检索结果-内蒙古大学图书馆

华西口腔医学杂志 2025年第1期43卷 37-45页

作者：刘炜林苏灿崔彩云滨州医学院附属医院牙体牙髓科滨州256600

目的45s5促进根尖牙乳头细胞(APCs)成牙本质方向分化作用机制仍不明确,本研究旨在探讨细胞自噬参与生物活性玻璃45s5促进APCs成牙本质方向分化的作用。方法体外分离培养APCs,流式细胞术鉴定细胞组织来源。配置1 mg/mL 45s5浸提培养液,检... 详细信息

目的45s5促进根尖牙乳头细胞(APCs)成牙本质方向分化作用机制仍不明确,本研究旨在探讨细胞自噬参与生物活性玻璃45s5促进APCs成牙本质方向分化的作用。方法体外分离培养APCs,流式细胞术鉴定细胞组织来源。配置1 mg/mL 45s5浸提培养液,检测pH和离子浓度。实验分为对照组、45s5组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)45s5组,45s5组为1 mg/mL 45s5诱导培养APCs,3-MA 45s5组为1 mg/mL 45s5中加入自噬抑制剂(3-MA)。免疫印迹法(Western blot)检测各组诱导培养24 h后自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)和P62的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测诱导培养7 d后骨涎蛋白(BsP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、牙本质涎磷蛋白(DsPP)和牙本质基质蛋白-1(DMP-1)的表达,细胞碱性磷酸酶(ALP)染色分析诱导培养7 d细胞ALP活性,茜素红染色分析诱导培养21 d矿化结节形成。结果45s5浸提培养液的pH为8.65±0.01,与对照组差异无统计学意义(P>0.05);45s5诱导培养液的硅离子浓度为(1.56±0.07)mmol/L,高于对照组(0.08±0.01)mmol/L(P<0.05);45s5浸提培养液的钙离子浓度为(1.57±0.15)mmol/L,与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,45s5组LC3B-Ⅱ/Ⅰ比值升高、P62表达降低(P<0.05);与45s5组相比,3-MA 45s5组LC3B-Ⅱ/Ⅰ比值降低、P62表达升高(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,与对照组相比,45s5组BsP、Runx2、DMP-1和DsPP表达增加;与45s5组相比,3-MA 45s5组BsP、Runx2、DMP-1和DsPP表达降低(P<0.05)。ALP染色和茜素红染色分析结果显示,与对照组相比,45s5组ALP活性增强,矿化结节形成增多;与45s5组相比,3-MA 45s5组ALP活性降低,矿化结节形成减少。结论1 mg/mL 45s5体外通过细胞自噬促进APCs成牙本质方向分化。

关键词：成牙本质分化根尖牙乳头细胞自噬生物活性玻璃45s5

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成人骨髓间充质干细胞复合生物玻璃45s5成骨的体外实验研究

成人骨髓间充质干细胞复合生物玻璃45S5成骨的体外实验研究

引用

作者：朱伟苏州大学

学位级别：硕士

第一部分成人骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向诱导分化的实验研究目的:研究体外培养的成人骨髓间充质干细胞(MsCs)在特定的条件下定向诱导分化为成骨细胞,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性和应用价值。方法:从骨髓血中提取MsCs,在... 详细信息

第一部分成人骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向诱导分化的实验研究目的:研究体外培养的成人骨髓间充质干细胞(MsCs)在特定的条件下定向诱导分化为成骨细胞,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性和应用价值。方法:从骨髓血中提取MsCs,在含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基中培养,以流式细胞仪检测MsCs的表面抗原表达。培养传代后改用含地塞米松(1 x10-8 mol/L) ,β一甘油磷酸钠(10 mmol/L )和维生素C(50 mg/L)的条件培养基培养,在相差显微镜下观察细胞形态并绘制生长曲线。免疫组化检测I型胶原(COL-I)、骨钙素(osteocalcin, OC)。NAP法进行碱性磷酸酶(ALP)染色、von Kossa法进行钙结节染色,并进行统计学分析。结果:MsCs增殖能力活跃,流式细胞仪检测MsCs显示CD105,CD44,表达阳性,CD14、CD34和CD45表达为阴性。成骨诱导培养后,可见碱性磷酸酶( ALP)染色、Ca结节染色、胶原-I (COL-I)和骨钙素(osteocalcin, OC)免疫组化染色阳性。结论:MsCs取材安全方便,易于诱导分化为成骨细胞,是研究骨组织工程的理想种子细胞。第二部分MsCs与生物活性玻璃45s5的体外生物相容的实验研究目的:研究成人MsCs与生物活性玻璃45s5在体外培养条件下的生物相容性。方法:分离培养人MsCs,置于含体积分数为10%的胎牛血清DMEM培养基中培养,传代后改用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养基培养,分为45s5复合细胞组和单纯细胞组,不同时间用倒置相差显微镜、透射电镜及扫描电镜观察细胞增殖和分化。细胞计数、MTT法及流式细胞仪进行细胞增殖测定,进行ALP的定量检测。并用von Kossa法行钙结节染色,结果:成人MsCs可以诱导为成骨细胞,成骨细胞体外培养时复合或不复合45s5均生长良好,表现出典型成骨细胞的形态特征和生物学特性,接种于生物活性玻璃45s5支架材料上的细胞生长良好,形成许多细小的钙结节和胶原纤维。45s5利于细胞的贴附、生长与增殖,并对细胞的功能无不良影响。结论:生物活性玻璃45s5是较理想的骨组织工程支架材料,用MsCs作为种子细胞,生物活性玻璃45s5作为支架构建组织工程

关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养成骨细胞分化组织工程生物活性玻璃45s5 骨髓间充质干细胞成骨细胞组织工程学细胞培养生物相容性材料/分析生物活性玻璃45s5 骨髓间充质干细胞成骨细胞组织工程学细胞培养基因表达

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