物医学班杭州310058

大部分肿瘤细胞在氧供充足时,仍会利用糖酵解来产生ATP,这种现象称为瓦伯格效应(Warburg effect)。这种产能效率远低于线粒体氧化磷酸化的代谢方式,其成因和对肿瘤发生发展的作用尚不明确。但科学界普遍认为肿瘤细胞一定从有氧糖酵解中... 详细信息

大部分肿瘤细胞在氧供充足时,仍会利用糖酵解来产生ATP,这种现象称为瓦伯格效应(Warburg effect)。这种产能效率远低于线粒体氧化磷酸化的代谢方式,其成因和对肿瘤发生发展的作用尚不明确。但科学界普遍认为肿瘤细胞一定从有氧糖酵解中获得生长优势。本文结合本实验室及学术界最新的研究结果,对瓦伯格效应促进生物合成的生化机制进行探讨,并在此基础上提出在葡萄糖充足或缺乏时肿瘤细胞均能维持生长优势的模型。

关键词：瓦伯格效应生物合成乳酸化肿瘤代谢肿瘤微环境

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

PLCε通过AKT/GSK-3β/Cdc25a信号通路促进膀胱癌的瓦伯格效应和增殖

PLCε通过AKT/GSK-3β/Cdc25a信号通路促进膀胱癌的瓦伯格效应和...

引用

作者：郝燕妮重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:研究人膀胱移行上皮细胞癌(transitional cell carcinoma of bladder,TCCB)中磷脂酶Cε(PLCε)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、细胞周期蛋白A(Cdc25a)的表达、相关性,且与膀胱癌病理分级分期的关系。探讨PLCε对人膀胱癌T24和BIU细胞... 详细信息

目的:研究人膀胱移行上皮细胞癌(transitional cell carcinoma of bladder,TCCB)中磷脂酶Cε(PLCε)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、细胞周期蛋白A(Cdc25a)的表达、相关性,且与膀胱癌病理分级分期的关系。探讨PLCε对人膀胱癌T24和BIU细胞瓦伯格效应及TCCB增殖的影响,以及分子机制。方法:(1)免疫组织化学法检测56例人膀胱移行上皮细胞癌组织及29例癌旁组织中PLCε和LDHA蛋白的表达,正置显微镜下拍照,统计学方法分析PLCε和LDHA的表达与临床病理参数之间的关系及二者的相关性。(2)利用干扰PLCε表达的慢病毒感染T24细胞和BIU细胞敲减PLCε的表达,收集各组细胞按照葡萄糖测定试剂盒和乳酸测定试盒的说明书分别检测各组膀胱癌细胞利用葡萄糖和生成乳酸的情况,MTT试验检测T24和BIU细胞的增殖情况,FCM检测T24和BIU细胞的细胞周期变化情况,western blot检测PLCε、AKT、p-AKT、p GSK-3β、Cdc25a、c-myc、Cyclind1及瓦伯格效应相关分子PKM2、GLUT1、LDHA的表达变化情况。(3)为了探究其机制,干扰PLCε表达的慢病毒、p-AKT抑制剂、及二者共同联用后分别处理T24和BIU细胞,western blot检测AKT、p-AKT、pGSK-3β、Cdc25a、c-myc、Cyclind1、PKM2、GLUT1、LDHA的表达情况;Cdc25a干扰质粒处理T24和BIU细胞,western blot检测Cdc25a、PKM2、GLUT1、LDHA、c-myc、Cyclind1的表达情况。(4)将感染LV-sh PLCε、LV-sh NC和未做任何处理的空白膀胱癌T24细胞分别种植于三组裸鼠皮下(随机分组、每组4只),定期测定三组裸鼠的体重和瘤体的大小,一个月后处死裸鼠,取瘤体测量大小、做切片行免疫组织化学法和H&E染色检测PLCε、LDHA的表达情况。结果:(1)PLCε、LDHA在人膀胱移行上皮癌组织中表达明显高于癌旁组织(P<0.05)。(2)慢病毒干扰PLCε表达抑制了T24和BIU细胞的增殖(P<0.05),细胞阻滞于S期(P<0.05);降低了膀胱癌细胞葡萄糖的利用和乳酸的生成;降低了膀胱癌细胞中p-AKT、p GSK-3β、Cdc25a、c-myc、Cyclind1、PKM2、GLUT1、LDHA的蛋白表达,AKT的表达无明显变化;p-AKT抑制剂处理膀胱癌细胞使p-AKT、p GSK-3β、Cdc25a、c-myc、Cyclind1、PKM2、GLUT1、LDHA的蛋白水平表达降低,AKT的表达无明显变化;干扰Cdc25a的表达降低了Cdc25a、c-myc、Cyclind1、PKM2、GLUT1、LDHA的蛋白水平表达,促进了膀胱癌细胞的瓦伯格效应及增殖。(3)裸鼠皮下成功成瘤,感染LVsh PLCε的T24细胞处理组瘤体体积明显小于LV-sh NC组和空白组,差异比较具有统计学意义(p<0.05);IHC结果显示LV-sh PLCε处理组与LV-sh NC处理组、空白组比较,PLCε、LDHA表达均降低。结论:PLCε通过AKT/GSK-3β/Cdc25a信号通路促进膀胱癌的瓦伯格效应和膀胱癌的增殖。

关键词：膀胱癌瓦伯格效应 PLCε

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

PPARδ通过抑制线粒体自噬增强肿瘤细胞的瓦伯格效应

PPARδ通过抑制线粒体自噬增强肿瘤细胞的瓦伯格效应

引用

作者：侯永忠江苏大学

学位级别：硕士

肿瘤细胞通过抑制线粒体自噬从而维持异常线粒体积累，这会增强肿瘤细胞糖酵解途径（Warburg effect，瓦伯格效应），然而这一机制目前依然不清楚。本研究发现PPARδ含有LIR（LC3 结合区域）结构域。免疫沉淀分析发现PPARδ-LIR结构域... 详细信息

肿瘤细胞通过抑制线粒体自噬从而维持异常线粒体积累，这会增强肿瘤细胞糖酵解途径（Warburg effect，瓦伯格效应），然而这一机制目前依然不清楚。本研究发现PPARδ含有LIR（LC3 结合区域）结构域。免疫沉淀分析发现PPARδ-LIR结构域能绑定LC3B。此外，PPARδ-LIR结构域能促进肿瘤细胞葡萄糖摄入，这与PPARδ-LIR结构域抑制线粒体自噬相关蛋白表达有关。相反，PPARδ 基因沉默或 PPARδ/Y42R 突变体能减轻这一现象。PPARδ 抑制肿瘤细胞线粒体自噬，从而促进肿瘤生长，主要研究结果如下：　　1、PPARδ 含有 LIR 结构域，PPARδ-LIR 结构域绑定 LC3B，而突变体PPARδ/Y42R能减轻这一现象。　　2、PPARδ 增加葡萄糖的吸收、消耗以及乳酸的释放，相反其突变体PPARδ/Y42R能减弱PPARδ这一作用。　　3、PPARδ增加线粒体蛋白COXⅡ、Tom20表达水平和线粒体DNA含量，即PPARδ抑制线粒体自噬，而突变体PPARδ/Y42R不抑制线粒体自噬。　　4、蛋白免疫印迹分析发现PPARδ 抑制线粒体自噬相关蛋白 PINK1、Park2的表达。相反，PPARδ基因沉默或突变体PPARδ/Y42R能减轻这一现象。　　5、软琼脂和异种移植瘤模型分析表明，PPARδ促进肿瘤细胞增殖和肿瘤生长，而突变体PPARδ/Y42R能减轻这一作用，这与PPARδ-LIR结构域抑制肿瘤组织中线粒体自噬相关蛋白表达有关。　　这些发现揭示PPARδ抑制线粒体自噬从而促进瓦伯格效应和肿瘤生长的新机制。

关键词：过氧化物酶体增殖激活性受体δ 线粒体自噬葡萄糖摄入 LC3结合结构域肿瘤细胞瓦伯格效应

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

瓦伯格效应与严重烧伤后的代谢紊乱

引用

中国医刊 2020年第6期55卷 608-612页

作者：迟云飞胡泉徐成峰柴家科解放军总医院第四医学中心烧伤整形科北京100048

瓦伯格效应的特征为糖酵解产生腺苷三磷酸提供的能量,取代线粒体的氧化磷酸化作用,这种代谢方式产能效率低,但速率却更高。瓦伯格效应最初在肿瘤细胞中被发现并就此开展了大量研究,近年来其在危重病及各种炎性疾病中的作用逐渐被发现并... 详细信息

瓦伯格效应的特征为糖酵解产生腺苷三磷酸提供的能量,取代线粒体的氧化磷酸化作用,这种代谢方式产能效率低,但速率却更高。瓦伯格效应最初在肿瘤细胞中被发现并就此开展了大量研究,近年来其在危重病及各种炎性疾病中的作用逐渐被发现并受到重视。严重烧伤的突出特点为代谢紊乱,包括高血糖、胰岛素抵抗、负担平衡等。本文通过回顾性分析瓦伯格效应的相关研究,探索利用瓦伯格效应深入开展严重烧伤后代谢紊乱的可行性,讨论利用瓦伯格效应针对烧伤后胰岛素抵抗开展研究的预期前景。

关键词：瓦伯格效应烧伤代谢

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

从“脾主升清”探讨瓦伯格效应在学习记忆障碍中的作用

引用

中国中医药信息杂志 2024年第8期31卷 12-16页

作者：唐志娟周雯战丽彬南京中医药大学中医学院·中西医结合学院江苏南京210023 辽宁中医药大学中医药创新工程技术中心辽宁沈阳110847 辽宁省中医脾脏象现代研究重点实验室辽宁沈阳110847

学习记忆障碍病位主要在脑,与脾、心、肾、肝功能失调密切相关,尤其是脾,其居中土,主管气机升降,斡旋一身之气血以濡养脑窍。本文通过论述“脾主升清”的生理功能,探讨其在学习记忆障碍中的作用。瓦伯格效应以快速高效的方式产生能量以... 详细信息

学习记忆障碍病位主要在脑,与脾、心、肾、肝功能失调密切相关,尤其是脾,其居中土,主管气机升降,斡旋一身之气血以濡养脑窍。本文通过论述“脾主升清”的生理功能,探讨其在学习记忆障碍中的作用。瓦伯格效应以快速高效的方式产生能量以维持大脑正常功能,与中医脾主升清的功能在一定程度上相契合。因此,以“脾主升清”立论,探讨学习记忆障碍的病理基础,并从中西医方面阐述瓦伯格效应紊乱是本病的重要特征,有助于深入探讨助脾升清法治疗学习记忆障碍的作用,为该病中医治疗提供新思路。

关键词：脾主升清瓦伯格效应学习记忆障碍助脾升清法

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基于PKM2介导的“瓦伯格”效应研究大黄促进DEN致大鼠肝纤维化的机制

基于PKM2介导的“瓦伯格”效应研究大黄促进DEN致大鼠肝纤维化的...

引用

作者：程金妞安徽中医药大学

学位级别：硕士

肝癌是世界上常见的恶性肿瘤之一,是威胁人类健康的重要负担。而肝纤维化是肝癌发生发展的重要原因,因此对于肝纤维化的防治具有重要意义。大黄是我国传统常用的大宗中药材,临床应用极其广泛,因其作用峻烈被称为“将军”。现代药理学证... 详细信息

肝癌是世界上常见的恶性肿瘤之一,是威胁人类健康的重要负担。而肝纤维化是肝癌发生发展的重要原因,因此对于肝纤维化的防治具有重要意义。大黄是我国传统常用的大宗中药材,临床应用极其广泛,因其作用峻烈被称为“将军”。现代药理学证实了大黄具有良好的保肝作用,主要活性部位为大黄蒽醌类物质。但近些年来,研究证明大黄对肝脏具有毒性作用。大黄对肝脏的效/毒的双向作用,导致学者对大黄在临床上使用的安全性产生疑虑。因此,我们进一步研究大黄在肝纤维化发展中的作用,对预防肝癌的发生发展具有重要意义。二乙基亚硝胺(DEN)致大鼠肝癌模型是模拟人类肝癌发生发展的常用模型之一。目的:本研究旨在研究大黄对DEN致大鼠肝纤维化的作用及其作用机制方法:1.大黄通过调控PKM2介导的“瓦伯格”效应对DEN致大鼠肝纤维化的作用32只SPF级SD大鼠适应性喂养三天,随机分为4组:正常对照组、大黄处理组、DEN处理组、大黄+DEN处理组。酶活检测法评估各组大鼠肝功能血清谷丙转氨酶活性。HE染色和Masson染色观察各组大鼠肝组织病理学变化。Western Blot法检测大鼠肝组织中肝纤维化标志分子α-SMA、有氧糖酵解标志分子PKM2和Erk1/2、p-Erk1/2、HIF-1α水平。***2的特异性抑制剂对大黄促进DEN致大鼠肝纤维化和“瓦伯格”效应的作用以有氧糖酵解关键酶PKM2的抑制剂(白藜芦醇)进行干预。64只大鼠(体重170～210g)适应性喂养3天后,随机分为8组(8只/组):正常对照组、大黄处理组、白藜芦醇处理组、白藜芦醇+大黄处理组、DEN处理组、大黄+DEN处理组、白藜芦醇+DEN处理组、白藜芦醇+大黄+DEN处理组。Masson染色观察各组肝组织病理学变化。Western Blot法检测有氧糖酵解标志分子PKM2。3.大黄不同极性部位对DEN致大鼠肝纤维化的作用32只SPF级SD大鼠适应性喂养三天,随机分为5组(8只/组):正常对照组、DEN处理组、大黄水提物+DEN处理组、大黄乙酸乙酯提取物+DEN处理组、大黄正丁醇提取物+DEN处理组。酶活检测法评估各组大鼠肝组织肝功能(谷丙转氨酶、谷草转氨酶)和乳酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶等活性,通过HE染色和Masson染色观察各组大鼠肝组织病理学变化。使用Western Blot法检测肝组织中肝纤维化和有氧糖酵解标志分子TGF-β1、PCNA和PKM2水平。结果:1.大黄通过调控PKM2介导的“瓦伯格”效应对DEN致大鼠肝纤维化的作用酶活性检测结果表示,大黄+DEN处理组大鼠肝组织中肝功能损伤更为严重。HE染色结果显示大黄+DEN处理组大鼠肝组织的病理变化更为严重;Masson染色结果显示,大黄+DEN处理组大鼠的肝组织纤维化程度更显著。Western Blot结果显示,与正常组和DEN处理组相比,大黄+DEN处理组中α-SMA、Erk1/2、p-Erk1/2和HIF-1α蛋白水平明显增高并且PKM2的水平也显著升高。这些结果表明,大黄对DEN致大鼠肝纤维化具有促进作用,这可能与PKM2介导的有氧糖酵解有关。***2的特异性抑制剂对大黄促进DEN致大鼠肝纤维化和“瓦伯格”效应的作用Masson染色结果显示,与大黄+DEN处理组大鼠相比,白藜芦醇+大黄+DEN处理大鼠肝组织的纤维化程度显著降低。Western Blot结果显示,与大黄+DEN处理大鼠相比,白藜芦醇+大黄+DEN处理大鼠肝脏中PKM2蛋白水平降低。这些结果显示,白藜芦醇减轻了大黄促进DEN致肝纤维化的作用并且抑制了大黄+DEN处理大鼠肝脏中的有氧糖酵解。3.大黄不同极性部位对DEN致大鼠肝纤维化的作用使用系统溶剂法提取总大黄四个不同极性部位,分别是水提物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物。因石油醚部位得率较低,故验证水提物、乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物三个极性部位。HE染色结果显示,大黄水提物+DEN处理组大鼠肝组织损伤较其他两组都严重。Masson染色结果表明,大黄水提物+DEN处理组大鼠肝组织纤维化程度更高。酶活结果显示,大黄水提物干预模型组后,大鼠血清中ALT和AST水平都显著性升高,同时,乳酸脱氢酶活性也显著升高,而异柠檬酸脱氢酶的活力显著性下降。Western Blot结果显示,大黄水提物+DEN处理组大鼠肝组织中TGF-β1、PCNA、PKM2的水平也显著性升高。这些结果表明,大黄水提物可以加重DEN致大鼠肝纤维化程度,同时与PKM2介导的有氧糖酵解相关。结论:大黄加重了DEN致大鼠肝纤维化并且促进了肝组织中有氧糖酵解的发生。白藜芦醇,作为有氧糖酵解关键酶丙酮酸激酶M2型(PKM2)的抑制剂,显著降低了大黄加重DEN致大鼠肝纤维化的作用。这提示我们大黄加重DEN致大鼠肝纤维化的主要机制主要与大黄调控有氧糖酵解的水平有关

关键词：大黄二乙基亚硝胺肝纤维化瓦伯格效应系统溶剂法

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

miR-490-3P/hnRNPA1-b/PKM2轴通过PI3K/AKT通路调控结肠癌细胞Warburg效应和增殖的研究

miR-490-3P/hnRNPA1-b/PKM2轴通过PI3K/AKT通路调控结肠癌细胞War...

引用

作者：万祥辉南昌大学

学位级别：博士

背景结直肠癌(CRC)是全球发病率和死亡率均位于前列的恶性肿瘤,患病人群呈现年轻化趋势。虽然早期的CRC 5年生存率大约为90%,但在转移性结肠癌中5年生存率下降至14%左右,侵袭转移是其最常见的致死原因,60%的CRC患者会发生转移。CRC包括... 详细信息

背景结直肠癌(CRC)是全球发病率和死亡率均位于前列的恶性肿瘤,患病人群呈现年轻化趋势。虽然早期的CRC 5年生存率大约为90%,但在转移性结肠癌中5年生存率下降至14%左右,侵袭转移是其最常见的致死原因,60%的CRC患者会发生转移。CRC包括了结肠癌(CC)和直肠癌(RC),本研究预实验结果显示异质性核糖核蛋白A1(hnRNPA1)在CC组织中相对癌旁组织高表达,具有统计学差异,而直肠癌中没有统计学差异,因此博士阶段的工作主要围绕CC展开。CC 5年生存率已从20世纪70年代中期的50%提高到目前的65%,这反映了癌症筛查带来的早期诊断,以及外科技术和新型系统疗法的进步。但这些筛查和治疗方案仍存在不少缺陷。目前CC的早期筛查主要靠隐血实验和肠镜。隐血实验阳性率低、特异性差;肠镜有创伤性,患者依从性差。治疗方面存在神经病变、化疗相关腹泻、膀胱功能障碍、性功能障碍等多种不良反应。鉴于目前还没有理想的CC早期诊断标志物,也没有特定的靶向药物,挖掘有效的CC早期诊断生物标志物和新的治疗靶标仍有重要意义。即使在有氧情况下肿瘤细胞也更倾向通过有氧糖糖酵解的方式消耗葡萄糖,生成乳酸,这种现象称为Warburg效应,现已被认为是癌症的一个共同标志。有氧糖酵解不仅为癌细胞提供能量,还能产生大量的产物以满足其快速生长的要求,并塑造有利于肿瘤细胞生存的肿瘤微环境。Warburg效应中hnRNPA1是主要调控因子。课题组对晚期结肠癌患者代谢组学研究也显示CC和糖酵解/糖异生代谢途径异常显著相关,在体内实验和细胞实验中经中药益气散结方处理后hnRNPA1表达显著降低。近年发现关键分子异常剪接产物可作为肿瘤进展和预后评估标志物。hnRNPA1自身也受选择性剪接机制调控而存在两个剪接亚型,即不包含外显子8的hnRNPA1-a亚型和包含外显子8的hnRNPA1-b亚型。但长期以来hnRNPA1亚型单体的生物学功能没有引起大家关注,相关研究少见报道。癌症中的有氧糖酵解和APC/KRAS/TP53、PI3K/AKT、WNT/β-Catenin等多个通路相关,其中AKT可通过增强葡萄糖的摄取、磷酸化糖酵素来促进糖酵解。目前尚未见hnRNPA1通过PI3K/AKT通路调控Warburg效应的报道。国内外研究显示hnRNPA1可以结合m RNA、miRNA、Lnc RNA调控包括CC在内的多种癌症癌细胞的增殖、侵袭、转移,且和癌症进展、患者总体生存率有关。miR-490-3P在CC中低表达,过表达miR-490-3P可以抑制CC细胞的增殖、侵袭、转移,沉默miR-490-3P表达可以促进结肠从腺瘤发展成为侵袭性CC。Target Scan8.0预测显示miR-490-3P可以和hnRNPA1的3'非编码区结合,但目前尚未见miR-490-3P靶向hnRNPA1亚型hnRNPA1-b抑制CC增殖的报道。综上所述提出科学假设:一个新的miR-490-3P/hnRNPA1-b/PKM2轴可以通过PI3K/AKT通路重塑Warburg效应调控CC细胞增殖。为进一步阐明其作用机制,本研究在前期研究基础上,分析hnRNPA1-b对CC预后评估价值,hnRNPA1-b通过PI3K/AKT通路增强Warburg效应促进CC细胞增殖及miR-490-3P靶向hnRNPA1-b消减Warburg效应抑制CC细胞增殖的作用机制。研究结果阐明了miR-490-3P/hnRNPA1-b/PKM2轴通过PI3K/AKT通路重塑Warburg效应调控CC细胞增殖的分子机制,为CC诊断和治疗探寻新的潜在生物靶标。第一部分hnRNPA1-b对结肠癌预后评估价值目的:研究hnRNPA1-b对CC预后评估价值。方法:使用RT-q PCR分析hnRNPA1-b m RNA在结肠癌组织和细胞中的差异表达。首先收集10例CC癌组织及其配套的癌旁组织和CC远端组织,使用荧光原位杂交(FISH)分析hnRNPA1-b核酸表达情况。再收集不同临床分期的220例CC患者的石蜡包埋切片,包括1期41例,2期64例,3期66例,4期49例,使用免疫组化(IHC)分析hnRNPA1-b抗原表达情况。然后进一步收集患者年龄、性别、TNM分期及生存时间信息,分析hnRNPA1-b表达与患者临床病理特征及总体生存期的关系。结果:与正常对照组相比,hnRNPA1-b在CC组织和细胞中的表达显著增加(P<0.05)。FISH、IHC分别从RNA和蛋白表达角度证明,hnRNPA1-b在CC的不同分期(包括I期、II-III期和IV期)中的表达存在显著性差异。此外,临床病理特征及生存分析显示hnRNPA1-b的表达与临床分期和T分期之间存在显著相关性,而与年龄、性别、N分期、M分期、总体生存期无显著相关

关键词：异质性核糖核蛋白A1-b miR-490-3P 异质性核糖核蛋白A1 瓦伯格效应结肠癌

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

RhoA/ROCK1通路调控Warburg效应在人主动脉瓣钙化中的作用及机制研究

RhoA/ROCK1通路调控Warburg效应在人主动脉瓣钙化中的作用及机制...

引用

作者：刘慧箬山东大学

学位级别：硕士

研究背景钙化性主动脉瓣疾病(Calcific aortic valve disease,CAVD)是一种高度流行的慢性进展性心血管疾病,被认为是心肌梗死、心血管死亡及全因死亡的独立危险因素。对于CAVD,目前最大的困扰就是没有有效的保守治疗方案对其进展过程进... 详细信息

研究背景钙化性主动脉瓣疾病(Calcific aortic valve disease,CAVD)是一种高度流行的慢性进展性心血管疾病,被认为是心肌梗死、心血管死亡及全因死亡的独立危险因素。对于CAVD,目前最大的困扰就是没有有效的保守治疗方案对其进展过程进行干预,也因此导致该疾病致残率和死亡率居高不下。异常血流动力学加剧主动脉瓣钙化的发生发展。主动脉瓣膜间质细胞(Valvular interstitial cells,VICs)成骨分化作为CAVD的关键环节,是一种可调控的异位成骨过程,但是异常机械应力如何启动VICs成骨分化仍不明晰。因此,探寻能启动VICs成骨分化的机械敏感通路并阐明其中病理机制,更有效的延缓主动脉瓣钙化的进展是非常重要且迫切的研究方向。RAS 同源基因家族成员 A(Ras homolog gene family,member A,Rho A)/Rho 关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rho-associated protein kinase 1,ROCK1)是广泛分布于心血管系统的机械敏感通路。近期多项动物研究表明,Rho A/ROCK通路参与调控主动脉瓣膜钙化,但目前对于Rho A/ROCK1通路在人主动脉瓣钙化中的作用研究仍无报道。并且,现有Rho A/ROCK和CAVD相关的研究仍停留于简单的表型层面,其中所涉及机制尚需进一步研究。代谢重编程是细胞为满足能量需求,通过改变代谢模式促进自身增殖、生长和分化的机制。其中,“Warburg效应”是目前研究最为广泛的细胞代谢重编程模式之一,在动脉粥样硬化、骨骼发育等多种成骨过程中被证实存在。有研究显示Rho A/ROCK1能够介导“机械反应性代谢”调控肿瘤侵袭、转移过程,这提示Rho A/ROCK1通路可能通过介导VICs代谢重编程在人CAVD进程中起着至关重要的作用。因此,进一步研究Rho A/ROCK1调控VICs Warburg效应在人主动脉瓣钙化过程中的作用及具体分子机制,将为探寻CAVD潜在的药物治疗靶点提供依据。研究目的(一)探究Rho A/ROCK1通路及Warburg效应关键蛋白在人主动脉瓣钙化过程中的表达情况。(二)探究Rho A/ROCK1通路对人VICs Warburg效应的调控作用及其促钙化机制。研究方法(一)人主动脉瓣组织样本收集及相关检测1.人主动脉瓣组织收集与处理.:收集我院2021年10月至2022年10月因CAVD行主动脉瓣置换术患者的主动脉瓣组织样本作为钙化组(n=22),并以同时期因主动脉瓣夹层行Wheat或Bentall术患者的主动脉瓣组织样本作为阴性对照组(n=12)。手术中取下无菌主瓣标本后,立即置入无菌PBS、4%多聚甲醛溶液或液氮中以用于后续实验。2.人组织钙化程度检测:茜素红染色观察钙盐沉积;蛋白免疫印迹和免疫组化法检测成骨标志蛋白在两组样本中的表达差异。3.人组织Rho A/ROCK1通路及Warburg效应关键蛋白差异表达:蛋白免疫印迹和免疫组化法检测Rho A/ROCK1及Warburg效应关键蛋白在两组样本中的表达差异。(二)人主动脉瓣膜间质细胞分离鉴定及体内外成骨诱导模型构建1.人VICs的分离与培养:使用Ⅱ型胶原酶二次消化法在体外分离人主动脉瓣中VICs。稳定传代后第2-7代细胞用于后续实验。2.人VICs表型鉴定:免疫荧光技术检测间质细胞标志物Vimentin及内皮细胞标志物CD31的表达,明确所获细胞的纯度。3.人VICs体内外成骨诱导模型构建及鉴定:用成骨诱导培养基(含有2 mM磷酸二氢钠,75 mM抗坏血酸,100 nM地塞米松和10-7mM胰岛素的完全培养基)诱导培养7天,以构建人VICs体外成骨诱导模型。使用蛋白免疫印迹法、茜素红及碱性磷酸酶(ALP)染色检测成骨诱导不同时间点VICs中成骨相关蛋白、钙盐沉积及ALP含量的变化,明确成骨诱导模型是否构建成功。4.人VICs体内外成骨诱导模型中Rho A/ROCK1通路和Warburg效应相关蛋白差异表达,以及代谢模式的变化:蛋白免疫印迹法检测VICs体内外钙化模型中Rho A/ROCK1及Warburg效应关键蛋白的表达变化,Seahorse检测细胞OCR、ECAR。(三)Rho A/ROCK1通路对人VICs Warburg效应及成骨分化的调控作用研究使用 Y27632、BAY876 和 BX795 分别抑制 ROCK1、GLUT1 和 PFK1,模拟 Rho A/ROCK1通路阻断和Warburg效应抑制,成骨诱导7天。检测抑制效果后,通过蛋白免疫印迹、Seahorse、茜素红和ALP染色等验证阻断Rho A/ROCK1通路和阻滞Warburg效应对人VICs代谢重编程及成骨分化的影响。(四)Rho A/ROCK1通路调控VICs

关键词：钙化性主动脉瓣疾病瓣膜间质细胞瓦伯格效应 RAS同源基因家族成员A Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1 矮小相关转录因子2

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：