检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：马庆男南京农业大学

学位级别：硕士

罗非鱼是世界最重要的养殖经济鱼类之一,作为重要的动物性蛋白质来源,得到了联合国粮农组织的大力推荐。中国水产科学研究院淡水渔业研究中心2009年从马来西亚引进了红罗非鱼,并进行了驯化、扩繁和选育。靶位区域扩增多态性(target regi... 详细信息

罗非鱼是世界最重要的养殖经济鱼类之一,作为重要的动物性蛋白质来源,得到了联合国粮农组织的大力推荐。中国水产科学研究院淡水渔业研究中心2009年从马来西亚引进了红罗非鱼,并进行了驯化、扩繁和选育。靶位区域扩增多态性(target region amplified polymorphism,TRAP)分子标记由于其具有简单、多态性丰富、重复性好、易测序等优点得到了分子育种研究者的重视。它是利用已知的EST或者cDNA序列信息和生物信息工具来设计固定引物,偏向产生紧密连锁目标区域的多态性标记。已经用于植物的遗传多样性分析、种质资源分析、重要生长性状相关标记筛选、遗传图谱构建以及分子标记辅助育种等。该研究将使用TRAP标记分析红罗非鱼遗传结构以及筛选生长性状相关的分子标记。首先,该研究对红罗非鱼测量的基本形态性状进行了初步分析,同时计算出体重、体长、体厚、体高、尾柄长之间的相关系数以及形态性状对体重的通径分析,获得测量的形态性状对体重的决定系数、决定程度。并把三个测得的形态性状指标作为自变量,体重作为因变量建立了多元回归方程：Y=-474.877+1.813Χ1+5.874Χ2+2.709Χ3, Y、X1、X2、X3分别表示体重(g)、体长(mm)、体厚(mm)、体高(mm)。其次,为了获得稳定性好、重复性强的罗非鱼TRAP反应体系,本首次综合运用L16(45)正交和单因素方法优化罗非鱼TRAP反应体系。两种分析方法结果中dNTPs浓度、随机引物浓度、DNA浓度相同而Mg2+浓度和Taq聚合酶浓度不同,不同因素间存在一定的交互作用。正交设计法比单因素法更简单、科学、合理。本实验获得罗非鱼15μLTRAP最优反应体系：DNA模板浓度为60ng、Mg2+浓度为1.5mmol/L、dNTPs浓度为0.3mmol/L、Taq聚合酶0.5U、随机引物浓度为7pmol/L.固定引物浓度为10pmol/L。扩增程序为：94℃2min；94℃45s,38℃45s,72℃lmin,5个循环；94℃45s,53℃45s,72℃lmin,35个循环；72℃延伸8min。该反应体系在4个罗非鱼群体中验证,并用10对多态性好的TRAP标记分析吉富罗非鱼的遗传多样性,表现出良好的稳定性和重复性。该反应体系的建立为TRAP标记应用于罗非鱼遗传多样性评价、种质鉴定、分子标记辅助育种等研究提供了新的手段。再者,为了获得与红罗非鱼生长性状相关的TRAP分子标记,该研究使用最后优化后的反应体系,采用15对多态性好的TRAP标记分析同池的红罗非鱼的遗传多样性,并运用t检验筛选生长性状(体重、体高、尾柄长)相关的分子标记。结果表明,15对TRAP引物扩增出251个位点,多态性位点216个,平均多态性位点比例为86%。该研究群体PIC平均值为0.21,Shannon信息指数平均为0.466,Nei's遗传多样指数平均为0.316,表明该群体遗传多样性丰富。初步筛选出TRAP位点ghl-Trap1380005与体重和体高呈极显著相关(P<0.01),ghl-Em110与尾柄长和体重呈极显著相关。红罗非鱼通径分析结果和获得生长相关分子标记可以结合,为红罗非鱼的辅助选择育种提供参考。

关键词：红罗非鱼通径分析 TRAP 正交设计遗传多样性生长相关分子标记

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建鲤生长激素促泌素受体1基因的特性及其与增重相关SNP位点的筛选

引用

中国水产科学 2012年第3期19卷 390-398页

作者：俞菊华李红霞李建林唐永凯董在杰中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081

GHS-R基因在哺乳类为候选的肥胖和生长数量性状位点。本实验使用RT-PCR及PCR的方法,从建鲤(Cyprinus carpio ***)分离到2个jlGHS-R1s,称为jlGHS-R1a和jlGHS-R1b(分别简称1a和1b)。jlGHS-R1s的阅读框编码360个氨基酸,两者间相似性高达96%;另外还存在2个jlGHS-R1s的转录变体(分别简称1a'和1b'),选择性切割了翻译起始碱基后第490-680 nt的191 bp片段,该片段两端碱基分别为gt-ag,这种选择性切割导致翻译提前终止,仅翻译184个氨基酸,包括前面3个半跨膜区,这与已报道的罗非鱼等的保留内含子的转录变体不同。jlGHS-R1s的阅读框被1个内含子分隔,该内含子位于第260个氨基酸密码子的第1和第2个碱基之间,1a和1b的内含子长度分别为676 bp和885 bp。使用分段PCR在建鲤群体的1a和1b基因上共找到32个SNP位点,构建PCR-RFLP法对其中9个SNPs进行基因型检测,结果发现各种基因型在322尾建鲤中均有出现,但存在着明显的偏分布。与增重的相关分析表明,位点1a-I_C386T和1b-E1_G159T与雌雄鱼鱼种和成鱼阶段增重分别呈极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)相关,CC型和GG型个体增重最快,另外有5个位点则与其中的某阶段或者某性别的增重相关,为了确定上述所得标记的适用性,选取其中4个标记在另外7个家系共610尾鱼中检测,结果 C386T和G159T还是与增重呈极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)相关,可用于建鲤分子育种。

关键词：建鲤生长激素促泌素受体单核苷酸多态位点生长相关分子标记

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