目的观察放射线对体外培养棘球蚴的杀伤作用及对其生长阻滞和dna损伤45α(growth arrest and dna damage 45 alpha,Gadd45α)mRNA表达的影响。方法体外培养自然感染的羊肝脏中的棘球蚴,分为7组,分别以0(对照)、20、40、60、80、100、120...
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目的观察放射线对体外培养棘球蚴的杀伤作用及对其生长阻滞和dna损伤45α(growth arrest and dna damage 45 alpha,Gadd45α)mRNA表达的影响。方法体外培养自然感染的羊肝脏中的棘球蚴,分为7组,分别以0(对照)、20、40、60、80、100、120 Gy的6兆电子线(6 MeV)进行1次放射。放射线照射后培养1、3、5、7 d时,光镜下观察棘球蚴的生长情况;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定放射线照射后培养7 d时,对照,20、40、60 Gy组棘球蚴Gadd45αmRNA表达水平。结果各剂量组放射线照射后1、3、5、7 d时,光镜下棘球蚴结构崩解,勾突脱落,且棘球蚴死亡率与放射线照射剂量呈正相关(r=0.81,P<0.05)。放射线照射后培养7 d时,与对照组(100.00±0.00)比较,20、40、60 Gy组棘球蚴Gadd45αmRNA表达水平明显升高(279.74±80.08、759.38±160.98、1666.68±316.36,P均<0.01),且与放射线剂量呈正相关(r=0.93,P<0.01)。结论放射线照射对体外培养的棘球蚴有一定的杀伤作用,且与放射线的剂量存在一定的量效关系;Gadd45α基因可能参与放射线所致体外杀伤棘球蚴的分子机制。
目的:研究人生长阻滞和dna损伤45α(growth arrest and dna damage 45 alpha,Gadd45α)基因对滋养细胞HTR8/SVneo增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学功能的影响,探讨其在子痫前期(preeclampsia,PE)发生发展中的可能作用。方法:构建Gadd45...
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目的:研究人生长阻滞和dna损伤45α(growth arrest and dna damage 45 alpha,Gadd45α)基因对滋养细胞HTR8/SVneo增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学功能的影响,探讨其在子痫前期(preeclampsia,PE)发生发展中的可能作用。方法:构建Gadd45α短发夹干扰RNA,以阴性对照组作为参照,转染人滋养细胞HTR8/SVneo,即分为实验组(si-Gadd45α)和阴性对照组(si-NC)进行实验;应用流式细胞仪检测转染效率,并应用q RT-PCR和Western blot检测转染后各组细胞中Gadd45αm RNA和蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)显色法检测转染后各组细胞增殖能力;应用流式细胞仪对转染后各组细胞进行细胞凋亡分析;采用Transwell法检测转染后各组细胞迁移和侵袭能力;采用早孕绒毛外植体培养模型观察敲除Gadd45α基因后对绒毛外滋养细胞外生性迁移能力的影响;收集各组细胞培养上清液,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的表达,蛋白免疫印迹检测基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitors of MMPs,TIMPs)的表达。结果:流式细胞仪检测转染效率约为90%;转染后实验组较对照组Gadd45αm RNA的表达量约降低80%,蛋白表达水平约下降70%,差异均有统计学意义(P<0.01),证明干扰Gadd45α表达成功。MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡,结果显示实验组和对照组细胞增殖和凋亡均无统计学差异(P>0.05)。Transwell实验表明干扰Gadd45α后HTR8/SVneo侵袭能力明显增加,约为对照组的1.65倍;迁移能力也明显增加,约为对照组的2倍,均有统计学差异(P<0.01)。早孕绒毛外植体培养结果显示:与阴性对照组的绒毛相比,Gadd45α干扰片段处理的绒毛外滋养细胞外生性迁移的距离明显增加,差异有统计学意义(P=0.005)。明胶酶谱实验结果显示干扰Gadd45α后基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases,MMP-2)和MMP-9的活性增强,而Western blot检测发现其抑制因子TIMP-1和TIMP-2相应地下降(P<0.01)。结论:推测Gadd45α可能是通过调控蛋白酶的活性来抑制滋养细胞的迁移和侵袭,从而参与PE的发生发展。
目的:研究子痫前期胎盘组织中生长阻滞和dna损伤45α基因(Growth Arrest and dna Damage-inducible 45 alpha,Gadd45α)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase ,p38 MAPK)信号分子的表达及其与血清中可溶性血...
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