检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业科学 2024年第14期57卷 2781-2790页

作者：王永江乔奇王爽赵付枚田雨婷张德胜张振臣河南省农业科学院植物保护研究所/河南省农作物病虫害防治重点实验室/农业农村部华北南部作物有害生物综合治理重点实验室

【目的】利用逆转录酶重组酶聚合酶扩增（reverse transcriptase recombinase polymerase amplification,RT-RPA）结合侧向流层析（lateral flow dipstick,LFD）试纸条技术，建立甘薯褪绿矮化病毒（sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV）西非株系（west African strain,WA）的RT-RPA-LFD检测方法。【方法】根据SPCSV-WA外壳蛋白基因和热激蛋白基因的保守序列设计并筛选扩增效果好、特异性强的引物和探针。然后对引物和探针的浓度、扩增体系、温度、反应时间等条件进行优化，建立SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法。利用该方法对SPCSV-EA、甘薯羽状斑驳病毒（sweet potato feathery mottle virus,SPFMV）、甘薯潜隐病毒（sweet potato latent virus,SPLV）、甘薯G病毒（sweet potato virus G,SPVG）等常见的甘薯病毒进行检测，验证方法的特异性；将感染SPCSV-WA甘薯叶片样品总RNA进行10倍梯度稀释，分别采用RT-PCR和RT-RPA-LFD进行检测，比较RT-PCR和RT-RPA-LFD方法的灵敏度；对采自田间的甘薯样品和试管苗样品进行RT-RPA、RT-RPA-LFD和RT-PCR检测，验证该方法的实用性。【结果】建立了SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法，最适引物为CSV357F/R，探针CSV-CP-Probe（47 bp），引物和探针工作浓度分别为0.2和0.06μmol·L-1，温度为42℃，时间5 min。该方法可对SPCSV-WA进行特异性检测，与甘薯上其他常见病毒无交叉反应。RT-RPA-LFD最低可检测到总RNA稀释至10-4溶液，而RT-PCR最低检测到总RNA稀释至10-3溶液，RT-RPA-LFD灵敏度是RT-PCR的10倍。田间采集的22份甘薯样品经RT-PCR、RT-RPA和RT-RPA-LFD检测，均检出11份阳性样品，3种方法检测结果一致。28份试管苗样品的检测结果表明，RT-PCR和RT-RPA-LFD检测结果一致，均检出5份阳性样品。【结论】建立了SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法，该方法具有快速、简便、特异、灵敏、可视的特点，既可用于甘薯脱毒试管苗样品的病毒检测，也适用于基层单位田间甘薯病毒样品的现场快速检测。

关键词：甘薯褪绿矮化病毒西非株系逆转录酶重组酶聚合酶扩增侧向流层析快速检测甘薯

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甘薯褪绿矮化病毒西非株系RT-LAMP检测方法的建立

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中国农业科学 2013年第18期46卷 3939-3945页

作者：乔奇张振臣秦艳红张德胜田雨婷王爽王永江河南省农业科学院植物保护研究所/河南省农作物病虫害防治重点实验室/农业部华北南部作物有害生物综合治理重点实验室

【目的】基于逆转录环介导等温扩增技术(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)建立甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)西非株系(West African,WA)的可视化检测方法。【方法】针对SPCSV西非株系(SPCSV-WA)的CP核苷酸序列设计4条引物,以感染SPCSV-WA甘薯叶片总RNA为模板,进行一步法RT-LAMP,在65℃条件下反应1 h。扩增产物利用琼脂糖电泳分析和SYBR green I荧光染料显色判断结果,同时对扩增产物的电泳条带进行基因克隆和测序鉴定。利用常规RT-PCR和建立的RT-LAMP方法对14份甘薯样品进行SPCSV-WA检测,比较2种方法的检测结果。【结果】建立的LAMP方法可特异地对SPCSV-WA进行检测,且最低可检测出101拷贝/μL的模板。RT-LAMP产物的克隆测序表明,感染SPCSV-WA甘薯样品的RT-LAMP产物为SPCSV-WA CP基因序列。14份田间甘薯样品检测表明,RT-LAMP与RT-PCR方法检测结果完全一致。【结论】建立的SPCSV-WA RT-LAMP可视化检测方法,是简便、可靠的SPCSV-WA检测方法。

关键词：甘薯甘薯褪绿矮化病毒西非株系逆转录环介导等温扩增技术检测

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甘薯褪绿矮化病毒西非株系实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

引用

植物病理学报 2014年第5期44卷 461-468页

作者：王丽王振东乔奇秦艳红张德胜田雨婷王爽张立军张振臣沈阳农业大学农学院沈阳110161 南阳师范学院生命科学与技术学院南阳473061 河南省农业科学院植物保护研究所河南省农作物病虫害防治重点实验室农业部华北南部作物有害生物综合治理重点实验室郑州450002

依据Gen Bank中登录的甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)西非株系(WA)的核苷酸序列,分别设计两对特异性引物和一条Taq Man探针。以SPCSV-WA外壳蛋白(cp)基因的重组质粒为阳性标准质粒绘制标准曲线,通过优化... 详细信息

依据Gen Bank中登录的甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)西非株系(WA)的核苷酸序列,分别设计两对特异性引物和一条Taq Man探针。以SPCSV-WA外壳蛋白(cp)基因的重组质粒为阳性标准质粒绘制标准曲线,通过优化反应体系和反应条件,建立了SPCSV-WA的实时荧光定量PCR检测方法。试验结果表明,该方法只能检测到目的病毒,标准曲线的斜率和相关系数分别为-3.239和1,扩增效率为103.568%。最低可检测到约3.31 copies/μL的阳性质粒,灵敏度比常规PCR高1 000倍。本研究建立的SPCSV实时荧光定量PCR方法可用于田间样品的检测,为SPCSV的早期预警和流行学研究提供了技术手段。

关键词：甘薯褪绿矮化病毒西非株系荧光探针实时荧光定量PCR

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